Del 2: Ekstrakter af Cistanche Deserticola kan modvirke immunosenescens og forlænge levetiden hos ældningsaccelererede musetilbøjelige 8 (SAM-P8) mus

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com

3.5. Uddrag dfCistanche deserticola(ECD) Fremme.

Apoptose og hæmning af nekrose af lymfocytter i SAM-P8-mus. Niveauerne af nekrose og apoptose i blodlymfocytpopulationer blev analyseret ved dobbeltfarvning med Annexin V-FITC V/PI. Dette afslørede, at andelen af ​​nekrotiske lymfocytter i SAM-P8mic var signifikant højere end i SAM-R1 kontroldyr, mens andelen af ​​apoptotiske lymfocytter var lavere (figur 7). Supplering af kosten af ​​SAM-P8 mus med tre forskellige doser af ECD var i stand til at hæmme niveauerne af nekrose set i perifere lymfocytpopulationer, mens kun de to højere niveauer af ECD-supplementering producerede en signifikant ændring i niveauet af apoptotiske lymfocytter (Figur 7).

3.6.Uddrag afCistanche deserticola(ECD) Reducer det proinflammatoriske cytokin IL-6 i SAM-P8-mus.

Som en yderligere indikator for ECD's evne til at påvirke aldersrelaterede ændringer i immunsystemet er effekten af ​​ECD diættilskud på niveauet af en række cytokiner(IFN-, TNF-, IL-2.IL{{4 }}.IL-10, GM-CSF og IL-3) blev analyseret ved hjælp af cytometrisk bead array-analyse (CBA), som involverer farvning med fluorescerende farvestof-mærkede antistoffer koblet med capture-cytometriske perler. Resultaterne (Figur8) viste, at det inflammatoriske cytokin IL-6 ikke var øget i 8-måned gamle SAM-P8-mus sammenlignet med kontrol-SAM-R1-mus på samme alder, men det var signifikant øget, når sammenlignet med6-måned gamle SAM-R1-mus (resultater ikke vist). Imidlertid var kosttilskud med høje og mellemstore doser af ECD i stand til at producere et statistisk signifikant fald i plasma IL-6 niveau (figur 8(a) og 8(b),<>

(IFN-,TNF-,IL-2,IL-10, GM-CSF og IL-3) viste ingen signifikante variationer mellem SAM-P8, SAM-R1 og ECD-behandlede grupper af mus (data ikke vist).

4. Diskussion

Immunforsvaret mod nyligt invasive mikroorganismer eller endogene tumorceller afhænger af mangfoldigheden af ​​T-cellerepertoire, som igen er afhængig af generering og vedligeholdelse af naive T-celler[19]. Under ældningsprocessen har mangfoldigheden af ​​T-cellerepertoiret vist sig at skrumpe dramatisk på grund af den progressive udtømning af naive T-celler i den perifere reservepulje. Det er denne mangel på responsive naive T-celler, der er blevet anset for at være ansvarlige for ældre menneskers modtagelighed for infektion, cancer og dårlige resultater efter vaccination [20]. Forskellige interventioner, herunder kaloriebegrænsning [7], motion [21] og E-vitamintilskud [8], er alle blevet brugt til med succes at genopbygge naive T-celler og derved forlænge levetiden og reducere opståen af ​​infektion og kræft blandt ældre. I denne undersøgelse har vi påvist, at ECD er i stand til at øge niveauet af naive T-celler i den perifere pool, og der var en samtidig forlængelse af levetiden og reduktion i hyppigheden af ​​tumordannelse i alderdomsaccelererede mus (ECDtherapeutic groupversusSAM-P8) ,0 mod 1/6). Derfor forekommer det rimeligt at konkludere, at ECD's evne til at vende den aldersafhængige udtømning af perifere naive T-celler kan bidrage til dens kendte virkninger med hensyn til at reducere aldersrelateret sygdom, som stammer fra langsigtede kliniske observationer.

5. Materialer og metoder

5.1. Materialer.

I det normale immunrespons, efter indeslutning og eliminering af et fremmed antigen, gennemgår de fleste af de klonalt ekspanderede T-celler apoptose, hvor kun en lille del tilbageholdes som hukommelses-T-celler. Som følge heraf akkumuleres perifere hukommelses-T-celler efterhånden som immunkompetente organismer ældes som et resultat af en levetid med eksponering for fremmede antigener, der omdanner naive T-celler til hukommelsesceller[22,23]. En række undersøgelser har antydet, at defekter af lymfocytapoptose hos ældre dyr og mennesker også bidrager til udvidelsen af ​​hukommelses-T-cellerummet [24,25]. Derudover har en nylig undersøgelse vist, at en overflod af perifere hukommelses-T-celler kan hæmme den homøostatiske proliferation af naive T-celler [26]. Disse nylige undersøgelser har også antydet, at hukommelses-T-celler kan udskille høje niveauer af proinflammatoriske cytokiner, som kan bidrage til vedvarende inflammationer i forskellige væv hos ældre. Følgelig burde reduktion af niveauet af hukommelses-T-celler være gavnlig både for den homøostatiske proliferation af naive T-celler og også til at lindre den overskydende inflammatoriske tilstand, der ses hos ældre organismer. I denne undersøgelse blev kosttilskud med ECD vist at kunne reducere niveauet af perifere hukommelses-T-celler og øge niveauet af naive T-celler. Derudover øgede ECD-tilskud apoptoseplads til nye naive lymfocytter. Nekrose i perifere lymfocytter, som hovedsageligt induceres af oxidativt stress hos senile dyr, blev også hæmmet.

Der findes omfattende beviser for, at aldring i en organisme ikke kun er karakteriseret ved immundefekt, men også af en stigning i kronisk inflammation[27. Proinflammatorisk status er tydeligst manifesteret i øget og IL-1 i kredsløbet kombineret med øgede hyppigheder af kroniske inflammatoriske sygdomme forbundet med aldring såsom Alzheimers sygdom, Parkinsons sygdomme og åreforkalkning. En af de mest fremtrædende inflammatoriske cytokineser er IL-6, og dets plasmakoncentration stiger med aldring og aldersrelaterede sygdomme [18,28,29], og epidemiologiske undersøgelser tyder på, at IL-6 er en god biomarkør for lang levetid da det er tæt forbundet med dødelighed i ældre patientkohorter [30,31]. I overensstemmelse hermed er en række terapeutiske indgreb, der nedsætter IL-6-koncentrationen, i stand til at

Figur 6: Virkningerne af ECD-kosttilskud på stamcelleantigen-1 (Sca-1) i de perifere blodlymfocytter fra SAM-P8-mus. Otte måneder gamle han-SAM-P8- og kontrol-SAM-RI-mus blev opdelt i 5 grupper. De 3 behandlingsgrupper af SAM-P8-dyr blev fodret i fire uger med diæter suppleret med lave (100 mg/kg), medium 500 mg/kg) og høje 250 mg/kg) doser af ECD, og ​​de to kontroldyrsgrupper blev fodret med samme kost uden tilskud. Efter faste i 12 timer blev perifert blod opsamlet fra bedøvede dyr og underkastet FACS-analyse alt sammen som beskrevet i afsnit 5. (a) Repræsentative FACSplots af de forskellige grupper af mus genereret ved gating på stamcelleantigen-1 (Sca{{ 20}})positive celler.(b) Histogram, der viser procentdelen af ​​stamcelleantigen-1 (Sca-1)positive celler i perifert blod fra de forskellige dyregrupper.Søjler repræsenterer kød-SD(i hver gruppe,{ {23}}).w*<0.01 sam-p8="" versus="" sam-r1;**=""><0.01 each="" treated="" group="" versus="" sam-p8="" group="" (by="" one-way="" anova="" with="" post="" hoc="">

Figur 7: Virkningerne af ECD-kosttilskud på apoptose og nekrose af lymfocytter i gamle SAM-P8-mus. Otte måneder gamle han-SAM-P8- og kontrol-SAM-RI-mus blev opdelt i 5 grupper. De 3 behandlingsgrupper af SAM-P8 dyr blev fodret i fire uger med diæter suppleret med lave (100 mg/kg), medium (500 mg/kg) og høje (2500 mg/kg) doser af ECD, og ​​de to kontroldyrsgrupper blev fodret med samme kost uden tilskud. Efter faste i 12 timer blev perifert blod opsamlet fra bedøvede dyr og underkastet FACS-analyse alt sammen som beskrevet i afsnit 5. (a) Repræsentative FACSplots af de forskellige grupper af mus genereret ved gating på dobbeltfarvede blodlymfocytter med Annexin V-FITC /PI. (b) Histogram, der viser procentdelen af ​​apoptotiske lymfocytter (Annexin V-FITC positive celler) i perifert blod fra de forskellige dyregrupper. (c) Histogram, der viser procentdelen af ​​nekrotiske lymfocytter (PI-positive celler) i perifert blod fra de forskellige dyregrupper. Søjler repræsenterer mere SD (i hver gruppe,= 10)."<0.05 sam-p8=""><0.05each treated="" groupversussam-p8group(by="" one-way="" anova="" with="" post="" hoc="">

Figur 8: Effekter af ECD kosttilskud på serum proinflammatorisk cytokin L6 niveau af SAM-P8 mus. Otte måneder gamle SAM-P8 hanmus og kontrol SAM-RI mus blev opdelt i 5 grupper. De 3 behandlingsgrupper af SAM-P8 dyr blev fodret i fire uger med diæter suppleret med lav (100 mg/kg), medium (500 mg/kg) kg) og høje (2500 mg/kg) doser af ECD, og ​​de to kontroldyrsgrupper blev fodret med den samme diæt uden tilskud. Efter faste i 12 timer blev plasmaerne opsamlet, og plasmacytokiner i de forskellige dyregrupper blev bestemt ved cytometrisk perlearray-immunoassay, alt sammen som beskrevet i afsnit 5.(a) Repræsentative EACSplots af de forskellige grupper af mus genereret af gatingonIL-6 cytometrisk perlearray. (b) Histogram, der viser koncentrationerne af cytokin IL6 i plasma i de forskellige dyregrupper. Søjler repræsenterer middelværdien±SD (i hver gruppe,= 10).<0.001each treated="" group="" versus="" sam-p8="" group="" (by="" one-way="" anova="" with="" post="" hoc="">

lindre aldersrelaterede sygdomme [18]. På denne baggrund var det signifikant, at kosttilskud med ECD i denne undersøgelse var i stand til at reducere perifere IL-6-koncentrationer, med den implikation, at denne effekt kan bidrage til de underliggende mekanismer til at reducere hyppigheden af ​​aldersrelaterede sygdomme, som er opnået gennem langvarig brug af ECD i klinisk praksis.

Sideløbende med ændringerne i det adaptive immunrespons, der opstår med alderen, er der også store ændringer i medfødt immunitet som en organismealder. Blandt disse har ændringer i naturlige dræberceller [18], den første linje af cellulære komponenter, der giver direkte cytotoksisk lysis af tumorceller og virusinficerede celler, været omfattende, da ældre mennesker viser øget modtagelighed for både tumorudvikling og virusinfektioner [32 ]. Denne undersøgelse indikerede, at CD3 plus Ly49 plus NK-celler var til stede i signifikant lavere niveauer i senile SAM-P8-mus sammenlignet med SAM-R1-kontroldyr, hvilket kan være en anden underliggende faktor, der tegner sig for ældre muss øgede modtagelighed for cancer og virusinfektion. Stigningen i niveauet af NK-celler set i denne undersøgelse efter kosttilskud med ECD kan derfor være gavnlig for ældre organismer i form af øget resistens over for tumorudvikling og virusinfektion. Der kræves dog yderligere undersøgelser for at afklare, hvilken rolle effekten af ​​ECD har på NK-celler i ældede organismer.

Som konklusion har denne undersøgelse vist, at behandling af den senescens-accelererede muse-tilbøjelige understamme, SAM-P8, med ECD kan inducere en signifikant reversering af aldersrelaterede immunosenescensændringer. Mangler i både perifere og miltcellepopulationer af naive T-celler og NK-celler blev reduceret, mens niveauer af overflødige hukommelsesceller også blev reduceret. Derudover var kosttilskud med ECD i stand til at undertrykke både nekroser i perifere lymfocytter og niveauerne af det proinflammatoriske cytokin, IL-6. Endelig, ud over at skabe ændringer i det senile immunsystem, forlængede ECD-kosttilskud signifikant levetiden for den senile SAM-P8 mikrofon.

Referencer

[1] Y.Jiang og PF.Tu, "Analyse af kemiske bestanddeleCistanchespecies, "Journal of Chromatography A, vol. 1216, nr. 11, s. 1970-1979, 2009.

[2] Q.Xiong K. Hase Y.Tezuka,T.Tani,T.Namba ogSKadota. "Hepatoprotektiv aktivitet af phenylethanoider fraCistanche deserticola," PlartaMedica, bind 64, nr. 2, s. 120-125, 1998.

[3]"Immunologi og aldring i Europa. Proceeding of the 2nd Conference on Basic Biology and Clinical Impact of Immunosenescence marts 22-26, 2001, Cordoba, Spanien, "Experimental Gerontology, vol. 37, no.{{5} }, s. 183-473, 2002.

[4] G.-D. Xuan og C.-Q. Liu, "Forskning påvirkning af phenylethanoid glycosider (PEG) af Cistanche deserticolapåanti aldringi gamle mus induceret af D-galactose,"Journal of Chinese Medicinal Materials, bind 31, nr. 9, s. 1385-1388, 2008.

[5] D.Aw, ABSilva og DBPalmer, "Immunosenescence emerging challenges for an aging population," Immwmology, vol.120, nr.4, pp.435-446,2007.