Foreløbig udforskning af den fremmende effekt og mekanisme af polysaccharider fra Cistanche Deserticola på lymfocytproliferation

Metoder

MTT-assay blev brugt til at påvise proliferationen af ​​miltlymfocytter i mus. Cyclophosphamid (Cy) blev brugt til at replikere dyremodeller af immunkompromitterede dyr, og milt- og thymusindekserne for normale og immunkompromitterede dyr blev målt. Aktiviteten af ​​interleukin-2 (IL-2) blev målt ved thymocytproliferationsassayet. Resultater: Cistanche deserticola polysaccharid fremmede signifikant proliferationen af ​​mitogen (ConA og LPS) aktiverede lymfocytter og ikke-aktiverede normale celler og fremmede sekretionen af ​​IL-2 i lymfocytter. Intraperitoneal administration viste, at Cistanche deserticola polysaccharid signifikant øgede miltindekset for normale og immunkompromitterede mus og havde også en signifikant antagonistisk effekt på reduktionen af ​​thymusindeks forårsaget af Cy. Konklusion: Cistanche deserticola polysaccharid kan signifikant fremme proliferationen af ​​miltlymfocytter i mus, hvilket kan være relateret til dets fremme af IL-2 sekretion.

Ørken levende cistanche

[Nøgleord]Cistanche deserticola polysaccharid; Milt indeks; Thymus indeks; Lymfocytproliferation; Interleukin-2

Plantepolysaccharider har tiltrukket sig udbredt opmærksomhed på grund af deres udbredte immunmodulerende virkninger og relativt lave toksicitet [1]. Cistanche deserticola ma, kendt som "Desert Ginseng", er den skællende, tørre, kødfulde stilk af Cistanche deserticola, en plante af Orobaceae, som har omfattende farmakologiske virkninger. Dens vandafkog kan øge den fagocytiske procentdel og det fagocytiske indeks af makrofager betydeligt. Yderligere undersøgelser har vist, at dets materielle grundlag er det totale polysaccharid af Cistanche deserticola [3]. Zeng Qunli et al. [4] har fundet ud af, at en enkelt komponent af Cistanche deserticola polysaccharid har en signifikant proliferativ effekt på musetymiske lymfocytter in vitro. Virkningen af ​​Cistanche deserticola polysaccharid på lymfocytproliferation blev observeret in vivo og in vitro.

Molekylær formel for Cistanche deserticola

1 Materiale og metoder

1.1 Lægemidler og reagenser

Polysaccharidet fra Cistanche deserticola leveres af Plante- og Kemikalieafdelingen ved Institut for Medicin og Plantning, Medical College. Det er udvundet af Cistanche-ekstraktpulveret, og polysaccharidindholdet er 87%.

Cistanche ekstrakt pulver

Før brug af in vivo eksperimenter, opløses og fortyndes med fysiologisk saltvand til den nødvendige koncentration, og koges til sterilisering. Før brugen af ​​in vitro-eksperimenter blev RPMI-1640-kulturmediet opløst og fortyndet, og højtrykssterilisering blev udført. Lipopolysaccharid (LPS), concanavalin (ConA), dexamethason (DEX) og MTT er alle produkter fra Sigma Corporation. Cyclophosphamid, et kinesisk-amerikansk joint venture af Shanxi Taisheng Pharmaceutical Co., Ltd., føtalt bovint serum, RPMI1640 kulturmedium og trypsin er alle Gibco-produkter. Andre reagenser er indenlandske analytiske reagenser.

1.2 Dyr

BALB c unge mus (SPF-niveau) leveres af Viton Lihua Experimental Animal Technology Co., Ltd. [SCXK (Beijing) 2002-2003]. Dyr af SPF-kvalitet opdrættes i et rum og fodres og drikkes frit.

1.3 Apparatur

Multikan Ascent enzymmarkør, et produkt fra Thermo Electron Company, USA. Leici PHS-3B Precision pH Meter, Shanghai Precision Scientific Instrument Co., Ltd., NAPCOo 5410 kuldioxidinkubator, NAPCO, USA. BCN-1360 Ultra Clean Workbench, Beijing Donglianhar Instrument Manufacturing Co., Ltd. XDS-1B Inverted Microscope, Chongqing Optoelectronic Instrument Co., Ltd.

1.4 Metode

1.4.1 Effekt på lymfocytproliferation [5]:

Rutinepræparation af miltlymfocytter fra BALB/c-mus ved hjælp af RPMI-1640 til at justere cellekoncentrationen til 1 × 107 ml, inokuleret på en 96-brønds kulturplade med 100 cellesuspensioner tilsat til hver brønd μL-50. Det blev dyrket sammen med forskellige koncentrationer af Cistanche deserticola polysaccharid (den endelige koncentration af Cistanche deserticola polysaccharid til spredning af ikke-aktiverede lymfocytter var 6,25, 12,5, 25, 50 og 100 mg/L i rækkefølge; den endelige koncentration af Cistanche deserticola polysaccharid til proliferation af ikke-aktiverede lymfocytter var 6,25, 12,5, 25, 50 og 100 mg/L i rækkefølge; lymfocytter var 3,9, 7,8, 15,6, 31,2 og 62,5 mg/L i rækkefølge, og den endelige koncentration af Cistanche deserticola-polysaccharid til proliferation af LPS-aktiverede B-lymfocytter var 1,56, 3,13, 6,25, 125, og LPS i orden; RPMI-1640 medium blev brugt som kontrol. Det samlede volumen af ​​hvert hul er 200 μL. Når der tilføjes mitogen ConA og LPS (kontrollen er RPMI-1640, der indeholder tilsvarende koncentrationer af ConA eller LPS), er slutkoncentrationerne af begge henholdsvis 2,5 mg/L og 10 mg/L. Der blev lavet tre parallelle huller til forskellige behandlinger. Placer kulturpladen i en 37 graders, 5% CO2 mættet fugtighedsinkubator i 68 timer, tilsæt MTT, og fortsæt med at dyrke i 4 timer. Mål A540 nm-værdien med en enzymmarkør ved hjælp af MTT-metoden for at påvise proliferation. Når du sammenligner hver gruppe, konverter A540nm-værdien til lymfocytproliferationshastighed i henhold til følgende formel:lymfocytproliferationshastighed=AA-prøve A kontrol × 100 %.

Virkninger af Cistanche - Forbedre immunitet

1.4.2 Effekt på vægten af ​​immunorganer hos normale mus [6,7]:

Unge BALB c mus (han, 4 uger gamle, med en kropsvægt på 10-15 g) blev tilfældigt opdelt i en blind kontrolgruppe (saltopløsning) og forskellige dosisgrupper (125 mg (kg · lgv) og 250 mg (kg · lgv)), med 11 rotter i hver gruppe. Lægemidlet blev administreret intraperitonealt én gang dagligt i 7 på hinanden følgende dage. Musene blev dræbt efter cervikal dislokation. Milten og thymus blev taget, fedt- og fascievæv blev fjernet, og overfladevæsken blev tørret med filterpapir. Efter vejning, miltindekset=100 × miltvægt (mg) kropsvægt (mg); Hthymusindekset=100 × Thymusvægt (mg) Kropsvægt (mg). Beregn miltindekset og thymusindekset for henholdsvis hver 100 mg kropsvægt.

1.4.3 Effekt på immunorganvægt hos immunkompromitterede mus [7,8]:

Unge BALB c-rotter (han, 6 uger gamle, kropsvægt 15-20 g) blev tilfældigt inddelt i 12 grupper efter kropsvægt. Bortset fra den normale kontrolgruppe (intraperitoneal injektion af et ækvivalent volumen af fysiologisk saltvand), blev de andre grupper injiceret med Cy 50 mg (kg · lgv) dagligt intraperitonealt, og testlægemiddelopløsningen blev administreret intraperitonealt [125 og 250 mg (kg · lgv)], den normale kontrolgruppe og modelgruppen fik samme volumen i 13 dage, en gang en fysiologisk fysiologisk dosis. dag. Ændringerne i dyrevægt blev observeret under forsøget. 24 timer efter den sidste administration, milt- og thymusindekset blev målt og beregnet ved anvendelse af samme metode som i 1.4.2.

1.4.4 Indvirkning på IL-2 aktivitet:

① Induktion af IL-2 [9]: Tilsæt 50 til hver brønd i en 96-brønds celleplade μ L Forskellige koncentrationer af Cistanche deserticola polysaccharid (slutkoncentrationer i rækkefølge: 3,91, 7,82, 15,63, 31,25, 65,5 mg/L, 12, 12, 25, 65,5 mg/L, 12,5 mg/l brønd L kulturmedium) og 50 μL ConA (slutkoncentration 5 mg/L), tilsæt 1 mere pr. brønd × 106 miltceller. Inkuber i en 37 graders, 5 % CO2 mættet fugtighedsinkubator i 24 timer, centrifuger i 20 minutter ved 2500 r min., og tag cellesupernatanten og opbevar den ved - 20 grader til standby. ② IL-2 aktivitetsdetektion [9,10]: Den grundlæggende metode er baseret på litteratur [9], og passende justeringer foretages i henhold til litteraturen [10]. Konventionel fremstilling af BALB c muse-thymocytsuspension, cellekulturplade med 96 brønde, 1 podning pr. brønd × 106 thymocytter, mens der tilsættes 50 celler pr. brønd μL ConA (slutkoncentration 2,5 mg/L), og derefter tilsættes den forberedte IL-2-supernatant 50 μL til cubat-kulturopløsningen til μl-kulturopløsningen til 50 μL sammen i kuben. 54 timer, tilsæt MTT, fortsæt med at inkubere i 4 timer, centrifuger i 10 til 15 minutter ved 1000 r min., kassér supernatanten og tilsæt DMSO 100 pr. brønd μL, ryst med en mikrooscillator i 8 minutter, og mål A540 nm værdien med en enzymmarkør.

1.5 Statistisk analyse

Dataene blev udtrykt som middelværdi og standardafvigelse (x ± s). Microsoft Excel-software blev brugt til at samle dataene, og der blev udført en t-test. P<0.05 and P<0.01 were significant differences, both of which were statistically significant.

2. Resultater

2.1 Effekt på lymfocytproliferation

Som det kan ses af tabel 1, kan tilsætning af Cistanche deserticola polysaccharid til dyrkningsmediet af musemiltlymfocytter dyrket in vitro i en koncentration over 25 mg/L signifikant stimulere lymfocytproliferation, hvilket indikerer, at Cistanche deserticola polysaccharid i sig selv har en mitotisk effekt. På samme tid,det kan ses af tabel 2 og tabel 3, at CDPS har en signifikant fremmende effekt på proliferationen af ​​ConA-inducerede T-lymfocytter eller LPS-inducerede B-lymfocytter.

Tab.1 Indflydelsen af ​​Cistanche deserticola polysaccharid på proliferationen af ​​ikke-aktiverede lymfocytter (x ±s, n =3)

Ikke: sammenlignet med kontrolgruppen, ＊P<0.05.

Tab.2 Indflydelsen af ​​Cistanche deserticola polysaccharid på proliferationen af ​​T-lymfocytter induceret af ConA (x ±s, n =3)

 

Bemærk: sammenlignet med ConA-gruppen, ＊P<0.05, ＊＊P <0.01.

Tab.3 Indflydelsen af ​​Cistanche deserticola polysaccharid på proliferationen af ​​B-lymfocytter induceret af LPS (x ±s, n =3)

Bemærk: sammenlignet med LPS-gruppen, ＊P<0.05, ＊＊P <0.01.

2.2 Effekt på vægten af ​​immunorganer hos normale mus

Som det fremgår af tabel 4,Cistanche deserticola polysaccharid kan signifikant øge miltindekset hos normale BALB/cc unge rotter, men påvirker ikke thymuskirtlen.

2.3 Effekt på immunorganvægt i immunkompromitterede mus

Fra tabel 5,det kan ses, at milt- og thymusorganindekserne for mus i den Cy-immunsuppressive gruppe er lavere end dem i kontrolgruppen, og Cistanche deserticola-polysaccharid (125, 250 mg/kg) kan forbedre milt- og thymusindekset betydeligt.

2.4 Effekt på IL-2 aktivitet

Som det fremgår af tabel 6,når dosen af ​​Cistanche deserticola polysaccharid når 7,82 mg/L, kan det øge frigivelsen af ​​IL-2 betydeligt fra musemiltceller.

Tab.4 Virkningen af ​​Cistanche deserticola polysaccharid på vægten af ​​immunorganer i normale mus (x ±s, n =11)

Bemærk: sammenlignet med kontrolgruppen, ＊＊P<0.01.

Tab.5 Virkningen af ​​Cistanche deserticola polysaccharid på vægten af ​​immunorganer i immundeprimerede mus (x ±s, n =12)

Bemærk: sammenlignet med kontrolgruppen, ## P < 0,01; sammenlignet med modelgruppen, ＊＊P<0.01.

Tab.6 Indflydelsen af ​​Cistanche deserticola polysaccharid på IL-2 produktion af miltlymfocytter i mus( x ±s, n =3)

Bemærk: sammenlignet med kontrolgruppen, ＊＊P<0.01.

3. Diskussion

ConA- og LPS-induceret miltlymfocytproliferation i mus er et in vitro-eksperiment til at påvise funktionen af ​​T- og B-lymfocytter og er en vigtig indikator for specifik immunevne. Undersøgelser har vist, at når den endelige koncentration af Cistanche deserticola polysaccharid er over 25 mg/L, kan det fremme lymfocytproliferation signifikant, hvilket indikerer, at det har en vis mitotisk effekt. I nærvær af mitogen (ConA eller LPS) kan en mindre dosis af Cistanche deserticola polysaccharid forbedres, hvis kroppen udviser betydelig proliferativ aktivitet. Vi ved, at ConA og LPS hovedsageligt inducerer proliferationen af ​​henholdsvis T-lymfocytter eller B-lymfocytter. Det har undersøgelser vistcistanche pulver sundhedsmæssige fordele: Cistanche deserticola polysaccharid kan fremme både T-lymfocytproliferation og B-lymfocytproliferation, men dets proliferative effekt på B-lymfocytter er betydeligt stærkere end på T-lymfocytter.

Cistanche pulver sundhedsmæssige fordele-Improve immunitet

Klik her for at se produkter fra Cistanche Improve Immunity

【Spørg om mere】 E-mail: xue122522@foxmail.com / WhatsApp 0086 18599088692 / WeWeChat18599088692

Thymus og milt er de vigtigste immunorganer hos dyr. Immuncellerne i milten er hovedsageligt modne B-lymfocytter, mens thymus hovedsageligt er umodne T-lymfocytter. Thymus- og miltindekser kan afspejle udviklingen af ​​immunorganer og immuncellernes funktionelle status. Intraperitoneal injektion af Cistanche deserticola polysaccharid kan signifikant øge miltindekset for normale og immunsupprimerede mus og har en signifikant antagonistisk effekt på thymusatrofi induceret af Cy i mus.

Cistanche deserticola polysaccharid har ingen signifikant effekt på thymusindekset hos normale dyr, hvilket er i overensstemmelse med resultaterne af in vitro forsøg, hvor Cistanche deserticola polysaccharid fremmer proliferationen af ​​B-lymfocytter frem for T-lymfocytter.

Cistanche supplement nær mig-Forbedreimmunitet

IL-2 er et cytokin produceret af T-lymfocytter fra G1-fasen af ​​cellecyklussen til S-fasen. Det er en vigtig T-cellevækstfaktor, der fungerer som en autokrin vækstfaktor. Derudover kan IL-2 fremme B-celleproliferation og antistofsyntese [11,12]. Cistanche deserticola polysaccharid fremmer frigivelsen af ​​IL-2 fra lymfocytter, hvilket åbenlyst er relateret til Cistanche deserticola polysaccharid, der fremmer spredningen af ​​miltlymfocytter.

Medicinsk forskning viser, at Cistanche indeholder polysaccharider, Echinacosider og Acteoside, som kan aktivere lymfocytter og forbedre kroppen; de funktionelle komponenter i cistanche Phenylethanoid Glycosider har en betydelig effekt på cellegendannelse efter 60 Co gammastråleskader og kan også forbedre immunfunktionen mod strålingsskader. Indtagelse af Cistanche deserticola kosttilskud dagligt kan opnå effekten af ​​at forbedre immuniteten.