Undersøgelse af de terapeutiske virkninger og mekanismer af traditionel kinesisk medicin monomerer på en rottemodel af sen-debut hypogonadisme

 

Abstrakt

Objektiv
At evaluere de terapeutiske virkninger og mekanismer af tre traditionel kinesisk medicin (TCM) monomerer-icariin, verbascoside, ogginsenosid Rg1-påsen-debut hypogonadisme (LOH)i en rottemodel, og at udforske deres potentiale somnaturlige indgreb for aldersrelateret testosteronfaldhos midaldrende mænd.

Metoder
En sen-debut hypogonadisme (LOH) model blev etableret hos ældre mændSprague-Dawley rottervia intraperitoneal injektion afcyclophosphamid, simulering af androgenmangel. Tre TCM monomerer-icariin, verbascoside, ogginsenosid Rg1-blev indgivet oralt i 60 dage.

Ved afslutningen af ​​behandlingen blev kropsvægten og vægten af ​​reproduktionsorganer (testikler, bitestikler, sædblærer osv.) målt.Histopatologiske ændringeri testikelvæv blev vurderet vhahæmatoxylin-eosin (H&E) farvning. Serum niveauer afFSH, LH, ogtestosteronblev testet viaELISA. Udtrykket afandrogen receptor (AR)protein og mRNA blev evalueret vhaWestern blotogkvantitativ realtids-PCR (qRT-PCR).

 

 

 

Resultater

Ginsenosid Rg1viste den mest markante forbedring ikropsvægtogreproduktionsorganvægt(P < 0,01).

Icariinmarkant øget vægten aftestikler, epididymis, ogsædblærer(P < 0,01).

Verbascosidemoderat forbedret sædblærevægt (P < 0,05).

Alle tre TCM-monomerer effektivtomvendt testikeldegenerationi LOH-rotter, genoprette seminiferøse tubuli struktur og øge antallet afspermatogene cellerogmoden sperm.

Alle monomergrupper viste evnen tillavere serum FSH og LH niveauermenshæve serum testosteron. Deicariin gruppeviste de mest signifikante endokrine forbedringer (P < 0,01).

Udtryksniveauer afandrogen receptor (AR)i både protein og mRNA var signifikant opreguleret i alle behandlede grupper. Effekten aficariinvarmere udtalt end testosteronpropionat, der angiver enstærk regulatorisk effekt på AR-signalering.

 

Konklusion

Det tyder denne undersøgelse påginsenosid Rg1er mest effektiv til at forbedrekrops- og organvægthos LOH-rotter, mensicariinviser den stærkeste effekt iat øge testosteronproduktionenogforbedring af AR-udtryk. Alle tre monomerer-icariin, verbascoside, ogginsenosid Rg1- påvistbeskyttende virkning mod testikeldegenerationogunderstøtte mænds reproduktive endokrine funktion, der tilbyder lovende naturlige alternativer til forvaltning afaldersrelateret hypogonadisme.

 

Nøgleord

Sen-debut hypogonadisme (LOH); Icariin; Verbascoside; Ginsenosid Rg1; Traditionel kinesisk medicin; Naturlig testosteron booster; Aldring mandligt syndrom; Androgen receptor ekspression; Urteterapi for mandlig sundhed

Klik på billedet for at lære mere om TCM-urten til seksuel sundhed

 

 

Baggrund

Sen-debut hypogonadisme (LOH)hos midaldrende og ældre mænd er tæt forbundet medaldersrelateret fald i androgenniveauer, især testosteron. En befolkningsbaseret epidemiologisk undersøgelse fra 2021 udført på tværs af seks repræsentative provinser i Kina, der involverer6.296 mænd i alderen 40–79, afslørede følgende prævalensrater af LOH:

3.2%hos mænd i 50'erne

11.2%i 60'erne

24.0%i 70'erne [1]

LOH er karakteriseret vednedsat serum testosteronsammen med en konstellation afsymptomer på androgenmangelsåsom:

Lav libido

Erektil dysfunktion

Depression og irritabilitet

Kognitiv tilbagegang og hukommelsestab

Disse symptomer kanforringer det fysiske og psykiske velvære betydeligt, samtlivskvalitet [2–3].

For tiden,testosteron substitutionsterapi (TRT)er den almindelige behandling af LOH og kan midlertidigt lindre symptomer. Dog bekymringer vedrkardiovaskulær risiko, prostata sundhed, oglangsigtet sikkerhedforblive [4]. Derfor er der en stigende interesse for at gå på opdagelsenaturlige, sikrere alternativer, især fraTraditionel kinesisk medicin (TCM).

Denne undersøgelse har til formål at evaluereterapeutiske virkninger og mekanismeraf tre TCM monomerer-icariin, verbascoside, ogginsenosid Rg1-ved at bruge enrottemodel af LOH.

 

1. Materialer og metoder

1.1 Forsøgsdyr

Tres15 måneder gamle Sprague-Dawley (SD) hanrotter(700-800 g) blev opnået i januar 2022 fra Animal Experimental Center of China Three Gorges University. Licensnumre:

Dyrecertifikat: Nej. 42010200007997

Produktionslicens: SCXK (E) 2022-0012

Rotter blev anbragt i et kontrolleret miljø (temperatur: 19-23 grader, relativ luftfugtighed: 55%-65%), med en naturlig lys-mørke cyklus og fri adgang til mad og vand. Efter1 uges akklimatisering, begyndte eksperimenter.

1.2 Reagenser og instrumenter

Cyclofosfamid(Nanjing Jiancheng)

Icariin(Nanjing Guangrun Biotech)

Ginsenosid Rg1(Shanghai Macklin)

Verbascoside(Shanghai Zhenzhun Biotech)

AR antistof(Santa Cruz, USA)

-aktin antistof(Sigma, USA)

H&E farvningssæt(Shanghai Yiji Industrial)

ELISA-sæt til serum FSH, LH, testosteron(Shanghai Meilian)

qRT-PCR-reagenser (SYBR Green I)(Shanghai Julu Biotech)

Instrumenter: Termo mikropladelæser, Olympus optisk mikroskop, LI-COR Odyssey billedbehandlingssystem, ABI qRT-PCR maskine

 

1.3 Dyregruppering og LOH-modelinduktion

Rotter blev tilfældigt tildelt til6 grupper (n=10 pr. gruppe):

Kontrolgruppe:

Intraperitoneal (ip) injektion af 0,9% saltvand i 5 dage

Oral saltvand (1 ml/100 g) i 60 dage

Modelgruppe:

ip cyclophosphamid 20 mg/kg/dag i 5 dage

Efterfulgt af oral saltvand i 60 dage

Testosteronpropionat (positiv kontrol):

ip cyclophosphamid (samme som ovenfor)

Subkutan injektion af testosteronpropionat 5 mg/kg/dag i 7 dage

Icariin gruppe:

ip cyclophosphamid (samme)

Oral icariin 200 mg/kg/dag i 60 dage

Verbascoside gruppe:

ip cyclophosphamid (samme)

Oral verbascoside 200 mg/kg/dag i 60 dage

Ginsenoside Rg1 gruppe:

ip cyclophosphamid (samme)

Oral ginsenosid Rg1 200 mg/kg/dag i 60 dage

Alle behandlinger blev administreret mellem kl8.00-11.30. Der blev udført vurderinger24 timer efter den sidste dosis.

 

1.4 Kropsvægt og reproduktive organindeks

Efter vejning blev rotter aflivet ved cervikal dislokation. Detestikler, epididymis og sædblærerblev dissekeret og vejet.

Entestis fra hver rotteblev fikset ind4% paraformaldehydi 72 timer, dehydreret med graderet alkohol, paraffinindstøbt, sektioneret (5 μm) og farvet medHæmatoxylin-Eosin (H&E). Morfologiske ændringer blev observeret under lysmikroskopi.

 

1.5 Serumhormonanalyser

Rotter blev bedøvet med3% pentobarbitalnatrium, og blod blev opsamlet viahjertepunktur. Serum blev adskilt afcentrifugering ved 3000 rpm i 10 minutter ved 4 grader. ELISA-kits blev brugt til at måleFSH, LH og testosteronniveauer i henhold til producentens protokoller.

 

1.6 AR-proteinekspression (Western Blot)

Testikelvæv blev lyseret og proteinkoncentration målt. Lige store mængder protein blev opløst af10% SDS-SIDE, overført til PVDF-membraner og inkuberet med primære antistoffer imodARog-aktin (1:1000)natten over. Sekundær antistofinkubation blev efterfulgt af kemiluminescenspåvisning.ImageJblev brugt til analyse.

 

1,7 AR mRNA-ekspression (qRT-PCR)

Total RNA blev ekstraheret fra testikelvæv. cDNA blev syntetiseret via revers transkription. qRT-PCR blev udført ved hjælp af SYBR Green-metoden.

AR primere:

Frem: 5′-CAGGGACCA CGTTTTACCCA-3′

Bagside: 5′-TTCCCTTCCGCAGCTCTTTT-3′

-aktin primere (intern kontrol):

Frem: 5′-CCACCATGTACCCAGGCATT-3′

Bagside: 5′-CGGACTCATCGTACTCCTGC-3′

Termisk cykling: 95 grader i 15 minutter (præ-denaturering), efterfulgt af 40 cyklusser af 95 grader i 15 s og 60 grader i 1 min. Data blev analyseret ved hjælp af2^-ΔACtmetode.

 

1.8 Statistisk analyse

Data blev analyseret vhaSPSS 26.0.

Resultater præsenteres sommiddel ± standardafvigelse (x̄ ± s)

t-testblev brugt til to-gruppe sammenligninger

Envejs ANOVAblev brugt til flere gruppesammenligninger

P < 0,05blev betragtet som statistisk signifikant