SLC37A2, et fosforrelateret molekyleforøgelse i glatte muskelceller i den forkalkede aorta Ⅱ

Resultater

Søg efter kandidatmolekyler ifosfatinduceret forkalketAoSMC. For at søge efter molekyler, hvis ekspression øges i forkalket AoSMC, blev DNA-mikroarray-analyse af ca. 26,000 gener udført under anvendelse af forkalket AoSMC og ikke-forkalket AoSMC mRNA. Figur 1 viser HeatMap af forskellige gener udtrykt mellem AoSMC ikke dyrket med 2,6 mM og dem dyrket med 2,6 mM P i 12 dage. I alt 3.066 gener steg mere end to gange på dyrket vs ikke-dyrket AoSMC. Gener med øget ekspression var molekyler relateret til osteoblastdannelse såsom osteopontin, periostin osteoblast-specifik faktor (POSTN), Wnt3, interleukin-6 (IL-6), ogfibroblast vækstfaktor23 (FGF23) såvel som adskillige molekyler i SLC-superfamilien (tabel 1). Blandt disse molekyler fokuserede vi på SLC37A2, for hvilket mRNA steg omkring 3,1 gange på AoSMC dyrket med 2,6 mM P i 12 dage sammenlignet med AoSMCnot dyrket med 2,6 mM P. SLC37A2 er blevet rapporteret at være relateret til P-regulering, men dens detaljerede funktion er ukendt effekt af inflammation på SLC37A2-ekspression.Vaskulær forkalkninger blevet rapporteret at blive fremmet af inflammation, så vi undersøgte, om SLC37A2 mRNA er påvirket af inflammatorisk respons. 24 timer efter LPS-behandling steg IL-6 signifikant sammenlignet med AoSMC, der ikke blev behandlet med LPS (fig. 2A). Disse resultater blev også set 72 timer efter LPS-behandling. Der var ingen signifikante forskelle mellem grupper i SLC37A2mRNA-ekspression (fig. 2B).

KLIK HER FOR AT FÅ NATURLIGE ØKOLOGISKE CISTANCHE EKSTRAKT MED 25% ECHINACOSIDE OG 9% ACTEOSIDE TIL NYREFUNKTION

Supportive Service Of Wecistanche - Den største cistanche-eksportør i Kina:

E-mail:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Tlf:+86 15292862950

Shop for flere specifikationer detaljer:

https://www.xjcistanche.com/CISTANCHE-BUTIK

Ekspression af SLC37A2 i fosfatinduceret forkalket AoSMC. For at bestemme, om SLC37A2 er involveret i forkalkning, undersøgte vi ekspressionen af ​​SLC37A2 mRNA på ikke-kalcificeret og forkalket AoSMC (fig. 3). Forkalkning blev observeret i AoSMC dyrket med 2,6 mM P i 6 dage, og mere avanceret forkalkning blev observeret i AoSMC dyrket med 2,6 mM P i 12 dage (fig. 3A). Runx2 mRNA steg signifikant på forkalket AoSMC sammenlignet med ikke-kalcificeret AoSMC(fig. 3B).SLC37A2 mRNA begyndte signifikant at stige på dag 3 i forkalket AoSMC, og på dag 9 steg forkalket AoSMC signifikant omkring to gange sammenlignet med ikke-forkalket AoSMC ( 3C). Ekspression af SLC37A2-protein steg signifikant omkring to gange på dag 6 i forkalket AoSMC sammenlignet med ikke-kalcificeret AoSMC (fig. 3D).

Ekspression af SLC37A2 i CKD-modelrotter.

For at afsløre, om SLC37A2 er involveret i vaskulær forkalkning in vivo, undersøgte vi SLC37A2 mRNA-ekspression på kar fra adenin-inducerede CKD-rotter. Adenin-inducerede CKD-rotter blev skabt i overensstemmelse med protokollen vist i fig. 4A. Tabel 2 viser kropsvægt og biokemiske data på ofringsdagen. Kropsvægten afadenin-induceret CKDrotter var signifikant lavere sammenlignet med ikke-CKD-rotter. Sammenlignet med ikke-CKD-gruppen havde CKD-grupper højere plasma P- og Cr-niveauer og lavere plasma-calevels og 24-timers urinudskillelse af P, Ca og Cr. Yderligere var disse resultater mere fremtrædende i CKD-HP-gruppen, som set i tidligere undersøgelser.37,39) Således faldt nyrefunktionen i CKD-gruppen, især i CKD-HP-gruppen. Vi undersøgte mRNA-ekspression i aortakarrene hos CKD-rotter (fig. 4). Selvom der ikke var nogen signifikante forskelle i ekspressionen af ​​Runx2 mRNA, en transkriptionsfaktor, der bevæger sig tidligt i mekanismen for vaskulær forkalkning, mellem grupper (fig. 4B) steg ekspressionen af ​​osteopontin mRNA signifikant i en CKD-HP gruppe sammenlignet med den ikke- CKD-gruppen ogCKD-LP-gruppe(Fig. 4C). SLC37A2 mRNA-ekspression var også signifikant forøget i CK D-HP-gruppen sammenlignet med ikke-CKD-gruppen og CKD-LP-gruppen (Fig. 4D). Fordi der var store individuelle forskelle i disse rotter, undersøgte vi korrelationen mellem osteopontin og SLC37A2 mRNA og fandt en signifikant sammenhæng mellem disse molekyler (Fig. 4E). Histologisk undersøgelse af den thoracoabdominale aorta afslørede kun medial forkalkning i aorta af CKD-HP-gruppen (fig. 5A). For at undersøge ekspressionsstedet for SLC37A2 på aorta udførte vi immunfarvning af aorta af CKD-HPrats. SLC37A2 var stærkt udtrykt ved det område, hvorvaskulær forkalkningforekom (fig. 5B).

Fig. 1. HeatMap af forskelligt udtrykte gener mellem AoSMCnon-dyrket med 2,6 mM P og AoSMC dyrket med 2,6 mM P. Rød repræsenterer gener med et højt signalniveau, og grønt repræsenterer gener med et lavt signalniveau. AOSMC glatte muskelceller i aorta. Se figuren i onlineversionen.

Diskussion

Vi undersøgte kandidat P-relaterede molekyler involveret i vaskulær forkalkning. Vores resultater viste, at SLC37A2 er et af de molekyler, der stiger medvaskulær forkalkningin vitro og in vivo.

SLC37-familien tilhører SLC-superfamilien og inkluderer proteiner: SLC37A 1-440) SLC37-familien indeholder transmembranproteiner i den endoplasmatiske retikulummembran og har en sekvens, der er homolog med den bakterielle organophosphatphosphat-antiporter.(41) SLC37A4 er bedre kendt somglukose6-fosfattransportør.(2-44 Der er dog få rapporter om SLC37A2, og detaljer om dens funktion er ikke fuldt ud forstået. SLC37A2, også kendt som SPX2, er rigeligt udtrykt i murine makrofager, milt, thymus og hvidt fedtvæv (WAT) ) af genetisk overvægtige musemodeller og osteoklastlignende celler afledt af Raw264.7-celler.(45.6) SLC37A2-proteinet transporterer både glucose-6-phosphat/phosphat og fosfat/phosphat-udvekslinger.(4) For nylig har rapporter vist en sammenhæng SLC37A2 med dyresygdom. (47-49) En SLC37A2-defekt forårsagerkraniomandibulær osteopati(CMO), en selvbegrænsende proliferativ knoglesygdom, hos terrierracer. (47) Hos malkekvæg er en SLC37A2 homozygot mutation ansvarlig for embryonal død. (8.9) Desuden. SLC37A2 er blevet betragtet som et mål for vitamin D-målgener. (så) Potentialet for phosphor-Ser294-progesteronreceptor-målgenet i udviklingen af ​​brystkræft er også blevet overvejet(1)Det er blevet rapporteret, at inflammation både kan forårsage og forværre vaskulær forkalkning. (2s26) Endvidere. SLC37A2 udtrykkes rigeligt i makrofager og WAT, som påvirkes af makrofaginfiltration. (s) Derfor. vi overvejede, at SLC37A2 kunne være et molekyle udtrykt under inflammation. Vores resultater viste imidlertid ingen stigning i SLC37A2-ekspression i AoSMC udsat for en inflammatorisk respons, dette molekyle ser ikke ud til at være direkte påvirket af inflammatorisk stimulering. SLC37A2 kan være involveret i vaskulær forkalkning gennem en anden mekanisme end inflammation.

Det er blevet rapporteret, at SLC37A2 fungerer som en P-bundetAnti-Porter. (41) Derudover blev SLC37A2 rapporteret at være et målgen for D-vitamin, og SLC37A2-genet indeholder et vigtigt vitamin Dreceptor-bindingssted(ss2). Systematisk korrelerede ændringer i ekspressionen af ​​SLC37A2-gener og cirkulerende former for D-vitamin. er set i humane perifere mononukleære blodceller. (50)D-vitaminreceptorer binder til 1a, 25-dihydroxy-vitamin D, som er en metabolit af D-vitamin, og regulerer genekspression. lo, 25dihydroxyvitamin D, fungerer i absorptionen af ​​Ca og P i tarmen, Ca-mobilisering i knoglen og reabsorption af Cain i nyrerne. (3) Der er en rapport om, at hos adenin-inducerede CKD-modelrotter var serum la, 25-dihydroxy D-vitamin, signifikant højere hos rotter med høj-p diæt, med fremskreden vaskulær forkalkning sammenlignet med rotter med lavt niveau. -p diætindtagelse.39) SLC37A2 kan være relateret til P-regulering via D-vitamin. Yderligere undersøgelser er nødvendige for at klarlægge, at D-vitamin påvirker SLC37A2-ekspression in vitro og Vivo.

Det er blevet vist, at mekanismen for vaskulær forkalkning svarer til knogledannelsens mekanisme. Mangelen på SLC37A2 forårsaget af CMO er klinisk sammenlignelig med human infantil kortikal hyperostose, også kendt som Caffey disease.7 Derudover er der rapporter om, at SLC37A2 udtrykkes i knoglemarv og osteoklaster.o Hytone et al.(7 antog, at en dysfunktion af SLC37A2 ville forårsage en ubalance i funktionen af ​​osteoblastisk og osteoklastisk knogledannelse og som følge heraf føre til hyperostose.

Runx2 er en vigtig transkriptionsfaktor for vaskulær forkalkning. Det er også rapporteret, at Runx2 er en osteoblastdifferentieringstransskriptionsfaktor udtrykt i brystepitelceller under udvikling. (s435) Runx2 ser ud til at være nødvendig for reguleringen af ​​phosphor-Ser294 progesteron-målgener, som er forbundet med brystkræftprogression. SLC37A2 betragtes som et kandidat-phosphor-Ser294-progesteronreceptor-målgen. (s1) Det anses derfor for, at Runx2 kan regulere SLC37A2. I den foreliggende undersøgelse var ekspressionen af ​​SLC37A2 mRNA i aorta hos CkD rotter korreleret med osteopontin mRNA, som er målrettet mod Runx2 genet.