Undersøgelse om indflydelse af immunitet hos mus

For mere information kontakt venligstdavid.wan@wecistanche.com

To af tredive mændDBA/2NCrl(D2N)mus brugt som kontrolstamme i baggrundsdataanalyse afDBA/2N-MDXmus, præsenteret med unormale fund, der tyder på infektion. Tilfælde 1: En 4-uge gammel D2N-hanmus viste en hvid plaklæsion i venstre nyre (ingen kliniske symptomer), og en patologisk undersøgelse af nyren blev udført. Inflammatorisk celleinfiltration, hovedsageligt neutrofiler, blev observeret i tubuli og interstitium i venstre nyre, og Staphylococcus aureus (S.aureus) blev påvist fra det venstre nyresegment. Derfor blev denne læsion på venstre nyre diagnosticeret som suppurativtubulointerstitielnefritis forårsaget af S. aureus-infektion. Tilfælde 2: Venstre torticollis med vægttab blev påvist i en 9-uge gammel D2N-hanmus. Histologisk evaluering afslørede ekssudativ inflammation omkring svælgåbningen i eustachiske rør og purulent betændelse i både mellemøre og venstre indre øre med abscesdannelse og klynger som gram-positive mikrokolonier. S. aureus blev identificeret fra podningskulturer af begge ydre øregange. Som et resultat var dette tilfælde af torticollis forårsaget af S. aureus-suppurativ mellemørebetændelse og internettet. S. aureus er velkendt som et opportunistisk patogen med potentiale til hyppigt at forårsage suppurative sygdomme hos immunkompetente laboratoriedyr. Så vidt vi ved, er dette tilfælde af S. aureus-infektion præsenteret med torticollis i en D2N-mus imidlertid ikke rapporteret.

Klik her for at lære mere om Cistanche

En methicillin-resistent Staphylococcus aureus (MRSA) isolater dukkede op i en laboratoriemus på Center for Laboratory Animal Science ved National Defense Medical College i 2018 ogMRSAisolater blev udvundet fra mus også i de andre muserum derefter. På disse MRSA-isolater blev der udført molekylær typebestemmelse, såsom Multi-locus-sekvenstypebestemmelse (MLST), Staphylococcus aureus Protein A(spa)-typebestemmelse, SCCmec-typning og koagulasetypebestemmelse til bestemmelse af deres genotyper. Alle isolater afslørede identiske genotyper (ST1, spa t1784, SCCmec type IV og koagulase type VII), hvilket tyder på, at isolaterne var identiske kloner. Før fremkomsten af ​​MRSA i 2018 var der ikke isoleret isolater med sådanne genotyper på denne facilitet, det blev antaget, at MRSA-klonen blev bragt ind i faciliteten via mennesker eller laboratoriedyr. STl1 er den første samfundserhvervede MRSA udvundet fra børn i USA, men ST1 er gendannet fra mennesker og dyr verden over i øjeblikket. I Japan er ST1 og SCCmec type IV-stammer blevet isoleret fra mennesker og katte, hvilket tyder på, at ST1 overføres mellem mennesker og dyr. En MRSA-stamme med disse genotyper, men også med spa tl784, er blevet genfundet fra mennesker. I øjeblikket er skelnen mellem hospitalserhvervet MRSA, samfundserhvervet MRSA og husdyrrelateret MRSA mere tvetydig. Disse resultater tyder på, at mus kan fungere som reservoirer af MRSA.

I nyere cancerimmunterapi hæmmes aktiviteten af ​​molekyler såsom PD-1 for at øge immuncellernes aktivitet mod cancer. På trods af den høje terapeutiske effekt er der tilfælde, hvor autoimmun sygdom udvikler sig i cancerimmunterapi. Her etablerede vi et system, der kan nedbryde PD-1 på en tidsspecifik måde i dyrkede celler og mus ved hjælp afSMASh degron system. PD-1-SMASh-fusionsprotein i Jurkat-celler og CD3 plus splenocytter blev reduceret med 1 dag efter administration af Asunaprevir(ASV) eller Grazoprevir(GRV), som er NS3/4A-proteasehæmmere. Vækst af MC-38 adenokarcinomceller inokuleret i PD-1-cherry-SMASh knockin(KI)-mus med ASV blev undertrykt sammenlignet med vildtype(WT) og ubehandlede KI-mus. Ydermere kunne WT-musene transplanteret med KI-knoglemarvsceller efter at være blevet bestrålet med dødelig stråling afvise MC-38-celler med GRV. KI-mus virkede raske og viste ingen tegn på autoimmun sygdom. Vi foreslår, at brugen af ​​degron-systemet i levende organismer forventes at fremme ikke kun forskellige biologiske undersøgelser, men også behandlingen af ​​sygdomme.

Progesteron (P4) udskilles fra moderkagen for at opretholde graviditeten og fungerer som en immunregulator. Glukokortikoid er en andenimmunregulerendesteroid til at regulere inflammation. I denne undersøgelse blev humane perifere mononukleære blodceller (PBMC'er) transplanteret ind i NOG-mus for at inducere graft-versus-host-sygdom (GVHD) og brugt til sammenligningen mellem P4 og cortisol (COR) effekter. PBMC'er blev stimuleret i nærvær af forskellige koncentrationer af P4 eller COR, og cellerne blev analyseret ved flowcytometri (FCM). Alikvoter afPBMC'erblev transplanteret i NOG-mus, og P4 eller COR blev injiceret i musene to gange om ugen. Efter 28 dage blev FCM og immunhistokemiske analyser udført. Som et resultat hæmmede en høj koncentration af P4 T-celleaktivering in vitro, mens inhiberingen ikke fortsatte efter fjernelsen. Undertrykkelsen af ​​T-celleaktivering var mindre i COR-behandling sammenlignet med P4, og T-celleudmattelse var mere fremtrædende. P4-injicerede mus bar flere splenocytter, især CD8 T-celler, sammenlignet med kontrolmus. Men den lavere ekspression af CD25, mindre infiltration af humane T-celler i lunge og lever, og færreGVHDsymptomer blev observeret. På den anden side var antallet af splenocytter, især T-celler, i COR-injicerede mus signifikant lavere, og aktiverede/udtømte celler var rigelige. Disse resultater tyder på, at P4 foretrækker at opretholde T-celler sammenlignet med COR in vitro.

Helicobacter hepaticus og Helicobacter regninger er kendt som patogener, der forårsager hepatitis og colitis hos mus. Eksistensen af ​​flere positive tilfælde bekræftes stadig årligt i dyreforsøgsanlæg i Japan. Det er bedst at bruge cecal indhold eller frisk afføring som prøve til PCR-testning af H. hepaticus og H. bilis.

For nylig er DNA- og RNA-transport- og opbevaringsreagenser blevet fremstillet af forskellige producenter. Det forventes, at disse reagenser vil være problemerne med at transportere prøver, der bruges til PCR-test, vil blive ryddet. I denne undersøgelse blev anvendeligheden af ​​nukleinsyrelagringsreagenset derfor undersøgt ved at udføre en PCR-test af Helicobacter under anvendelse af indholdet af blindtarmen konserveret ved hjælp af nukleinsyrekonserveringsreagenset. Som et resultat kunne prøver opbevaret i 7 dage ved hjælp af konserveringsopløsningen påvises Helicobacter på samme niveau som den friske prøve. Ud fra ovenstående blev det foreslået, at i PCR-testen af ​​Helicobacter, selvom transporten tager dage, er det muligt at udføre testen med høj nøjagtighed ved at transportere prøven nedsænket i nukleinsyreopbevaringsreagenset ved køleflyvning.

Vi har tidligere udviklet E.coli mutantstammer med betydeligt forbedret adhærens til in vitro faste overflader ved at modificere de gener, der reagerer på næringssult. For at evaluere interaktionen mellem disse adhæsionsforstærkede E. coli-stammer (AEE'er) og in vivo tarmmiljø vurderede vi deres koloniseringsevne til tarmkanalen ved at inokulere mus.

Før evalueringsforsøget transformerede vi AEE'er med et plasmid, der udtrykker luciferase til in vivo visualisering. som blev oralt inokuleret i fastende mus og opsamlet fæces med få dages mellemrum. Antallet af levendeAEE'erblev estimeret ved at måle CFU fra den indsamlede afføring.

Som et resultat, sammenlignet med kontrolstammen, var AEE'er mere rigelige i fæces i mere end en uge, hvilket indikerer øget kolonisering i tarmkanalen. Ved at observere lokaliseringen af ​​luciferase-luminescens ved ikke-invasiv billeddannelse ved hjælp af IVIS, blev det også fundet, at AEE'er havde en tendens til at kolonisere ved blindtarmen og tyktarmen.

[Mål] ​​I øjeblikket [Pasteurella]pneumotropicaer blevet omklassificeret som en ny slægt Rodentibacter. Af disse er R.pneumotropicus og R. Healy hovedmålene for mikrobiologisk overvågning hos gnavere. Vi har isoleret en række Rodentibacter sp. der ikke kunne identificeres som arter fra gnavere. I denne undersøgelse undersøger vi egenskaberne ved Rodentibacter sp. isolere, med fokus på bakteriel virulens. [Metoder] Rodentibacter sp. der blev isoleret fra rotteluftrøret blev brugt til undersøgelsen. Udkast til genomsekventering blev udført på næste generations sequencer, og derefter blev de virulensassocierede gener forudsagt. I dyreforsøg blev Rag2-mus brugt til Rodentibacter sp. infektion.|Resultater| Ved udkast til genomsekventering var et unikt RTX-toksinkodende gen blevet identificeret i Rodentibacter sp. Proteinsekvensen af ​​RTX-toksin var mere homolog med dem, der blev produceret af Enterobacteriaceae end af Pasteurellaceae. I et dyreforsøg blev næsten alle inficerede Rag 2-mus bekræftet dødelig lungebetændelse eller septikæmi. Selvom isolatet ikke kunne identificeres som R. pneumotropicus og R. heylii, kan denne nært beslægtede art være dødelig for immunkompromitterede dyr i nærvær af virulensfaktorer såsom RTX-toksin.

I NBRP Basic Technology Development Program (2018-2019) sekventerede vi genomerne af murine opportunistiske patogene bakterier og udførteRNAseqaf protozoer i mus, for at udvikle PCR-assays for disse organismer. Vi brugte disse resultater til at analysere Rodentibacter spp. og protozoer hos rotter i samarbejde med Kyoto University (NBRP Rat). Her rapporterer vi testresultaterne i rotteprøver. [Metoder] 16S rRNA-gensekvenserne på ca. 1,5 kbp blev aflæst ved PCR for seks rotteisolater af Rodentibacter spp., og udkastgenomsekvensen for et isolat (#25) blev bestemt under anvendelse af Illumina HiSeq 2500. PCR af rottececalindholdet var udført baseret på RNAseq-resultater fra museprotozoer. [Resultater] 16S rRNA-gensekvenserne for alle isolater var identiske, og de blev identificeret som Rodentibacter Ratti ved OTU-analyse. Gensekventering af isolat #25 afslørede også, at denne stamme var R. Ratti. PCR for murine protozoer gav positive resultater for rotteamøber. Der blev ikke opnået positive resultater for TrichomonasPCRpå rotteprøver. [Diskussion] Rotteisolaterne af Rodentibacter spp. undersøgt i denne rapport var alle R. Ratti. Det er vigtigt at være opmærksom på tilstedeværelsen af ​​R. Ratti, når man udfører Rodentibacter-test på rotter. Nogle fækale rotteprøver viste positive for museamøbe PCR. Dette er det første skridt i udviklingen af ​​PCR til påvisning af protozoer hos rotter.

Rodentibacter-organismer 'Pasteurella pneumotropica'er opportunistisk patogen bakterie, der forårsager luftvejssygdomme hos mus og rotter. De blev tidligere klassificeret i slægten Pasteurella, og flere stammer blev foreløbigt foreslået som biotyper. I 2017 blev de kollektivt omorganiseret til slægten Rodentibacter. MaM- og MaR-stammer blev isoleret fra henholdsvis mus og rotter omkring 1980'erne. I denne undersøgelse bestemte vi genomsekvenserne for begge stammer og sammenlignede dem med dem fra slægten Rodentibacter, materialer og metoder. MaM- og MaR-stammerne blev opnået fra National Institute of Infectious Diseases (NIAID)

(Manabu Saito --> Yasushi Ami -->Fumio Ike). Begge stammer blev dyrket ved flydende kultur for at ekstrahere genomisk DNA, og de genomiske sekvenser blev bestemt ved hjælp af Illumina Hiseq 2500 og PacBio Sequel. [Resultater] Baseret på 16S rRNA-gensekvensen blev MaM-stammen identificeret som R.pneumotropicus og MaR-stammen som R. Ratti. Ydermere blev den komplette genomsekvens (2.213.961 bp) af MaR-stammen bestemt (antallet af rRNA-operoner var 6, og antallet af gener blev estimeret til at være 2.063). [Diskussionl MaM- og MaR-stammerne er blevet brugt som standarder til identifikation af 'Pasteurella pneumotropica' i Japan. Ud fra denne analyse bestemte vi arten af ​​begge stammer som følger: MaM-stammen er R.pneumotropicus og MaR-stammen er R.ratti. Bemærkelsesværdigt viser disse resultater, at R. Ratti kan isoleres fra rotter i Japan.

Clostridium pili for mig (CP) er modtagelig for smitsom hos forskellige laboratoriedyr, herunder rotter og mus, og viser asymptomatisk infektion undtagen hos immunkompromitterede dyr. Det betragtes som en stor differentialdiagnose at vedligeholde dyrefaciliteter og er velkendt for at påvirke eksperimentelle data fra dyreforsøg. Serodiagnose (ELISA, IFA) og PCR bruges almindeligvis til diagnosticering af CP, fordi isoleringen i det kunstige næringsmedium er vanskelig for CP. Imidlertid er eksistensen af ​​det ikke-specifikke antistof, der indikerer krydsreaktiviteten med CP ved hjælp af serodiagnosen, rapporteret og genkendes ofte i et lignende tilfælde i vores faciliteter. Desuden har PCR-metoden grænser som en pålidelig diagnostisk metode med periodisk overvågning, fordi CP ikke kan påvises i fæces efter den stigende antistoftiter. For nylig undersøgte vi en anden tilgang, hvor vi konserverede afføring fra dyr hver måned. Vi adopterede PCR-testen for CP, der ikke var påvirket af antistoffernes indflydelse, som mere pålidelig diagnostik ved at bruge afføringen, der kontinuerligt bevares. I denne rapport viser vi et nyligt tilfælde. (ikke-specifikt antistof) for at føre til inspektion af flowet, der udvikler sig i vores virksomhed.