Andel af kraftfoder i kost for tidlig lakterende malkekøer har kontrasterende virkninger på cirkulerende leukocytter Globale transkriptomiske profiler, sundhed og fertilitet i henhold til paritet

Abstrakt:Funktionaliteten af ​​cirkulerende leukocytter hos malkekøer undertrykkes efter kælvning, med negativ energibalance som risikofaktor. Leukocyttranskriptomiske profiler blev sammenlignet separat i 44 multiparøse (MP) og 18 primiparøse (PP) holstein-frisiske køer, der modtog diæter, der var forskellige i koncentratforhold for at teste, om immundysfunktion kunne afbødes ved passende ernæring. Efter kælvning blev køerne tilbudt enten (1) lavt koncentrat (LC); (2) medium koncentrat (MC) eller (3) højkoncentrat (HC) foder med proportioner af koncentrat til græsensilage på henholdsvis 30 %:70 %, 50 %:50 % og 70 %:30 %. Ko-fænotypedata indsamlet omfattede cirkulerende metabolitter, mælkeydelse og sundheds- og fertilitetsregistre. RNA-sekventering af cirkulerende leukocytter efter 14 dage i mælk blev udført. HC-diæten forbedrede energibalancen i begge aldersgrupper. Der var flere differentielt udtrykte gener i PP end i MP-køer (460 vs. 173, HC vs. LC-sammenligning) med få overlapninger. MP-køerne på LC-diæten viste opregulering af komplement- og koagulationskaskaden og medfødte immunforsvarsmekanismer mod patogener og havde en tendens til flere tilfælde af mastitis og dårligere fertilitet. I modsætning hertil viste PP-køerne på HC-diæten større immunreaktioner baseret på både genekspression og fænotypiske data og længere kælvningsinterval til undfangelse. Leukocytterne fra MP- og PP-køer reagerede derfor forskelligt på diæterne mellem alder, næringsstofforsyning og immunitet, hvilket påvirkede deres helbred og efterfølgende fertilitet.

cistanche fordele for mænd styrker immunsystemet

Klik her for at se produkter fra Cistanche Enhance Immunity

【Spørg om mere】 E-mail:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

Nøgleord:postpartum immunsuppression; medfødt immunitet; metabolisme; leukocytter; amning diæter; transkriptom; reproduktion; køer

1. Introduktion

Tidligt postpartum er malkekøer karakteriseret ved immunsuppression, der påvirker medfødt og adaptiv immunitet, herunder både cellemedieret og humoral immunitet. Cirkulerende leukocytter rekrutteres til væv som mælkekirtlen og endometrium under inflammation. Tidligere undersøgelser har dog vist en reduktion i både leukocyttal og deres funktionelle kapacitet i peripartumperioden [1,2]. Rapporterede effekter inkluderer svækket fagocytose og oxidativ burst-aktivitet [3-5], en nedsat reaktionsevne af cirkulerende T-celler over for mitogene midler og reduceret produktion af immunglobulin af B-celler [6,7]. Årsagerne er multifaktorielle, men ser ud til at være forbundet med opdeling af næringsstoffer til fordel for mælkeproduktion i starten af ​​laktationen, hvilket kompromitterer immunfunktionen [8-10]. Leukocytter kræver en tilstrækkelig forsyning af glucose, forskellige fedtsyrer og kolesterol eller oxysteroler for deres vedligeholdelse og funktionalitet [8,11,12]. Den tilgængelige næringsstofforsyning er dog prioriteret til mælkekirtlen efter kælvning, hvilket kræver ca. 25 % mere metaboliserbar energi og protein end foderoptagelsen giver [8,13,14]. Derudover er fødslen karakteriseret ved inflammatoriske processer forbundet med ændringer i udskillelsen af ​​forskellige prostaglandiner, steroider og cytokiner og mulige skader under selve fødeprocessen [15-17]. De inflammatoriske reaktioner på kælvning og metabolitter frigivet under vævsmobilisering har potente anorektiske effekter, hvilket yderligere reducerer indtag og forværrer den negative energibalance (NEB) [18]. Når foderoptagelsen ikke kan imødekomme det stigende energibehov, går køerne ind i en periode med NEB, hvor nogle individer bliver metabolisk ubalancerede [19-21]. NEB er forbundet med insulinresistens, reduceret hepatisk væksthormon (GH)-receptorekspression og lavere hepatisk IGF-1-syntese [22,23]. Afkoblingen af ​​GH med insulin i postpartum køer er en tilpasning, der prioriterer glukosetilførslen til væv som brystepitelceller, hvor optagelsen er uafhængig af insulin [8]. I denne situation er konkurrencen om energiforsyningen mellem mælkekirtlen og immunsystemet uundgåelig, da de begge er afhængige af de samme essentielle substrater og begge er storforbrugere af energi. Kvidera et al. [24] viste, at aktivering af et fuldt immunrespons hos køer krævede 2,5 til 3,1 kg glukose om dagen. Dette svarer til det estimerede behov på 2,7 kg/d glukose optaget af brystepitelceller til mælkeproduktion på 40 kg/d [8].

Vævsmobilisering er også forbundet med øgede cirkulerende koncentrationer af ikke-esterificerede fedtsyrer (NEFA'er), beta-hydroxybutyrat (BHB) og nedsat IGF-1, som alle bidrager til immundysfunktion [5,9,10,20 ]. For eksempel illustrerede vores nylige undersøgelse, at leukocytcelle-til-celle-adhæsion blev hæmmet, når NEFA-koncentrationen oversteg 750 µM [25]. Selvom vævsmobilisering er en normal pattedyrs tilpasning til at understøtte laktation, har mange undersøgelser vist, at svær NEB har stor indflydelse på koens efterfølgende evne til at blive gravid i tide [26]. Dette kan skyldes en række faktorer, herunder forsinkelser i genoprettelse af et passende livmodermiljø [2]; en længere periode med anovulation [27], et dårligt intrafollikulært miljø [28] og nedsat oocytkvalitet [29]. Malkekvier kælver generelt omkring 90 % af deres modne kropsvægt [30]. Vores tidligere undersøgelse viste, at primiparøse (PP) køer havde højere insulin-, IGF-1- og leptinkoncentrationer i deres kredsløb, lavere koncentrationer af blodmetabolitter (BHB, NEFA'er og urinstof) og højere glukosekoncentrationer end multiparøse (MP) ) køer i mindst 7 uger efter kælvning [31,32]. Dette indikerer, at der er mindre afkobling af den somatotrofe akse i tidlig laktation hos PP-køer sammenlignet med MP-køerne, forbundet med en svagere prioritering af næringsstoffer til mælkekirtlen, hvilket muliggør fortsat vækst. Genekspressionsprofilerne i cirkulerende leukocytter adskiller sig også mellem PP- og MP-køer under tidlig laktation [33].

cistanche tubulosa-forbedrer immunsystemet

Optimering af ernæringsstyring i den tørre periode kan øge tørstofindtaget (DMI), reducere forekomsten af ​​periparturient sygdom og forbedre fertiliteten [34]. Der er generelle retningslinjer for, hvordan man kan reducere sygdomsrisiko relateret til fodring og håndtering [35]. Der er dog kun lidt tilgængelig information om kostformuleringer til den enkelte ko i en metabolisk ubalance i postpartum-perioden, som kan forbedre immunfunktionen, mindske sygdomsforekomsten og forbedre den efterfølgende reproduktive ydeevne. At formulere diæter med et højt næringsstofindtagspotentiale er en praktisk tilgang [36]. I denne undersøgelse blev køer i tidlig laktation tilbudt lav (LC), medium (MC) eller højkoncentrat (HC) diæt baseret på forholdet mellem kraftfoder og græsensilage og virkninger på metabolisk sundhed og sygdom og systemisk immunitet ( ved at vurdere globale cirkulerende leukocyt-genekspressionsprofiler) blev bestemt. Data fra PP- og MP-køer blev analyseret separat for at undgå enhver forvirrende effekt som følge af paritet. Vores hypotese var, at de højkoncentrerede diæter ville forbedre immunforsvaret og gavne fertiliteten.

cistanche tubulosa-forbedrer immunsystemet

2. Resultater

2.1. Effekt af diæter på tørstofindtag, mælkeydelse, energibalance og blodmetabolitter

Mælkeparametre, kropsvægt (BW), DMI, body condition score (BCS), energibalance (EBAL) og blodmetabolitter for både MP- og PP-køer ved omkring 14 dage i mælk (DIM) er opsummeret i tabel 1. DMI for MP-køerne var signifikant forskellige mellem de tre diætgrupper med rækkefølgen HC > MC > LC (p < 0.01–0.0{{11 }}1). Mælkeydelsen hos MP-køerne, der modtog HC-diæterne, var signifikant højere end dem, der fik LC-diæterne (p < 0.05). Forskellen i energikorrigeret mælkeydelse (ECM) mellem LC- og HC-grupperne var signifikant (p < 0.05), med mellemværdier i MC-gruppen. EBAL-værdierne i alle tre MP-grupper var negative, men værdierne i MC- og HC-køerne var signifikant bedre (mindre negative) end i LC-køerne (p < 0,01). De cirkulerende koncentrationer af både glucose (p < 0,01) og IGF-1 (p < 0,001) i HC-køerne var signifikant højere end i LC-køerne. MP-køerne, der tilbød HC-foder, producerede også mindre cirkulerende urinstof (p < 0,001), BHB (p < 0,05) og NEFA'er end dem, der tilbød LC-foder med koncentrationerne LC > MC > HC, selvom forskellene i NEFA-koncentrationerne mellem diætgrupperne var ikke statistisk signifikante.

Tabel 1. Samlet tørstofindtag, mælkeparametre, kropsvægte, energibalance, kropstilstandsscore og blodmetabolitter omkring 14 dage efter kælvning, analyseret efter paritet og kost 1,2

Hos PP-køerne havde dem, der fik MC- eller HC-diæten, et højere DMI end dem, der fik LC-diæten (p < {{0}}.01). Mælkeydelsen var ikke signifikant anderledes. EBAL var positiv hos køer, der blev tilbudt MC- eller HC-diæter, mens den for dem, der blev tilbudt LC-diæt, var negativ. Forskellene i EBAL mellem HC- og LC PP-køer var signifikante (p < 0,05). Af de målte metabolitter var der kun urinstofkoncentrationer, der var forskellige mellem grupperne, idet de var lavere hos HC-køerne (LC > MC > HC, p < 0,001 for LC vs. HC eller MC).

2.2. Effekt af diæter på inflammatoriske parametre

Kostens effekt på inflammatoriske parametre målt i livmoderen og mælkekirtlen er vist i tabel 2. Hos PP-køerne var forholdet mellem polymorfonukleære leukocytter og uterine epitelceller (PMN'er: UEC'er) opsamlet fra livmoderen ved hjælp af en cytobørste signifikant højere for køerne på HC sammenlignet med LC-diæten (p < 0.05). Hos MP-køerne gik tendensen i samme retning, med LC < MC < HC, men opnåede ikke statistisk signifikans. I mælk havde MP-køerne på LC-diæten en signifikant højere SCC end dem på enten MC- eller HC-diæten (p < 0.05), hvorimod den ikke-signifikante tendens hos PP-køer var i den modsatte retning . Koncentrationer af mælke-N-acetyl- -d-glucosaminidase (NAGase) og lactatdehydrogenase (LDH), mælkeenzymer, der indikerer mastitis, fulgte de samme generelle tendenser som SCC-værdierne, men ingen forskelle var signifikante. Disse resultater blev understøttet af sundhedsjournalerne. MP-køerne på HC-diæten oplevede ingen tilfælde af mastitis (0/15), mens 4/14 (28,6%) af køerne på LC-diæten blev diagnosticeret med klinisk mastitis inden for 16 dage efter kælvning. Tendensen gik igen i den modsatte retning for PP-køerne med én ud af seks (16,7%) på LC-diæten med klinisk mastitis sammenlignet med ét tilfælde af klinisk og to af subklinisk mastitis på HC-diæten (50%).

Tabel 2. Inflammatoriske parametre omkring 14 dage efter kælvning efter paritet og diæt 1,2.

2.3. Fertilitetsdata

Nærmere oplysninger om fertilitetsdata er angivet i tabel 3. For MP-køerne tog dem på LC-diæten lidt længere tid at blive gravide og krævede flere tjenester pr. undfangelse end HC-køerne (2,4 ± 0.42 vs. 1,6 ± 0.23), selvom flere af HC-køerne enten ikke blev serveret (en ledelsesbeslutning) eller slet ikke blev gravide (6{{10}}.0% vs. 71,4%). Ingen af ​​disse forskelle var dog signifikante. For PP-køerne var det omvendte tilfælde, hvor LC-køerne havde det korteste interval til undfangelse med 29 dage (p < {{20}}.05), hvor fem af de seks dyr undfangede deres første gang. . I modsætning hertil blev halvdelen af ​​HC-gruppen enten ikke serveret (n=2) eller undfangede at blive gravide (n=1), hvor de tre, der blev gravide, krævede 2,0 ± 0,41 service pr. Dette resulterede i, at HC-gruppen havde en signifikant højere "i kalv efter" (ICB) score (p < 0,05).

Tabel 3. Fertilitetsdata efter paritet og kost 1,2

2.4. Leukocyttranskriptomiske profiler i køer tilbydes forskellige andele af kraftfoder

Referencekvæggenomet for ARS-UCD 1.2 leveret af RefSeq (https://www. ncbi.nlm.nih.gov/assembly, tilgængeligt den 1. maj 2022) indeholder 35.158 gener, hvoraf 19.001 leukocytgener var kvantificerbare, når sekventeringen læste i FASTQ-filerne blev mappet til det. Vulkanplot, der viser ekspressionsprofilerne i både MP- og PP-køerne, der modtager de tre forskellige diæter, er vist i figur 1. I MP-køerne var der 173 differentielt udtrykte gener (DEG'er) i sammenligningen mellem HC og LC, 126 mellem MC og LC. LC og 68 for HC vs. MC (Supplerende fil S1A–C). Venn-diagram illustrerede, at intet gen (almindelig DEG) var signifikant i alle tre kostsammenligninger (figur 2A). Hos PP-køerne var der 460 grader i sammenligningen af ​​HC vs. LC, 178 mellem MC vs. LC og 128 mellem HC vs. MC (Supplerende fil S2A-C). Kun ét fælles gen (DCN, fold change (FC)=-7.3) var signifikant i alle tre kostsammenligninger (figur 2B). Dette koder for decorin, et protein, der spiller en rolle i samlingen af ​​kollagenfibriller. Generelt var det bemærkelsesværdigt, at et større antal DEG'er blev fundet i kostsammenligninger af leukocyt-genekspression i PP end i MP-køerne på trods af de mindre gruppestørrelser, hvor størstedelen af ​​disse gener blev opreguleret på HC-diæten. Endvidere var der lidt overlap i generne identificeret mellem de forskellige aldersgrupper, som illustreret i Venn-diagrammerne i figur 3. Dette tyder på, at diæterne havde forskellige effekter på leukocyttranskriptomet i PP- og MP-køer. I begge aldersgrupper fandtes de største forskelle mellem de køer, der blev tilbudt LC vs. HC diæterne, så vi fokuserede på denne sammenligning i de efterfølgende analyser.

Figur 1. Vulkanplot viser ekspressionsprofilerne i både MP- og PP-køerne, der modtager tre forskellige diæter. (A) MP-køer HC vs. LC, (B) MP-køer HC vs. MC, (C) MP-køer MC vs. LC, (D) PP HC vs. LC, (E) PP HC vs. MC og (F) ) PP MC vs. LC. HC: højt koncentrat (n=6 i PP-køer og n=14 i MP-køer), MC: medium koncentrat (n=5 i PP-køer og n=15 i MP-køer ), og LC: lavt koncentrat (n=6 i PP-køer og n=14 i MP-køer). Foldeændringerne blev log2-transformeret. De grønne prikker angiver de nedregulerede gener med p (BH) < 0.05 og fold ændringer Mindre end eller lig med -1,5 og de røde prikker angiver opregulerede gener med p (BH) < {{ 16}}.05 og fold ændringer Større end eller lig med 1,5. De orange prikker angiver generne med p (BH) < 0,05, men absolutte foldændringer < 1,5.

Figur 2. Venn-diagrammer, der viser de differentielt udtrykte gener af de cirkulerende leukocytter mellem de tre diætgrupper i (A) multiparøse (MP) køer og (B) primiparøse (PP) køer. HC: højt koncentrat (n=6 i PP-køer og n=14 i MP-køer), MC: medium koncentrat (n=5 i PP-køer og n=15 i MP-køer ) og LC: lavt koncentrat (n=6 i PP-køer og n=14 i MP-køer).

Figur 3. Venn-diagrammer, der viser de differentielt udtrykte gener ved at cirkulere leukocytter mellem PP- og MP-køerne i sammenligningerne af (A) højt koncentrat (HC) med lavt koncentrat (LC); (B) HC med medium koncentrat (MC) og (C) MC med LC. HC: n=6 i PP-køer og n=14 i MP-køer, MC: n=5 i PP-køer og n=15 i MP-køer og LC: n {{5 }} i PP-køer og n=14 i MP-køer

2.5. Sammenligning af leukocyt-genekspressionsprofiler mellem multiparøse køer, der modtager foder med højt eller lavt koncentrat

De 20 bedste opregulerede og nedregulerede DEG'er rangeret efter p-værdierne (BH justeret) i MP-køerne, der blev fodret med en HC sammenlignet med dem, der blev fodret med en LC-diæt, er angivet i Supplerende fil S1D, E. Blandt de opregulerede DEG'er var de fleste involveret i GO funktioner i immunsystemprocessen, metabolisme og respons på stimulus, hvor mange kodende proteiner har flere roller. For eksempel har ALAS2 (koder for 50 -aminolevulinatsyntase 2) en rolle i den metaboliske proces, respons på stimulus og udviklingsproces. COL1A1 (collagen type I alpha 1 kæde) og DAB2 er involveret i metabolisme, respons på stimulus, flercellet organisme, bevægelse og udvikling. De øverste 20 nedregulerede gener illustrerer et klart tema om ændringer i immunitet med 14 associerede DEG'er. Af disse koder DMTB1, FGA, FGB og TF for antimikrobielle peptider, ALB og TF koder for negative akutfaseproteiner (APP), og FGA og FGG koder for positive APP'er. Otte gener spiller roller i stofskiftet, og 10 er involveret som reaktion på stimulus.

cistanche planteforøgende immunsystem

Leukocyt-DEG'erne afledt fra sammenligningen af ​​HC med LC-gruppen blev derefter underkastet GO-berigelsesanalyse. De 76 opregulerede DEG'er blev signifikant beriget med 208 funktioner, hvoraf top 20 baseret på berigelsesscorerne er vist i figur 4A. Disse var forbundet med forskellige aspekter af cellulær funktion, med blodpladeafledt vækstfaktorbinding på toppen. Mange funktioner var relateret til protein- og aminosyremetabolisme (involverende APLP1, COL1A1, COL1A2, COL3A1, HTR1B og P2RY12 i de fleste af dem), biomineralisering og kollagenbehandling (involverende COL1A1, COL1A2, SPP1 og TUFT1) og cellekommunikation. I modsætning hertil havde topfunktionerne af de 97 nedregulerede DEG'er et klart tema om forskellige immunforsvarsprocesser (figur 4B), som overvejende var forbundet med 20 DEG'er. Af disse blev FGA (en positiv APP) nedreguleret 85-fold i HC vs. LC-sammenligningen. Et GO-browserværktøj opsummerede de biologiske funktioner af både op- og nedregulerede DEG'er i otte signifikante kategorier (tabel 4). Bortset fra biomineralisering var alle de andre biologiske funktioner, især dem der er forbundet med immunforsvar, overvejende forbundet med de nedregulerede DEG'er.

Figur 4. Top 20 GO-funktioner forbundet med DEG'erne afledt af HC vs. LC sammenligninger. (A) MP opregulerede DEG'er, (B) MP nedregulerede DEG'er, (C) PP opregulerede DEG'er og (D) PP nedregulerede DEG'er.

Tabel 4. Sammenfatning af GO-berigelses hovedfunktioner af leukocyt DEG'er i sammenligningen mellem de multiparøse køer, der modtager høj (n=14) og lav (n=14) kraftfoder i tidlig laktation.

Tabel 4. Forts.

De kombinerede op- og nedregulerede DEG'er (n=173) blev signifikant beriget med 23 KEGG-veje, som hovedsageligt var relateret til forskellige immun- og metaboliske processer (tabel 5). Komplement- og koagulationskaskader var på toppen med otte nedregulerede DEG'er (CFB, FGA, FGB, FGG, KNG1, PROC, SERPINA1 og VTN). Den inflammatoriske vej for NOD-lignende signalering var forbundet med seks DEG'er (IFNB1, MAPK10, OAS1X, OAS1Y, OAS1Z og OAS2), hvoraf alle undtagen MAPK10 var nedregulerede. Vejen til proteinfordøjelse og -absorption indeholdt seks DEG'er, hvoraf tre (COL1A1, COL1A2 og COL3A1) var opregulerede og tre nedregulerede (CELA2A, COL5A3 og ELN). Fem nedregulerede DEG'er var involveret i de peroxisomproliferatoraktiverede receptorer (PPAR'er) signalvejen (APOA2, APOC3, FABP1, HMGCS2 og PCK1). Vejene til ekstracellulær matrix-receptor-interaktion, fokal adhæsion og sphingolipid-signalering er alle involveret i vedligeholdelsen af ​​celle- og vævsstruktur.

Tabel 5. Signifikante veje identificeret ved berigelse af KEGG-veje forbundet med differentielt udtrykte leukocytgener i de multiparøse køer tilbød den højkoncentrerede diæt (n=14) sammenlignet med dem, der tilbydes den lavkoncentrerede diæt (n=14).

2.6. Sammenligning af leukocyt-genekspressionsmønstre mellem primiparøse køer, der modtager foder med højt eller lavt koncentrat

De 20 bedste cirkulerende leukocyt-DEG'er i PP-køerne fodret med HC sammenlignet med LC-diæterne er opført i Supplerende fil S2D, E. Immune, og metaboliske processer dominerede de biologiske funktioner af de øverste opregulerede DEG'er, der indeholdt henholdsvis 11 og 12 DEG. Blandt disse er ACSL6, MMP9 og SLC11A1 involveret i leukocytproliferation, og ACSL6, ADGRG3, COL1A2, DUSP1, HCK, MMP9 og PADI4 i udviklingsprocessen. SLC40A1 er en vigtig jerntransportør, der spiller en nøglerolle i at balancere cellulære og systemiske jernniveauer. Nogle af disse DEG'er koder for proteiner med flere funktioner. For eksempel er MMP9, DUSP1, SLC11A1 og COL1A2 forbundet med de fleste af ovenstående GO-funktioner. De biologiske funktioner af de top-nedregulerede DEG'er var mere forskellige. Der var otte DEG'er involveret i immunsystemprocessen, fem spillede roller i metabolisme og to forbundet med både leukocytproliferation og udviklingsproces (EPCAM og FCRL3). Igen koder nogle DEG'er, for eksempel CD96 og FCRL3, for proteiner med flere roller.

Hos PP-køerne var 382 opregulerede DEG'er afledt af HC vs. LC-sammenligningen signifikant forbundet med 690 GO-funktioner, med top 20 vist i figur 4C. Alle disse involverede 116 DEG'er (Supplerende fil S2F) med forskellige immunaktiviteter. Den øverste funktion var celleoverfladereceptorens signalvej. Dette var forbundet med 43 DEG'er, som inkluderede gener, der koder for mange receptorer for immunligander, såsom CXCR1, CXCR2, IL17RD og IL1RAP. Denne funktion havde seks signifikante underfunktioner, herunder den lipopolysaccharid (LPS)-medierede signalvej (PTAFR, TLR4 og SCARB1) og immunrespons-reguleret celleoverfladereceptor-signalvej. Den øverste underfunktion inden for reguleringen af ​​multicellulær organismeproces var reguleringen af ​​cytokinproduktion med 24 opregulerede DEG'er, såsom MARK13, LTF og TLR4. Der var færre nedregulerede DEG'er (kun 78), som var forbundet med 298 signifikante GO-funktioner, med lavere berigelsesscore og mere forskelligartede biologiske processer. Figur 4D viser de øverste 20 funktioner. En række af disse var forbundet med aspekter af immunitet, såsom celleadhæsion, regulering af produktion af mediator af immunrespons, respons på LPS og respons på molekyler af bakteriel oprindelse. Andre var relateret til opretholdelsen af ​​homeostase, såsom celleoverflade, cytolyse, transmembran transport og serin-type endopeptidase. Sammenfatning af de væsentlige biologiske funktioner forbundet med både op- og nedregulerede DEG'er genererede syv kategorier (tabel 6), med immunsystemprocessen ovenpå og de fleste af de andre funktioner også forbundet med immunforsvar. For eksempel blev bevægelsen beriget af DEG'erne med kemotaktiske og immune egenskaber og interspecies interaktion mellem organismer, hvilket involverer dræbning af invaderede patogener. Både cellulær proces og biologisk regulering var forbundet med et stort antal DEG'er. Cellulær proces (n=239 DEG'er) inkluderede mange underfunktioner forbundet med celleadhæsion, celledrab, immuncelleaktivering og cellepopulationsproliferation. Biologisk regulering (125 grader) involverer også mange immunaktiviteter, såsom regulering af immunsystemprocessen, bevægelse og respons på stimulus. Alle disse funktioner indeholdt overvejende opregulerede DEG'er på HC-diæten.

Tabel 6. Sammenfatning af GO-berigelses hovedfunktioner af DEG'er i sammenligningen mellem de primiparøse køer, der tilbød høj (n=6) og lav (n=6) kraftfoder i tidlig laktation.

Tabel 6. Forts.

De kombinerede op- og nedregulerede DEG'er (460) i PP-køerne blev beriget med 35 signifikante KEGG-veje (tabel 7). Mange var forbundet med metaboliske processer, der involverede aminosyrer (valin, leucin, isoleucin, arginin og glutathion), proteiner, lipider (arachidonsyre, glycerolipid og kolesterol), vitamin B6 og nogle hormoner (aldosteron, kortisol, skjoldbruskkirtel og væksthormon). ). Disse metaboliske veje blev overvejende beriget med DEG'erne opreguleret på HC-diæten. For eksempel var biosyntese af aminosyrer forbundet med fem opregulerede DEG'er (ARG2, ASS1, GPT2, SDS og SDSL), vejen for væksthormonsyntese, sekretion og virkning blev beriget med seks opregulerede (ADCY6, CREB3L2, CREB5, FOS , MAPK13 og SOCS3) og en nedreguleret (BCAR1) DEG'er, og arachidonsyremetabolisme indeholdt fem opregulerede DEG'er (CYP2J2, GGT5, GPX3, PLB1 og TBXAS1). Adskillige veje forbundet med den immune/inflammatoriske proces blev også betydeligt beriget, igen hovedsageligt med opregulerede DEG'er. Disse omfattede kemokin-, MAPK- og TNF-signalveje og komplement- og koagulationskaskader. For eksempel indeholdt kemokinsignalvejen otte opregulerede (ADCY6, CCL16, CCR1, CXCL13, CXCR1, CXCR2, GNG7 og HCK) og to nedregulerede DEG'er (BCAR1 og CCR5), TNF-signalvejen indeholdt seks opregulerede DEG'er (CREB3L2, CREB3L2, CREB3L2, CREB3L2, CREB3L2, CREB3L2, CREB3L2, CREB3L2, BCAR1 og CCR5). , FOS, MAPK13, MMP9 og SOCS3), og MAPK-signalvejene indeholdt 12 opregulerede DEG'er, inklusive IL1A, MAP3K6 og MAPK13.

Tabel 7. Signifikante veje identificeret af Kegg-vejberigelse forbundet med differentielt udtrykte leukocytgener i de primiparøse køer tilbød højkoncentratfoder (n=6) sammenlignet med dem, der tilbydes lavkoncentratfoder (n=6).

3. Diskussion

Postpartum malkekøer har homøostatiske mekanismer til at kontrollere næringsopdelingen mellem laktation og andre vigtige livsfunktioner, såsom immunitet og vækst [8]. Vævsmobilisering er en normal pattedyrs tilpasning til at understøtte laktation, men nogle køer bliver metabolisk ubalancerede [35,37]. Sådanne dyr oplever overdreven fedtvævsmobilisering, insulinresistens og systemisk inflammation, som bidrager til den svækkede immunitet, der ofte observeres på dette tidspunkt [38]. Dette er forbundet med inflammatoriske mediatorer såsom TNF og IL6 [39,40]. På dag 14 efter kælvning, hvor de cirkulerende leukocytprøver i denne undersøgelse blev indsamlet, var cellerne derfor blevet udsat for en periode med inflammatorisk stimulering. Vi har påvist ved hjælp af næste generations sekventering og bioinformatikanalyse, at diæterne med forskellige andele af kraftfoder gav forskellige effekter på det cirkulerende leukocyttranskriptom i PP- og MP-køer i tidlig laktation. Dette var forbundet med forskelle i deres helbred og fertilitet. Denne information har tilføjet nye resultater til vores tidligere rapport om kostens virkninger på mælkeproduktion og immunitet [32].

3.1. Sammenligning af virkningerne af foder med højt og lavt koncentrat i flerbørste køer

MP-køerne på HC-diæterne havde en højere DMI end MC- og LC-køer, og dette var forbundet med højere cirkulerende koncentrationer af både glucose og IGF {{0}}. Dette førte til, at HC-køerne var i mindre alvorlig NEB og producerede mere mælk. HC-diæten blev formuleret til at opfylde energi- og proteinkravene til både laktation og vedligeholdelse af kropshomeostase, og metabolitmålingerne bekræftede, at deres metaboliske status faktisk var bedre end for LC-køerne, med et mindre krav til vævsmobilisering for at opfylde energibehovet. Dette skulle bidrage til at fremskynde opløsningen af ​​postpartum inflammatoriske processer, da mange inflammatoriske sygdomme i tidlig laktation er forbundet med eller forårsaget af metaboliske lidelser [38], og vi viste tidligere, at livmoderbetændelse blev løst hurtigere hos køer med en bedre energibalancestatus [2]. I den foreliggende undersøgelse var der ingen forskel i forholdet mellem PMN'er og epitelceller i livmoderlumen i henhold til kosten i MP-køerne. Dette indeks tages ofte som en indikator for cytologisk endometritis [41]. Diætforskelle blev dog observeret i mælkekirtlen, da LC-køerne havde et højere SCC, og dette var forbundet med, at en større andel af dem oplevede klinisk mastitis i løbet af de første 16 DIM (28,6 % vs. 0 % i LC vs. HC-grupper).

De fleste af de DEG'er, der blev identificeret i analysen af ​​leukocyttranskriptomet, var involveret i immun- og/eller metaboliske processer, som forventet i en immuncellepopulation. Den mest betydningsfulde KEGG-vej var komplement- og koagulationskaskaden, som inkluderede seks af de mest nedregulerede gener i HC-køerne. Af disse koder CFB for komplementfaktor B, en komponent i den alternative vej for komplementaktivering. FGA, FGB og FGG koder for tre underenheder af koagulationsfaktoren fibrinogen, en nøglekomponent i blodproppen, som også er vigtig for at binde bakterier til blodplader [42]. Den højmolekylære form af kininogen, kodet af KNG1, er også essentiel for blodkoagulation, og kininogen frigiver bradykinin, et peptid med forskellige funktioner, herunder antibakteriel og svampedræbende aktivitet. Vitronectin, kodet af VTN, er også involveret i reguleringen af ​​koagulationsvejen og sårheling, mens dets heparinbindende domæne giver antimikrobielle egenskaber. PROC koder for et plasmaglykoprotein, hvis aktiverede form indeholder et serinproteasedomæne, der fungerer i nedbrydningen af ​​de aktiverede former af koagulationsfaktorer V og VIII, mens SERPINA1 koder for en serinproteaseinhibitor, hvis mål omfatter plasmin, thrombin og plasminogenaktivator. Opregulering af komplement- og koagulationskaskaden er tidligere blevet vist i brystvæv som et tidligt værtsrespons på E. coli eller Staph. aureus infektion [43]. Da denne vej var mere udtrykt i køerne på LC-diæten, understøtter dette bevis for en større forekomst af mastitis hos disse dyr.

cistanche tubulosa-forbedrer immunsystemet

En anden topfunktion opsummeret af GO-browseren var patogen-drabsprocessen (interspecies interaktion mellem organismer), som var forbundet med 14 nedregulerede DEG'er i HC-køerne (tabel 4). Dette inkluderede en række gener involveret i antiviral aktivitet (IFI6, IFNB1, ISG15, MX2, OAS1Y, OAS1Z, OAS2 og RSAD2), der blev udtrykt på lavere niveauer. Af disse koder IFNB1 for interferon beta 1, mens de andre alle er interferon-stimulerede gener [44,45]. De er alle også en del af den NOD-lignende receptor (NLR) signalvej. NLR'er er cytosoliske mønstergenkendelsesreceptorer, der aktiveres af forskellige ikke-selv-komponenter, herunder bakteriel peptidoglycan, hvilket potentielt initierer NF-kappa B-/AP-1-afhængig ekspression af pro-inflammatoriske cytokiner, ekspression af type I interferoner, autofagi og betændelse [46]. Vores nylige undersøgelse viste, at denne vej var opreguleret i leukocytter fra E. coli-inficerede køer [47]. Et andet identificeret gen var MPO, der koder for myeloperoxidase, et enzym lagret i azurofile granula af PMN'er og makrofager. Det frigives til ekstracellulær væske under inflammatoriske processer og er blevet brugt som en markør for inflammation og oxidativt stress [48]. IL1R2 koder for et medlem af interleukin 1-receptorfamilien og var en af ​​de mest signifikant nedregulerede DEG identificeret i MP-køerne. Dette kan binde IL1A, IL1B og interleukin 1 receptor, type I (IL1R1/IL1RA), men virker som en lokkereceptor til at hæmme ligandaktivitet.

Genet med den mest signifikante differentielle ekspression mellem MP-køer på de forskellige diæter var FCER1A, med lavere ekspression i HC-køerne. Dette koder for en underenhed af IgE-receptoren, som er initiatoren af ​​allergiske reaktioner, der kunne have udviklet sig for at fremme værtens forsvar mod parasitter gennem frigivelsen af ​​mediatorer såsom histamin [49]. Interessant nok var FCER1A et af kun 18 gener, hvis ekspressionsniveau blev identificeret som skelnen mellem fertiliteten af ​​oksekødskvier [50]. Dens præcise rolle i kvæg er stadig uafklaret, men i et vaccineforsøg med kalve eksperimentelt inficeret med den økonomisk vigtige parasitiske nematode Ostertagia ostertagi, korrelerede dets ekspressionsniveauer i blod positivt med mastcelletal og negativt med antallet af orme [51]. Tre andre opregulerede gener i HC-køerne med en vis immunfunktion var ALAS2, GZMB og LIF. ALAS2 koder for 50 -aminolevulinatsyntase 2, et erythroid-specifikt mitokondrielt lokaliseret enzym, der katalyserer det første og hastighedsbegrænsende trin i hæmbiosyntesevejen. Hæm er en essentiel cofaktor i en række nøgleprocesser, herunder ilttransport, mens mutationer i dette gen er blevet forbundet med en række menneskelige sygdomme, herunder anæmi [52]. GZMB koder for et præproprotein, der udskilles af naturlige dræberceller og cytotoksiske T-lymfocytter og behandles til at generere en aktiv protease, der inducerer målcelleapoptose og også behandler cytokiner og nedbryder ekstracellulære matrixproteiner [53]. Den cytokin-leukæmi-hæmmende faktor, kodet af LIF, blev oprindeligt identificeret gennem involvering i makrofagdifferentiering, men det har også vist sig at spille en vigtig rolle i embryoudvikling og etablering af graviditet hos en række arter, herunder kvæg [54].

DEG'erne afledt af HC vs. LC-sammenligningen i MP-køerne blev også beriget med adskillige signifikante veje forbundet med glucose-, protein- og fedtsyremetabolisme. Disse inkluderede fire nedregulerede DEG'er involveret i PPAR-signalveje (APOA2, APOC3, FABP1 og PCK1). I denne undersøgelse blev tre store PPAR-isoformer (A, D, G) påvist i leukocytpopulationen. Selvom ekspressionen af ​​selve PPAR'erne ikke var påvirket af kosten, kan denne vej påvirke ekspressionen af ​​gener involveret i glucose- og lipidmetabolisme, adipocytdifferentiering og inflammatoriske responser [55,56] og bidrager til den metaboliske tilpasning til en begrænset næringsstofforsyning ved at inducerende gener involveret i -oxidation [57]. Retinol metaboliske vej blev også nedreguleret i HC-køerne med lavere ekspression af RBP4 og TTR (koder for henholdsvis retinolbindende protein og transthyretin), som begge fungerer som retinoltransportører i blodet. Interaktionen af ​​retinol med PPAR-signalvejen påvirker transkriptionen af ​​mange andre nedstrømsgener [58]. APOA2 og APOC3 sammen med APOH er også en del af kolesterolmetabolismen. Kolesterol er en vigtig bestanddel af plasmamembranen og påvirker både dens organisation og funktion [59,60]. Nylige undersøgelser har understreget en spirende rolle for kolesterol som en vigtig modulator af medfødt og adaptiv immunaktivitet [61].

Glykolyse-/gluconeogenesevejen var forbundet med tre nedregulerede DEG'er hos de HC-fodrede køer (ADH1C, ALDOB og PCK1). Af disse koder PCK1 for phosphoenolpyruvat carboxykinase 1, der fungerer som det vigtigste kontrolpunkt for reguleringen af ​​gluconeogenese. Dette enzym katalyserer sammen med GTP dannelsen af ​​phosphoenolpyruvat fra oxaloacetat med frigivelse af kuldioxid og BNP. Aktivering af immune/inflammatoriske veje fremmer transkriptionen af ​​glukoneogene gener via toll-lignende receptor 4 (TLR4) [62]. Dette kan få immunceller til at skifte deres glukosemetabolisme fra oxidativ phosphorylering til glykolyse for at producere både energi og næringsstoffer, der kræves til spredning og immunmolekyleproduktion [12,63]. Dette fører til en øget efterspørgsel efter glukose, som konkurrerer med kravet om laktatproduktion [64].

Sammenfattende giver genekspressionsforskellene mellem MP-køer på HC- og LC-diæterne tegn på større opreguleret immunaktivitet og inflammation hos LC-køerne. Dette blev ledsaget af en højere forekomst af mastitis. I modsætning hertil blev gener, der koder for nogle proteiner, der sandsynligvis vil gavne sundhed og fertilitet, såsom ALAS2 og LIF, opreguleret i HC-køerne. Dette understøtter de målte metaboliske indekser, der viser, at der var en forbedret EBAL-status hos MP-køerne på HC-diæterne, hvilket sandsynligvis har været med til at beskytte dem mod udvikling af infektions- eller stofskiftesygdomme.

3.2. Sammenligning af virkningerne af foder med højt og lavt koncentrat i de primiparøse køer

I lighed med MP-køerne havde PP-køerne på HC-diæten også højere DMI, med omkring 4 kg/d, men mælkeydelsen steg ikke signifikant. Der var ingen signifikante forskelle i cirkulerende koncentrationer af glucose, NEFA, BHB eller IGF-1, hvor kun urinstof var højere på LC-diæten. I modsætning hertil var der mere signifikante forskelle i leukocyt-genekspression mellem diætgrupper end i MP-køerne, med 460 vs. 173 DEG identificeret i HC vs. LC-sammenligningerne, hvoraf 83% var opreguleret i PP-køer på HC-diæten. Kun en lille del af DEG'erne overlappede mellem de to aldersgrupper (figur 3), hvilket tyder på, at ændringerne i leukocytfunktionen til den tidlige laktationsdiæt var mere følsomme hos PP-køer end hos MP-køer. Vi havde forventet, at HC-diæten ville gavne PP-køerne ved at øge deres DMI og fuldt ud opfylde de beregnede diætmæssige unedbrydelige og metaboliserbare proteinbehov. EBAL var faktisk forbedret på HC-diæten, men genekspressionsanalysen viste en meget større opregulering af gener involveret i immunforsvaret. De HC-fodrede køer havde også et højere forhold mellem PMN'er: UEC i deres livmoder sammen med en numerisk større SCC og flere tilfælde af mastitis. Dette tyder på, at de faktisk var mere, snarere end mindre, tilbøjelige til sygdom. Vi har tidligere fundet ud af, at neutrofiler indsamlet fra PP-køerne i denne undersøgelse i de første tre uger af laktation havde et signifikant højere fagocytisk indeks og oxidativt burst-indeks sammenlignet med MP-køerne, men 2-måden af ​​kost og paritet disse målinger blev ikke rapporteret [32].

Immunsystemprocesserne identificeret i HC vs. LC-sammenligningen omfattede opregulering af celleoverfladereceptor- og mønstergenkendelsessignaleringsveje, kemotaksi, cytokinproduktion og leukocytmigrering i de HC-fodrede køer. Identificerede DEG'er var forbundet med en række forskellige immunforsvarsmekanismer, herunder en række antimikrobielle peptider (AMP) (CATHL6, CXCL13, DEFB1, LTF, PGLYRP1, PGLYRP4, SA100A8, SA100A9, S100A1 og SLC11A1). Disse kan ikke kun dræbe de invaderede organismer direkte, men også hjælpe ved at modulere andre immun- og antimikrobielle processer [65-67]. Opregulering af antimikrobielle peptider i leukocyttranskriptomiske profiler er tidligere blevet påvist hos køer med klinisk mastitis [47,68] og metritis/endometritis [69,70]. Leukocytadhæsionsfunktionen var forbundet med 16 opregulerede og fem nedregulerede DEG'er hos de HC-fodrede dyr. Adhæsion af leukocytter til kapillærvægge er et vigtigt første skridt i at sætte dem i stand til at transmigrere fra blodet og trafikken til steder med vævsskade, infektion og inflammation [71]. Både celle-celle og celle-matrix-interaktioner påvirker leukocyt-fænotypen, og dysregulering af adhæsionsveje kan føre til vedvarende leukocytaktivering med uafklaret inflammation [72]. Af de identificerede opregulerede DEG er ADAM8, ANGPTL3, CD24, ICAM3 og THY1 alle involveret i ekstravasation [73,74], mens FN1, NRP1, TNFAIP6 og VCAN har potentielle roller i leukocytcellehandel og funktion i betændt væv [72, 75]. Generne, der koder for kemokinreceptorerne CXCR1 og CXCR2, blev også opreguleret i de HC-fodrede køer; disse er både vigtige for at stimulere kemotaksen af ​​PMN mod infektionssteder såvel som aktivering af biokemiske processer, der dræber invaderende bakterier [76].

Af de nedregulerede gener forbundet med adhæsion i HC-fodrede køer koder BCAR1 for et multifunktionelt protein kendt som cas med involvering i cellemotilitet, apoptose og cellecykluskontrol [77]. Polymorfier i BCAR1 har tidligere været forbundet med SCC og mastitisresistens [78]. ADGRG1 (også kendt som GPR56) koder for en G-proteinkoblet receptor, der binder kollagen 3 og transglutaminase 2, begge komponenter i vævsstroma. ADGRG1 blev vist at spille en rolle i humane naturlige dræberceller (NK), hvor det hæmmer deres cytotoksicitet [79]. Dens egen ekspression nedreguleres efter cytokin-induceret aktivering, hvilket ville stemme overens med resultaterne vist her. CD96-protein virker også som en hæmmende checkpoint-receptor på NK-celler [80]. Tidligere undersøgelser af ændringer i leukocyttranskriptomet i overgangsperioden har også fundet ændringer i genekspression relateret til transendotel migration, men med forskellige konklusioner, der rapporterer om henholdsvis aktivering efter kælvning [81] eller hæmning [82]. Vores analyse identificerede også en række forskelle i signalveje for aminosyremetabolisme i PP-køer på HC-diæten sammenlignet med dem på LC-diæten, forbundet med enzymer kodet af fem opregulerede DEG'er (ARG2, ASS1, GPT2, SDS og SDSL) . Af disse koder ASS1 for argininsuccinatsyntase 1, som katalyserer det næstsidste trin i argininbiosyntesevejen, mens ARG2 koder for arginase, der katalyserer hydrolysen af ​​arginin til ornithin og urinstof. L-arginin kan også omdannes til nitrogenoxid, et signalmolekyle, der spiller en nøglerolle i patogenesen af ​​inflammation [83]. Glutamin-pyrodruesyre transaminase 2 (GPT2) er et mitokondrielt enzym, der katalyserer den reversible transaminering mellem alanin og 2-oxoglutarat for at generere pyruvat og glutamat. Dette gen er opreguleret under forhold med metabolisk stress og spiller en rolle i at drive gluconeogenese fra aminosyremetabolisme [84]. Serin-dehydratase (SDS) koder for et enzym, der omdanner L-serin til pyruvat og ammoniak, mens serindehydratase (SDSL) forudsiges at være involveret i isoleucinbiosyntesevejen fra threonin.

Vejen for kolesterolmetabolisme var forbundet med fire opregulerede DEG'er på HC-diæten (ANGPTL3, LRP1, SCARB1 og SORT1). Dette kan føre til akkumulering af kolesterol i leukocytterne hos de HC-fodrede køer og fremme inflammation, herunder forøgelse af TLR-signalering, inflammasomaktivering og større produktion af monocytter og neutrofiler i knoglemarven og milten [85]. Vejen for arachidonsyremetabolisme med fem opregulerede DEG'er (som nævnt tidligere) fører til produktion af kaskader af pro- og antiinflammatoriske produkter, såsom prostaglandiner og leukotriener [86]. Glyerolipidmetabolismevejen var forbundet med fire opregulerede DEG'er (DGAT2, DGKG, GK og GPAT3), som koder for lipogene gener involveret i syntesen af ​​triacylglycerol. Dets akkumulering kan inducere leukocytaktivering og inflammation [87,88]. Alle disse fund understøtter konklusionen om, at HC-diæten opregulerede leukocytmetaboliske veje i PP-køerne på en måde, der øgede deres immun-/inflammatoriske reaktioner. Tidligere arbejde med køer har hovedsageligt fokuseret på den tørre periode og har vist, at overfodring og høj BCS på dette tidspunkt fremmer efterfølgende lipidmobilisering og en øget inflammatorisk respons i peripartum-perioden [34]. I denne undersøgelse understøtter uterus PMN:UEC-forholdet og tendensen til en højere SCC antydningen af, at der var øget leukocytmigrering til livmoderen og mælkekirtlen hos PP-køerne, der fik HC-diæten. Selvom dette er en væsentlig komponent i immunforsvaret, kan overaktivering bidrage til hyperinflammation. Yderligere undersøgelse med en større stikprøvestørrelse er påkrævet for at bekræfte disse resultater.

3.3. Ligheder i reaktion på diæt hos multiparøse og primiparøse køer

In terms of metabolic changes, both the MP and PP cows had higher circulating concentrations of urea when on the LC diet. Blood urea in both late pregnancy and early lactation may rise following mobilization of amino acids stored in skeletal muscle [89] or when dietary protein supply exceeds energy availability or protein needed [90], so these situations could have applied here. Elevated levels of urea have been associated with reduced fertility, but only at >4,5 mmol/L, højere end de koncentrationer, der blev nået i de LC-fodrede dyr i denne undersøgelse [91]. Med hensyn til leukocyt-gentransskriptionsdata er det interessant at bemærke, at DEG'erne afledt af HC vs. LC-sammenligningen i begge aldersgrupper blev beriget med proteinfordøjelses- og absorptionsvejen, hvor generne, der koder for forskellige isoformer af kollagen, spiller vigtige roller . Blandt dem var der tre opregulerede kollagengener (COL1A1, COL1A2 og COL3A1) i både MP- og PP-køer og et nedreguleret (COL5A3) kollagen-gen i MP-køerne. Deres ekspressionsværdier i prøverne var små, men forskellene var signifikante. En del af dette RNA kan komme fra fibrocytter, en cellepopulation, der kun omfatter 0.1–0,5 % af ikke-erythrocytiske celler i perifert blod [92,93]. Kollagen er en længe etableret immunforstærker involveret i mange immun/inflammatoriske processer [93,94]. Dets opregulerede produktion i cirkulerende blod af HC-diæten kan derfor påvirke leukocytfunktionen.

3.4. Implikationer for fertilitet

Mange tidligere undersøgelser har rapporteret, at den indbyrdes forbundne metaboliske og immune status og sygdomsforekomst hos køer i tidlig laktation har stor indflydelse på deres efterfølgende fertilitet (f.eks. [38,95]). Vores eget arbejde viste, at MP-køer med en lav IGF-1-koncentration på 14 DIM var mindre tilbøjelige til overhovedet at blive gravide [37]. For nylig rapporterede vi, at 63 % af køerne med lav IGF-1 på dette tidspunkt oplevede mere end ét sundhedsproblem i løbet af deres første 35 DIM sammenlignet med kun 26 % af køer med høj IGF-1. Dette omfattede flere dyr med livmoderinfektioner og klinisk mastitis [10]. Foley et al. [69] skelnede mellem sunde køer, som var i stand til at genoprette homeostase inden for 3 uger efter kælvning, og andre, som oplevede en mere alvorlig og langvarig inflammatorisk respons, som derefter fortsatte med at udvikle klinisk endometritis. En sammenhæng med perifert blod blev påvist af Galvão et al. [96] som viste, at neutrofiler fra køer i dårligere EBAL havde et lavere glykogenindhold ved syv DIM, og disse dyr oplevede mere livmodersygdom, potentielt forbundet med den nedsatte tilgængelighed af oxidative brændstoffer til immunrespons. Klinisk mastitis i tidlig laktation er også forbundet med øgede rater af præ-implantationstab af embryoner, med en vis indikation på, at en lav BCS yderligere øger risikoen [97]. En række mekanismer forbundet med cytokin- og prostaglandinproduktion og andre inflammatoriske mediatorer er blevet foreslået, som kunne påvirke æggestokken og/eller forårsage et ugunstigt livmodermiljø [98,99]. Fertilitetsdata opnået fra køerne i vores undersøgelse understøttede resultaterne vedrørende deres immunstatus og sundhed i tidlig laktation. MP-køerne på LC-diæten krævede numerisk mere S/C i overensstemmelse med deres dårligere EBAL sammen med beviser fra analyse af leukocyttranskriptomet af mere aktivt immunforsvar i gang, som understøttet af deres højere forekomst af mastitis. Derimod tog PP-køerne på HC-diæten betydeligt længere tid om at blive gravide, og færre blev drægtige sammenlignet med de LC-fodrede køer. De havde flere tegn på betændelse i begyndelsen af ​​graviditeten, selvom deres beregnede EBAL var bedre. På nuværende tidspunkt er de underliggende mekanismer, der forårsager deres dårlige sundhedstilstand og fertilitet, usikre, selvom vi også har fundet beviser baseret på global genekspression af øget leverbetændelse og fibrose (Cheng, Little, Ferris, Takeda, Ingvartsen, Crowe og Wathes, upublicerede observationer) .

3.5. Undersøgelsens begrænsninger

Der var færre PP-køer pr. gruppe til rådighed, og det reducerede den statistiske kraft af analyserne vedrørende fænotyperne. Yderligere undersøgelser med en større prøvestørrelse er derfor påkrævet for at bekræfte kostens effekter på reproduktion og sygdom. I denne undersøgelse ekstraherede vi alt RNA fra hel perifert blod ved hjælp af Tempus-rør og dets isoleringssystem. Dette giver let indsamling til en storstilet gårdundersøgelse, men adskiller ikke celletyperne, som vil omfatte T- og B-lymfocytter, naturlige dræberceller, blodplader, monocytter, granulocytter (neutrofiler, eosinofiler og basofiler) og fibrocytter. De præsenterede genekspressionsdata er derfor blevet påvirket af mulige behandlingseffekter på de relative andele af bestemte celletyper ud over deres individuelle transkriptionelle ændringer. Disse resultater er også baseret på gentranskriptionsniveauer og inkluderer ikke information om deres post-translationelle bearbejdning, hvilket også vil påvirke, hvor meget funktionelt protein der produceres.

4. Materialer og metoder

4.1. Dyr og diæter

Alle procedurer blev udført i henhold til Animals (Scientific Procedures) Act 1986 og dækket af Home Office Project License nummer PPL2754 og et certifikat for betegnelse for virksomheden. Arbejdet blev også godkendt af Ethics and Welfare Committee for Agri-Food and Biosciences Institute (AFBI, Belfast, Nordirland, UK). 62 holstensk-frisiske malkekøer blev rekrutteret fra AFBI-besætningen. Blandt dem var 18 PP (laktation 1) og 44 MP med laktationsnummer 2-7 (3,5 ± 1,28), og alle køer var sunde som undersøgt af dyrlægen. Kælvningsvægten var 680 ± 62 (middel ± STD) kg for MP-køer og 550 ± 39 kg for PP-køer. Efter kælvning blev PP- og MP-køerne separat tildelt tre diætgrupper, med tildelingen i hver aldersgruppe afbalanceret for forudsagt overførselsevne for fedt plus protein (kg), BW før kælvning og BCS. MP-køerne blev også afbalanceret for paritet og tidligere laktations 305-dag mælkeydelse. Køerne blev tilbudt enten (1) lavt koncentrat (LC, 30 % kraftfoder plus 70 % græsensilage, n=6 for PP og n=14 for MP); (2) medium koncentrat (MC, 50 % koncentrat plus 50 % græsensilage, n=6 for PP og n=15 for MP) eller (3) højkoncentrat (HC, 70 % koncentrat plus 30 % græsensilage, n=6 for PP og n=15 for MP) diæter (procenter på tørstofbasis). Koncentratet for hver behandling blev formuleret til at opnå en fælles total diætråprotein (CP) koncentration for hver af LC, MC og HC (henholdsvis 152, 152 og 154 g/kg DM), mens den beregnede totale diætmetaboliserbare energi ( ME) indhold var 12,0, 12,4 og 12,8 MJ/kg DM. Diæterne blev estimeret til at levere 1556, 1997 og 2420 g/d effektivt vomnedbrydeligt protein; 559, 733 og 888 g/d unedbrydeligt protein i kosten og 1346, 1817 og 2275 g/d metaboliserbart protein til henholdsvis LC, MC og HC. Adgang til behandlingsrationer blev kontrolleret af et Calan Broadbent fodringssystem (American Calan Inc., Northwood, NH, USA) koblet til et elektronisk identifikationssystem, som gjorde det muligt at registrere individuelle koindtag dagligt. Diæterne for hver behandling blev tilbudt med 107 % af de foregående dages indtag for at sikre ad libitum forbrug. Alle køer blev også tilbudt yderligere 0,5 kg kraftfoder ved hver malkning via et fodersystem i stalden for at hjælpe med at opretholde et effektivt koflow. Nærværende undersøgelse var en del af et bredere projekt, og alle detaljer om de tilbudte diæter, fodringsstyring og fodersammensætning blev beskrevet tidligere [32].

4.2. Ko fænotype dataindsamling

Kropsvægte blev registreret to gange om ugen ved hjælp af vægte. BCS blev estimeret til omkring 14 DIM [100]. Alle køer blev malket to gange dagligt, og deres daglige udbytte blev registreret. Mælkeprøver blev analyseret to gange ugentligt ved hjælp af mid-infrarød analyse for koncentrationer af protein, fedt og laktose, og somatiske mælkeceller blev talt. Yderligere morgenmælkprøver (2 × 8 ml) blev indsamlet to gange ugentligt og opbevaret ved -18 ◦C til analyse af LDH (EC. 1.1.1.27) og NAGase (EC 3.2.1.30) ved hjælp af fluorometriske assays [101]. Energikorrigeret mælkeydelse (ECM; kg/dag) blev beregnet efter metoderne brugt i vores gruppe [32]. EBAL for hver ko blev estimeret ved hjælp af metoden beskrevet tidligere [102].

Klinisk mastitis blev diagnosticeret ved hjælp af standardmetoder baseret på daglige observationer for unormale ændringer i mælkens udseende (f.eks. flager, blodpropper), kvalitet, mælkeydelse og brystbetændelsesreaktioner (rødme, hævelse, varme eller smerte). Mælk SCC-aflæsninger sammen med de kliniske diagnoser blev brugt til at kategorisere køerne i tre grupper. Raske køer blev defineret som havende et SCC < 100,000 celler/ml mælk og ingen kliniske symptomer. Subklinisk mastitiske køer blev defineret som havende en SCC mellem 100,000 og 400,000 celler/ml mælk og ingen synlige kliniske symptomer. Køer diagnosticeret med klinisk mastitis havde en SCC > 400,000 celler/ml mælk og viste nogle af ovenstående kliniske symptomer. Køer blev insemineret ved observeret brunst under anvendelse af normal besætningspraksis, og fertilitetsdata for varigheden af ​​den efterfølgende laktation eller indtil dyret blev aflivet blev hentet fra besætningsregistrene. De rapporterede data inkluderede dage til første gang (DFS), dage til befrugtning (åbent dage), ydelser pr. befrugtning og andelen af ​​køer, der blev gravide. Derudover blev undfangelsesdataene scoret ved hjælp af en 4-point i kalv efter (ICB) score som (1)<100 days, (2) 100–200 days, (3) >200 dage, eller (4) undlod at blive gravid eller aflivet.

4.3. Livmodercytologisk analyse

En uterin cytobørsteprøve (Minitube, Minitüb GmbH, Tiefenbach, Tyskland) blev taget fra hver ko omkring 14 DIM for at evaluere endometriecytologi, som tidligere beskrevet [103]. En dobbeltbeskyttet cytobørste blev ført manuelt gennem livmoderhalsen ind i livmoderen, den indre beskyttelse blev ekstruderet fra den ydre beskyttelse, og børsten blev roteret forsigtigt mod endometrievæggen. Børsten blev derefter trukket tilbage i den indre beskyttelse og fjernet. Objektglas til cytologisk undersøgelse blev forberedt ved at rulle cytobørsten på et rent mikroskopobjektglas og fiksere prøven med Fisherbrand™ CytoPrep™ Cytology Fixative (Fishers Scientific, Blanchardstown, Irland). Faste objektglas blev sendt til UCD School of Veterinary Medicine, University College Dublin, Irland til behandling og farvet med modificeret Giemsa-farve. Den cytologiske vurdering blev udført ved at tælle PMNs UEC'er ved 400x forstørrelse (Leitz Labourlux-S, Wetzlar, Tyskland) og bestemme deres forhold ved at beregne et gennemsnit af 10 højeffektfelter pr. objektglas.

4.4. Analyse af cirkulerende metabolitter og IGF-1

Ved 14 ± 2 (gennemsnit ± STD) dage efter kælvning blev 10 ml blodprøver opsamlet fra halsvenen på alle køer i Na-heparinrør til plasma og almindelige rør til serum. Efter adskillelse af plasma eller serum med centrifugering blev de opbevaret ved -20 ◦C indtil analyse. Koncentrationer af plasmaglucose, urinstof, BHB, NEFA og kolesterol blev målt ved hjælp af de tidligere beskrevne metoder [20,25]. Kort fortalt blev serum-NEFA-koncentrationen bestemt med ACS-ACOD-metoden under anvendelse af NEFA C-kits (Wako, Neuss, Tyskland). Plasmaglukose blev kvantificeret med en enzymatisk metode (ADVIA 1800 Clinical Chemistry System, Siemens Healthcare Diagnostics, Ballerup, Danmark). Serum BHB blev bestemt ved at måle absorbans ved 340 nm på grund af produktionen af ​​NADH ved alkalisk pH i nærvær af BHB dehydrogenase. Serumurinstof blev analyseret ved spektrofotometri. Intra- og inter-assay variationskoefficienter (CV) var i alle tilfælde under henholdsvis tre og fire procent for både lave og høje kontrolprøver. Koncentrationer af serum IGF-1 blev kvantificeret med radioimmunoassay efter ekstraktion af sur ethanol [104]. Intra-assay CV var 12,4, 7,5 og 9,9% for henholdsvis lav, medium og høj kontrolprøver.

4.5. Blod RNA ekstraktion

Blodprøver til RNA-ekstraktion blev opsamlet via halsvenepunktur fra alle køer ved 14 ± 2 DIM i Tempus blod-RNA-rør (Thermo-Fisher Scientific, Loughborough, UK). Rørene blev rystet kraftigt i 15-20 sekunder umiddelbart efter opsamling, derefter frosset og opbevaret ved -80 ◦C til RNA-ekstraktion. Fuldblods-RNA'et blev ekstraheret ved hjælp af Tempus Spin RNA-isoleringssæt (Thermo-Fisher) efter producentens instruktioner som beskrevet tidligere [20]. En Agilent BioAnalyzer 2000 (Agilent Technologies UK Ltd., Cheadle, UK) med Agilent RNA 6000 Nano Kit (Agilent Technologies UK Ltd., Cheadle, UK) blev brugt til at vurdere RNA-mængden og integriteten. Derudover blev mængden og renheden valideret med en NanoDrop 1000 (Thermo Fischer). Kvalitetsdata er opsummeret i Supplerende fil S3. Dette viste, at alle RNA-prøver havde rimelig integritet (RIN-tal > 8,7, 9,3 ± 0,3) og renhed (260/280 mellem 2,01 og 2,15, middel ± STD 2,10 ± 0,03), så ingen dyr blev fjernet fra analysen. RNA'et blev opbevaret ved -80 ◦C til efterfølgende RNA-sekventering.

4.6. RNA-sekventering, kortlægning og kvantificering

Det ekstraherede leukocyt-RNA blev sekventeret på Illumina NextSeq 500-platformen som beskrevet tidligere [68]. Kort fortalt blev 750 ng total RNA ved brug af epMotion væskehåndteringsarbejdsstationen (Eppendorf, Hamborg, Tyskland) omvendt transskriberet til cDNA-sekventeringsbiblioteker med Illumina TruSeq Stranded Total RNA Library Prep Ribo-Zero Gold kit (Illumina, San Diego, CA, USA ). De samlede cDNA-biblioteker blev sekventeret på en Illumina NextSeq 500-sequencer ved 75 nukleotid-længde enkelt-ende-aflæsninger for at nå et gennemsnit på 33,5 millioner aflæsninger pr. prøve. De rå FASTQ-filer blev deponeret til European Nucleotide Archive (E-MTAB-9347 og E-MTAB-9431). Alle sekventeringsanalyser blev udført under anvendelse af CLC Genomic Workbench v21 (Qiagen, Manchester, UK). Hver prøve indeholdt aflæsningerne fra fire baner, og de blev slået sammen til en fastq-fil. Kvaliteten af ​​både rå og trimmede fastq-filer blev vurderet efter en Illumina Pipeline 1.8, og eventuelle mislykkede læsninger blev fjernet. Aflæsninger blev derefter kortlagt til en referencegenom Bos taurus-samling (ARS-UCD1.2 leveret af RefSeq på https://www. ncbi.nlm.nih.gov/assembly, tilgængelig den 1. januar 2021) og kvantificeret som aflæsninger pr. gen, læser pr. kilobase million (RPKM) og transkriptioner pr. kilobase million (TPM). Disse blev gemt som genekspressionsfiler (GE) i CLC Genomics Workbench for at blive brugt til den følgende analyse af differentiel genekspression.

4.7. Analyse af differentiel genekspression mellem diætgrupperne

Før differentialekspressionsanalysen for diæteffekt brugte vi principal komponentanalyse (PCA) med RPKM-værdierne til at identificere outliers, og dette viste, at to køer (Blood020009, MP og Blood020103, PP) var populationsoutliers og blev derfor udelukket fra yderligere analyse (Supplerende fil S4A). Hovedkomponentanalyse viste også, at der kun var begrænset overlap i det overordnede genekspressionsmønster mellem PP- og MP-køerne (Supplerende fil S2B). Dette understøttede det oprindelige undersøgelsesdesign til at analysere hver aldersgruppe separat. GE-filerne afledt af alle individuelle prøver blev derfor adskilt efter aldersgruppe (PP, n=5-6 pr. gruppe og MP, n=14-15 pr. gruppe). DEG'erne mellem diætgrupperne i PP- eller MP-køer blev identificeret med CLC Genomics Workbench V21 via en envejs ANOVA-lignende procedure. Falske opdagelsesrater (FDR) for flere tests blev justeret med Benjamini-Hochberg (BH), og signifikansen blev betragtet som p < 0,05. Foldeændringerne (FC'er) blev beregnet som genekspressionsforholdet for den højere koncentratgruppe til den lavere koncentratgruppe (f.eks. HC vs. LC, MC vs. LC eller HC vs. MC), hvis værdien af ​​den højere koncentratgruppe var større end for den lavere koncentratgruppe (positiv foldændring, opregulering). Hvis værdien af ​​den lavere koncentratgruppe var større end værdien af ​​den højere koncentratgruppe, blev forholdet mellem den lavere koncentratgruppe og den højere koncentratgruppe anvendt (f.eks. LC vs. HC, MC vs. HC og LC vs. MC ) (negativ foldændring, nedregulering). DEG'erne opreguleret og nedreguleret med en absolut foldændring større end eller lig med 1,5 mellem diætgrupper blev udvalgt til yderligere analyse.

4.8. Genontologi (GO) berigelsesanalyse

DEG'erne afledt af parsammenligninger mellem diætgrupperne blev indlæst i Partek Genomics Suite V7.1 (Partek Incorporation, Chesterfield, MO, USA) til GO-berigelsesanalyse til undersøgelse af de biologiske funktioner og interaktioner mellem DEG'erne og den tilhørende Kyoto Encyclopedia of Gener og genomer (KEGG) veje med et genom af Bos taurus ARS-UCD1.2. Fishers eksakte test med BH-justering blev brugt, og statistisk signifikans blev betragtet ved p < 0.05.

4.9. Statistisk analyse af fænotypedata

Dataene fra alle køer blev først opdelt efter aldersgruppen (PP- og MP-køer), ifølge undersøgelsens design. Værdierne af DMI, BW, mælkeparametre, EBAL, BCS, cirkulerende metabolitter (glucose, urinstof, BHB, NEFA'er, kolesterol og IGF{{0}}), SCC (logaritmisk transformeret) og livmodercelletal og deres forhold blev opsummeret som middel ± standardfejl af middelværdien (SE). Statistisk analyse blev brugt til at sammenligne forskellene mellem diætgrupperne ved hjælp af en envejs ANOVA indbygget i SPSS V28 softwarepakken (Chicago, IL, USA). Varianshomogeniteten for hver variabel blev testet med Levenes statistik før ANOVA. Resultaterne viste, at homogenitet mellem grupperne for ECM, EBAL, glucose, urinstof, BHB og IGF-1 i PP-køerne ikke blev opnået, så logaritmisk transformation blev anvendt for disse variable. Hvor ANOVA viste betydning, blev der udført flere sammenligninger med Fishers LSD-metode for at identificere kilden til forskelle. Da homogenitet af variansen for dataene for mælke-SCC og uterincytologi ikke kunne opnås efter logaritmisk transformation, blev disse variable testet ved hjælp af en Kruskal-Wallis envejs ANOVA med Dunns multiple sammenligninger. Fertilitetsdataene blev testet med Wilcoxon-metoden. I alle tilfælde blev signifikans betragtet ved p < 0,05.

5. Konklusioner

Denne undersøgelse understøtter tidligere arbejde med at påvise klare sammenhænge mellem køers metaboliske status i tidlig laktation og deres immunfunktion. De fleste tidligere undersøgelser rettet mod at forbedre postpartum sundhed gennem bedre ernæring har fokuseret på prepartum perioden og vist, at overfodring og høj BCS på dette tidspunkt fremmer efterfølgende lipidmobilisering og en øget inflammatorisk respons i peripartum perioden [34]. Vi har i stedet vurderet, om det er muligt at ændre immunfunktionen efter kælvning ved at ændre diegivningskosten. Vi fandt ud af, at responsen på yderligere inklusion af kraftfoder, som gav en diæt formuleret til at opfylde dyrets energi- og proteinbehov, frembragte forskellige effekter på leukocyttranskriptomet i MP- og PP-køer. Hos MP-køerne var HC-diæten klart gavnlig, da LC-koens leukocytter havde opregulering af komplement- og koagulationskaskaden og medfødte immunforsvarsmekanismer mod patogener. I modsætning hertil viste leukocytterne i PP-køerne på HC-diæten større immun/inflammatoriske reaktioner, og de havde et højere PMN:UEC-forhold, hvilket tyder på øget leukocytmigrering til livmoderen. Disse køer havde efterfølgende et længere kælvningsinterval til undfangelse, hvilket tyder på dårligere fertilitet. Yderligere arbejde med et større antal køer er berettiget for at bekræfte opdagelsen af ​​en diæteffekt på fertiliteten og for at forstå mere fuldstændigt, hvordan de metaboliske reaktioner af postpartum-diæten adskiller sig hos de yngre dyr.

Referencer

1. Mallard, BA; Dekkers, JC; Irland, MJ; Leslie, KE; Sharif, S.; Vankampen, CL; Wagter, L.; Wilkie, BN Ændring i immunrespons i peripartum-perioden og dens forgrening på malkekøer og kalvesundhed. J. Dairy Sci. 1998, 81, 585-595. [CrossRef] [PubMed]

2. Wathes, DC; Cheng, Z.; Chowdhury, W.; Fenwick, MA; Fitzpatrick, R.; Morris, DG; Patton, J.; Murphy, JJ Negativ energibalance ændrer global genekspression og immunrespons i livmoderen hos malkekøer efter fødslen. Physiol. Genom. 2009, 39, 1-13. [CrossRef]

3. Ingvartsen, KL; Moyes, K. Ernæring, immunfunktion og sundhed hos malkekvæg. Dyr 2013, 7 (Suppl. 1), 112–122. [CrossRef] [PubMed]

4. Kehrli, ME, Jr.; Nonnecke, BJ; Roth, JA Ændringer i bovin neutrofil funktion under den periparturiente periode. Er. J. Vet. Res. 1989, 50, 207-214. [PubMed]

5. Ster, C.; Loiselle, MC; Lacasse, P. Effekt af ikke-esterificerede fedtsyrekoncentrationer i serum efter kælvning på funktionaliteten af ​​bovine immunceller. J. Dairy Sci. 2012, 95, 708-717. [CrossRef] [PubMed]

6. Lacetera, N.; Scalia, D.; Bernabucci, U.; Ronchi, B.; Pirazzi, D.; Nardone, A. Lymfocytfunktion i overkonditionerede køer omkring fødslen. J. Dairy Sci. 2005, 88, 2010-2016. [CrossRef] [PubMed]

7. Nonnecke, BJ; Kimura, K.; Goff, JP; Kehrli, ME, Jr. Effekter af mælkekirtlen på funktionelle kapaciteter af mononukleære leukocytpopulationer i blod fra periparturient køer. J. Dairy Sci. 2003, 86, 2359-2368. [CrossRef]

8. Habel, J.; Sundrum, A. Mismatch af glukoseallokering mellem forskellige livsfunktioner i overgangsperioden for malkekøer. Dyr 2020, 10, 1028. [CrossRef]

9. Horst, EA; Kvidera, SK; Baumgard, LH Inviteret gennemgang: Påvirkningen af ​​immunaktivering på overgangsko sundhed og præstation - En kritisk evaluering af traditionelle dogmer. J. Dairy Sci. 2021, 104, 8380-8410. [CrossRef]

10. Wathes, DC; Becker, F.; Buggiotti, L.; Crowe, MA; Ferris, C.; Foldager, L.; Grelet, C.; Hostens, M.; Ingvartsen, KL; Marchitelli, C.; et al. Forbindelser mellem cirkulerende IGF-1-koncentrationer, sygdomsstatus og leukocyttranskriptomet hos malkekøer med tidlig laktation. Drøvtyggere 2021, 1, 147–177. [CrossRef]

11. Dimeloe, S.; Burgener, AV; Grahlert, J.; Hess, C. T-cellemetabolisme, der styrer aktivering, proliferation og differentiering; en modulopbygget udsigt. Immunology 2017, 150, 35-44. [CrossRef] [PubMed]

12. Loftus, RM; Finlay, DK Immunmetabolisme: Cellulær metabolisme bliver immunregulator. J. Biol. Chem. 2016, 291, 1-10. [CrossRef] [PubMed]

13. Bauman, DE; Currie, WB Opdeling af næringsstoffer under graviditet og amning: En gennemgang af mekanismer, der involverer homeostase og homeorhesis. J. Dairy Sci. 1980, 63, 1514-1529. [CrossRef] [PubMed]

14. Drackley, JK ADSA Foundation Scholar Award. Malkekøers biologi i overgangsperioden: Den endelige grænse? J. Dairy Sci. 1999, 82, 2259-2273. [CrossRef] [PubMed]

15. Jabbour, HN; Salg, KJ; Catalano, RD; Norman, JE Inflammatoriske veje i kvindelig reproduktiv sundhed og sygdom. Gengivelse 2009, 138, 903–919. [CrossRef]

16. Pascottini, OB; LeBlanc, SJ Modulering af immunfunktion i bovin uterus peripartum. Theriogenology 2020, 150, 193-200. [CrossRef]

17. Sheldon, IM; Lewis, GS; LeBlanc, S.; Gilbert, RO Definition af postpartum livmodersygdom hos kvæg. Theriogenology 2006, 65, 1516-1530. [CrossRef]

18. Kuhla, B. Anmeldelse: Pro-inflammatoriske cytokiner og hypothalamus inflammation: Implikationer for utilstrækkelig foderoptagelse af overgangsmakekøer. Dyr 2020, 14, s65–s77. [CrossRef]

19. Ingvartsen, KL; Moyes, KM Faktorer, der bidrager til immunsuppression hos malkekoen i den periparturiente periode. Jpn. J. Vet. Res. 2015, 63 (Suppl. 1), S15–S24.

20. Wathes, DC; Cheng, Z.; Salavati, M.; Buggiotti, L.; Takeda, H.; Tang, L.; Becker, F.; Ingvartsen, KI; Ferris, C.; Hostens, M.; et al. Forbindelser mellem metaboliske profiler og genekspression i lever og leukocytter hos malkekøer i tidlig laktation. J. Dairy Sci. 2021, 104, 3596-3616. [CrossRef]

21. Pinedo, P.; Melendez, P. Leversygdomme forbundet med metaboliske ubalancer hos malkekøer. Dyrlæge. Clin. N. Am. Mad Animal. øv. 2022, 38, 433-446. [CrossRef] [PubMed]

22. Fenwick, MA; Fitzpatrick, R.; Kenny, DA; Diskin, MG; Patton, J.; Murphy, JJ; Wathes, DC Sammenhæng mellem negativ energibalance (NEB) og IGF-regulering i leveren hos lakterende malkekøer. Indenrigs. Anim. Endokrinol. 2008, 34, 31-44. [CrossRef] [PubMed]

23. Kobayashi, Y.; Boyd, CK; Bracken, CJ; Lamberson, WR; Keisler, DH; Lucy, MC Reduceret væksthormon receptor (GHR) messenger ribonukleinsyre i leveren af ​​periparturient kvæg er forårsaget af en specifik nedregulering af GHR 1A, der er forbundet med nedsat insulinlignende vækstfaktor I. Endocrinology 1999, 140, 3947-3954. [CrossRef]

24. Kvidera, SK; Horst, EA; Abuajamieh, M.; Mayorga, EJ; Fernandez, MV; Baumgard, LH Glukosekrav til et aktiveret immunsystem hos diegivende Holstein-køer. J. Dairy Sci. 2017, 100, 2360-2374. [CrossRef] [PubMed]

25. Cheng, Z.; Wylie, A.; Ferris, C.; Ingvartsen, KL; Wathes, DC; Gplus, EC Effekt af diæt og ikke-esterificerede fedtsyreniveauer på globale transkriptomiske profiler i cirkulerende perifere mononukleære blodceller hos malkekøer i tidlig laktation. J. Dairy Sci. 2021, 104, 10059-10075. [CrossRef]

26. Wathes, DC; Fenwick, M.; Cheng, Z.; Bourne, N.; Llewellyn, S.; Morris, DG; Kenny, D.; Murphy, J.; Fitzpatrick, R. Indflydelse af negativ energibalance på cyklicitet og fertilitet hos den højproducerende malkeko. Theriogenology 2007, 68 (Suppl. 1), S232–S241. [CrossRef]

27. Santos, JE; Bisinotto, RS; Ribeiro, ES Mekanismer, der ligger til grund for reduceret fertilitet hos anovulære malkekøer. Theriogenology 2016, 86, 254-262. [CrossRef]

28. Pascottini, OB; Leroy, J.; Opsomer, G. Utilpasning til overgangsperioden og konsekvenser for malkekøers fertilitet. Reprod. Dom. Anim. 2022, 57 (Suppl. 4), 21-32. [CrossRef]

29. Leroy, JL; Valckx, SD; Jordaens, L.; De Bie, J.; Desmet, KL; Van Hoeck, V.; Britt, JH; Marei, WF; Bols, PE Ernæring og maternal metabolisk sundhed i forhold til oocyt- og embryokvalitet: Kritiske synspunkter på, hvad vi lærte fra malkekomodellen. Reprod. Fertil. Dev. 2015, 27, 693-703. [CrossRef]

30. Coffey, MP; Hickey, J.; Brotherstone, S. Genetiske aspekter af væksten af ​​holstensk-frisiske malkekøer fra fødsel til modenhed. J. Dairy Sci. 2006, 89, 322-329. [CrossRef]

31. Wathes, DC; Cheng, Z.; Bourne, N.; Taylor, VJ; Coffey, MP; Brotherstone, S. Forskelle mellem primiparøse og multiparøse malkekøer i det indbyrdes forhold mellem metaboliske egenskaber, mælkeydelse og kropstilstandsscore i den periparturiente periode. Indenrigs. Anim. Endokrinol. 2007, 33, 203-225. [CrossRef] [PubMed]

32. Lille, MW; Wylie, ARG; O'Connell, NE; Welsh, MD; Grelet, C.; Bell, MJ; Gordon, A.; Ferris, CP Immunologiske virkninger af ændring af kraftfoderinklusionsniveauet i en græsensilagebaseret diæt til tidlig laktation Holstein Friesian køer. Dyr 2019, 13, 799–809. [CrossRef] [PubMed]

33. Buggiotti, L.; Cheng, Z.; Salavati, M.; Wathes, CD; Genotype plus Environment, C. Sammenligning af transkriptomet i cirkulerende leukocytter i tidlig laktation mellem primiparøse og multiparøse køer giver bevis for aldersrelaterede ændringer. BMC Genom. 2021, 22, 693. [CrossRef] [PubMed]

34. Cardoso, FC; Kalscheur, KF; Drackley, JK Symposium gennemgang: Ernæringsstrategier for forbedret sundhed, produktion og fertilitet i overgangsperioden. J. Dairy Sci. 2020, 103, 5684-5693. [CrossRef] [PubMed]

35. Ingvartsen, KL Foder- og ledelsesrelaterede sygdomme hos overgangskoen. Anim. Foder Sci. Teknol. 2006, 126, 175-213. [CrossRef]

36. Ferris, CP; Gordon, FJ; Patterson, DC; Mayne, CS; McCoy, MA En kortsigtet sammenligning af ydeevnen af ​​fire græsmarksbaserede systemer til mælkeproduktion til efterårskalvede malkekøer. Græsfoder Sci. 2003, 58, 8. [CrossRef]

37. Taylor, VJ; Cheng, Z.; Pushpakumara, PG; Beever, DE; Wathes, DC Forbindelser mellem plasmakoncentrationerne af insulinlignende vækstfaktor-I hos malkekøer og deres fertilitet og mælkeydelse. Dyrlæge. Rec. 2004, 155, 583-588. [CrossRef]

38. LeBlanc, SJ Interaktioner af stofskifte, inflammation og reproduktionskanal sundhed i postpartum perioden hos malkekvæg. Reprod. Domc. Anim. 2012, 47 (Suppl. 5), 18-30. [CrossRef]

39. Vailati-Riboni, M.; Kanwal, M.; Bulgari, O.; Meier, S.; Præst, NV; Burke, CR; Kay, JK; McDougall, S.; Mitchell, MD; Walker, CG; et al. Kropstilstandsscore og ernæringsplan præpartum påvirker fedtvævstranskriptomregulatorer af metabolisme og inflammation hos græssende malkekøer i overgangsperioden. J. Dairy Sci. 2016, 99, 758-770. [CrossRef]

40. Trevisi, E.; Minuti, A. Vurdering af det medfødte immunrespons i den periparturient ko. Res. Dyrlæge. Sci. 2018, 116, 47-54. [CrossRef]

41. Druker, SA; Sicsic, R.; van Straten, M.; Goshen, T.; Kedmi, M.; Raz, T. Cytologisk endometritis diagnose hos primiparøse versus multiparøse malkekøer. J. Dairy Sci. 2022, 105, 665-683. [CrossRef] [PubMed]

42. Hamzeh-Cognasse, H.; Laradi, S.; Osselaer, JC; Cognasse, F.; Garraud, O. Amotosalen-HCl-UVA-patogenreduktion ændrer ikke metabolisme efter lagring af opløselig CD40-ligand, Ox40-ligand og interkeukin-27, de cytokiner, der generelt forbindes med alvorlige bivirkninger. Vox sang. 2015, 108, 205-207. [CrossRef] [PubMed]

43. de Greeff, A.; Zadoks, R.; Ruuls, L.; Toussaint, M.; Nguyen, TK; Downing, A.; Rebel, J.; Stockhofe-Zurwieden, N.; Smith, H. Tidlig værtsrespons i mælkekirtlen efter eksperimentel Streptococcus uberis udfordring i kvier. J. Dairy Sci. 2013, 96, 3723-3736. [CrossRef] [PubMed]

44. Cheng, Z.; Chauhan, L.; Barry, AT; Abudureyimu, A.; Oguejiofor, CF; Chen, X.; Wathes, DC Akut bovin viral diarrévirusinfektion hæmmer ekspression af interferon tau-stimulerede gener i bovint endometrium. Biol. Reprod. 2017, 96, 1142-1153. [CrossRef]

45. Schoggins, JW Interferon-stimulerede gener: Hvad gør de alle sammen? Annu. Rev. Virol. 2019, 6, 567-584. [CrossRef] [PubMed]

46. ​​Ohto, U. Aktiverings- og reguleringsmekanismer af NOD-lignende receptorer baseret på strukturel biologi. Foran. Immunol. 2022, 13, 953530. [CrossRef]

47. Cheng, Z.; Palma-Vera, S.; Buggiotti, L.; Salavati, M.; Becker, F.; Werling, D.; Wathes, DC; Gplus, EC Transkriptomisk analyse af cirkulerende leukocytter opnået under genopretning fra klinisk mastitis forårsaget af Escherichia coli i Holstein malkekøer. Dyr 2022, 12, 2146. [CrossRef]

48. Loria, V.; Dato, I.; Graziani, F.; Biasucci, LM Myeloperoxidase: En ny biomarkør for inflammation i iskæmisk hjertesygdom og akutte koronare syndromer. Medit. Inflamm. 2008, 2008, 135625. [CrossRef]

49. Olivera, A.; Beaven, MA; Metcalfe, DD Mastceller signalerer deres betydning for sundhed og sygdom. J. Allergy Clin. Immunol. 2018, 142, 381-393. [CrossRef]

50. Dickinson, SE; Griffin, BA; Elmore, MF; Kriese-Anderson, L.; Elmore, JB; Dyce, PW; Rodning, SP; Biase, FH-transkriptomprofiler i perifere hvide blodlegemer på tidspunktet for kunstig insemination skelner mellem oksekødskvier med forskelligt fertilitetspotentiale. BMC Genom. 2018, 19, 129. [CrossRef]

51. Van Meulder, F.; Van Coppernolle, S.; Borloo, J.; Rinaldi, M.; Li, RW; Chiers, K.; Van den Broeck, W.; Vercruysse, J.; Claerebout, E.; Geldhof, P. Granuleksocytose af granulysin og granzym B som en potentiel nøglemekanisme i vaccine-induceret immunitet hos kvæg mod nematoden Ostertagia ostertagi. Inficere. Immun. 2013, 81, 1798-1809. [CrossRef] [PubMed]

52. Taylor, JL; Brown, BL Strukturelt grundlag for dysregulering af aminolevulinsyresyntase ved menneskelig sygdom. J. Biol. Chem. 2022, 298, 101643. [CrossRef] [PubMed]

53. Trapani, JA; Sutton, VR Granzyme B: Pro-apoptotiske, antivirale og antitumorfunktioner. Curr. Opin. Immunol. 2003, 15, 533-543. [CrossRef] [PubMed]

54. Campanile, G.; Baruselli, PS; Limone, A.; D'Occhio, MJ Lokal virkning af cytokiner og immunceller i kommunikation mellem begrebet og livmoderen i den kritiske periode med tidlig embryoudvikling, fastgørelse og implantation - Implikationer for embryooverlevelse hos kvæg: En gennemgang. Theriogenology 2021, 167, 1-12. [CrossRef] [PubMed]

55. Bougarne, N.; Weyers, B.; Desmet, SJ; Deckers, J.; Ray, DW; Staels, B.; De Bosscher, K. Molecular Actions of PPARalpha i lipidmetabolisme og inflammation. Endocr. Rev. 2018, 39, 760-802. [CrossRef]

56. Sobolev, VV; Tchepourina, E.; Korsunskaya, IM; Geppe, NA; Chebysheva, SN; Soboleva, AG; Mezentsev, A. Transskriptionsfaktor PPAR-gammas rolle i patogenesen af ​​psoriasis, hudceller og immunceller. Int. J. Mol. Sci. 2022, 23, 9708. [CrossRef]

57. Sang, S.; Attia, RR; Connaughton, S.; Niesen, MI; Ness, GC; Elam, MB; Hori, RT; Cook, GA; Park, EA Peroxisomproliferator-aktiveret receptor alfa (PPARalpha) og PPAR gamma coactivator (PGC-1alpha) inducerer carnitin palmitoyltransferase IA (CPT-1A) via uafhængige genelementer. Mol. Celle. Endokrinol. 2010, 325, 54-63. [CrossRef]

58. Ziouzenkova, O.; Plutzky, J. Retinoidmetabolisme og nukleare receptorresponser: Ny indsigt i koordineret regulering af PPAR-RXR-komplekset. FEBS Lett. 2008, 582, 32-38. [CrossRef]

59. Espenshade, PJ; Hughes, AL Regulering af sterolsyntese i eukaryoter. Annu. Rev. Genet. 2007, 41, 401-427. [CrossRef]

60. Van Meer, G.; Voelker, DR; Feigenson, GW Membranlipider: Hvor de er, og hvordan de opfører sig. Nat. Rev. Mol. Celle. Biol. 2008, 9, 112-124. [CrossRef]

61. Aguilar-Ballester, M.; Herrero-Cervera, A.; Vinue, A.; Martinez-Hervas, S.; Gonzalez-Navarro, H. Indvirkning af kolesterolmetabolisme i immuncellefunktion og åreforkalkning. Næringsstoffer 2020, 12, 2021. [CrossRef] [PubMed]

62. Mamedova, LK; Yuan, K.; Laudick, AN; Fleming, SD; Mashek, DG; Bradford, BJ Toll-lignende receptor 4-signalering er påkrævet til induktion af gluconeogen genekspression af palmitat i humane hepatiske carcinomceller. J. Nutr. Biochem. 2013, 24, 1499-1507. [CrossRef] [PubMed]

63. Soto-Heredero, G.; Gomez de Las Heras, MM; Gabande-Rodriguez, E.; Oller, J.; Mittelbrunn, M. Glycolysis-En nøglespiller i den inflammatoriske reaktion. FEBS J. 2020, 287, 3350-3369. [CrossRef] [PubMed]

64. Kominsky, DJ; Campbell, EL; Colgan, SP Metabolske skift i immunitet og inflammation. J. Immunol. 2010, 184, 4062-4068. [CrossRef]

65. Afacan, NJ; Yeung, AT; Pena, OM; Hancock, RE Terapeutisk potentiale af værtsforsvarspeptider i antibiotika-resistente infektioner. Curr. Pharm. Des. 2012, 18, 807-819. [CrossRef]

66. Auvynet, C.; Rosenstein, Y. Multifunktionelle værtsforsvarspeptider: Antimikrobielle peptider, de små, men store spillere inden for medfødt og adaptiv immunitet. FEBS J. 2009, 276, 6497-6508. [CrossRef]

67. Hilchie, AL; Wuerth, K.; Hancock, RE Immunmodulering ved hjælp af mangefacetterede kationiske værtsforsvarspeptider (antimikrobielle). Nat. Chem. Biol. 2013, 9, 761-768. [CrossRef]

68. Cheng, Z.; Buggiotti, L.; Salavati, M.; Marchitelli, C.; Palma-Vera, S.; Wylie, A.; Takeda, H.; Tang, L.; Crowe, MA; Wathes, DC; et al. Globale transkriptomiske profiler af cirkulerende leukocytter i tidlig laktationskøer med klinisk eller subklinisk mastitis. Mol. Biol. Rep. 2021, 48, 4611-4623. [CrossRef]

69. Foley, C.; Chapwanya, A.; Callanan, JJ; Whiston, R.; Miranda-CasoLuengo, R.; Lu, J.; Meijer, WG; Lynn, DJ; O'Farrelly, C.; Meade, KG Integreret analyse af de lokale og systemiske ændringer forud for udviklingen af ​​postpartum cytologisk endometritis. BMC Genom. 2015, 16, 811. [CrossRef]

70. Machado, VS; Silva, TH Adaptiv immunitet i postpartum uterus: Potentiel brug af vacciner til at kontrollere metritis. Theriogenology 2020, 150, 201-209. [CrossRef]

71. Ley, K.; Hoffman, HM; Kubes, P.; Cassatella, MA; Zychlinsky, A.; Hedrick, CC; Catz, SD Neutrofiler: Ny indsigt og åbne spørgsmål. Sci. Immunol. 2018, 3, eaat4579. [CrossRef] [PubMed]

72. Wahl, SM; Feldman, GM; McCarthy, JB Regulering af leukocytadhæsion og signalering ved inflammation og sygdom. J. Leukoc. Biol. 1996, 59, 789-796. [CrossRef] [PubMed]

73. Schubert, K.; Polte, T.; Bonisch, U.; Schader, S.; Holtappels, R.; Hildebrandt, G.; Lehmann, J.; Simon, JC; Anderegg, U.; Saalbach, A. Thy-1 (CD90) regulerer ekstravasationen af ​​leukocytter under inflammation. Eur. J. Immunol. 2011, 41, 645-656. [CrossRef] [PubMed]

74. Dreymueller, D.; Pruessmeyer, J.; Schumacher, J.; Fellendorf, S.; Hess, FM; Seifert, A.; Babendreyer, A.; Bartsch, JW; Ludwig, A. Metalloproteinasen ADAM8 fremmer leukocytrekruttering in vitro og ved akut lungebetændelse. Er. J. Physiol. Lungecelle. Mol. Physiol. 2017, 313, L602-L614. [CrossRef]

75. Kostelnik, KB; Barker, A.; Schultz, C.; Mitchell, TP; Rajeeve, V.; Hvid, IJ; Aurrand-Lions, M.; Nourshargh, S.; Cutillas, P.; Nightingale, TD Dynamisk trafficking og omsætning af JAM-C er afgørende for migration af endotelceller. PLoS Biol. 2019, 17, e3000554. [CrossRef] [PubMed]

76. Stillie, R.; Farooq, SM; Gordon, JR; Stadnyk, AW Den funktionelle betydning bag at udtrykke to IL-8-receptortyper på PMN. J. Leukoc. Biol. 2009, 86, 529-543. [CrossRef]

77. Bouton, AH; Riggins, RB; Bruce-Staskal, PJ Funktioner af adapterproteinet Cas: Signalkonvergens og bestemmelse af cellulære responser. Oncogene 2001, 20, 6448-6458. [CrossRef]

78. Chen, X.; Cheng, Z.; Zhang, S.; Werling, D.; Wathes, DC Ved at kombinere genom-dækkende associationsstudier og differentielle genekspressionsdata analyser identificeres kandidatgener, der påvirker mastitis forårsaget af to forskellige patogener i malkekoen. Åbn J. Anim. Sci. 2015, 5, 358-393. [CrossRef]

79. Chang, GW; Hsiao, CC; Peng, YM; Vieira Braga, FA; Kragten, NA; Remmerswaal, EB; van de Garde, MD; Straussberg, R.; Konig, GM; Kostenis, E.; et al. Den adhæsions-G-proteinkoblede receptor GPR56/ADGRG1 er en hæmmende receptor i humane NK-celler. Celle. Rep. 2016, 15, 1757-1770. [CrossRef]

80. Bi, J.; Tian, ​​Z. NK-celledysfunktion og checkpoint-immunterapi. Foran. Immunol. 2019, 10, 1999. [CrossRef]

81. Minuti, A.; Gallo, A.; Lopreiato, V.; Bruschi, S.; Piccioli-Cappelli, F.; Uboldi, O.; Trevisi, E. Effekt af kuldstørrelse på præpartums metaboliske og aminosyreprofil hos kanin. Dyr 2020, 14, 2109-2115. [CrossRef] [PubMed]

82. Crookenden, MA; Moyes, KM; Kuhn-Sherlock, B.; Lehnert, K.; Walker, CG; Loor, JJ; Mitchell, MD; Murray, A.; Dukkipati, VSR; Vailati-Riboni, M.; et al. Transkriptomisk analyse af cirkulerende neutrofiler i metabolisk stressede peripartale græssende malkekøer. J. Dairy Sci. 2019, 102, 7408-7420. [CrossRef] [PubMed]

83. Sharma, JN; Al-Omran, A.; Parvathy, SS Nitrogenoxids rolle i inflammatoriske sygdomme. Inflammofarmakologi 2007, 15, 252-259. [CrossRef] [PubMed]

84. Martino, MR; Gutierrez-Aguilar, M.; Yew, NKH; Lutkewitte, AJ; Singer, JM; McCommis, KS; Ferguson, D.; Liss, KHH; Yoshino, J.; Renkemeyer, MK; et al. At dæmpe alanintransaminase 2 i diabetisk lever dæmper hyperglykæmi ved at reducere glukoneogenese fra aminosyrer. Cell Rep. 2022, 39, 110733. [CrossRef] [PubMed]

85. Høj, AR; Yvan-Charvet, L. Kolesterol, inflammation og medfødt immunitet. Nat. Rev. Immunol. 2015, 15, 104-116. [CrossRef]

86. Wathes, D.; Cheng, Z.; Mareiy, W.; Fouladi-Nasht, A. Flerumættede fedtsyrer og fertilitet hos hunpattedyr: En opdatering. CABI rev. 2013, 8, 1-14. [CrossRef]

87. Alipour, A.; van Oostrom, AJ; Izraeljan, A.; Verseyden, C.; Collins, JM; Frayn, KN; Plokker, TW; Elte, JW; Castro Cabezas, M. Leukocytaktivering af triglyceridrige lipoproteiner. Arterioskler. Thromb. Vasc. Biol. 2008, 28, 792-797. [CrossRef]

88. Castoldi, A.; Monteiro, LB; van Teijlingen Bakker, N.; Sanin, DE; Rana, N.; Corrado, M.; Cameron, AM; Hassler, F.; Matsushita, M.; Caputa, G.; et al. Triacylglycerolsyntese forbedrer makrofagernes inflammatoriske funktion. Nat. Commun. 2020, 11, 4107. [CrossRef]

89. Bell, AW Regulering af organisk næringsstofstofskifte under overgang fra sen graviditet til tidlig laktation. J. Anim. Sci. 1995, 73, 2804-2819. [CrossRef]

90. Moore, DAPSU; Varga, G. BUN og MUN: Urea-nitrogentest i malkekvæg. Kompendium 1996, 18, 712-720.

91. Wathes, DC; Bourne, N.; Cheng, Z.; Mann, GE; Taylor, VJ; Coffey, MP Multiple korrelationsanalyser af metaboliske og endokrine profiler med fertilitet hos primiparøse og multiparøse køer. J. Dairy Sci. 2007, 90, 1310-1325. [CrossRef] [PubMed]

92. Abe, R.; Donnelly, SC; Peng, T.; Bucala, R.; Metz, CN Perifere blodfibrocytter: Differentieringsvej og migration til sårsteder. J. Immunol. 2001, 166, 7556-7562. [CrossRef] [PubMed]

93. Schreier, S.; Triampo, W. Den blodcirkulerende sjældne cellepopulation. Hvad er det, og hvad er det godt for? Cells 2020, 9, 790. [CrossRef] [PubMed]

94. Lynn, AK; Yannas, IV; Bonfield, W. Antigenicitet og immunogenicitet af kollagen. J. Biomed. Mater. Res. 2004, 71, 343-354. [CrossRef]

95. Roche, JR; Burke, CR; Crookenden, MA; Heiser, A.; Loor, JL; Meier, S.; Mitchell, MD; Phyn, CVC; Turner, SA Fertilitet og overgangen malkeko. Reprod. Fertil. Dev. 2017, 30, 85-100. [CrossRef]

96. Galvao, KN; Flaminio, MJ; Brittin, SB; Sper, R.; Fraga, M.; Caixeta, L.; Ricci, A.; Guard, CL; Butler, WR; Gilbert, RO Sammenhæng mellem livmodersygdom og indikatorer for neutrofil og systemisk energistatus hos lakterende Holstein-køer. J. Dairy Sci. 2010, 93, 2926-2937. [CrossRef]

97. Dahl, MO; Maunsell, FP; De Vries, A.; Galvao, KN; Risco, CA; Hernandez, JA Bevis for, at mastitis kan forårsage graviditetstab hos malkekøer: En systematisk gennemgang af observationsstudier. J. Dairy Sci. 2017, 100, 8322-8329. [CrossRef]

98. Hansen, PJ; Soto, P.; Natzke, RP Mastitis og fertilitet i kvæg-mulig involvering af inflammation eller immunaktivering i embryonal dødelighed. Er. J. Reprod. Immunol. 2004, 51, 294-301. [CrossRef]

99. Malinowski, E.; Gajewski, Z. Mastitis og fertilitetsforstyrrelser hos køer. Pol. J. Vet. Sci. 2010, 13, 555-560.

100. Edmonson, AJ; Lean, IJ; Væver, LD; Farver, T.; Webster, GA Et skema over kropstilstand for Holstein-malkekøer. J. Dairy Sci. 1989, 72, 11. [CrossRef]

101. Larsen, T.; Rontved, CM; Ingvartsen, KL; Vels, L.; Bjerring, M. Enzymaktivitet og akutfaseproteiner i mælk brugt som indikatorer for akut klinisk E. coli LPS-induceret mastitis. Dyr 2010, 4, 1672–1679. [CrossRef] [PubMed]

102. Krogh, MA; Hostens, M.; Salavati, M.; Grelet, C.; Sørensen, MT; Wathes, DC; Ferris, CP; Marchitelli, C.; Signorelli, F.; Napolitano, F.; et al. Variation mellem og inden for besætningen i blod- og mælkebiomarkører hos Holstein-køer i tidlig laktation. Dyr 2020, 14, 1067-1075. [CrossRef] [PubMed]

103. Buggiotti, L.; Cheng, Z.; Wathes, DC; Gplus, EC Mining af de ikke-kortlagte læsninger i bovine RNA-Seq-data afslører forekomsten af ​​bovint herpesvirus-6 i europæiske malkekøer og de associerede ændringer i deres fænotype og leukocyttranskriptom. Virus 2020, 12, 1451. [CrossRef] [PubMed]

104. Beltman, ME; Forde, N.; Furney, P.; Carter, F.; Roche, JF; Lonergan, P.; Crowe, MA Karakterisering af endometrial genekspression og metaboliske parametre i oksekødskvier, der giver levedygtige eller ikke-levedygtige embryoner på dag 7 efter insemination. Reprod. Fertil. Dev. 2010, 22, 987-999. [CrossRef] [PubMed]