Opløseligt perleekstrakt giver effektiv hudoplysning ved at modvirke endotelin

Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Jing Wang MD1|Zhixiong Chen MSc2|Yaojia Lu BSc2|Lihua Zhang BSc3|Jiahuan Mo BSc2|Fumin Cao BSc2|Min Xie BSc3|Xinzhong Shen BSc3|Anquan Yang BSc3

Abstrakt

Baggrund:Forekomsten af ​​hudpigmenteringsforstyrrelser har været stigende globalt. Dette kræver sikrere og mere effektive produkter til hudoplysning og fregnefjernelse. I denne undersøgelse har vi antaget detOpløseligt perleekstrakt(SPE) kan have endotelin-antagoniserende forbindelser med god hudblegningeffekter.

Mål: (a) At bestemme effekten og mekanismerne afSPEpå ET-1-behandlede B16 melanomceller. (b) At udforske de cytotoksiske virkninger af SPE på B16 melanomceller.

Metoder:CCK-8-assay blev udført for at bestemme, hvordan SPE og ET-1 påvirker proliferationshastigheden af ​​B16-melanomceller, NaOH-lyseassayet blev udført for at kvantificere indholdet af melanin, mens tyrosinaseaktiviteten blev bestemt ved DOPA-oxidation prøve. mRNA- og proteinekspressionsniveauerne for TYR og TRP-1 blev bestemt ved henholdsvis qRT-PCR-assay og Western blot-assay.

Resultater:Det fandt viSPEved 0.1 og 1 ug/mL koncentrationer har ingen effekt på proliferationen af ​​cellerne, og 10 nmol/L ET-1 fremmede proliferation af B16 melanomceller. B16-melanomceller behandlet med 10 nmol/L ET-1 udviste signifikant højere melaninsyntese, tyrosinaseaktivitet, TYR- og TRP-1-mRNA-ekspressionsniveauer sammenlignet med ubehandlede celler. Det skal bemærkes, at virkningerne af 10 nmol/L ET-1-behandling blev afskaffet med SPE på en dosisafhængig måde.

Konklusioner:SPE hæmmer endotelin, hvorved en sikker og effektiv oplysning lysner huden ved at modvirke endotelin. Desuden er SPE sikker og effektiv.

SØGEORD:B16 melanomceller, endothelin-1, opløseligt perleekstrakt,blegning

Cistanche herbaer en hudblegende ingrediens.

1|INTRODUKTION

I de senere år, nyere og effektiv hudblegningkosmetik til ekstern brug er blevet markedsført. Dette tilskrives økonomisk udvikling og ændrede livsstilsbehov på tværs af mennesker i alle generationer. Den aktuelt brugte hudblegningmidler omfatter hydroquinon, kojinsyre, phospholipase D1, placenta og vitamin A. Hudpigmenteringsforstyrrelser er hovedsageligt forbundet med produktionen af ​​melanin. Det syntetiseres gennem en proces initieret af omdannelsen af ​​tyrosin til dopa katalyseret af tyrosinase. Dopa initierer en række komplekse biokemiske reaktioner, der fører til syntesen af ​​melanin. Blegningsmekanismen af ​​dihydro asparges ic acid, 1 hydroquinon og kojic syre involverer hæmning af tyrosinase aktivitet, som er det hastighedsbegrænsende enzym i melanin syntese.2 Når man gør det, reducerer disse midler produktionen af ​​melanin, hvilket resulterer i hudblegning. 3 Derimod virker phospholipase D1, placenta og retinsyre ved at reducere mængden af ​​syntese af tyrosinase.4Selvom disse midler opnår en vis grad af blegning af huden, er deres blegningsmekanismer ikke klare. Desuden er de giftige og tager længere tid at forårsage hudblegning.

Det er derfor bydende nødvendigt at finde en mere sikker og effektiv hudblegningagenter. Forskning i hudblegning har betalt en høj præmie til interaktionen mellem cytokiner og melanocytter som en vej til at udvikle effektive hudblegningsmidler. Keratinocytter udskiller cytokiner såsom endothelin (ET), når de udsættes for ultraviolet stråling. Disse cytokiner påvirker migrationen af ​​melanocytter, dendritisk udvikling og melaninproduktion.5 Som sådan vil antagonisering af virkningsstederne for disse cytokiner føre til hvidere hud.6 Shi et al (2011) rapporterede, at resveratrol, en ny endotelinantagonist, bleger hud gennem en mekanisme, der involverer hæmning af tyrosinaseaktivitet i B16-melanocytter.7 Yang et al (2000) fandt, at resveratrol målretter mod melanocytmembran. Dette indebærer, at det kun passerer gennem melanocytmembranen og melanosommembranen for at nå steder, hvor det hæmmer melaninproduktionen.8 Tyrosinase er placeret i melanosomet, og derfor skal dets inhibitorer krydse fire lag (stratum corneum, den dybe epidermis, melanocytmembranen og melanosommembranen) for at blokere dens virkning.9 Resveratrol overgår kun to lag (stratum corneum og den dybe epidermis) for at hæmme tyrosinaseaktiviteten.10 Dette forkorter blegningsperioden.

Harley (1993) fandt, at perler i skotsk ferskvand, australsk og srilankansk havvand var lavet af lignende kemisk sammensætning, det vil sige calciumcarbonat, 91,72 procent, organisk stof, 5,94 procent, vand, 2,23 procent, og andre stoffer, {{ 7}}.11 procent .11 Andre steder fandt Zhang et al (2018), at perleekstrakter giver betydelige antioxidanteffekter in vitro.12,13 Yang et al (2016) fandt ud af, at perleekstrakter kan hæmme tyrosinaseaktivitet i B16F10-celler og derved reducere produktion af melanin.14 Dette indikerede, at perleekstrakt kan have hudblegningvirkninger, men den involverede mekanisme er ikke blevet undersøgt. Heri postulerede vi detSPEantagoniserer endothelin og ændrer syntesen af ​​melanin og tyrosinaseaktivitet af B16 melanomcellerne. Vores resultater viser, at opløselige perleekstrakter antagoniserer endotelin, hvilket forårsager hudblegning.

2|MATERIALER OG METODER

2.1|Forberedelse og sammensætningsanalyse af opløseligt perleekstrakt (SPE)

Perlepulver blev opløst i mælkesyre, og blandingens pH blev justeret til 7.0 med PBS. Enzymatisk hydrolyse blev initieret med tilsætning af protease, og ekstraktet blev filtreret med 10 μm kvalitativt filterpapir. Supernatanten blev opnået og lyofiliseret til fremstilling af opløseligt perleekstrakt.

2.2|Analyse af sammensætningen af ​​det frysetørrede pulver

Kort fortalt, fugtindholdet iSPEblev målt med den atmosfæriske tørringsmetode. En specifik mængde prøve blev opvarmet i en tørreovn ved 95-105 grader i 3 timer og vejet. Prøverne blev tørret gentagne gange for at opnå en konstant vægt. Fugtindholdet blev bestemt som forskellen i masse før og efter opvarmning. Prøven blev brændt, hvilket resulterede i dannelsen af ​​et uorganisk stof kaldet aske. Brændvejemetoden blev brugt til at måle kvaliteten af ​​aske, hvor forskellen i kvalitet før og efter afbrænding blev betragtet som askeindholdet. Kjeldahl-metoden blev anvendt til at bestemme proteinindholdet i SPE. Peptidindholdet blev estimeret som beskrevet før.15 Indholdet af polysaccharider blev bestemt ved anvendelse af anthranon-svovlsyremetoden.

cistancheuddrag

2.3|Cellekultur

Murine B16 melanomceller (venligst leveret af Stem Cell Bank, Chinese Academy of Sciences) blev dyrket i Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) indeholdende 10 procent føtalt bovint serum og 1 procent penicillin/streptomycin i en inkubator (BB150 Thermo) Fisher Scientific) sat til 37 grader og 5 procent CO2. Efter 3 dages dyrkning var cellerne i en næsten fusioneret tilstand og stort set spredt over hele skålen. Cellerne blev vasket med phosphatbuffer saltvand (PBS) og passeret ved fordøjelse med 0,25 procent trypsin. Cellerne blev talt under anvendelse af en celletælleplade og cellesuspensioner fremstillet i passende koncentrationer. Cellesuspensioner blev dyrket i en celleinkubator til efterfølgende eksperimenter

2.4|Påvisning af celleproliferation efter behandling med SPE og ET-1 ved CCK-8 assay

Celler i den logaritmiske vækstfase blev dyrket i {{0}}brøndsplader i en koncentration på 1 × 104 celler/ml i en inkubator indstillet til 37 grader og 5 procent CO2 i 24 timer . Forskellige koncentrationer af SPE ({{10}}, 0,01, 0,1, 1 og 10 ug/ml) blev derefter tilsat til brøndene og henstillet i 24 timer. 10 procent af Cell Counting Kit-8 (CCK-8) reagens (Jian Cheng Bioengineering Co.) blev tilsat til hver brønd for at måle cellernes spredningshastighed. Absorbansen af ​​hver brønd blev aflæst ved en bølgelængde på 490 nm under anvendelse af en mikropladelæser. Hver gruppe blev testet som tre replikater. Effekten af ​​ET-1 (0,1, 1, 10 og 100 nmoL) på celleproliferation blev vurderet efter samme protokol. Cellerne blev derefter opdelt i tre grupper: kontrolgruppen (ingen behandling blev givet), ET-1-gruppen (celler blev behandlet med 10 nmol ET-1 i 24 timer), ogSPEgruppe (celler blev behandlet med 1 0 nmol ET-1 i 24 timer og derefter behandlet med 0,1, 1 ug/ml SPE i 24 timer).

cistanche tubulosaer en tyrosinasehæmmer

2,5|Tyrosinase aktivitetstest

10 μL celler (forskelligt behandlede) blev podet i hver brønd i en 96-brøndsplade ved en celletæthed på (5-10) × 104 celler/ml, og 100 μL af vækstmediet blev tilsat til hver brønd. Cellerne blev derefter forkultiveret i en inkubator sat til 37 grader og 5 procent CO2 i 24 timer. Pladerne blev centrifugeret ved 2000 omdrejninger pr. minut i 2 minutter, og supernatanten blev kasseret. Cellerne blev vasket tre gange med PBS efter, og 50 μL 1 procent Triton X-100-opløsning (Jian Cheng Bioengineering Co.) blev tilsat til hver brønd. Cellerne blev straks opbevaret ved -80 grader i 30 minutter og derefter optøet ved stuetemperatur for at opnå fuldstændig brud af cellerne. Cellerne blev derefter forvarmet ved 37 grader i 5 minutter, og 10 μL 1 procent L-DOPA-opløsning blev tilsat. Cellerne fik lov at stå ved 37 grader i 2 timer, og pladens absorbans blev målt ved en bølgelængde på 490 nm under anvendelse af en mikropladelæser.

2,6|Melanin indhold test

Celler blev dyrket i {{0}}brøndsplader ved en tæthed på (5-10) ×104 pr. brønd. Hver brønd indeholdt 2 ml vækstmedium. Cellerne blev inkuberet i 24 timer i en inkubator sat til 37 grader og 5 procent CO2. Supernatanten blev kasseret, og melanocytter blev behandlet med 0,25 procent trypsin i 3 minutter. 2 ml 10 procent FBS-holdigt DMEM-medium blev efterfølgende tilsat for at standse reaktionen. Melanocytter blev opsamlet i et 15 ml centrifugerør, centrifugeret ved 1000 omdrejninger pr. minut i 5 minutter, og supernatanten blev kasseret. Melanocytter blev vasket med PBS og sat i rør indeholdende 500 μL ethanol/etheropløsning blandet i forholdet 1:1 og blandet godt ved omrystning. Blandingen henstod ved stuetemperatur i 30 minutter og blev derefter centrifugeret ved 3000 omdrejninger pr. minut i 5 minutter. Supernatanten blev kasseret, og 300 μL 1N NaOH (indeholdende 10 procent DMSO) blev tilsat til cellerne. Denne blanding fik lov at reagere i et vandbad indstillet til 80 grader i 40 minutter for fuldstændigt at opløse melaninet. 200 μL af det opløste melanin blev derefter overført til en 96-brøndplade, og absorbansen blev målt ved en bølgelængde på 405 nm ved hjælp af en mikropladelæser.

2,7|Kvantitativ real-time PCR (qRT-PCR) analyse

Total RNA blev ekstraheret fra celler i de tre grupper (Control, ET-1 ogSPEgrupper) ved hjælp af RNAiso Plus-kittet (TaKaRa Bio) og revers-transskriberet til cDNA ved hjælp af PrimeScript™ RT-reagenssættet (TaKaRa Bio). qRT-PCR-assayet blev udført for at påvise ekspressionen af ​​-actin i hver prøve. Dette blev gjort ved at bruge det grønne farvestof SYBR. De anvendte primersekvenser16 (TaKaRa Bio) er vist i tabel 1. PCR-betingelserne var en initial denatureringstemperatur sat til 95 grader i 30 sekunder, 40 denatureringscyklusser, annealingstemperatur sat til 95 grader i 5 sekunder og 60 grader i 34 sekunder sekunder. Dette blev udført i et StepOne plus real-time PCR-system (Applied Biosystems). qRT-PCR-resultaterne blev analyseret og udtrykt som relativ mRNA-ekspression baseret på CT-værdier (tærskelcyklus), som senere blev konverteret til fold-ændringer.

2,8|Western blot analyse

Totale proteiner blev ekstraheret fra cellerne under anvendelse af Radio-Immunoprecipitation Assay (RIPA) (Solarbio Science & Technology Co., Ltd.). Koncentrationen af ​​proteinekstrakterne blev bestemt med Bicinchoninic Acid Assay Kit (BCA) (Solarbio Science & Technology Co., Ltd.). Proteinerne blev derefter adskilt ved natriumdodecylsulfat polyacrylamidgelelektroforese (SDS-PAGE), og de resulterende bånd blev elektroforetisk overført til en polyvinylidenfluorid (PVDF)-membran. Membranen blev derefter blokeret med 5 procent skummetmælkspulver og inkuberet med antistoffer mod TYR, TRP-1 og -actin (Santa Cruz Biotechnology) ved 4 grader i 24 timer. Derefter blev membranen inkuberet med det sekundære antistof (Goat Anti-Mouse IgG Abmart) i 1 time ved stuetemperatur. Proteinbåndene blev påvist under anvendelse af den forstærkede kemiluminescens (ECL) (Solarbio Science & Technology Co., Ltd.). Strimlescanningsanalysen blev udført under anvendelse af et Image J-analysesystem. -Actin blev brugt som den interne reference i analysen af ​​proteinekspression. Prøver blev kørt som uafhængige replikater gentaget tre gange for hver gruppe.

2,9|Statistisk analyse

Statistiske analyser blev udført under anvendelse af GraphPad prism8 software. Gruppeforskelle blev sammenlignet ved hjælp af envejsvariansanalyse (ANOVA), og resultater præsenteres som middel ± SD P<.05 was="" considered="" statistically="">

cistanche til salg: cistanche er et blegende serum

3|RESULTATER

3.1|Sammensætningsanalyse af SPE

Det viste kemisk karakteriseringSPEindeholdt et fugtindhold på 6.03 ± 0,16 procent, askeindhold på 1,55 ± {{10}},11 procent, peptidindhold på 7,52 ± {{16 }}.03 procent, proteinindhold på 54,12 ± 0,18 procent og polysaccharidindhold på 0,09 ± 0,005 procent. Disse resultater indikerer, at proteiner var de mest udbredte i det organiske stof i SPE.

3.2|Effekt af SPE på proliferation af B16 melanomceller

Efter at B16-melanomcellerne blev behandlet med forskellige koncentrationer (0, 0.01, 0.1, 1 og 10 ug/mL) af SPE i 24 timer, blev celleproliferationen evalueret ved CCK-8-assayet (figur 1A). Vi fandt, at proliferationen af ​​B16 melanomceller behandlet med 0,01 ug/mL SPE var højere end den for den blanke gruppe (P<.01). 0.1="" and="" 1="" μg/ml="" spe="" had="" no="" effect="" on="" the="" proliferation="" of="" the="" cells.="" however,="" 10="" μg/ml="" of="" spe="" significantly="" inhibited="" the="" proliferation="" of="" b16="" melanoma="" cells="" (p=""><.01). thus,="" 0.1="" and="" 1="" μg/ml="" of="">SPEblev brugt i efterfølgende forsøg. Ud fra sikkerhedshensyn, som en naturlig bestanddel afblegningkosmetik, SPE er ikke giftigt for celler ved disse to koncentrationer; dermed er det sikkert til en vis grad.

3.3|Effekt af ET -1 på B16 melanom celleproliferation

B16-melanomcellerne blev behandlet med forskellige koncentrationer af ET-1 i 24 timer, og proliferationen af ​​cellerne blev evalueret ved et CCK-8-assay. Navnlig fremmede behandling af B16 melanomceller med 0.1, 1 og 10 nmol/L ET-1 proliferation på en koncentrationsafhængig måde med 10 nmol/L ET{{12} } producerer den højeste spredningsrate (P<.001). by="" contrast,="" 100="" nmol/l="" of="" et-1="" decreased="" the="" proliferation="" of="" cells="" (figure="" 1b).="" therefore,="" 10="" nmol/l="" was="" used="" in="" subsequent="">

3.4|SPE hæmmer Tyrosinase-aktivitet i B16-melanomceller

For yderligere at udforske den hæmmende mekanisme afSPEpå syntesen af ​​melanin analyserede vi dets virkning på det hastighedsbegrænsende enzym (tyrosinase) i processen med melaninsyntese. Aktiviteten af ​​tyrosinase i celler blev påvist ved L-dopa-oxidationsmetoden. B16 melanomceller behandlet med 10 nmol/L ET-1 viste signifikant højere intracellulær tyrosinaseaktivitet sammenlignet med ubehandlede celler (P < 0,01).="" imidlertid="" var="" tyrosinaseaktiviteten="" i="" celler="" behandlet="" med="" 0,1="" ug/ml="" og="" 1="" ug/ml="" spe-behandling="" lavere="" end="" i="" ubehandlede="" celler="" (p="">< 0,05,="" p="">< 0,01).="" disse="" resultater="" viser,="" at="" spe="" inhiberede="" tyrosinaseaktivitet="" på="" en="" koncentrationsafhængig="" måde="" (figur="">

3,5|SPE hæmmer melaninsyntesen i B16 melanomceller

Vi testede yderligere, om virkningerne af SPE på melaninproduktion i B16-melanomceller blev medieret af ET-1 ved hjælp af NaOH-lysemetoden. Resultaterne viste, at melaninindholdet i B16 melanomcellerne var signifikant øget efter behandling med 10 nmol/L ET-1 sammenlignet med kontrolgruppen (P<.01). however,="" the="" melanin="" content="" in="" cells="" treated="" with="" the="" 0.1="" μg/ml="" and="" 1="" μg/ml="" of="" spe="" was="" significantly="" lower="" than="" in="" cells="" of="" the="" control="" group.="" moreover,="" the="" inhibitory="" effects="" of="">SPEpå melaninproduktion var dosisafhængige. Virkningerne af SPE på melaninindhold og tyrosinaseaktivitet var ens (figur 2B). Da 0.1 ug/mL og 1 ug/mL SPE ikke ændrede proliferationen af ​​B16-melanomceller, kan faldet i melaninindholdet ved disse to koncentrationer forekomme gennem ukendte mekanismer.

3,6|Effekt af SPE på TYR- og TRP-1-mRNA-niveauer

Mekanismen, hvorved SPE ændrede virkningerne af ET-1 på B16-melanomceller, blev bestemt ved at måle mRNA-niveauerne af TYR og TRP-1 i celler, der modtog forskellige behandlinger. mRNA-niveauerne af TYR og TRP-1 i B16 melanomceller var signifikant højere (P<.01 and="" p=""><.001, respectively)="" after="" treatment="" with="" 10="" nmol/l="" et-1="" compared="" to="" cells="" of="" the="" control="" group.="" interestingly,="" spe="" treatment="" effectively="" inhibited="" the="" expression="" of="" tyr="" and="" trp-1="" mrna="" (p=""><.05, p=""><.05 for="" 0.1="" μg/ml,="" and="" p="" <="" .01,="" p="" <="" .01="" for="" 1="" μg/ml,="" respectively).="" altogether,="" these="" results="" show="" that="" treatment="" with="">SPEhæmmede ekspressionsniveauerne af TYR og TRP-1 mRNA på en koncentrationsafhængig måde.

3,7|Effekt af SPE på TYR- og TRP-1-proteinniveauer i B16-melanomceller

Proteinekspressionen af ​​TYR og TRP-1 i B16 melanomceller blev påvist ved Western blot. Vi fandt højere proteinniveauer af TYR og TRP-1 i B16 melanomceller behandlet med 10 nmol ET- 1 sammenlignet med kontrolgruppen (P<.05 and="" p=""><.01, respectively).="" this="" indicated="" that="" 10="" nmol/l="" et-1="" promoted="" the="" synthesis="" of="" melanin="" in="" the="" cells.="" this="" indicates="" that="" et-1="" may="" promote="" the="" synthesis="" of="" melanin="" by="" activating="" tyr="" and="" trp-1="" signaling="" pathways.="" in="" contrast,="" cells="" (treated="" with="" 10="" nmol="" et-1="" for="" 24="" hours="" and="" then="" treated="" with="">SPEi 24 timer) havde signifikant lavere proteinniveauer af TYR og TRP-1 (P<.001 and="" p=""><.001, respectively)="" than="" cells="" treated="" with="" 10="" nmol/l="" et-1.="" this="" indicated="" that="" spe="" antagonized="" the="" effect="" of="" et-1="" thereby="" inhibiting="" melanin="" synthesis="" (figure="">

4|DISKUSSION

Endotelin (ET) er et naturligt bioaktivt peptid syntetiseret af endotelceller i den menneskelige krop. Den består af tre isomerer: ET{{0}}, ET-2 og ET-3, der signalerer gennem tre ET-receptorer: ETA, ETB og ETC.17 ETA og ETB er hovedreceptorer udtrykt i det humane ET-system.18 ET frigives fra keratinocytter, når det udsættes for ultraviolet stråling B (UVB) bestråling. Når ET binder til melanocytreceptorer, stimulerer det DNA-syntese og øger tyrosinaseaktiviteten. Dette fremmer den hurtige proliferation af melanocytter og melaninsyntese.19 ET-l fremmer melanocytproliferation, dendritisk dannelse, adhæsion og migration.20 Heri fandt vi, at 0,1, 1, 10 og 100 nmol/L ET-1 væsentligt fremmet celleproliferation. Proliferationen var højest ved 10 nmol/L ET-1, hvilket er i overensstemmelse med resultater rapporteret af Geng et al (2011), som fandt ud af, at ET-1 øgede spredningen og melaninsyntesen af ​​dyrkede alpacahudmelanocytter. 21 TYR- og TRP-1-gener spiller en rolle i melaninproduktionen. Faktisk fandt en tidligere undersøgelse, at virkningerne af endothelin-1 på tyrosinaseaktivitet medieres af ETA-receptorer.22 10 nmol/L af ET-1-behandling i B16-melanomceller øget tyrosinaseaktivitet og melaninindhold . qRT-PCR-resultater afslørede, at mRNA-niveauerne af TYR og TRP-1 i cellerne behandlet med 10 nmol/L ET-1 var højere end i kontrolgruppen. Dette bekræftede, at ET-1 fremmede melaninproduktionen.

Ud over,SPEhæmmede virkningerne af endotelin på B16 melanomceller. Ved en koncentration på 1 0 ug/ml udviste det toksiske virkninger og hæmmede derfor proliferationen af ​​B16 melanomceller. SPE ændrede imidlertid ikke proliferationen af ​​celler ved koncentrationer på 0.1 og 1 ug/ml. Men ved en koncentration på {{10}}.01 ug/ml fremmede det celleproliferation signifikant sammenlignet med kontrolgruppen. Disse resultater antydede, at SPE er sikkert ved koncentrationer under 1 ug/ml. SPE hæmmede ET-1-induceret melaninproduktion ved koncentrationer på 0,1 og 1 ug/mL på en dosisafhængig måde. Desuden resulterede behandling med 0,1 og 1 ug/mL SPE i lavere TYR- og TRP-1-mRNA-niveauer sammenlignet med kontrolgruppen. Desuden var den hæmmende effekt af SPE koncentrationsafhængig. Western blot-analyse afslørede lignende virkninger af SPE ved begge koncentrationer (0,1 og 1 ug/mL) på proteinniveauer af TYR og TRP-1.

I melanocytter binder ET-1 til endotelinreceptor type B (EDNRB)-receptoren, hvilket fører til aktivering af phospholipase C (PLC).23 Dette hydrolyserer yderligere phosphatidylinositoldiphosphat (PIP2) og aktiverer proteinkinase C (PKC) og ændrer sig således. ionkanalernes permeabilitet.24 Ændringen i permeabilitet fører til aktivering af spændingsafhængige Ca2 plus-kanaler og phospholipase A (PLA).25 Til sidst aktiverer dette melaninsyntesen.26 Heri den mekanisme, hvorved SPE antagoniserede ET{{ 8}} for at hæmme melaninproduktionen blev kun undersøgt foreløbigt. Som sådan fortjener ekspression af EDNRB-receptoren såvel som andre aspekter af melaninsyntese såsom PKC, PKA og KIT27 yderligere undersøgelse.

De vigtigste kemiske komponenter i perlepulver er calciumcarbonat og proteiner, mens andre såsom porphyrin og taurin er mindre udbredte.28 Vandekstraktet af perlepulver indeholder hovedsageligt proteiner. Hård keratin er hovedproteinet i vandekstraktet. Vandekstraktet kan dog også indeholde et lille antal sporstoffer.29Moderne farmakologisk forskning tyder på, at perle kan fremme menneskekroppens stofskifte, øge levedygtigheden af ​​epidermale celler, forsinke cellernes aldring og hæmme produktionen af ​​melanin som samt andre farmakologiske effekter som fregneblegning og afgiftning.30 Kemisk karakterisering afslørede, at proteiner er de mest udbredte biomolekyler i indholdet af organisk stof i SPE. Vi antog således, atSPEogså ville haveblegningvirkninger i B16 melanomceller. Vores resultater bekræftede denne hypotese.

Disse ercistanchetablets tilhudblegning. Klik venligst på billedet og få detaljerne.

5|KONKLUSION OG UDSIGT

ET{{0}} fremmer proliferation af B16-melanomceller og melaninsyntese ved at aktivere TYR- og TRP-1-signalvejene. SPE ved koncentrationer på 0,1 og 1 ug/mL hæmmer melaninsyntesen og modvirker derved virkningerne af ET-1 uden nogen cytotoksiske virkninger på B16-melanomceller. Som sådan,SPEer en potentiel endotelinantagonist, der kan bruges som et sikkert og effektivt hudoplysende middel.

REFERENCER

1. Venditti A, Mandrone M, Serrilli M, et al. Dihydroasparagusinsyre: antioxidant- og tyrosinaseinhiberende aktiviteter og forbedret syntese. J Agric Food Chem. 2013;61(28):6848-6855.

2. Jean-Paul O. Fotobeskyttende egenskaber af hudmelanin. Brit J Dermatol. 2002;146(61):7-10.

3. Maeda K, Fukuda M. Invitro-effektiviteten af ​​flere blegende kosmetiske komponenter i humane melanocytter. J Soc Cosmet Chem. 1991;42(6):361-368.

4. Sato K, Morita M, Ichikawa C, Takahashi H, Toriyama M. Depigmenterende mekanismer af all-trans retinsyre og retinol på B16 melanomceller. J Biosci Biotech Bioch. 2014;72(10):2589-2597.

5. Ching-Shuang W, Chia-Li Y, Chieh-Shan W, Lan Cheng-Che E, Hsin-Su Y. Smalbåndet ultraviolet-B stimulerer proliferation og migration af dyrkede melanocytter. J Exp Dermatol. 2004;13(12):755-763.

6. von Koschembahr AM, Swope VB, Starner RJ, Abdel-Malek ZA. Endothelin-1 beskytter humane melanocytter mod UV-induceret DNA-skade ved at aktivere JNK- og p38-signalveje. J Exp Dermatol. 2015;24(4):269-274.

7. Shi XM, Yan ZM, Xie JH, Zhou HF, He HX, Duan MX. Foreløbig forskning i den blegende effekt af resveratrol. J Flavor Fragrance Cosmetics. 2011;10(05):37-39.

8. Yang LC, Wang F, Liu M, et al. Anti-endotelin-1 virkningerne af Cissus assamica. Chinese New Drugs J. 2000;12(07):455-458.

9. Serre C, Busuttil V, Botto JM. Indre og ydre regulering af menneskelig hudmelanogenese og pigmentering. Int J Cosmet Sci. 2018;40(4):328-347.

10. Cabanes J, Chazarra S, Garcia-Carmona F. Kojic acid, et kosmetisk hudblegningsmiddel, er en langsomt-bindende hæmmer af katekolaseaktivitet af tyrosinase. J Pharm Pharmaco. 1994;46(12):982-985.

11. Kun GF, Stevenson CH. Perlens bog. New York: Dover Publications; 1993:13-125.

12. Zhang LH, Shen YQ, Yang AQ, Mo JH, Chen ZX, Wang J. Undersøgelse af in vitro antioxidantaktivitet af frysetørret pulver af perleekstrakt. J Flav Frag Cosm. 2018;13(04):26-29.

13. Yang YL, Chang CH, Huang CC, Liu HW. Anti-inflammation og anti-apoptose virkninger af perle ekstrakt gel på UVB bestråling HaCaT celler. J Biomed Mater. 2015;26(Suppl 1): S139-S145.

14. Yang AQ, Wang J, Zhang LH, Mo JH, Chen ZX, Shen YQ. Lyseffekten af ​​perleekstrakt på melanocytter in vitro. J Pharma Biotechnol. 2016;23(2):146-149.

15. Lu W, Ren GP, ​​Song JM. Bestemmelse af indhold af peptidesinproteinhydrolysater. J Food Sci. 2005;12(07):169-171.

16. Chia-Hua L. Ov-16 [4-(3,4-dihydroxybenzoyloxymethyl)phenyl-O- -D-glucopyranosid] hæmmer melaninsyntesen ved at regulere udtryk for melanogenese- reguleret gen og protein. J Exp Dermatol. 2011;20(9):743-748.

17. Yanagisawa M, Kurihara H, Kimura S, et al. Et nyt potent vasokonstrikt eller peptid produceret af vaskulære endotelceller. J Natur. 1988;332:411-415.

18. Hou L, Pavan WJ, Shin MK, et al. Celleautonom og celle ikke-autonom signalering gennem endotelinreceptor B under melanocytudvikling. J Udvikle. 2004;131(14):3239-3247.

19. Imokawa G, Yada Y, Miyagishi M. Endoteliner udskilt fra humane keratinocytter er iboende mitogener for humane melanocytter. J Biol Chem. 1992;267(34):24675-24680.

20. Tada A, Suzuki I, Im S, et al. Endothelin-1 er en parakrin vækstfaktor, der modulerer melanogenese af humane melanocytter og deltager i deres reaktioner på ultraviolet stråling. J Cellevækst er forskellig. 1998;9(7):575-584.

21. Geng JJ, Zhang J, Mu XL, et al. Effekt af ET-1 på proliferation og melaninsyntese af alpaca hudmelanocytter in vitro. Chinese J Animal Veter Sci. 2011;42(07):932-938.

22. Monji A, Inoue H, Oshima H, et al. Tyrosinase-induktion og inaktivering i normale dyrkede humane melanocytter med endotelin-1. J Int J Tissue React. 2005;27(2):41-49.

23. Takeshi S, Masashi Y, Tomoh M. Molekylær karakterisering af endotelinreceptorer. J Tips. 1992;13(3):103-108.

24. Georgia K, Ali B, Bou DG, Srivastava AK. Nitrogenoxid/cGMP-systemets modulatoriske rolle i endotelin-1-inducerede signalresponser i vaskulære glatte muskelceller. J Curr Cardiol Rev. 2010;6(4):247-254.

25. Sp H, Angela C. Endotelinsignalering i hjertemyocytten og dens patofysiologiske relevans. J Curr Vasc Pharmacol. 2005;3(4):343-351.

26. Clouthier DE, Hosoda K, Richardson JA, et al. Kraniale og kardiale neurale kamdefekter i mus med endotelin-A-receptormangel. J Udvikle. 1998;125(5):813-824.

27. Imokawa G, Yada Y, Kimura M, et al. Signaleringsmekanismer for endotelin-induceret mitogenese og melanogenese i humane melanocytter. Biochem J. 1996; 314 (Pt 1): 305-312.

28. Zhang C, Xie LP, Huang J, et al. En ny matrixproteinfamilie, der deltager i den prismatiske lagrammedannelse af perleøsters. Pinctada fucata. Biochem Bioph Res Co. 2006;344(3):735-740.

29. Wu WL, Zhang LP, Yang ZJ, et al. Komponenter og ultrastruktur med sin dannelse af pære. J Mater Rep. 2011;025(021):79-85.

30. Shao DZ, Wang CK, Wang HJ, et al. Abstracts: sammenligning af hydrering, tyrosinase-resistens og antioxidantaktivering i tre slags perlepulver. Int J Cosmet Sci. 2010;32(5):396.