Liang Qingsong 1,2,4, Pan Yingjie 2,4, Chen Ziying 2,4, Zhang Ying 1,3, Wu Menghua 1,3, Cao Hui 1,3, Ma Zhiguo 1,3*

(1. School of Pharmacy, Jinan University, Guangzhou 510632, Guangdong; 2. Guangdong Yifang Pharmaceutical Co., Ltd., Foshan 528244, Guangdong; 3. Lingnan Traditional Chinese Medicine Research Center, Jinan University, Guangdongzhou 510632, 4. Key Laboratory of Guangdong Traditional Chinese Medicine Formula Granules Enterprise, Foshan 528244, Guangdong)

Abstrakt: Formål At tilberede cistanche deserticola standardafkog og give en pålidelig metode til kvalitetskontrol. Metoder I henhold til tilberedningskravene for standardafkog blev 14 partier af Cistanche deserticola standardafkog fremstillet. Indholdet af echinasid og pilosid i standardafkogningen blev bestemt ved HPLC, overførselshastigheden blev beregnet, ekstraktionshastigheden og pH-værdien af ​​afkogningen blev målt, og UPLC-fingeraftrykket for Cistanche deserticola standardafkog blev etableret. Resultater Den gennemsnitlige overførselshastighed af echinasid og pilosid i 14 batches af Cistanche deserticola standardafkog var henholdsvis 22,99 procent og 17.{{20}}9 procent. Ekstraktionshastigheden varierede fra 25,1 procent til 56,6 procent, og pH-værdien varierede fra 4,30 til 5,15. Der er 6 almindelige toppe i fingeraftrykket, og blandt dem identificeres nr. 1-toppen som echinacea-glycosid, nr. 3-toppen identificeres som angiocyanin A, nr. 4-toppen identificeres som pilosid, og nr. 5 peak er identificeret som isopilosid. Ligheden mellem 14 partier af Cistanche deserticola standardafkog blev evalueret, og ligheden varierede fra 0,789 til 0,999. Konklusion Tilberedningen af ​​Cistanche deserticola standardafkog er standardiseret, med god generel homogenitet, kontrollerbar kvalitet, god nøjagtighed, stabilitet og repeterbarhed af bestemmelsesmetoden og høj fingeraftrykslighed, som kan give en reference til kvalitetskontrollen af ​​Cistanche deserticola standardafkog .

Nøgleord: Cistanche deserticola; Standard afkog;Echinacoside; Pilosid; Fingeraftryk; Kvalitetsvurdering

"Cistanche deserticola er en tør, skællende, kødfuld stilk af slægten Cistanche i Orobaceae eller Cistanche tubulosa ma. Den har virkningerne af tonificering af nyre-yang, gavner blodessens, fugter tarmene og lindrer forstoppelse. Det er meget udbredt ved impotens. , infertilitet, ømhed i taljen og knæet, muskel- og knoglesvaghed, og tarmtørhed og forstoppelse."

cistanche pulver sundhedsmæssige fordele—tonificerende nyre

Klik her for at se produkter fra Cistanche for nyresygdom

【Ask for more】 Email: xue122522@foxmail.com /  Whats App:  0086 18599088692 /  Wechat:  18599088692

Det indeholder hovedsageligt phenylethanoidglycosider, benzylalkoholglycosider, iridoider og deres glycosider, lignin og dets glycosider og andre forbindelser. Blandt dem,phenylethanoid glycosideranses for at være de vigtigste effektive komponenter i Cistanche deserticola ma.

Phenylethanolglycosid er den vigtigste aktive komponent i Cistanche deserticola

Standardafkog af traditionelle kinesiske medicinskiver (dvs. standardafkogningen) er et enkelt afkog af traditionelle kinesiske medicinskiver fremstillet gennem standardiserede processer, styret af teorien om traditionel kinesisk medicin og baseret på klinisk anvendelse, med reference til moderne ekstraktionsmetoder. På grund af det faktum, at standardafkogningen ikke har nogen hjælpestofinterferens og ikke gennemgår en tørreproces, er den i overensstemmelse med traditionel afkog til klinisk brug, og det er nemt at teste forskellige ideelle koncentrationer gennem tilberedning af skiver eller ekstrakter. Derfor er standardafkog af traditionelle kinesiske medicinskiver, som kvalitetsstandarden for klassiske Ming Fang-præparater og standardreferencen til måling af traditionel kinesisk medicinformelpartikler, i øjeblikket en effektiv form til at sikre sikkerheden, effektiviteten og stabiliteten af ​​traditionel kinesisk medicin for at opnå konsistens i klinisk effekt. I øjeblikket er der ingen litteraturrapporter om undersøgelsen af ​​standardafkog af Cistanche deserticola afkogsstykker.Dette eksperiment forberedte tilsvarende standardafkog til 14 partier Cistanche deserticola og udførte forskning i standardafkog for Cistanche deserticola med henblik på at etablere kerneprøver af kvalitetsmarkører for Cistanche deserticola, hvilket giver et eksperimentelt grundlag for udviklingen af ​​Cistanche deserticola-formelgranulat .

Cistanche pulver

1.Apparater og materialer

1.1 Instrumenter og udstyr

Waterse2695 højtydende væskekromatografi (vande); ME204E 1/10000 balance (Mettler Toledo); XP26 millionte skala (Mettler Toledo); WatersAcquire UPLC Ultra High-Performance Liquid Chromatography (WATSCH); KQ-500E Ultrasonic Cleaner (Kunshan Ultrasonic Instrument Co., Ltd.).

1.2 Reagenser og materialer

Echinacosidereferencestof (batchnummer: S-003-190403),anthocyaninEt referencestof (batchnummer: G-066-181216),Acteosidreferencestof (batchnummer: M-011-181106), ogisopilosidreferencestof (batchnummer: Y{{0}}) blev alle købt fra Chengdu Ruifensi Biotechnology Co., Ltd., med en renhed på mere end 98,0 procent. Kromatografisk ren myresyre, Tianjin Kemio Chemical Reagent Co., Ltd; Kromatografisk ren methanol, Merck Co., Ltd; Det eksperimentelle vand er et laboratoriesystem med ultrarent vand, Merck Co., Ltd; Andre reagenser er analytisk rene. I denne undersøgelse blev i alt 14 partier af tilberedte stykker Cistanche deserticola indsamlet fra markedet og identificeret af professor Ma Zhiguo fra Jinan University som de tørrede, skællende, kødfulde stængler af slægten Cistanche deserticola eller Cistanche tubulosa, en plante af slægten Cistanche i familien Orobaceae. Prøveoplysninger (se tabel 1).

Echinoside, den vigtigste kemiske komponent i Cistanche deserticola

2 .Metoder og resultater

2.1 Fremstilling af standardafkog og testopløsning

2.1.1 Tilberedning af Cistanche deserticola standardafkog:

Tag 100 g af de tilberedte skiver af Cistanche deserticola i henhold til reglerne om forvaltning af traditionel kinesisk medicin afkogningsrum i medicinske institutioner, tekniske krav til kvalitetskontrol og standardformulering af granulat af traditionelle kinesiske medicinformler og standardsuppe af traditionel kinesisk medicin , læg dem i en elektrisk keramisk gryde, tilsæt vand til afkogning to gange, tilsæt 9 gange vandet første gang, læg dem i blød i 30 minutter, opvarm og kog med Wuhuo (500W), hold dem let kogende under mild varme (200W), fortsæt til at afkoge i 60min, og filtrer den afkogte væske gennem en 350 mesh sigte, mens den er varm. Tilsæt 7 gange mængden af ​​vand for anden gang, opvarm det over en varm ild og bring det i kog. Skift til lav varme og hold det let kogende. Fortsæt med at koge i 40 minutter. Filtrer afkogningen med en 350 mesh sigte, mens den er varm, og kombiner de to afkog. Overfør afkogningen til en 2000 ml rundbundet kolbe, brug en rotationsfordamper til at reducere trykket, og koncentrer ved lav temperatur (temperatur: 60 grader; vakuumgrad: - 0.10 MPa) til et konstant volumen på 500 ml, og ryst godt. .

Tabel 1 Prøveoplysninger om Herba Cistanche

2.1.2 Forberedelse af testopløsningen af ​​Cistanche deserticola afkogsstykker:

Tag omkring 1 g af pulveret af Cistanche deserticola (sigtet gennem en fjerde sigte), vej det nøjagtigt, anbring det i en 100mL brun målekolbe, tilsæt nøjagtigt 50mL 50 procent methanol, luk låget, ryst godt , vej vægten, læg i blød i 30 min, ultralydsbehandling i 40 min (effekt: 250W, frekvens: 35kHz), afkøl den, vej vægten igen, tilsæt 50 procent methanol for at kompensere for den tabte vægt, ryst godt, lad den stå, tag supernatanten, og fortynd den med 0,22 μM mikroporøs membranfiltrering, opnået.

2.1.3 Fremstilling af testopløsningen af ​​Cistanche deserticola standardafkog:

Tag standard cistanche-suppen, ryst godt, mål nøjagtigt 5mL til 50mL i en målekolbe, tilsæt vandfri ethanol for at fortynde til skalaen, ryst godt og fortynd med 0,22 μM mikroporøs membranfiltrering, opnået.

2.1.4 Fremstilling af referenceopløsning:

Tag en passende mængde echinacea glycosid kontrolprøve og poolside kontrolprøve, vej dem nøjagtigt, anbring dem i en 10 mL brun målekolbe, opløs dem med 50 procent methanol og fortynd til vægten, ryst godt, og tilbered en opløsning med koncentrationerne 0,0200 og 0,02100 mg · ml - 1 for henholdsvis de to ovenstående komponenter for at opnå en blandet kontrolopløsning.

Acteosid, den vigtigste kemiske komponent i Cistanche deserticola

2.2 Indhold af echinosid- og pilosidkomponenter

Indholdsbestemmelsesmetoden for Cistanche deserticola i bind I af den kinesiske farmakopé (2015 udgave) blev udført ved hjælp af Agilent ZORBAXB-C18 kromatografisk kolonne (4,6 × 150mm,5 μm) ved anvendelse af methanol som den mobile fase A og 0,1 procent myresyreopløsning som den mobile fase B, blev der udført gradienteluering (0 til 17 minutter, 26,5 procent A; 17 til 20 minutter, 26,5 procent → 29,5 procent A; 20 til 27 minutter, 29,5 procent A); Flowhastighed: 1,0mL · min-1; Søjletemperatur: 30 grader ; Detektionsbølgelængde: 330 nm; Antallet af teoretiske plader beregnet ud fra toppen af ​​echinacea bør ikke være mindre end 3000. Indholdet af echinacea glycosid og poolside i de tilberedte stykker af Cistanche deserticola og deres standardafkog blev bestemt, og resultaterne blev vist i tabel 2.

2.3 Bestemmelse af evalueringskarakteristiske parametre for standardafkog af Cistanche deserticola afkogsstykker

Tabel 2 Kvalitetsanalyseresultater af Herba Cistanche og dens standardafkog (n=2)

2.3.1 Indsæt udbytte:

Ryst standard Cistanche deserticola suppen tilberedt under 2.1.1 godt, sug 100 ml nøjagtigt, læg den i en fordampningsskål med konstant vægt (vægt: m1), inddamp den i et vandbad, tør den i en ovn ved 105 grader i 3 timer, tag det ud, læg det i en tørretumbler til afkøling og tør i 30 minutter, vej det, notér dets vægt som m2 og vægten af ​​det medicinske materiale som M. Ifølge formlen "Flødeudbytte=(m2 m1 )" × 500/(100 × M) × Beregn pastahastigheden med "100 procent ", og tag gennemsnitsværdien efter 2 parallelle kopier af hver prøve. Resultater (se tabel 2).

2.3.2 Overførselshastighed:

Baseret på ovenstående måleresultater af indholdet af echinacea-glykosider og pilosider blev overførselshastighederne for echinacea-glykosider og pilosider beregnet i henhold til formlen for overførselshastighed (overførselshastighed=kvalitet af indikatorkomponenter i Cistanche deserticola standardafkog/kvalitet af indikatorkomponenter i afkogsstykker × 100 procent), 2 parallelle kopier for hver prøve. Resultater (se tabel 2).

2.3.3 pH-værdi:

Ryst Cistanche deserticola standardafkog fremstillet under 2.1.1 jævnt, tag en passende mængde, mål pH-værdien med et pH-meter, og tag en gennemsnitsværdi. Hver prøve er opdelt i to dele parallelt. Resultater (se tabel 2).

2.4 Etablering af UPLC-fingeraftryk af Cistanche deserticola standardafkog

2.4.1 Kromatografiske forhold:

Brug af en WatersHSST3-søjle (2,1 × 100mm,1,8 μm); Ved at bruge methanol som mobil fase A og 0,1 procent myresyreopløsning som mobil fase B, blev der udført gradienteluering (0 til 4 min, 34 procent A; 4 til 10 min, 34 procent → 40 procent A; 10 til 15 minutter, 40 procent → 46 procent A; 15 til 17 minutter, 46 procent → 34 procent A; 17 til 20 minutter, 34 procent A); Flowhastighed: 0,3mL · min-1; Søjletemperatur: 30 grader ; Detektionsbølgelængde: 330 nm; Referenceopløsningsinjektionsvolumen 1 μ 50. Injektionsmængde af testopløsningen 0,4 μ L.

2.4.2 Fremstilling af referenceopløsning:

Tag en passende mængde af kontrolstofferne Echinacetin, Angiosid A, Piloside og Isopilosid, vej dem nøjagtigt, anbring dem i en 10mL brun målekolbe, opløs dem med 50 procent methanol, fortynd til skalaen, ryst godt og klargør opløsninger med koncentrationerne af de ovennævnte fire komponenter på henholdsvis 0.196, 0.234, 0.228 og 0.213 mg · mL - 1, for at opnå en blandet kontrolopløsning.

2.4.3 Forberedelsen af ​​prøveopløsningen er den samme som i punkt 2.1.3.

2.4.4 Præcisionstest:

Tag testopløsningen af ​​den samme batch af Cistanche deserticola standardafkog (GH{{0}}), og injicer den seks gange kontinuerligt i henhold til de kromatografiske betingelser i 2.4.1. Ved at bruge poolside (top 4) som referencetop, beregnes, at RSD for den relative retentionstid for hver fælles top er mindre end 0,2 procent, og RSD for det relative topareal er mindre end 5,0 procent, indikerer, at instrumentet har god præcision.

Eksperimentel undersøgelse af Cistanche deserticola

2.4.5 Stabilitetstest:

Tag testopløsningen af ​​den samme batch Cistanche deserticola standardafkog (GH{{0}}), og injicer den ved 0, 2, 4, 8, 12, 16, 20, 24 og 28 timer efter fremstilling i henhold til de kromatografiske betingelser i 2.4.1. Ved at bruge poolside (top 4) som referencetop, beregnes, at RSD for den relative retentionstid for hver fælles top er mindre end 0,3 procent, og RSD for det relative topareal er mindre end 4,8 procent, hvilket indikerer, at testopløsningen har god stabilitet inden for 28 timer.

2.4.6 Repeterbarhedstest:

Tag det samme parti Cistanche deserticola standardafkog (GH{{0}}), tilbered 6 dele af opløsningen parallelt efter metoden i punkt 2.1.3, analyser i henhold til de kromatografiske betingelser i punkt 2.4. 1, optag kromatogrammet, og beregn, at RSD for den relative retentionstid for hver fælles top er mindre end 0,2 procent, og RSD for det relative topareal er mindre end 3,8 procent. Resultaterne viser, at metodens repeterbarhed er god.

2.4.7 Etablering af fingeraftryk:

Forbered testopløsningen af ​​14 batches Cistanche deserticola standardafkog i henhold til punkt 2.1.3, og injicer prøven til bestemmelse i henhold til de kromatografiske betingelser i punkt 2.4.1 for at opnå UPLC-fingeraftrykket af 14 batches af Cistanche deserticola standardafkog. UPLC-fingeraftrykskromatogrammerne af 14 batches af testopløsning blev importeret til "Chinese Medicine Chromatographic Fingerprint Similarity Evaluation System" (Version 2{{10}}12) software, ved at bruge SI som referencekromatogram, peak matching var udført med en tidsbredde på 0.1, og medianmetoden blev brugt til at generere referencefingeraftrykket R for Cistanche deserticola standardsuppe (se figur 1). Samtidig blev ligheden beregnet, og resultaterne (se tabel 3) blev opnået. Fra det matchende kort kan det ses, at der er 6 almindelige toppe i standardafkog af Cistanche deserticola. I henhold til toparealet og retentionstiden for de seks almindelige toppe blev den relative retentionstid (peak-tal (gennemsnitlig relativ retentionstid) beregnet som top 1 (0.434), top 2 (0 .643), top 3 ({{40}}.919), top 4 (1.000), top 5 (1.635) og top 6 (1.858), henholdsvis; relativ top områder, [peak number (gennemsnitligt relativ peak area)] var top 1 (6,340), top 2 (0.890), top 3 (0,295), top 4 ( 1.000), henholdsvis top 5 (0,674) og top 6 (0,0190). Blandt dem blev top 1 identificeret som echinacea glycosid, top 3 blev identificeret som anthocyanin A, top 4 blev identificeret som poolside, og top 5 blev identificeret som isopilosid; lighedsanalysen viste, at ligheden mellem de 14 batches af standardafkog og kontrolkortet var mellem 0,789 og 0,999 (se figur 2).

Tabel 3    14 Lighed af UPLC-fingeraftryk af batch Cistanche deserticola standardafkog

Figur 1 UPLC-kromatogrammer af blandet referenceopløsning (A), cistanche deserticola standardafkog (B) og cistanche tubulosa standardafkog (C)

1. Echinoside; 3. Anthocyanin A; 4. Physalis-glycosider; 5. Isopilosid

Figur 2    14 UPLC-fingeraftryk af batch Cistanche deserticola standardafkog

3 .Diskussion

3.1 Tilberedning af standardafkog

Som en kvalitetsstandard standardiserer standardafkog af traditionelle kinesiske medicinskiver forskellige kliniske medicinformer, som i øjeblikket er et af forsknings-hotspots inden for traditionel kinesisk medicin. Tilberedning af standardafkog kræver, at kilden til afkogsstykkerne er autentisk og repræsentativ. Derfor omfatter den kinesiske farmakopé 9 partier af tilberedte Cistanche deserticola og 5 partier af forberedte Cistanche deserticola. Før tilberedning blev de tilberedte skiver testet og opfyldte alle kravene i 2015-udgaven af ​​den kinesiske farmakopé.

3.2 Undersøgelse af injektionsmængden af ​​testopløsningen

I indholdsbestemmelsestesten af ​​indekskomponenterne i standardafkogningen var prøveindsprøjtningsmængden af ​​testartiklen 10 μ Ved L var der ingen top af poolside i standardafkogskromatogrammet af Cistanche deserticola, undtagen for echinacea glycosid. Selvom både echinacea-glycosid og poolside optrådte i standardafkogskromatogrammet for Cistanche deserticola, var toparealerne af både echinacea-glycosid og poolside små, og det blev fundet, at en høj top forekom ved opløsningsmiddeltoppositionen i kromatogrammet af testartiklen. Årsagen til analysen er, at det konstante volumen af ​​testprøven er vandfri ethanol uden vand, og det er ikke i overensstemmelse med præparationsopløsningsmidlet af kontrolprøven, 50 procent methanol, hvilket resulterer i en signifikant opløsningsmiddeleffekt, hvilket resulterer i ingen tilbageholdelse af echinacea og ved poolen. Nogle prøver har toppe af echinacea og giver på grund af deres relativt høje indhold og delvise tilbageholdelse. Juster testartiklens injektionsmængde til henholdsvis 5 og 3 μ L. Undersøg elimineringseffekten af ​​opløsningsmiddeleffekt, og resultatet viser, at prøveindsprøjtningsmængden af ​​testartiklen er 3 μ. Ved L kan opløsningsmiddeleffekten elimineres, og toppen af ​​echinacea kan være normal, så prøveindsprøjtningsmængden af ​​testartiklen er indstillet til 3 μ L. På samme måde blev opløsningsmiddeleffekten, der blev genereret under fingeraftryksbestemmelsen af ​​standardafkogningen, elimineret ved at undersøge injektionsmængden af ​​testopløsningen, og den optimale injektionsmængde blev bestemt til at være 0,4 μL.

3.3 Årsager til den lave lighed mellem fingeraftryk af Cistanche deserticola standardafkog

Ligheden mellem fingeraftryk på 14 partier af Cistanche deserticola og Cistanche tubulosa standardafkog varierede fra 0.789 til 0.999. Den laveste lighedsbatch var RCR-9 med en standardsuppe på 0.789. Ligheden mellem andre batches er over 0.98. Sammenlignet med andre prøver er den overordnede lighed mellem RCR-9-standardsuppen ikke høj. Fra fingeraftrykskromatogrammet af RCR-9 standardsuppen kan det ses, at den har to tydelige toppe sammenlignet med andre prøver ved retentionstider på 12.278 og 15.466. På grund af de komplekse kemiske komponenter i traditionel kinesisk medicin fører forskelle i et vækstmiljø, høsttid, forarbejdningsmetoder osv. til forskellig materialeophobning og komponentindhold i tilberedte skiver. Den lave lighed mellem RCR-9-standardsuppe kan skyldes forskellige faktorer, der forårsager, at materialeakkumuleringen af ​​denne batch af tilberedte skiver er forskellig fra andre batcher.

3.4 Kvalitetskontrol af Cistanche deserticola standardafkog

Dette eksperiment analyserede ekstraktionshastigheden, pH-værdien og overførselshastighederne for echinacoside og poolside af 14 batches af cistanche deserticola standardafkog. Ekstraktionshastigheden for 14 partier af Cistanche deserticola standardafkog varierede fra 25,1 procent til 56,6 procent. På grund af det lave sukkerindhold i de tilberedte stykker af Cistanche deserticola sammenlignet med de tilberedte stykker af Cistanche deserticola, var ekstraktionshastigheden for standardafkog af Cistanche deserticola deserticola lavere end for standardafkog af Cistanche deserticola. pH-værdien af ​​14 partier Cistanche deserticola standardafkog varierede fra 4,30 til 5,15, hvilket indikerer, at pH-værdien af ​​Cistanche deserticola standardafkog var relativt stabil. Den gennemsnitlige overførselshastighed af Echinacetin i 14 partier af Cistanche deserticola og Cistanche deserticola standardafkog var 22,99 procent, og den gennemsnitlige overførselshastighed ved poolen var 17,09 procent. Blandt dem var overførselshastigheden af ​​indekskomponenter i standardafkog fremstillet af Cistanche deserticola afkogsstykker relativt stabil, mens overførselshastigheden af ​​indekskomponenter i standardafkog fremstillet af Cistanche deserticola afkogsstykker var relativt stor blandt batcher.

4.Konklusion

I denne undersøgelse blev UPLC-metoden brugt til at etablere fingeraftrykket af Cistanche deserticola standardafkog, som udførligt kan afspejle og evaluere den interne kvalitet af Cistanche deserticola standardafkog. Resultaterne af ekstraktionshastigheden, indekskomponentoverførselshastigheden og fingeraftryksanalysen af ​​standard cistanche afkog viste, at den samlede homogenitet af de 14 batches af cistanche standard afkog var god, fremstillingsmetoden var i overensstemmelse med klinisk praksis, og kvaliteten var kontrollerbar. Dette er med til at standardisere de forskellige former for cistanche-medicin, sikre konsistensen af ​​lægemidlets kliniske effekt og løse kvalitetsforskellene forårsaget af forskellige produktionsprocesser og fremstillingsmetoder.

Superman urter cistanche

reference

〔1〕 Redigeret af National Pharmacopoeia Commission. Kinesisk farmakopé (Del I) [S]. Beijing: China Pharmaceutical Science and Technology Press, 2015135

〔2〕Li Chenghua, Liu Jinghui, Xu Zhenxia, ​​et al. Samtidig bestemmelse af fire phenylethanolglycosider i Cistanche tubulosa ved RP-HPLC. Journal of Pharmaceutical Analysis, 2010, 30 (06): 1003-1006

〔3〕Ding Yan, Zhang Kaimei, Cang Xiaoxin, et al. Forskningsfremskridt vedrørende kemiske bestanddele og biologiske aktiviteter af Cistanche L. Journal of Dalian University of Technology, 2016, 35 (06): 395-402

〔4〕Gao Yan, Guo Linong, Ma Shuangcheng, et al. Sammenlignende undersøgelse af tre arter af cistanche deserticola baseret på UPLC karakteristisk kort og hovedkomponentindhold ［ J ］. Chinese Journal of Traditional Chinese Medicine, 2019, 44 (17): 3749-3757

〔5〕Chen Shilin, Liu An, Li Qi, et al. Forskningsstrategi for standardafkog af traditionelle kinesiske medicinskiver ［ J ］. Chinese Journal of Traditional Chinese Medicine, 2016, 41 (08): 1367-1375