Mønstre af Arc MRNA-ekspression i rottehjernen efter dobbelt tilbagekaldelse af frygt- og belønningsbaseret socialt erhvervet information(2)

Bue i tilbagekaldelsen af ​​direkte og socialt erhvervede frygtforeninger.

Vores evne til at fortolke vores resultater vedrørende vores rotter, der gennemgår genkaldelse af frygt erhvervet via direkte læring, er væsentligt hjulpet af, hvor velkarakteriseret systemet, der ligger til grund for frygtindlæring og -genkaldelse, er. En række af de områder, vi undersøgte, er involveret i frygt- eller ekstinktionslæring (hvoraf sidstnævnte vi ville antage var initieret i Demonstrators, da de havde gennemgået en ikke-forstærket CS-præsentation under FCbP), specifikt ACC, PLC og ILC30–32 ,37. Selvom en lidt mindre pulje af forskning er tilgængelig vedrørende de neurale mekanismer af social frygt, antyder de foreslåede modeller for social frygtindlæring, at lignende systemer ligger til grund for social og direkte frygtindlæring28. Vores resultater indikerer ingen overordnet rolle for ACC, PLC eller ILC i hverken tilbagekaldelse af en socialt erhvervet frygtforening eller en direkte erhvervet frygtforening (se dog også "Diskussion" af kønsforskelle i PLC-aktivitet nedenfor). Men som beskrevet i det foregående afsnit indikerer dette sandsynligvis bare, at Arc ikke tjener som en pålidelig indikator for aktivitet i dette tilfælde. Undersøgelse af disse områder post-frygt erhvervelse ville sandsynligvis fortælle en anden historie. Hård eksplicit forskning i Arc-aktivitet efter frygtindkaldelse er begrænset, der er noget tidligere forskning at trække på. Chia og Otto35 fandt, at konditionerende rotter i spor frygt havde signifikant højere Arc-proteinekspression i både den dorsale og ventrale hippocampus sammenlignet med ubetingede kontroller. Navnlig blev Arc kvantificeret ved Western Blot-analyse af den homogeniserede ventrale og dorsale hippocampus i dette eksperiment, så præcis lokalisering af hippocampus aktivitet var ikke tilgængelig. Disse fund tyder sandsynligvis på, at buetransskription, som i STFP, kan induceres i visse områder af hippocampus på 48-h tilbagekaldelsestidspunktet for en cued frygthukommelse. Vores nulresultater kan også potentielt skyldes mislykket tilbagekaldelse fra observatørers side, da vi i modsætning til tidligere undersøgelser i vores lab12-14,26 ikke så højere frysning til CS hos observatører sammenlignet med kontroller. Hvorvidt dette faktisk skyldes mislykket tilbagekaldelse hos observatører eller på grund af vores enkelt CS-tilbagekaldelsesprocedure og forhåndseksponering af kontroller til CS er ikke klart.

Hvad gør cistanche - Forbedring af hukommelsen

Potentiel rolle for den ventrale orbitofrontale cortex i tilbagekaldelse af socialt erhvervet information.

I en skelsættende undersøgelse har Lesburguères et al.24. var i stand til at demonstrere, at mens dHPC-aktivitet var nødvendig for erhvervelse og kortvarig tilbagekaldelse af en erhvervet STFP, blev STFP-hukommelsen til sidst overført til OFC til langtidslagring. Derudover har Lesburguères et al. var i stand til at demonstrere, at tagging af neuroner i den orbitofrontale cortex under STFP-optagelse er nødvendig for langtidsopbevaring af socialt overførte fødevarepræferencer, og at interferens med OFC-aktiviteten efter erhvervelse svækker hukommelsen 30 dage efter erhvervelse (selvom se også38). Disse resultater tyder på kommunikation mellem dHPC og OFC i de første dage eller uger efter STFP erhvervelse og igangværende omorganisering af OFC på dette tidspunkt for at imødekomme den langsigtede lagring af STFP hukommelsen. Mens manglen på overordnede forskelle i ventral eller lateral OFC Arc-ekspression mellem demonstranter, kontroller og observatører i denne undersøgelse ville udfordre denne fortolkning, opdagede vi en signifikant negativ sammenhæng mellem vores kombinerede mål for overordnet social læringspræstation og dual-Arc-udtrykkende celler i VOC. Desuden blev denne korrelation ikke observeret mellem en lignende metrik dannet for demonstranter baseret på valgtestpræstation og frysning til CS. Da afhængighed af socialt erhvervet information kan opfattes som et valg mellem potentielt upålidelig social information og farerne ved at lære gennem direkte erfaring, kan denne tilsyneladende hæmmende rolle for stemmen i udtrykket af socialt erhvervet information være forbundet med OFC's bredere rolle i værdi. -baseret beslutningstagning39–42.

Cistanche deserticola eksperiment

Kønsforskelle i buetransskription.

flere statistiske og metodiske årsager. For det første vores lejlighedsvis lave stikprøvestørrelse for hunner, med gruppestørrelse for køn/tilstandskombinationer, der spænder fra n=2 til n=9 efter fjernelse af rotter uden nok levedygtige sektioner (dog især en n)<5 was only present for female Controls in the vOFC and lOFC and female Demonstrators and Observers in the lOFC, see Table S5 for specific group sizes). Additionally, our lack of entirely undisturbed controls means that we have no way to determine whether these sex differences are the result of baseline or task-specific differences in Arc mRNA production. Finally, because the pre-in situ PFA wash was not introduced until all female sections had been processed, this difference in tissue processing might have affected the overall stain. That said, if this were the case, we might expect to see a broader and more consistent effect of sex across regions and types of Arc expression (nuclear, cytoplasmic, and dual). As it is, 18 regions/cellular areas of Arc expression combinations are examined, and only 10 display a significant overall effect of sex. Furthermore, this effect is not uniform in its direction, with males displaying greater overall Arc expression in 5 cases and females displaying greater expression in the other 5. Regardless, we feel that our findings here should serve only to inform possible future research into sex differences in Arc expression. As it is, the limitation of the current study would make drawing definitive conclusions regarding sex effects on Arc expression inappropriate. This should be kept in mind in reading the following discussion.

Selvom der kun har været lidt undersøgelse af kønsforskelle i Arc-ekspression, er der nogle resultater, der indikerer, at hunrotter udtrykker mere Arc i visse områder af den dorsale hippocampus efter gentagen eksponering for et relativt beriget miljø43, selvom en tendens i den modsatte retning også har været observeret hos rotter testet uden forudgående adfærdsmæssig intervention43. Vores resultater kan indikere, at kønsforskelle i Arc transkription er til stede efter visse generelle adfærdsmæssige opgaver eller oplevelser. I CG1-regionen af ​​ACC fandt vi, at mænd generelt havde flere celler aktive på begge tidspunkter, muligvis på grund af højere baseline Arctranscription i ACC af mænd eller øget transkription efter kontekstændringer/geneksponering (hjemmebur → STFP testrum → konditioneringskammer), da der er nogle beviser - skønt begrænset - for en rolle for ACC i langsigtet genkaldelse af kontekstuelle minder44. Hanrotter viste også højere nukleare og dobbelte bue-tal i ILC. Dette kan forklares med ILC's rolle i udryddelse og frygthæmning31,45,46 og observerede svækkelser i hæmning og udryddelse af indlært frygt hos kvinder47-49. Hvis dette er tilfældet, rejser det spørgsmålet om, hvorfor der ikke blev observeret nogen overordnede forskelle mellem vores kontrol-, observatør- og demonstratorrotter, hvis Arc-ekspression blev udløst af CS-fremkaldt infralimbisk aktivitet.

Hunnerne viste højere niveauer af Arc-ekspression for alle tællinger i vCA3. Forskellen i nukleare tællinger kunne potentielt have været resultatet af større aktivering efter eksponering for CS eller genudsættelse for konditioneringskammeret hos kvinder, mens de højere niveauer af cytoplasmatisk bueekspression i vCA3 efter fødevareopgaven kan indikere kønsforskelle i Arcs rolle i vCA3 enten anerkendelsen af ​​"kendt" mad (selv for observatører ville duften være velkendt på grund af deres tidligere interaktion med demonstranten) eller belønning/generelle fuldendte processer. Denne kvinde viste også signifikant højere dobbeltmærkning i vCA3 - selvom denne effekt var lille - kan også indikere generaliserede stigninger i vCA3 Arc-transskription hos kvinder. Hunrotter udviste også højere nuklear Arc-transkription i vOFC og højere dobbeltniveauer af Arc mRNA i lOFC, selvom disse resultater er sværere at fortolke på grund af det lave antal hunkontrolrotter, hvis hjernevæv var intakt nok til at tage OFC-tællinger (n=2 og 3 for henholdsvis den laterale og ventrale OFC). Data fra de tilgængelige kontrolrotter indikerer en mulig kønsmedieret stigning i OFC Arc mRNA-produktion, men det er lige så muligt, at denne effekt ikke ville vedvare med en højere n. Især har noget tidligere forskning indikeret strukturelle forskelle i OFC og funktionelle forskelle i OFC-medieret adfærd mellem kvindelige og mandlige gnavere50-52.

Cistanche ekstrakt pulver

Måske vores mest interessante kønsforskelle i Arc mRNA blev påvist i PLC'en. Her viste hanner generelt et højere antal celler, der udtrykte Arc i cytoplasmaet og i både cytoplasmaet og kernen (dobbelt udtryk) end kvinder. Vi fandt også ud af, at mens mandlige demonstranter og observatører ikke viste stigninger i buetransskription i forhold til kontroller på tidspunktet for frygt-genkaldelse, viste kvindelige demonstranter signifikant højere nuklear buetransskription end kontroller, mens kvindelige observatører faldt midt imellem de to. Denne kønseffekt kan være drevet af de førnævnte underskud observeret i indlært frygthæmning og udryddelse, som observeres hos kvinder 47-49, da tidligere forskning har antydet, at PLC er kritisk involveret i at stimulere frygtadfærd45,53,54. Ydermere har flere undersøgelser impliceret forskelle i PLC-signalering og struktur som potentielle drivende faktorer for disse kønsspecifikke svækkelser i frygthæmning og udryddelse55-58. Selvom vi ikke fandt nogen signifikant forskel i kvindelig og mandlig fryseadfærd til cue, kan opreguleringen af ​​Arc mRNA som reaktion på en ikke-forstærket frygt associeret CS hos specifikt kvindelige demonstranter være tegn på differentiel neural omstrukturering i PLC'en, der i sidste ende kan føre til kønsforskelle i frygtudtryk.

Konklusioner

Selvom resultaterne af denne undersøgelse ikke udvidede vores forståelse af hjernens mekanismer involveret i genfinding af socialt erhvervede minder så meget, som vi havde håbet, giver vores resultater nogle potentielle indsigter i kønsforskelle i Arc-udtryk såvel som rollen (eller mangel på samme) af Arc i langtidshukommelse. Vores resultater tyder på, at - i det mindste i den præfrontale cortex og vCA3 - induktion af hjerneaktivitet gennem genkaldelse af socialt erhvervet information ikke ser ud til at være tilstrækkelig til at forårsage stigninger i Arc-ekspression i forhold til dem, der er forårsaget af testproceduren alene. Men gyldigheden af ​​denne takeaway bliver bestemt sat i tvivl af de uendelige resultater af vores adfærdstests, da dårlig opbevaring af den socialt erhvervede information kan være skyld i denne mangel på effekt. Vi teoretiserer, at dette kan skyldes, at minimal neural omstrukturering udløses, når en tilbagekaldelse sker før systemkonsolidering. Yderligere forskning i Arc-proteinets rolle i tilbagekaldelsesprocesser for social læring er stadig berettiget, da vores adfærdsmæssige resultater ikke demonstrerer social læring hos Observer-rotter. Fremtidig forskning, der undersøger overlap i de neurale mekanismer, der styrer forskellige former for social læring, kan også drage fordel af inklusion af dyr, der gennemgår erhvervelsesprocedurer, og dyr, der gennemgår fjernindkaldelsesprocedurer, da disse tidspunkter kan være mere tilbøjelige til at inducere plasticitetsændringer og dermed ændringer i bueekspression .

Cistanche-tilskud nær mig - Forbedring af hukommelsen

Klik her for at se produkter fra Cistanche Improve Memory

【Spørg om mere】 E-mail:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

Metoder

Emner. Forsøgspersonerne var Sprague-Dawley-han- og hunrotter opdrættet internt i Animal Resource Center ved University of Texas i Austin. Syv ynglepar producerede forsøgspersonerne for kohorte 1 (n=27 hunner, n=36 hanner), og otte ynglepar producerede forsøgspersonerne for kohorte 2 (n=27 hanner, ingen hunner). Hun-opdrættere var Sprague-Dawley-rotter (mellem 215 og 260 g ved ankomst) opnået fra Charles-Rivers (Wilmington, MA, USA), mens han-avlere var Sprague-Dawley-rotter (mellem 230 og 300 g ved ankomst) opnået fra Harlan (nu Envigo) (Houston, TX, USA). Alle rotter blev opstaldet med en burkammerat af det modsatte køn, indtil hunnen viste tydelige tegn på graviditet, hvorefter hunnerne blev anbragt enkeltvis. Hvalpe blev vænnet fra til triader af søskende af samme køn på post-natal dag 21 (P21) for at hjælpe med at sikre social frygtindlæring26. Reserveunger blev vænnet fra til triader eller dyader med ubeslægtede rotter og brugt i andre eksperimenter ved University of Texas i Austin. Hununger fra vores anden kohortekuld blev brugt i andre eksperimenter. Hvalpe fik lov til at modnes med minimale forstyrrelser bortset fra rutinemæssige dyreholdsprocedurer (f.eks. burskift), indtil tilvænningsprocedurer (huntriader) eller dominansvurderingsprocedurer (mandlige triader) begyndte (dominansprocedurer og resultater beskrevet i Supplerende materialer). Kohorte 1-rotter begyndte procedurer mellem P106-P112 dages alderen, og kohorte 2-rotter startede mellem P99-P118 dages alderen. Alle forsøgspersoner blev holdt i en 12-h omvendt mørk-lys-cyklus med lys slukket kl. 15.00. Alle eksperimentelle procedurer blev afsluttet under forsøgspersonernes mørke cyklus under rødt lys. Alle dele af dette eksperiment blev udført i overensstemmelse med National Institutes of Health Guide for pleje og brug af forsøgsdyr og blev godkendt til brug af University of Texas i Austin Animal Care and Use Committee.

Apparater og stimuli. Frygt konditionering. Alle frygtkonditionering og frygtkonditionering-by-proxy-procedurer blev gennemført i standardkonditioneringskamre (30,48 cm×25,4 cm×30,48 cm) konstrueret af klare plexiglasvægge foran og bagpå, to stålvægge på siden og et plexiglasloft med et hul i midten. Gulvet i kammeret var en række af rustfrit stålstænger forbundet med en stødgenerator (Coulbourn Instruments, Allentown, PA). Alle kamre var indesluttet i akustiske isolationsbokse (Coulbourn Instruments) og oplyst med et internt rødt lys. Opførsel blev optaget af lukkede kredsløbskameraer (Panasonic™ WV-BP334) monteret over konditioneringskamrene med linsen indsat gennem hullet i plexiglasloftet. Kamrene blev tørret fuldstændigt af med 70 procent alkoholopløsning mellem hvert emne. Al stimuluslevering blev kontrolleret ved hjælp af Freeze Frame-softwaren (Coulbourn Instruments). CS var en 20 sten (5 kHz, 80 dB) og, i procedurer med flere CS-præsentationer, et variabelt inter-trial interval (ITI) på gennemsnitligt 180 s. Den ubetingede stimulus (US) var et 1 mA-chok, der var 500 ms i varighed og co-terminerede med den konditionerede stimulus.

Social transmission af madpræference. Alle STFP-procedurer fandt sted i et rum ved siden af ​​rummet, der indeholdt konditioneringskamrene. Nye diæter blev sammensat ved at blande 100 g pulveriseret 5LL2 Purina-gnavermad med enten 1 g McCormick malet kanel (diæt Cin) eller 2 g Hershey kakaopulver (diet Co). Den almindelige diæt, som blev givet til alle rotter under fødevarerestriktionsperioden og til kontrolrotter på den sidste dag af eksperimentelle procedurer, var uforfalsket pulveriseret 5LL2 Purina-gnaverfoder. Alle pulveriserede madretter – både under fødevarebegrænsning og eksperimentelle procedurer – blev præsenteret i hængende madbægre, der var konstrueret af 4 oz. glaskrukker og 12-gauge ståltråd. Madkopper blev skyllet og derefter tørret af med en 70 procent ethanolopløsning, før de blev vasket grundigt med sæbe og vand mellem hver brug. Alle fuldendte faser af STFP-eksperimentelle procedurer fandt sted i standardrottebure (26,7 cm x 48,3 cm x 20,3 cm), hvor hver rotte modtog et frisk bur. Interaktionsfasen (STFP-opkøbsfasen) fandt sted i en stor plastikbeholder (50,5 cm×39,4 cm×37,5 cm) med strøelse af træflisgulv, der blev udskiftet mellem hver gruppe. Plastbeholdere blev tørret grundigt af med Windex mellem hver session.

Oversigt over eksperimentelt design og sociale læringsprocedurer.

(Se fig. 2 for en grafisk oversigt).

Alle rotter var fødevarebegrænset i fem dage og vant til håndtering og rummet, hvor STFP-procedurer ville finde sted i fire dage umiddelbart før dag 1 af eksperimentelle procedurer. Mens tilvænningsprocedurer sluttede før dag 1 af de eksperimentelle procedurer, fortsatte fødevarerestriktion til slutningen af ​​eksperimentet. En rotte fra hver triade blev tildelt en af ​​tre betingelser: Demonstrator, Observatør eller Kontrol. Kohorte 2 hantriader var blevet vurderet for dominans og viste alle et klart hierarki og blev tildelt sådan, at den dominerende rotte var demonstranten og en underordnet var observatøren for at øge social transmission af frygt13. Individuelle triader blev yderligere tilfældigt underinddelt i grupper, hvor demonstranten og observatøren ville modtage en valgtest ved STFP-tilbagekaldelse (Choice), og grupper, hvor de kun ville modtage den påviste mad (Cin).

På dag 1 af den eksperimentelle procedure blev rotter tildelt demonstratortilstanden flyttet til frygtkonditioneringskamre og fik lov til at vænne sig i 10 minutter, før de blev udsat for 3 CS'er, der sluttede med et smertefuldt chok (se "Apparater og stimuli" for detaljer). Efter frygtkonditioneringsprocedurer blev dem-demonstranter flyttet tilbage til deres oprindelige hjemmebur. På dag 2 af eksperimentelle procedurer, 24 timer efter frygtkonditionering, blev demonstranterne returneret til konditioneringskamrene med deres burkammerat tildelt observatørtilstanden og sat igennem FCbP-proceduren (fig. 2). Umiddelbart efter FCbP-proceduren blev observatørrotter returneret til deres hjemmebur, mens demonstranterne blev flyttet til et tilstødende rum og fik 1 time til at indtage pulveriseret chow smagt til med kanel. Efter en time var gået, blev observatører flyttet til en interaktionsbeholder med deres demonstranter og fik lov til at interagere med dem i 30 minutter for at tillade erhvervelse af en socialt overført madpræference. Tidligere forskning fra vores laboratorium har valideret disse tidspunkter som værende tilstrækkelige til STFP-transmission33. Bagefter blev observatørrotter returneret til deres hjemmebur, mens demonstratorrotter blev flyttet til enkelthus for at forhindre yderligere STFP-transmission til observatøren eller kontrollen. På dag 3 af eksperimentelle procedurer blev kontrolrotter flyttet til konditioneringskamre alene, og efter 10 minutters tilvænning til kammeret blev der præsenteret tre 20 s CS'er uden medfølgende shock. Dette blev gjort på en separat dag for at minimere muligheden for at dvælende alarmferomoner - som vides at blive frigivet af rotter som reaktion på truende stimuli og påvirker artsspecifik indlæring59 - stadig er til stede i kammeret.

På eksperimentets sidste dag, dag 4, blev der indledt en tilbagekaldelse for både den socialt overførte madpræference og frygtkonditionerende/frygtkonditionerende by-proxy-hukommelser. Alle observatører og demonstranter fra triader tildelt Choice-betingelsen fik 10 min ad libitum adgang til både kanel- og kakao-begunstigede diæter, mens observatører og demonstranter fra triader tildelt Cin-tilstanden fik 10 min ad libitum adgang til kanel-diæten- kun. I alle triader fik kontrolrotter 10 min ad libitum adgang til almindeligt pulveriseret foder. Umiddelbart efter dette blev rotter returneret til deres hjemmebur og efterladt uforstyrret i en 10-min. periode, før de blev flyttet tilbage til laboratorierummet og anbragt i konditioneringskamrene. Alle rotter fik derefter en 3-min. tilvænningsperiode til kammeret, før de blev præsenteret for en enkelt 20 s CS. 5 minutter efter afslutningen af ​​CS blev alle rotter aflivet via injektion af en pentobarbital- og phenytoinopløsning (Euthasol; Virbac Animal Health) og perfunderet. Deres hjerner blev senere behandlet til Arc mRNA-ekspression. I betragtning af tidsforløbet for vores terminale procedure og den kendte migreringstidsramme for Arc mRNA28, ville øget cytoplasmatisk ekspression af Arc mRNA skyldes STFP-tilbagekaldelsesprocedurer, mens nuklear ekspression ville skyldes FC/FCbP-tilbagekaldelsesprocedurer, hvor celler viser dobbelt aktivering blevet aktiveret i begge tidsrammer (se fig. 1; se også "Vævsanalyse" for detaljer om vævsbehandling og -behandling).

Ørken levende cistanche

Procedurer.

Tilvænning og fødevarebegrænsning. Al tilvænning fandt sted lige før den første dag af eksperimentelle procedurer. Tilvænning bestod i, at hvert bur med rotter blev flyttet ind i det rum, hvor alle STFP eksperimentelle procedurer ville finde sted, og fik lov til at vænne sig til rummet i 15 min. I løbet af denne periode blev hver rotte samlet op og håndteret af eksperimentatoren, der ville køre adfærd i 2 minutter for at vænne dem til håndtering og denne person. Alle tilvænningsprocedurer fandt sted i et mørkt rum under rødt lys, og alle rotter fik 4 dages tilvænning. Fødevarebegrænsning begyndte dagen før tilvænning begyndte og fortsatte indtil slutningen af ​​eksperimentet. Ved starten af ​​fødevarebegrænsningen blev de madpiller, som alle forsøgspersoner havde spist, fjernet fra buret. Efterfølgende fik alle bure dagligt ad libitum adgang til en hængende krukke fuld af almindelig, pulveriseret Purina 5LL2 diæt i deres hjemmebur i 1 time. Rotter blev vejet dagligt fra begyndelsen af ​​foderrestriktion, indtil eksperimentet var overstået for at sikre, at der ikke var usædvanligt vægttab.

Adfærdsmæssig scoring.

Al adfærdsscoring for dette eksperiment blev fuldført ved hjælp af Behavioural Observation Research Interactive Software (BORIS)60.

Frygtkonditionering ved-proxy social kontakt scoring. Tidligere forskning fra vores laboratorium har indikeret, at der er en stærk sammenhæng mellem mængden af ​​frygt, der vises af observatører ved langtidshukommelsestesten, og den tid, der bruges på at interagere med deres demonstrator under CS hos mænd13 og efter CS hos kvinder14,26. Som sådan blev videoer af den sociale tilegnelsesfase af frygtkonditionering ved hjælp af proxy bedømt for social interaktion mellem observatøren og demonstranten for hver 20--periode under CS-præsentationen og 20--perioden umiddelbart efter hver CS-præsentation for at give et sekundært indeks for tilegnelse af frygt. Social kontakt blev scoret, når observatør- og demonstratorrotter tog kontakt på anden måde end i forbifarten i cue-perioden (under CS-kontakt) eller i 20 s efter CS (post CS-kontakt). Procentdelen af ​​hver scoringsperiode brugt i kontakt med demonstranten blev beregnet. Data for procentkontakt i cue-perioden for mænd og data for procentkontakt umiddelbart efter cue-perioden for kvinder blev trukket og kombineret til et enkelt "relevant kontakt"-mål, der skulle bruges i alle endelige statistiske analyser.

Valgprøvescore. Videoer af valgtesten for at starte en tilbagekaldelse af en socialt overført fødepræference blev bedømt for den tid, en given rotte brugte på at interagere med en madkop baseret på, om den indeholdt den påviste/allerede forbrugte diæt (diæt Cin) eller romanen diæt (diet Co). Dette blev gjort som et potentielt sekundært mål for madpræference, da vi forventede, at på grund af at valgtesten var unormalt kort (10 min) af nødvendighed, ville vi muligvis ikke være i stand til at opdage præferencer baseret på mængden spist alene. Interaktion med madkoppen blev bedømt for, når en rotte var fysisk i kontakt med og ikke aktivt bevægede sig væk fra koppen (dvs. forpoter i kontakt med krukken, hovedet inde i krukken, klatrede oven på krukken eller aktivt spiste fra krukken). Til statistisk analyse beregnede vi procentdelen af ​​tid brugt på at interagere med en kop, der indeholder en given diæt baseret på den samlede mængde tid brugt på at interagere med begge kopper (f.eks. for diæt Cin, procent af tid= TimeDiet Cin/ (TimeDiet Co plus TimeDiet Cin)). Den fulde 10-min. valgtestsession blev scoret for alle rotter, der gennemgik den.

Vævsanalyse.

For at minimere nedbrydningen af ​​mRNA ved ribonuklease (RNase) blev alt udstyr og overflader, der blev brugt under hjerneforberedelse og -behandling, desinficeret regelmæssigt med enten RNase AWAY™ (Termo Scientity; Waltham, MA, USA) eller RNAseZap™ (Ambion; Grand Island, NY , USA).

Hjerneforberedelse. Umiddelbart efter eutanasi blev forsøgspersoner perfunderet intrakardialt under anvendelse af en 4 procent paraformaldehyd (PFA) opløsning. Hjerner blev derefter fjernet og nedsænket i 4 procent PFA for at tillade postfiksering i 24-48 timer. Når postfikseringen var afsluttet, blev hjerner overført til en opløsning af 30 procent saccharose i phosphatbufret saltvand til kryobeskyttelse. Når hjerner var sunket til bunden af ​​hætteglasset, hvilket indikerer tilstrækkelig saccharoseoptagelse til kryobeskyttelse, blev de lynfrosset i pulveriseret tøris og flyttet til en -80 graders fryser til opbevaring indtil sektionering. Hjerner blev derefter sektioneret koronalt på en glidende mikrotom ved 30 µm tykkelse i seks serier (så efterfølgende sektioner i en enkelt serie var 180 µm fra hinanden) og straks monteret og fik lov til at lufttørre, før de blev anbragt i et vakuumkammer med fugtsvampe, hvor de var lad det tørre helt i 24 timer. Kun hippocampale sektioner (ca. - 3,2 til - 5,2 fra bregma) eller præfrontale regioner (ca. plus 3,7 til plus 1,4 fra bregma), der indeholdt interesseområderne, blev sektioneret og behandlet. Monterede sektioner blev derefter placeret i en forseglet RNase-fri objektglasboks og opbevaret ved – 80 grader indtil behandling.

Vævsbehandling. Alle procedurer blev modificeret fra protokollerne anvendt i Lee et al.61 og Petrovich et al.62. Før vævsbehandling blev en cRNA-probe for Arc-mRNA konstrueret startende med et plasmid indeholdende et cDNA i fuld længde (~3.0 kbp) af Arc-transkriptet. For at skabe proben blev DNA'et først skåret ved at blande plasmidet med en 10 x fordøjelsesbuffer (NEBufer; Biolabs; Ipswich, MA, USA), et 10 x EcoRI restriktionsenzym (Biolabs) og renset nukleasefrit vand, før det blev inkuberet ved 37 grader i 2 timer. Korrekt udskæring af DNA'et blev verificeret ved hjælp af elektroforese, hvorefter DNA'et blev oprenset natten over i ethanol. Efter oprensning blev DNA-pelleten centrifugeret ud i en centrifuge, vasket i EtOH, fuldstændigt tørret og resuspenderet i en TE-buffer. For at verificere, at DNA'et var korrekt lineariseret, beregne buekoncentrationen og kontrollere, at der ikke var forurenende stoffer til stede, blev en prøve af DNA'et testet via spektrofotometri (Nanodrop Lite; Thermo Scientific, Waltham, MA, USA). Den Digoxigenin (DIG) mærkede probe blev transskriberet ved at kombinere det lineariserede DNA med RNase-frit vand, en 10 x transkriptionsbuffer (Ambion), RNAse blok (Ambion), DIG RNA mærkningsblanding (Roche Applied Science; Indianapolis, IN, USA) og en T7 RNA-polymerase (Ambion) før inkubering af opløsningen ved 37 grader i 2 timer. Til sidst blev proben fortyndet i nukleasefrit vand og oprenset i en mini Quick-Spin-søjle (Roche).

Når først cRNA-proben var blevet konstrueret, blev objektglas indeholdende væv fra hanrotterne nedsænket i 40 minutter i en 4 procent PFA-opløsning for at øge vævsintegriteten gennem in situ-behandling. Væv fra hunrotter blev behandlet uden denne PFA-vask. Objektglassene blev derefter vasket og inkuberet i en proteinase K (PK) buffer ved 37 grader, før de blev behandlet med en 0,5 procent eddikesyreanhydrid/1,5 procent triethanolaminopløsning indeholdende iseddikesyre til permeabilisering. Objektglassene blev derefter vasket i en saltvands-natriumcitrat (SSC) buffer, før de blev dehydreret ved nedsænkning i stigende koncentrationer af ethanol og lufttørret. Til sidst blev hvert objektglas dækket med 300 µL af en hybridiseringsbuffer indeholdende gær-tRNA (Invitrogen; Carlsbad, CA, USA), laksesperm-DNA (Ambion), dithiothreitol (Sigma; St. Louis, MO, USA) og cRNA-sonden (1:100). Hvert objektglas blev derefter dækglas og forseglet rundt om kanterne med DPX-monteringsmiddel (Electron Microscopy Sciences; Hatfield, PA, USA), før det blev inkuberet i hybridiseringsopløsningen i 20 timer ved 60 grader. Især beskyttede dækglasset vævet mod enhver direkte kontakt med DPX-monteringsmidlet, så senere fjernelse af den hærdede DPX forårsagede ingen skade på vævet.

Når hybridiseringen var afsluttet, blev dækglas forsigtigt fjernet, og objektglassene blev inkuberet i en 4xSSC-buffer blandet med natriumthiosulfat (ST) ved 60 grader i en time, før de blev behandlet med en ethylendiamintetraeddikesyrebaseret opløsning for at hæmme RNAse-aktivitet ved 37ºC. Efter dette blev objektglassene vasket i faldende koncentrationer af SSC-opløsning blandet med ST igen ved 60 grader. Vævet blev derefter vasket i en detergentopløsning (Tween20), før det blev farvet med PerkinElmer TSA Fluorescein-systemet (NEL701001KT; PerkinElmer, Waltham, MA, USA). Objektglassene blev anbragt i et fugtigt kammer og behandlet med en blokerende buffer efterfulgt af et anti-DIG-HRP-konjugat i 2 timer. Objektglassene blev derefter kortvarigt vasket i detergentopløsningen, før de blev returneret til et mørkt fugtigt kammer og overtrukket med en opløsning indeholdende fluoresceintyramidreagens (FITC) og fik lov til at sidde i 30 minutter. Til sidst blev objektglassene vasket, fik lov til at lufttørre og dækglas med et monteringsmiddel indeholdende nuklearfarven 4',6-diamidino-2-phenylinodol (DAPI) (Vectashield; Vector Lab, Burlingame, CA, USA) . Objektglassene blev opbevaret i mørke ved -20 grader indtil billeddannelse.

Billedbehandling. Al billeddannelse blev afsluttet ved hjælp af et Axio Scope A1 mikroskop (Zeiss; Tornwood, NY, USA). Regioner af interesse blev identificeret via DAPI-farvning ved hjælp af et 10×-objektiv med hjælp fra Paxinos og Watsons hjerneatlas63 og derefter afbildet under et 40×-objektiv (faktisk forstørrelse ~900×). Billeder blev taget for både DAPI og FITC pletter og senere farvelagt og flettet automatisk ved hjælp af en brugerdefineret makro i ImageJ softwaren med FIJI (NIH, Bethesda, MD). På grund af vævsnedbrydning, der fandt sted overalt in situ, var ikke alle sektioner eller områder af potentiel interesse levedygtige. Som sådan var billederne ikke i stand til at blive z-stablet pålideligt og blev i stedet taget på et enkelt plan. Følgende regioner blev afbildet og talt: den prælimbiske cortex (plus 3,72 til plus 2,52 fra bregma), den infralimbiske cortex (plus 3,52 til plus 2,2 fra bregma), den laterale (plus 3,72 til plus 3,2 fra bregma) og ventral (plus 3,72 til plus 3,0 fra bregma) orbitofrontal cortex, CG1-regionen af ​​den forreste cingulate cortex (plus 3,72 til plus 2,52 fra bregma) og CA3-regionen af ​​den ventrale hippocampus (- 4,3 til - 4,8 fra bregma) (fig. S6). Selvom amygdal-kernerne også var af særlig interesse for deres veletablerede rolle i frygtindlæring, havde den førnævnte vævsskade tendens til at være særlig alvorlig i dette område. Som sådan var vi ikke i stand til at opnå en prøvestørrelse, der var stor nok til at inkludere denne region (der kræves minimum 6 levedygtige billeder/region for at en rotte kan inkluderes i den statistiske analyse af et givet område).

Optællinger blev afsluttet region for region, og alle billedfiler blev tildelt en tilfældig numerisk kode for at blinde forsøgslederen, der fuldførte tællingerne fra alle detaljer vedrørende billedet på tidspunktet for optællingen. Alle celletællinger blev taget i ImageJ med FIJI-pakken og blev lavet ved hjælp af celletællingsværktøjet. Celler blev talt for nuklear og cytoplasmatisk bue-mRNA-ekspression separat, og celler, der viste overlappende ekspression, blev talt som dobbeltekspression. De endelige tællinger for nuklear Arc-udtrykkende og cytoplasmatisk Arc-udtrykkende celler inkluderede kun de celler, der kun udtrykte i denne region (dvs. inkluderede ikke dobbeltudtrykkende celler). Fuld tælling for DAPI-farvede celler blev taget, og procentdelen af ​​celler, der viste ekspression i hvert givet område, blev beregnet efterfulgt af den gennemsnitlige procentdel af celler, der viste hver type aktivering i individuelle rotter. For at forhindre antallet af rotter med et større antal billeder i at have en uforholdsmæssig effekt på vores statistikker og for at forhindre en inflation af stikprøvestørrelsen blev kun disse gennemsnit brugt i vores endelige analyse.

Oversigt over statistisk analyse. Alle statistiske analyser blev afsluttet ved hjælp af R-kodningssoftwaren. Den fulde kode er frit tilgængelig at se på vores datalager på https://dataverse.tdl.org/dataverse/MonflsFearMemoryLab. Medmindre andet er angivet, blev grænsen for, at en test anses for statistisk signifikant, sat til p<0.05. All of our Arc results, unless otherwise mentioned, were tested for significance using a series of two-way ANOVAs (type 2) containing sex and condition as between-subject variables (Sex and Condition) with an individual ANOVAs run for each area of expression (nucleus, cytoplasm, and dual). Similarly, a series of one-way ANOVAs were run with a combined variable containing the food task (diet Cin only or Choice test for Demonstrators and Observers; plain chow only for all Controls) for each area of expression. Sex was not included as a secondary variable as the relatively low number of female rats made sample sizes too small for certain condition/food task combinations. When ANOVA assumptions were violated, data were transformed using either a log(y+1) function or by taking the inverse square root. As these transforms did not always succeed in bringing ANOVAs in line with assumptions, Kruskal-Wallace tests were performed on datasets where transforms were not effective. Pairwise t-tests were performed for posthoc analyses against a Bonferroni-corrected alpha value when ANOVAs indicated a significant effect of condition (α=0.017) or a significant sex and condition interaction (α=0.008; conditions tested against each other within each sex-only) with between-group effect sizes calculated using Cohen's d. To provide a better gauge of variability for our smaller group sizes, the MSError obtained from our ANOVA was used in the denominator of post hoc t-tests. Effect sizes for ANOVAs were calculated using the standard partial η2 formula and for Kruskal-Wallace tests using the formula η2 H =(H − k+1)/(n – k). For simplicity of data presentation, unless the addition of the food task grouping variable resulted in a significant effect or unless a significant contribution of sex was detected all data were presented graphically split up by area of expression and overall experimental condition only. Any rats that had fewer than 6 viable images counted in a given brain region were excluded from the analysis for that area.

Bivariate korrelationer blev beregnet for observatør- og demonstratorrotter for at vurdere potentielle forhold mellem adfærdsmæssige målinger og buecelleantal for ekspression, der fandt sted på passende tidspunkter (f.eks. cytoplasmatisk buetælling for procent af spist kanel). Pearsons korrelationskoefficienter blev brugt, hvis ingen outliers i nogen af ​​datasættene blev påvist med en Grubbs-test. Hvis der blev påvist outliers, blev Spearmans korrelationskoefficient brugt i stedet. For at måle, om en sammenhæng mellem social læring og Arc i dobbeltudtrykkende celler i Observers, blev en overordnet metrik for social læring - herefter omtalt som den sociale læringsmetrik (SLM) - beregnet ved at tage gennemsnittet af de standardiserede scores ( z-score) for procentdelen af ​​totalt spist, der var den demonstrerede mad og procentdelen af ​​tid brugt i kontakt med demonstranten under FCbP's sociale læringsfase under CS-præsentationen (mænd) eller efter CS-præsentationen (kvinder). Det er bemærkelsesværdigt, at procent fryse til stikordet på den sidste dag ikke blev brugt til observatørrotter, fordi vores resultater og resultaterne af vores opfølgende eksperiment (se Supplerende materialer) indikerede, at betingelserne for vores adfærdsmæssige testprocedure resulterede i en vis fryseadfærd, selv i Kontrolrotter – i det mindste hos hanner – og som sådan er de måske ikke den bedste målestok for styrken af ​​den socialt erhvervede frygtrespons. Som sådan, givet vores tidligere resultater om, at interaktioner med demonstratoren under eller efter CS (afhængigt af køn) i høj grad forudsagde senere frysning til cue12-14, blev interaktion med demonstratoren på det kønsegnede tidspunkt testet for korrelationer mod kernebueaktivitet i stedet for at fryse til køen på den sidste dag for Observer-rotter. For demonstranter blev en lignende metrik beregnet baseret på standardiseret frysning til stikordet på den sidste dag og procentdelen af ​​det samlede spiste, der var den velkendte diæt (Diet Cin) og kontrolleret mod dual Arc-aktivitet. For at korrigere for de multiple tests, der blev kørt på hvert adfærdsdatasæt (6, for hver hjerneregion), blev den kritiske p-værdi for korrelationer Bonferroni justeret til 0.0083.

Referencer

1. Dawson, G., Meltzof, AN, Osterling, J., Rinaldi, J. & Brown, E. Børn med autisme formår ikke at orientere sig mod naturligt forekommende sociale stimuli. J. Autism Dev. Uorden. 28, 479-485 (1998).

2. Zeeland, AAS-V., Dapretto, M., Ghahremani, DG, Poldrack, RA & Bookheimer, SY Belønningsbehandling i autisme. Autisme Res.

3, 53-67 (2010). 3. Chevallier, C., Kohls, G., Troiani, V., Brodkin, ES & Schultz, RT Teorien om social motivation om autisme. Trends Cogn. Sci. 16, 231-239 (2012).

4. Öst, L.-G. Måder at erhverve fobier på og resultatet af adfærdsmæssige behandlinger. Opfør dig. Res. Ter. 23, 683-689 (1985).

5. Ollendick, TH & King, NJ Oprindelsen af ​​barndomsfrygt: En evaluering af Rachmans teori om tilegnelse af frygt. Opfør dig. Res. Ter. 29, 117-123 (1991).

6. Merckelbach, H., Arntz, A. & de Jong, P. Conditioning experiences in spider phobics. Opfør dig. Res. Ter. 29, 333-335 (1991).

7. Jeon, D. et al. Observationel frygtindlæring involverer defekt smertesystem og Cav1.2 Ca2 plus kanaler i ACC. Nat. Neurosci. 13, 482-488 (2010).

8. Yusufshaq, S. & Rosenkranz, JA Social isolation efter fravænning svækker observationel frygtkonditionering. Opfør dig. Brain Res. 242, 142-149 (2013).

9. Kavaliers, M., Choleris, E. & Colwell, DD At lære af andre at klare bidende fluer: Social læring af frygt-induceret betinget analgesi og aktiv undgåelse. Opfør dig. Neurosci. 115, 661-674 (2001).

10. Kavaliers, M., Colwell, DD & Choleris, E. At lære at frygte og håndtere en naturlig stressfaktor: Individuelt og socialt erhvervet kortikosteron og undgåelsesreaktioner på bidende fluer. Horm. Opfør dig. 43, 99-107 (2003).

11. Kavaliers, M., Colwell, DD & Choleris, E. Slægtskab, fortrolighed og social status modulerer social læring om "mikrorovdyr" (bidende fluer) hos hjortemus. Opfør dig. Ecol. Sociobiol. 58, 60-71 (2005).

12. Bruchey, AK, Jones, CE & Monfls, M.-H. Frygtkonditionering ved proxy: Social transmission af frygt under hukommelseshentning. Opfør dig. Brain Res. 214, 80-84 (2010).

13. Jones, CE & Monfls, M.-H. Dominansstatus forudsiger overførsel af social frygt hos laboratorierotter. Anim. Cogn. 19, 1051-1069 (2016).

14. Agee, LA, Jones, CE & Monfls, M.-H. Forskellige effekter af fortrolighed/slægtskab i den sociale overførsel af frygtforeninger og madpræferencer hos rotter. Anim. Cogn. 22, 1013-1026 (2019).

15. Mitchell, CJ, Heyes, CM, Gardner, MR & Dawson, GR Begrænsninger af en tovejskontrolprocedure til undersøgelse af imitation hos rotter: Lugtsignaler på manipulandum. QJ Exp. Psychol. B 52, 193-202 (1999).

16. Galef, BG & Wigmore, SW Overførsel af information vedrørende fjerne fødevarer: En laboratorieundersøgelse af 'informationscenter'-hypotesen. Anim. Opfør dig. 31, 748-758 (1983).

17. Galef, BG, Mason, JR, Preti, G. & Bean, NJ Kulstofdisulfid: Et semiokemisk medierende socialt induceret kostvalg hos rotter. Physiol. Opfør dig. 42, 119-124 (1988).

18. Galef, BG Et casestudie i adfærdsanalyse, syntese og opmærksomhed på detaljer: Social læring af madpræferencer. Opfør dig. Brain Res. 231, 266-271 (2012).

19. Posadas-Andrews, A. & Roper, TJ Social overførsel af fødepræferencer hos voksne rotter. Anim. Opfør dig. 31, 265-271 (1983).

20. Countryman, RA, Orlowski, JD, Brightwell, JJ, Oskowitz, AZ & Colombo, PJ CREB-phosphorylering og c-Fos-ekspression i hippocampus hos rotter under erhvervelse og tilbagekaldelse af en socialt overført fødepræference. Hippocampus 15, 56-67 (2005).

21. Boix-Trelis, N., Vale-Martínez, A., Guillazo-Blanch, G., Costa-Miserachs, D. & Martí-Nicolovius, M. Effekter af nucleus basalis magnocellularis-stimulering på en socialt overført fødevarepræference og c. -Fos udtryk. Lære. Mem. 13, 783-793 (2006).

22. Ross, RS & Eichenbaum, H. Dynamik af hippocampus og kortikal aktivering under konsolideringen af ​​en ikke-rumlig hukommelse. J. Neurosci. 26, 4852-4859 (2006).

23. Smith, CA, Countryman, RA, Sahuque, LL & Colombo, PJ Tidsforløb for Fos-ekspression i rottehippocampus og neocortex efter erhvervelse og tilbagekaldelse af en socialt overført fødepræference. Neurobiol. Lære. Mem. 88, 65-74 (2007).

24. Lesburguères, E. et al. Tidlig tagging af kortikale netværk er påkrævet for dannelsen af ​​varig associativ hukommelse. Science 331, 924-928 (2011).

25. Knapska, E. et al. Overførsel af følelsesmæssig information mellem emner fremkalder specifikke mønstre for amygdala-aktivering. Proc. Natl. Acad. Sci. 103, 3858-3862 (2006).

26. Jones, CE, Riha, PD, Gore, AC & Monfls, M.-H. Social overførsel af Pavlovsk frygt: Frygtkonditionerende biproxy hos beslægtede hunrotter. Anim. Cogn. 17, 827-834 (2014). 27. Twining, RC, Vantrease, JE, Love, S., Padival, M. & Rosenkranz, JA Et intra-amygdala-kredsløb regulerer specifikt social frygtindlæring. Nat. Neurosci. 20, 459-469 (2017).

28. Olsson, A., Knapska, E. & Lindström, B. Te neurale og beregningsmæssige systemer for social læring. Nat. Rev. Neurosci. 21, 197-212 (2020).

29. Guzowski, JF, McNaughton, BL, Barnes, CA & Worley, PF Miljøspecifik ekspression af det umiddelbare-tidlige gen Arc i hippocampale neuronale ensembler. Nat. Neurosci. 2, 1120-1124 (1999).

30. Kim, JJ & Jung, MW Neurale kredsløb og mekanismer involveret i Pavlovsk frygtkonditionering: En kritisk gennemgang. Neurosci. Bioadfærd. Rev. 30, 188-202 (2006).

31. Laurent, V. & Westbrook, RF Inaktivering af den infralimbiske, men ikke den prælimbiske cortex, hæmmer konsolidering og genfinding af frygtudryddelse. Lære. Mem. 16, 520-529 (2009).

32. Tovote, P., Fadok, JP & Lüthi, A. Neuronale kredsløb for frygt og angst. Nat. Rev. Neurosci. 16, 317-331 (2015).

33. Agee, LA & Monfls, M.-H. Effekt af demonstratorens pålidelighed og seneste demonstration på erhvervelsen af ​​en socialt overført fødevarepræference. R. Soc. Åben Sci. 5, 172391 (2018).

34. Nikolaienko, O., Patil, S., Eriksen, MS & Bramham, CR Arc protein: En fleksibel hub for synaptisk plasticitet og kognition. Semin. Cell Dev. Biol. 77, 33-42 (2018).

35. Chia, C. & Otto, T. Hippocampal Arc (Arg3.1) ekspression induceres af hukommelsesgenkaldelse og kræves til hukommelsesrekonsolidering i spor-frygt-konditionering. Neurobiol. Lære. Mem. 106, 48-55 (2013).

36. Pilarzyk, K. et al. Tab af funktion af phosphodiesterase 11A4 viser, at nyere og fjerntliggende langtidshukommelser kan kobles fra. Curr. Biol. 29, 2307-2321.e5 (2019).

37. Jones, CE Te Social transmission af associativ frygt hos gnavere – individuelle forskelle i frygtkonditionering af proxy Vol. 17 (Springer, 2021).

38. Smith, CA, East, BS & Colombo, PJ Te orbitofrontal cortex er ikke nødvendig for erhvervelse eller fjerntilbagekaldelse af socialt overførte fødevarepræferencer. Opfør dig. Brain Res. 208, 243-249 (2010).

39. Rudebeck, PH, Walton, ME, Smyth, AN, Bannerman, DM & Rushworth, MFS Separate neurale veje behandler forskellige beslutningsomkostninger. Nat. Neurosci. 9, 1161-1168 (2006).

40. Rolls, ET & Grabenhorst, F. Te orbitofrontal cortex og videre: Fra affekt til beslutningstagning. Prog. Neurobiol. 86, 216-244 (2008).

41. Wallis, JD Cross-arts undersøgelser af orbitofrontal cortex og værdibaseret beslutningstagning. Nat. Neurosci. 15, 13-19 (2012).

42. Izquierdo, A. Funktionel heterogenitet inden for rotte orbitofrontal cortex i belønningslæring og beslutningstagning. J. Neurosci. 37, 10529-10540 (2017).

43. Randesi, M. et al. Kønsforskelle efter kronisk stress i ekspressionen af ​​opioid-, stress- og neuroplasticitetsrelaterede gener i rottehippocampus. Neurobiol. Stress 8, 33-41 (2018).

44. Maren, S., Phan, KL & Liberzon, I. Te kontekstuel hjerne: implikationer for frygtkonditionering, ekstinktion og psykopatologi. Nat. Rev. Neurosci. 14, 417-428 (2013).

45. Vidal-Gonzalez, I., Vidal-Gonzalez, B., Rauch, SL & Quirk, GJ Mikrostimulering afslører modsatrettede påvirkninger af prælimbisk og infralimbisk cortex på udtryk for betinget frygt. Lære. Mem. 13, 728-733 (2006).

46. ​​Sierra-Mercado, D., Padilla-Coreano, N. & Quirk, GJ Dissociable roller af prælimbiske og infralimbiske cortex, ventral hippocampus og basolateral amygdala i udtryk og udryddelse af betinget frygt. Neuropsychopharmacology 36, 529-538 (2011).

47. Baran, SE, Armstrong, CE, Niren, DC, Hanna, JJ & Conrad, CD Kronisk stress og kønsforskelle om tilbagekaldelse af frygtkonditionering og udryddelse. Neurobiol. Lære. Mem. 91, 323-332 (2009).

48. Greiner, EM, Müller, I., Norris, MR, Ng, KH & Sangha, S. Kønsforskelle i frygtregulering og belønningssøgende adfærd i en frygt-sikkerhed-belønning diskriminationsopgave. Opfør dig. Brain Res. 368, 111903 (2019).

49. Day, HLL & Stevenson, CW Det neurobiologiske grundlag for kønsforskelle i indlært frygt og dens hæmning. Eur. J. Neurosci. 52, 2466-2486 (2020).

50. van Hasselt, FN et al. Individuelle variationer i mødrepleje tidligt i livet korrelerer med beslutningstagning senere i livet og c-fos udtryk i de præfrontale subregioner af rotter. PLoS ONE 7, e37820 (2012).

51. Bayless, DW & Daniel, JM Kønsforskelle i myelin-associerede proteinniveauer inden for og tæthed af projektioner mellem den orbitale frontale cortex og dorsale striatum hos voksne rotter: Implikationer for hæmmende kontrol. Neuroscience 300, 286-296 (2015).

52. Orsini, CA & Setlow, B. Kønsforskelle i dyremodeller for beslutningstagning. J. Neurosci. Res. 95, 260-269 (2017).

53. Corcoran, KA & Quirk, GJ Aktivitet i den prælimbiske cortex er nødvendig for at udtrykke lært, men ikke medfødt. Frygter. J. Neurosci. 27, 840-844 (2007).

54. Burgos-Robles, A., Vidal-Gonzalez, I. & Quirk, GJ Vedvarende betingede responser i prælimbiske præfrontale neuroner er korreleret med frygtudtryk og udryddelsesfejl. J. Neurosci. 29, 8474-8482 (2009).

55. Fenton, GE et al. Vedvarende prælimbisk cortexaktivitet bidrager til øget indlært frygtudtryk hos kvinder. Lære. Mem. 21, 55-60 (2014).

56. Fenton, GE, Halliday, DM, Mason, R., Bredy, TW & Stevenson, CW Kønsforskelle i indlært frygtudtryk og ekstinktion involverer ændrede gamma-oscillationer i den mediale præfrontale cortex. Neurobiol. Lære. Mem. 135, 66-72 (2016).

57. Kirry, AJ et al. Hypofyse-adenylatcyklase-aktiverende polypeptid (PACAP)-signalering i den præfrontale cortex modulerer cued frygtindlæring, men ikke rumlig arbejdshukommelse, hos hunrotter. Neuropharmacology 133, 145-154 (2018).

58. Day, HLL, Suwansawang, S., Halliday, DM & Stevenson, CW Kønsforskelle i auditiv frygtdiskrimination er forbundet med ændret medial præfrontal cortexfunktion. Sci. Rep. 10, 6300 (2020).

59. Kikusui, T., Takigami, S., Takeuchi, Y. & Mori, Y. Alarmferomon øger stress-induceret hypertermi hos rotter. Physiol. Opfør dig. 72, 45-50 (2001).

60. Friard, O. & Gamba, M. BORIS: En gratis, alsidig open source-hændelseslogningssoftware til video/lydkodning og live observationer. Metoder Ecol. Evol. 7, 1325-1330 (2016). 61. Lee, HJ, Haberman, RP, Roquet, RF & Monfls, M.-H. Ekstinktion og genfinding plus ekstinktion af betinget frygt aktiverer differentielt den mediale præfrontale cortex og amygdala hos rotter. Foran. Opfør dig. Neurosci. 9, 1-10 (2016).

62. Petrovich, GD, Holland, PC & Gallagher, M. Amygdalar og præfrontale veje til den laterale hypothalamus aktiveres af en indlært cue, der stimulerer spisning. J. Neurosci. 25, 8295-8302 (2005).

63. Paxinos, G. & Watson, C. Te Rottehjerne i stereotaksiske koordinater: Hard Cover. (Elsevier, 2006).