Synergistiske antiinflammatoriske virkninger af Laminaria Japonica Fucoidan og Cistanche Tubulosa-ekstrakt
Mar 03, 2022
Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com
Abstrakt
Detanti-inflammatoriskvirkninger af fucoidan ogCistanche tubulosa (CT) ekstrakt blev undersøgt i Vitro makrofagkultursystemet og in vivo carrageenan-induceret luftpose-inflammationsmodel.Cistanche Tubulosaekstrakt hæmmede produktionen af nitrogenoxid fra aktiverede RAW 264.7 makrofagceller, mens fucoidan var inaktivt. In vivo luftpose-inflammationsmodel, carrageenan-induceret vaskulær ekssudation og øgede nitrogenoxid- og prostaglandin E2-koncentrationer i ekssudaterne blev synergistisk undertrykt ved samtidig administration af fucoidan ellerCistanche Ttubulosauddrag. Desuden blev vævsinflammation væsentligt svækket ved kombinationsterapi. Der var dog ingen synergistisk effekt modinflammatoriskcelleinfiltration, selvom fucoidan og CT(Cistanche tubulosa)udtræk hver markant reduceret celleantallet. Derfor foreslås det, at fucoidan blokerer infiltration afinflammatoriskceller, mens CT(Cistanche tubulosa) ekstrakt hæmmer aktivering af cellerne, og at deres kombinationsbehandling kunne være en lovende kandidat til lindring af forskellige typer af inflammation.
Nøgleord: Carrageenan, inflammation, fucoidan, Cistanche tubulosa ekstrakt.
Som et immunrespons mod fremmede antigener frigiver makrofager pro-inflammatoriske cytokiner såsom tumor-nekrosefaktor- (TNF-), interleukin-1 (IL-1), IL-6 og andre [1,2]. Sådanne cytokiner inducerer en kemotaktisk tilstrømning af granulocytter, monocytter, lymfocytter og mastceller til beskadiget væv, der fremmer antigenfjernelse og vævsgenvinding [3,4]. Men overdreven infiltration og aktivering af cellerne forværrer vævsskader, hvilket fører til ødem (vaskulær ekssudation) og smerte, som er velkendte betændelsesfænomener.
TNF- er en vigtig faktor til at inducere nitrogenoxidsyntase (iNOS) genekspression i flere cellelinjer.iNOS aktivering fører til nitrogenoxid (NO) produktion[5-7], der ikke kun modulerer adskillige fysiologiske funktioner såsom bakteriedræbende og vasodilatation men forårsager også betændelse [8,9]. Efter vævsskade genererer nedbrydning af phospholipaser af cellemembran-phospholipider arachidonsyre. Arachidonsyre nedbrydes yderligere af cyclooxygenase (COX) til prostaglandiner (PG'er) [10]. En for stor mængde PGE2 dannet af COX-II inducerer adskillige cytokiner til inflammation. Da både NO og PGE2 fungerer som hovedfaktorer for inflammation og smerteinduktion, er TNF- og COX-II-PGE2-veje hovedstrømmene i den inflammatoriske proces, som hæmmes af kortikosteroider og ikke-steroideanti-inflammatoriskhenholdsvis lægemidler (NSAID'er) [10,11].
Selvom der findes adskillige steroider og NSAID til behandling af inflammatoriske sygdomme, kan disse lægemidler give anledning til negative virkninger på immunsystemet, mave-tarmkanalen, nyrerne, leveren, centralnervesystemet, blodtrykket og det kardiovaskulære system [12-14 ]. Derfor er det nødvendigt at minimere de negative virkninger af kemiske lægemidler ved at erstatte dem eller bruge dem i kombination med naturlige produkter.
Fucoidan, sulfatpolysaccharidkompleks fra tang som Laminaria japonica og Cladosiphonokamuranus, der er bredt udbredt i mange lande, har været brugt som terapeutiske midler i orientalsk medicin i en lang periode. I tidligere undersøgelser er det blevet påvist, at fucoidan har antioxidativ, anti-koagulativ, anti-cancer oganti-inflammatoriskaktiviteter [15,16]. Følgelig tiltrækker de gavnlige virkninger af fucoidan på inflammatoriske sygdomme, iskæmi, immundysfunktion og tumorer efterforskernes opmærksomhed [17,18]. På den anden side,Cistanche tubulosa(CT) er også blevet brugt i vid udstrækning til traditionel medicin i Kina. Det blev rapporteret, at CT-ekstrakt sænker produktionen af TNF-á og IL-4, som er vigtige faktorer for NO-produktion i den inflammatoriske vej [19].
Sådanne tidligere fund fik os til at undersøge den kombinationsmæssige effekt af fucoidan og CT(Cistanche tubulosa)ekstrakt på de 2 hovedveje for inflammation. For at belyse virkningsmekanismen analyserede vi NO og PGE2 i ekssudaterne fra carrageenan-induceret luftposebetændelse [20].
Materialer og metoder
Materialer
Halvoprenset fucoidan og vandekstrakt af CT(Cistanche tubulosa)blev opnået fra Misuba RTech Co., Ltd. (Asan, Korea). Fucoidan og CT-ekstrakt blev opbevaret ved 4oC, blandet (1:3) og opløst i renset vand før brug og indgivet oralt i et volumen på 5 ml/kg
Cellekultur og NO kvantificering
Den murine makrofag RAW 264.7 cellelinje blev købt fra American Type Culture Collection (Manassas, USA) og dyrket i Dulbeccos modificerede ørnemedium (Sigma, St. Louis, USA) indeholdende 10 procent føtalt bovint serum og antibiotika [100 U/mLpenicillin ( Sigma) og 100 µg/ml streptomycin (Sigma)]. Cellerne blev inkuberet i en befugtet 5 procent CO2-atmosfære ved 37oC.
At vurdere virkningerne af fucoidan og CT(Cistanche tubulosa)ekstrakt på udskillelsen af NO, RAW 264.7-celler (1×106 celler/ml) blev inkuberet med fucoidan eller CT-ekstrakt (1-320 µg/mL) i 5 minutter, efterfulgt af interferon- (IFN- 10 U/ml) og lipopolysaccharid (LPS, 10 µg/ml) i 24 timer. I vores foreløbige undersøgelser blev det bekræftet, at behandling med IFN-plus LPS til aktivering af RAW 264.7-celler ikke påvirkede cellernes levedygtighed i op til 24 timer, og at fucoidan og CT-ekstrakt ikke var cytotoksiske op til 1 mg/ml. Koncentrationen af nitrit (NO2–), det oxiderede produkt af NO, blev målt som en indikator for NO. Dyrkningsmediet blev blandet med et tilsvarende volumen Griess-reagens (1 procent sulfanilamid, 0,1 procent naphthylethylendiamid i 2,5 procent phosphorsyre) [21] og inkuberet ved stuetemperatur i 10 minutter. Nitritkoncentrationen blev analyseret ved 540 nm, hvor NaNO2 blev brugt til at generere en standardkurve.
Dyr og behandling
ICR-hanmus (7 uger gamle) blev købt fra Daehan Biolink (Eumseong, Korea) og anbragt i et rum med konstante miljøforhold (22±2ºC; 40-70 procent relativ luftfugtighed; 12-timers lys -mørkecyklus;150-300 lux lysstyrke). Pelletfoder og renset vand var tilgængeligt ad libitum. Alle dyreforsøg blev godkendt af Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) fra Chungbuk National University (CBNU), Korea, og udført i henhold til Standard Operation Procedures (SOP) fra LaboratoryAnimal Research Center, CBNU.
Musene (n=8/gruppe) blev oralt behandlet med fucoidan (18 eller 54 mg/kg), CT(Cistanche tubulosa)ekstrakt (54 eller 162 mg/kg) eller deres blanding (18 plus 54, 54 plus 162 eller 90 plus 270 mg/kg) én gang dagligt i 7 dage. Lave doser af fucoidan (18 mg/kg) og CT-ekstrakt (54 mg/kg) var fra estimerede humane doser på 100 mg/krop (70 kg) og 300 mg/krop efter overfladeoversættelse af kropsvægt (Km{{14 }} for henholdsvis menneske/Km=3 for mus). Høje doser af fucoidan og CT-ekstrakt blev sat til 3 gange, alene eller i blandingen, og den højeste dosis blanding blev fastsat til 5 gange for at vurdere maksimale synergistiske effekter.
På 1. dag af fucoidan og CT(Cistanche tubulosa)ekstraktbehandling blev mus subkutant injiceret med 10 ml steril luft i bagsiden for at danne en pose [22,23]. Efter 2 og 5 dage blev posen geninjiceret med 5 ml luft. En time efter den sidste behandling blev 1 ml carrageenan (1 procent i saltvand; Sigma) eller dets vehikel (saltvand) sprøjtet ind i posen.
Analyser af ekssudaterne
Luftposen blev vasket med 1 ml kold saltvand 6 timer efter carrageenaninjektion, og nettovolumenet af skyllevæske blev registreret. Det samlede antal af inflammatoriske celler, neutrofiler, monocytter og lymfocytter blev bestemt ved anvendelse af en kolter-tæller. Koncentrationerne af NO og PGE2 blev bestemt ved henholdsvis Griess-reagens (Sigma) og enzymimmunoassay (EIA) ved anvendelse af et korrelat-EIA-kit (Assay Designs, Ann Arbor, AnnArboUSA).
Histopatologisk undersøgelse
Posebeklædning blev fjernet og fikseret i neutral formalinopløsning. Paraffinindlejrede vævsglas blev farvet med hæmatoxylin-eosin og undersøgt under et lysmikroskop for de inflammatoriske læsioner.
Statistisk analyse
Resultaterne præsenteres som middel ± SE. Eksperimentelle gruppesammenligninger blev foretaget ved en-vejs variansanalyse efterfulgt af en Tukey's testkorrektion. En P-værdi<0.05 was="" considered="" statistically="">
Resultater
In vitro RAW 264.7-cellekultur, IFN- og LPS-behandling øgede NO-produktionen betydeligt (figur 1). Forbehandling med fucoidan (1-320 µg/ml) påvirkede ikke NO-frigivelsen fra makrofagcellelinjen (figur 1A). Til sammenligning, CT(Cistanche tubulosa)ekstrakt (32-320 µg/mL) undertrykte signifikant NO-produktion, hvilket tyder påanti-inflammatoriskaktivitet (figur 1B).
Injektion af carrageenan i museluftpose øgede markant ekssudatvolumenet i posen (figur 2). En sådan øget ekssudation blev svækket ved behandling med fucoidan (18 mg/kg) og CT(Cistanche tubulosa)ekstrakt (54 og 162 mg/kg). Især den kombinationsbehandling af fucoidan og CT(Cistanche tubulosa)ekstrakt reducerede ekssudatvolumenet yderligere sammenlignet med de individuelle virkninger, selvom højere dosiskombinationer (54 plus 162 mg/kg og 90 plus 270 mg/kg) ikke udviste yderligere effekt til den laveste dosiskombination (18 plus 54 mg/kg) (Figur 2A). NO-indholdet i posen steg også drastisk efter carrageenaninjektion (figur 2B). I sammenligning med den milde virkning af fucoidan, CT(Cistanche tubulosa)ekstrakt sænkede NO-koncentrationen markant. Kombinationsbehandling af fucoidan og CT-ekstrakt reducerede NO-niveauet yderligere på en dosisafhængig måde. Tilsvarende blev det øgede PGE2-indhold synergistisk undertrykt af kombinationsterapien af fucoidan og CT(Cistanche tubulosa)ekstrakt (figur 2C). Parallelt med de inflammatoriske mediatorer i posen steg antallet af inflammatoriske celler drastisk ved carrageenaninjektion: 37,8, 4,8 og 24,1 gange kontrolniveauer for henholdsvis neutrofiler, monocytter og lymfocytter (tabel 1). . Dog fucoidan og CT(Cistanche tubulosa)ekstrakt reducerede den inflammatoriske celleinfiltration betydeligt, hvor fucoidan var noget bedre end CT-ekstrakt. Uventet blev der ikke opnået nogen synergistisk effekt i den inflammatoriske celleinfiltration ved samtidig administration af fucoidan og CT(Cistanche tubulosa)uddrag.
Som udledt af den inflammatoriske celleinfiltration i ekssudaterne udviste det subkutane væv, der omgav luftposer, alvorlige inflammatoriske læsioner (figur 3). Enormt mange celler i det fortykkede subkutane væv udsat for carrageenan blev observeret (figur 3B) sammenlignet med de næsten normale træk hos kontroldyr (figur 3A). Sådanne inflammatoriske læsioner blev bemærkelsesværdigt svækket ved behandling med fucoidan (figur 3C og 3D) eller CT(Cistanche tubulosa)ekstrakt (figur 3E og 3F). Navnlig blev der opnået højere antiinflammatoriske virkninger ved kombinationsterapi med fucoidan og CT(Cistanche tubulosa)ekstrahere(figurer 3G-3I)
Diskussion
Ved at bruge en in vivo carrageenan-induceret luftpose-inflammationsmodel inducerer injektion af luft på ryggen af gnavere proliferation af celler, der stratificerer på overfladen af hulrummet for at danne en struktur svarende til synovium. I denne model øgede injektion af carrageenan-induceret inflammatorisk celleinfiltration ekssudatet, hvilket er tegn på vaskulær lækage. Luftposen fungerer som et reservoir af inflammatoriske celler og mediatorer, der let kan måles i den væske, der ophobes lokalt.
Blandt de forskellige inflammatoriske mediatorer, der kan inducere vaskulær permeabilitet, er det velkendt, at NO og PGE2 er vigtige faktorer involveret i patogenesen af mange inflammatoriske sygdomme [24,25]. De er også kendt som mediatorer af smerteinduktion og perception[10,11]. iNOS, som udtrykkes og aktiveres i forskellige celletyper ved stimulering med TNF- og/eller LPS under inflammation, producerer høje, vedvarende koncentrationer af NO [3,5-7]. NO er et vigtigt regulatorisk molekyle i forskellige fysiologiske funktioner, såsom vasodilatation, der fører til vaskulær lækage [8,9]. PGE2, som genereres fra arachidonsyre via cox, bidrager til udviklingen af mange inflammatoriske sygdomme [26,27] og overproduktion af PGE2 som reaktion på forskellige inflammatoriske stimulationer er forbundet med opregulering af COX-II niveau og progression af inflammation [28]. Derfor er TNF- -NO- og COX-II-PGE2-veje blevet betragtet som to hovedstrømme af inflammatoriske processer, som blokeres af inhibitorer af henholdsvis iNOS (kortikosteroider) og COX (NSAID'er) [22,29].
I denne undersøgelse, samtidig administration af fucoidan og CT(Cistanche tubulosa)ekstrakt reducerede ekssudatvolumenet i posen, hvilket tyder på, at de har undertrykkende aktivitet mod vaskulær lækage (figur 2A). I sammenligning med de individuelle virkninger af hver fucoidan og CT(Cistanche tubulosa)ekstrakt øgedes kombinationsbehandlingen yderligere, hvilket betyder, at de to forbindelser virker synergistisk. Sådanne synergistiske virkninger mellem fucoidan og CT-ekstrakt blev understøttet af deres aktiviteter på NO- og PGE2-niveauerne i ekssudaterne (figur 3B og 2C).
Interessant nok blev det imidlertid bekræftet, at fucoidan ikke direkte hæmmer aktiveringen af makrofager invitro-assay (figur 1A). Tilsvarende var det hæmmende potentiale af fucoidan på NO- og PGE2-akkumuleringen i bioassay relativt lavere end for CT(Cistanche tubulosa)ekstrakt (figur 2B og 2C). En sådan virkningsmekanisme af fucoidan er forskellig fra en direkte inaktivering af cellerne med CT-ekstrakt (figur 1B). Til sammenligning udøvede fucoidan en høj effektivitet på inhiberingen af inflammatorisk celleinfiltration i poserne (tabel 1). Fucoidan var overlegen i forhold til CT-ekstrakt ved at blokere migrationen af neutrofiler, monocytter og lymfocytter til de carrageenan-inducerede vævsskadesteder. Interessant nok var der ingen synergistisk anti-migratorisk effekt, hvilket tyder på forskellige virkningsmekanismer mellem fucoidan og CT-ekstrakt: dvs. fucoidan blokerer infiltration af inflammatoriske celler, mens CT(Cistanche tubulosa)ekstrakt hæmmer aktivering af cellerne.
Polymorfonukleære celler, især neutrofiler, er de vigtigste cellulære komponenter, der rekrutteres til akutte inflammatoriske steder induceret af carrageenan. Derudover spiller efterfølgende inflammatoriske celler såsom makrofager og lymfocytter også centrale roller i den inflammatoriske proces ved at udskille cytokiner [22,30,31]. Ved forbehandlet med fucoidan eller CT(Cistanche tubulosa)ekstrakt blev antallet af hvide blodlegemer, der migrerede ind i de carrageenaninjicerede luftposer, markant undertrykt. Dette resultat stemte overens med en effekt, der ville opnås af kortikosteroider såsom dexamethason, men ikke af NSAID'er inklusive indomethacin [23,30]. Derfor antages det, at fucoidan og CT(Cistanche tubulosa)ekstrakt har til dels en egenskab af steroider.
Ud over den blokerende virkning på inflammatorisk celle kemotaksi, CT(Cistanche tubulosa)ekstrakt så ud til at undertrykke aktiveringen af makrofager. Dette blev bekræftet af dets hæmmende virkninger på NO in vitro og in vivo, som er den vigtigste inflammatoriske mediator produceret af makrofager. Således er effekten af CT(Cistanche tubulosa)ekstrakt på makrofager kan skyldes en undertrykkelse af mRNA-ekspression og/eller en direkte hæmning af iNOS-aktivitet i disse celler.
PGE2 er også en af de vigtigste inflammatoriske mediatorer. Det øges parallelt med vævsødem, som undertrykkes af NSAID'er, hæmmere af COX [21,22]. Carrageenan kan øge PGE2-produktionen ved at inducere COX-II mRNA og COX-II protein i poseekssudatet [32]. I denne model øgede carrageenan mængden af PGE2 betydeligt, og det blev væsentligt undertrykt af CT(Cistanche tubulosa)uddrag. Det er interessant at bemærke, at dette resultat var i overensstemmelse med en effekt, der ville blive opnået af et NSAID indomethacin [23]. Derfor udledes det fra resultaterne, at CT-ekstrakt har den yderligere egenskab af NSAID'er. Samlet menes det, at CT(Cistanche tubulosa)ekstrakt udøvede både kortikosteroid- og NSAID-lignende virkninger i den carrageenan-inducerede inflammationsmodel, og at fucoidan forbedredeanti-inflammatoriskvirkninger af CT-ekstrakt ved at blokere inflammatorisk celleinfiltration.
Selvom definere den nøjagtige virkningsmekanisme kræver yderligere undersøgelse, en blanding af fucoidan og CT(Cistanche tubulosa) ekstraherer markant svækkede inflammatoriske tegn ved at blokere TNF- –NO- og COX-II-PGE2-vejene i carrageenan-induceret luftposebetændelse. Disse resultater viser, at kombinationsbehandling af fucoidan og CT(Cistanche tubulosa)ekstrakt kan være en lovende kandidat til lindring af forskellige typer betændelse, der reagerer på kortikosteroider eller NSAID'er.
Referencer
1. Dag R. Bivirkninger af TNF-hæmmere ved reumatoid arthritis. Lancet 2002; 359(9306): 540-541.
2. Feldmann M, Brennan FM, Maini RN. Cytokiners rolle i reumatoid arthritis. Annu Rev Immunol 1996; 14: 397-400.
3. Eigler A, Sinha B, Hartmann G, Endres S. Taming TNF: strategier til at begrænse dette proinflammatoriske cytokin. Immunol Today 1997;18(10): 487-492.
4. Ershler WB, Keller ET. Aldersassocieret øget interleukin-6genekspression, sygdomme i det sene liv og skrøbelighed. Annu Rev Med2000; 51: 245-270.
5. Adams V, Nehrhoff B, Späte U, Linke A, Schulze PC, Baur A, Gielen S, Hambrecht R, Schuler G. Induktion af iNOS-ekspression i skeletmuskulatur ved IL-1- og NFκB-aktivering: en in vitro andin vivo undersøgelse. Cardiovasc Res 2002; 54(1): 95-104.
6. Xie QW, Whisnant R, Nathan C. Promotor af musegenet, der koder for calcium-uafhængig nitrogenoxidsyntase, giver inducerbarhed af interferon og bakterielt lipopolysaccharid. J ExpMed 1993; 177(6): 1779-1784.
7. Yui Y, Hattori R, Kosuga K, Aizawa H, Hiki K, Kawai C. Oprensning af nitrogenoxidsyntase fra rottemakrofager. J BiolChem 1991; 266(19): 12544-12547.
8. Marletta MA, Yoon PS, Iyengar R, Leaf CD, Wishnok JS. Makrofagoxidation af L-arginin til nitrit og nitrat: nitrogenoxid er et mellemprodukt. Biochemistry 1998; 27(24): 8706-8711.
9. Moncada S, Palmer RM, Higgs EA. Nitrogenoxid: fysiologi, patofysiologi og farmakologi. Pharmacol Rev 1991; 43(2):109-142.
10. Pang L, Hoult JR. Cytotoksicitet over for makrofager af tetrandrin, et anti-silikose-alkaloid, ledsaget af en overproduktion af prostaglandiner. Biochem Pharmacol 1997; 53(6): 773-782.
11. Hunskaar S, Hole K. Formalintesten i mus: dissociation mellem inflammatorisk og ikke-inflammatorisk smerte. Pain 1987; 30:103-114.
12. Lester RS, Knowles SR, Shear NH. Risici ved systemisk kortikosteroidbrug. Dermatol Clin 1998; 16(2): 277-288.
13. Lichtenstein DR, Syngal S, Wolfe MM. Ikke-steroideanti-inflammatoriskmedicin og mave-tarmkanalen. Det tveæggede sværd. Arthritis Rheum 1995; 38(1): 5-18.
14. Mukherjee D, Nissen SE, Topol EJ. Risiko for kardiovaskulære hændelser forbundet med selektive COX-2-hæmmere. JAMA 2001; 286(8):954-959.
15. Feldman SC, Reynaldi S, Stortz CA, Cerezo AS, Damont EB. Antivirale egenskaber af fucoidanfraktioner fra Leathesiadifformis. Phytomedicine 1999; 6(5): 335-340.
16. Wang J, Zhang Q, Zhang Z, Song H, Li P. Potentiel antioxidant- og antikoagulantkapacitet af fucoidanfraktioner med lav molekylvægt ekstraheret fra Laminaria japonica. Int J Biol Macromol2010; 46(1): 6-12.
17. Bojakowski K, Abramczyk P, Bojakowska M, Zwoliñska A, Przybylski J, Gaciong Z. Fucoidan forbedrer renal blodgennemstrømning i det tidlige stadie af nyreiskæmi/reperfusionsskade hos rotter. JPhysiol Pharmacol 2001; 52(1): 137-143.
18. Li N, Zhang Q, Song J. Toksikologisk evaluering af fucoidan ekstraheret fra Laminaria japonica i Wistar-rotter. Food ChemToxicol 2005; 43(3): 421-426.
19. Yamada P, Iijima R, Han J, Shigemori H, Yokota S, Isoda H. Inhiberende virkning af acteosid isoleret fra Cistanche tubulosa på kemisk mediatorfrigivelse og inflammatorisk cytokinproduktion af RBL-2H3- og KU812-celler. Planta Med 2010; 76(14): 1512-1518.
20. Shin S, Jeon JH, Park D, Jang JY, Joo SS, Hwang BY, Choe SY, Kim YB.Anti-inflammatoriskvirkninger af et ethanolekstrakt af angelica gigas i en carrageenan-luftpose inflammationsmodel. Exp Anim 2009; 58(4): 431-436.
21. Hevel JM, Marletta MA. Nitrogenoxidsyntaseassays. MethodsEnzymol 1994; 233: 250-258.
22. Romano M, Faggioni R, Sironi M, Sacco S, Echtenacher B, DiSanto E, Salmona M, Ghezzi P. Carrageenan inducerede akut inflammation i museluftposens synoviale model. Rolle af tumor nekrose faktor. Mediators Inflamm 1997; 6(1): 32-38.
23. Wallace JL, Chapman K, McKnight W. Limitedanti-inflammatoriskeffektiviteten af cyclooxygenase-2-hæmning ved carrageenan-luftpose-inflammation. Br J Pharmacol 1999; 126(5): 1200-1204.
24. Guslandi M. Nitrogenoxid og inflammatoriske tarmsygdomme. Eur J Clin Invest 1998; 28(11): 904-907.
25. Ritchlin CT, Haas-Smith SA, Li P, Hicks DG, Schwarz EM. Mechanisms of TNF- - og RANKL-medieret osteoklastogenese og knogleresorption ved psoriasisarthritis. J Clin Invest 2003;111(6): 821-831.
26. Minghetti L. Cyclooxygenase-2 (COX-2) ved inflammatoriske og degenerative hjernesygdomme. J Neuropathol Exp Neurol 2004;63(9): 901-910.
27. St-Onge M, Flamand N, Biarc J, Picard S, Bouchard L, DussaultAA, Laflamme C, James MJ, Caughey GE, Cleland LG, BorgeatP, Pouliot M. Karakterisering af prostaglandin E2-generering gennem cyclooxygenase (COX){ {3}} pathway i humane neutrofiler.Biochim Biophys Acta 2007; 1771(9): 1235-1245.
28. Choi YH, Park HY.Anti-inflammatoriskvirkninger af spermidin i lipopolysaccharid-stimulerede BV2 mikrogliaceller. J Biomed Sci2012; 19:31.
29. Wallace JL, Chapman K, McKnight W. Limitedanti-inflammatoriskeffektiviteten af cyclooxygenase-2-hæmning ved carrageenan-luftpose-inflammation. Br J Pharmacol 1999; 126(5): 1200-1204.
30. Oliveira de Melo J, da Conceição Torrado Truiti M, Muscará MN, Bolonheis SM, Dantas JA, Caparroz-Assef SM, Cuman RK, Bersani-Amado CA.Anti-inflammatoriskaktivitet af råekstrakt og fraktioner af Nectandra falcifolia blade. Biol Pharm Bull 2006; 29(11): 2241-2245.
31. Zanardo RC, Brancaleone V, Distrutti E, Fiorucci S, Cirino G, Wallace JL. Hydrogensulfid er en endogen modulator af leukocyt-medieret inflammation. FASEB J 2006; 20(12): 2118-2120.
32. Masferrer JL, Zweifel BS, Manning PT, Hauser SD, Leahy KM, Smith WG, Isakson PC, Seibert K. Selektiv inhibering af inducerbar cyclooxygenase 2 in vivo eranti-inflammatoriskog nonulc erogene. Proc Natl Acad Sci USA 1994; 91(8): 3228-3232.
