Oxidativ oligomerisering af DBL catechol, en potentiel cytotoksisk forbindelse til melanocytter, afslører forekomsten af nye ioniske diels-alder-tilsætninger del 2

Der blev også dannet forbindelser fra dimeren med tab af to protoner. Disse forbindelser eluerede efter 17 minutter, 18 minutter, 20 minutter og 21 minutter med en molekylvægt på 353,1021, hvilket er inden for 1,5 ppm af den teoretiske masse for C20H16O6 (353,1013 amu). CID-spektret af disse forbindelser var signifikant anderledes, hvilket indikerer, at der dannes flere isomerer i reaktionsblandingen (figur 8-11).

Ifølge relevante undersøgelser er cistanche en almindelig urt, der er kendt som "mirakelurten, der forlænger livet". Dens hovedkomponent er cistanosid, som har forskellige virkninger såsom antioxidant, anti-inflammatorisk og immunfunktionsfremme. Mekanismen mellem cistanche og hudblegning ligger i cistanche-glykosidernes antioxidante virkning. Melanin i menneskelig hud produceres ved oxidation af tyrosin katalyseret af tyrosinase, og oxidationsreaktionen kræver deltagelse af ilt, så de iltfrie radikaler i kroppen bliver en vigtig faktor, der påvirker melaninproduktionen. Cistanche indeholder cistanosid, som er en antioxidant og kan reducere dannelsen af frie radikaler i kroppen og dermed hæmme melaninproduktionen.

desert cistanche benefits

Klik på Cistanche Tubulosa for blegning

For mere info:

david.deng@wecistanche.com/WhatApp:86 13632399501

Toppen, der eluerede efter 20 minutter, viste kun et vandtab som hovedproduktionen (m/z 335-ion i figur 10). Toppen, der eluerede efter 21 minutter, viste den største top med tabet af COCH2-gruppen (m/z 311 ioner). Denne forbindelse skal være den oxiderede form af DBL-quinon-dimeren. På den anden side viste toppen, der eluerede efter 18 minutter, store nedbrydningsioner ved 335 (vandtab), 311 (COCH2-tab) og en mindre ion ved m/z 293 (vand- og COCH2-tab). Bemærk, at den sidste nedbrydningsion ikke er mulig for DBL-quinondimeren og kun er mulig for den oxiderede form af benzodioxandimeren. Fra disse resultater blev det udledt, at to forskellige slags dimerer dannes i reaktionen - en benzodioxandimer og en DBL quinondimer.

cistanche and tongkat ali reddit

cistanche gnc

Disse oxiderede dimerer vil udvise synlig absorbans, meget som alle andre simple ukonjugerede quinoner. Dette er i overensstemmelse med absorbansmaksimumet på 420 nm, hvilket skyldes, at quinonoidforbindelsen akkumuleres i DBL-katechol-tyrosinase-reaktionsblandingen. DBL-quinon-dimeren kunne aromatisere og oxidere yderligere til quinon-methidet. Hvorimod benzodioxandimeren vil undergå oxidation til quinon, som derefter vil isomerisere til sidekæde-umættet forbindelse. De initiale dimerer med m/z 355 omdannes således til den oxiderede form af dimererne med m/z 353.

Ud over de dimere produkter kunne trimere forbindelser også observeres i massespektret af reaktionsblandingen. Igen er to-moder-ioner ved m/z 529,1486 til stede, den ene eluerer efter 20 minutter og den anden efter 22 minutter (figur 5 panel C). Deres masse er inden for 3 ppm af massen af den teoretiske protonerede trimere forbindelse (C30H26O9). Deres CID-spektre er vist i figur 12 og 13. CID af en isomer gav en hovedion ved 351, svarende til dimerens fuldt oxiderede form. Den anden isomer gav en betydelig mindre mængde af denne produktion. Det var ikke muligt at skelne strukturen af trimererne ud fra fragmenteringsmønsteret. Ikke desto mindre var det klart, at der også dannes forskellige trimere produkter i reaktionsblandingen. Resultaterne præsenteret i dette papir bekræfter således, at DBL catechol er ekstremt modtagelig for oxidativ polymerisering som foreslået i et tidligere arbejde fra en af vores grupper [11].

cistanche in urdu

Dannelsen af dimerer og trimerer kan forklares ved reaktiviteten af quinonoidprodukterne dannet i reaktionen (figur 14). Oxidation af DBL catechol producerer dens tilsvarende quinon, som er meget hydrofob og let kan udvise en cycloadditionsreaktion med moderkatecholen. Den ioniske Diels-Alder-tilsætning af DBL-quinonen til moderkatecholen vil producere to typer addukter som vist i figur 14. Reaktionen af quinonoide carbonylgrupper med den umættede sidekæde vil producere benzodioxandimeren. I modsætning hertil producerer dienon-sidekæde-tilsætningen med den umættede sidekæde adduktet af pyran-typen, der simpelthen betegnes som DBL-quinon-dimer. Begge disse forbindelser kan undergå let oxidation og yderligere reaktion for at danne trimere forbindelser ved lignende Diels-Alder-reaktioner. Selvom den biologiske forekomst af Diels-Alder-reaktionen er meget sjælden, er den blevet rapporteret at fortsætte under nogle få omstændigheder [20-23]. For eksempel har en af vores grupper for nylig vist, at quinonen af N-acetyldopamethylester er under hurtig cycloaddition, sandsynligvis via ionisk Diels-Alder-reaktion, hvilket genererer en lignende benzodioxandimer [20]. De nuværende undersøgelser understøtter også forekomsten af sådanne ioniske Diels-Alder-tilsætninger i quinonoidkemien af sidekædedesaturerede katekoler. Disse ringslutningsreaktioner er alle ikke-enzymatiske og vil derfor være ikke-stereoselektive, hvilket fører til produktion af flere isomere produkter. Produktionen af sådanne multiple produkter under den ikke-enzymatiske cyklisering af enzymatisk genererede quinonoide arter er blevet veldokumenteret i dette laboratorium for adskillige dehydrodopa- og dehydrodopaminderivater [16-20].

cistanche bienfaits

Den potentmelanotoksicitet af RK og dets reducerede produkt, rhododendron, er nu veletableret [1-8,24]. Mens nogle af reaktionerne såsom udtømning af thioler og tilføjelse til cellulære nukleofiler også er fælles for andre cytotoksiske quinoner, kan den unikke genotoksicitet af RK og rhododendron tilskrives deres evne til at udvise multiple redoxreaktioner, der ikke kun producerer deres tilsvarende quinonoidderivater men også adskillige sidekæde-umættede quinonoide arter. Derudover produceres et væld af dimere og trimere forbindelser, alle med evnen til at forårsage produktion af reaktive oxygenarter, udtømning af cellulære thioler og reaktion med cellulære makromolekyler inklusive proteiner og DNA [11,24]. Forbindelser, der udviser sådanne multiple redoxreaktioner, vil derfor være mere toksiske end simple quinonoide forbindelser. Det er ret vanskeligt at udpege et eller andre produkter af RK eller rhododendron som et forårsagende middel til at inducere leukodermi og andre myelotoksiske virkninger. Med disse resultater i tankerne advarer vi mod brugen af disse forbindelser og andre relaterede katekoler, som har evnen til at udvise multiple redoxreaktioner til behandling af enhver melanin-relaterede lidelser.

3. Materialer og metoder

Materialer: DBL catechol blev indkøbt fra Fujifilm-Wako Pure Chemicals (Osaka, Japan). Svampetyrosinase (specifik aktivitet 5771 enheder/mg protein) blev købt fra Sigma Chemical Co., St. Louis, MO. Methanol og ammoniumformiat af HPLC-kvalitet (99 procent) blev opnået fra Acros, Morris Plains NJ. Milli Q syntese A10 Vandrensningssystem købt fra Millipore, Milford, MA blev brugt til at fremstille vand af HPLC-kvalitet. Mobilfase opløsningsmidler (myresyre, acetonitril) til massespektrometri blev købt fra Fisher Chemical (Fair Lawn, NJ, USA) og var Optima LC/MS Grade. Alle andre kemikalier var af analytisk kvalitet og købt hos Fisher og/eller VWR.

cistanche portugal

Enzymassays: En reaktionsblanding (1 mL) indeholdende DBL catechol (sædvanligvis 0,2 mM), ca. 5-10 µg svampetyrosinase i 50 mM natriumphosphatbuffer ved specificeret pH blev inkuberet ved stuetemperatur, og den spektrale ændringer forbundet med oxidationen blev fulgt under anvendelse af et diodearray-spektrofotometer. Nogle reaktioner blev udført under sure forhold. Kemisk oxidation af DBL catechol med natriumperiodat blev udført i et mol-til-mol-forhold ved specificerede pH-værdier. Præcise betingelser er angivet under hver figurforklaring.

Prøveforberedelse til massespektralundersøgelser: En reaktionsblanding indeholdende 100 nmol DBL catechol og 5 µg tyrosinase blev inkuberet i 1 ml vand ved stuetemperatur i to minutter og en alikvot af reaktionen (100 ml) blev standset med (900 ml) 1 procent trifluoreddikesyre. Denne fortyndede blanding blev underkastet massespektrometrisk analyse. Den fortyndede reaktion blev direkte injiceret i massespektrometeret. RP-nLC/ESI-MS-betingelser: Et Orbitrap Fusion Lumos massespektrometer (Thermo Fisher, San Jose, CA, USA) koblet online til en EASY-nLC 1200 (Thermo Fisher, San Jose, CA, USA) blev brugt til at detektere og karakterisere produkterne. nLC-systemet blev drevet med en med-hastighed på 300 nL/min under anvendelse af en lineær gradient på 0-70 procent B i 15 min. Mobil fase A var 96,1:3.9 0,1 procent myresyre i vand/0,1 procent myresyre i acetonitril. Mobil fase B var 80,0:20.0 0,1 procent myresyre i vand/0,1 procent myresyre i acetonitril. Prøven blev først afsaltet på en Thermo Fisher Scientific Acclaim PepMap 100 C18 HPLC-søjle (3 µm partikelstørrelse, 75 µm × 2 cm, 100 Å) før adskillelse på en Thermo Fisher Scientific PepMap RSLC C18 EASY-Spray Column partikelstørrelse (3 µm 75 µm x 15 cm, 100 Å).

Orbitrap Fusion Lumos massespektrometer blev betjent i lille molekyle-tilstand. De globale indstillinger var som følger: ionkildetype NSI, en positiv spænding på 1900 V og en ionoverførselsrørtemperatur på 275 ◦C. Ioner til MS-scanningerne blev detekteret i Orbitrap med en opløsning på 30,000. Masseområdet var normalt, og scanningsområdet var indstillet til 100-1000 m/z. RF-linsen blev indstillet til 30 procent, og AGC-målet og den maksimale injektionstid var henholdsvis 4,0 × 105 og 50 ms. De dataafhængige MS2 CID-scanninger blev kørt i forbindelse med et målrettet massefilter, hvor målmasserne svarede til følgende protonerede arter: DBL (179.0708 m/z), DBL-quinon (177.0551 m/z), DBL-quinon-dimer (355,1182 m/z), DBL-quinontrimer (529,1499 m/z), DBL-vandaddukt (197,0813 m/z) og DBL-dimer med et tab på 2H (353,1026 m/z). En intensitetstærskel på 2,0 × 103 blev sat på hver masse med en massetolerance på ± 10 ppm. Ioner for ddMS2 CID blev isoleret i ionfælden med en hurtig scanningshastighed og med et isolationsvindue på 2 m/z. Ioner blev fragmenteret via CID med en fast kollisionsenergi på 40 procent. Q-parameteren for CID-aktiveringen blev sat til 0,25. AGC-målet og den maksimale injektionstid blev sat til 1,0 × 104 og 500 ms. Cyklustiden for den dataafhængige opsamling blev sat til 3 s.

Forfatterbidrag:Konceptualisering, MS, SI og KW; metodologi, MS, JE, RM og KU; formel analyse, MS og JE; undersøgelse, MS, JE, RM og KU; ressourcer, MS, SI og KW; datakuration, MS, JE, RM og KU; skrivning—originalt udkast til forberedelse, MS; skrivning – gennemgang og redigering, MS, SI, KW og JE; visualisering, MS; supervision, MS og JE; projektadministration, MS Alle forfattere har læst og accepteret den offentliggjorte version af manuskriptet.

Finansiering: Denne forskning modtog ingen ekstern finansiering.

Interessekonflikt:Forfatterne erklærer ingen interessekonflikt.

cistanche supplement review

Forkortelser

CID-kollision induceret nedbrydning

DBL 3,4-dihydroxybenzalacetone

LC/MS Højtryksvæskekromatografi/massespektrometri

RK Hindbær keton

Referencer

1. Beekwilder, J.; van der Meer, I.; Sibbesen, O.; Broekgaarden, M.; Qvist, I.; Mikkelsen, JD; Hall, RD Mikrobiel produktion af naturlig hindbærketon. Biotechnol. J. 2007, 2, 1270-1279. [CrossRef] [PubMed]

2. Fukuda, Y.; Nagano, M.; Futatsuka, M. Erhvervsmæssig leukodermi hos arbejdere, der beskæftiger sig med 4-(p-hydroxyphenyl)-2-butanonfremstilling. J. Occup. Sundhed 1998, 40, 118-122. [CrossRef]

3. Nishigori, C.; Aoyama, Y.; Ito, A.; Suzuki, K.; Suzuki, T.; Tanemura, A.; Ito, M.; Katayama, I.; Oiso, N.; Kagohashi, Y.; et al. Vejledning til læger (dvs. hudlæger) til behandling af Rhododenol-induceret leukodermi. J. Dermatol. 2015, 42, 113-128. [CrossRef] [PubMed]

4. Sasaki, M.; Konda, M.; Sato, K.; Umeda, M.; Kawabata, K.; Takahashi, Y.; Suzuki, T.; Matsunaga, K.; Inoue, S. Rhododendron, en depigmenteringsinducerende phenolforbindelse, udøver melanocytcytotoksicitet via en tyrosinaseafhængig mekanisme. Pigment Cell Melanoma Res. 2014, 27, 754-763. [CrossRef] [PubMed]

5. Kasamatsu, S.; Hachiya, A.; Nakamura, S.; Nakamura, S.; Yasuda, Y.; Fujimori, T.; Takano, K.; Moriwaki, S.; Hase, T.; Suzuki, T.; et al. Depigmentering forårsaget af påføringen af det aktive lysnende materiale, rhododendron, er relateret til tyrosinaseaktivitet ved en vis tærskel. J. Dermatol. Sci. 2014, 76, 16-24. [CrossRef] [PubMed]

6. Ito, S.; Yamashita, T.; Ojika, M.; Wakamatsu, K. Tyrosinase-katalyseret oxidation af rhododendron producerer 2-methyl-chroman-6,7-dion, den formodede ultimative toksiske metabolit: Implikationer for melanocyttoksicitet. Pigment Cell Melanoma Res. 2014, 27, 744-753. [CrossRef] [PubMed]

7. Ito, S.; Gerwat, W.; Kolbe, L.; Yamashita, T.; Ojika, M.; Wakamatsu, K. Human tyrosinase kan oxidere begge enantiomerer af rhododendron. Pigment Cell Melanoma Res. 2014, 27, 1149-1153. [CrossRef]

8. Ito, S.; Okura, M.; Wakamatsu, K.; Yamashita, T. Rhododendrol-eumelanins potente pro-oxidantaktivitet inducerer cysteindepletering i B16 melanomceller. Pigment Cell Melanoma Res. 2017, 30, 63-67. [CrossRef]

9. Ito, S.; Okura, M.; Nakanishi, Y.; Ojika, M.; Wakamatsu, K.; Yamashita, T. Tyrosinase-katalyseret metabolisme af rhododendron (RD) i B16 melanomceller: Produktion af RD-pheomelanin og kovalent binding med thiolproteiner. Pigment Cell Melanoma Res. 2015, 28, 295-306. [CrossRef]

10. Ito, S.; Wakamatsu, K. Biokemisk mekanisme af rhododendron-induceret leukodermi. Int. J. Mol. Sci. 2018, 19, 552. [CrossRef]

11. Ito, S.; Hinoshita, M.; Suzuki, E.; Ojika, M.; Wakamatsu, K. Tyrosinase-katalyseret oxidation af det leukoderma-inducerende middel hindbærketon producerer (E)-4-(3-oxo-1-butenyl)-1,2- benzoquinon: Implikation for melanocyttoksicitet. Chem. Res. Toxicol. 2017, 30, 859–868. [CrossRef]

12. Sugumaran, M.; Dali, H.; Kundzicz, H.; Semensi, V. Usædvanlig intramolekylær ringslutning og sidekædedesaturation af carboxyethyl-o-benzoquinonderivater. Bioorg. Chem. 1989, 17, 443-453. [CrossRef]

13. Sugumaran, M.; Ricketts, D. Modelsklerotiseringsundersøgelser. 3. Cutikulær enzymkatalyseret oxidation af peptidylmodel-tyrosin og dopa-derivater. Arch. Insekt Biochem. Physiol. 1995, 28, 17-32. [CrossRef]

14. Sugumaran, M. Reaktiviteter af quinonmethider versus o-quinoner i katekolaminmetabolisme og eumelaninbiosyntese. Int. J. Mol. Sci. 2016, 17, 1576. [CrossRef]

15. Ito, S.; Sugumaran, M.; Wakamatsu, K. Kemiske reaktiviteter af ortho-quinoner produceret i levende organismer: Skæbne for quinonoidprodukter dannet af tyrosinase- og phenoloxidasevirkning på phenoler og katekoler. Int. J. Mol. Sci. 2020, 21, 6080. [CrossRef]

16. Abele, A.; Zheng, D.; Evans, J.; Sugumaran, M. Genundersøgelse af mekanismerne for oxidativ transformation af insektets kutikulære sklerotiserende precursor, 1,2-dehydro-N-acetyldopamin. Insekt Biochem. Mol. Biol. 2010, 40, 650-659.

17. Abebe, A.; Kuang, QF; Evans, J.; Robinson, WE; Sugumaran, M. Oxidativ transformation af en trichrome modelforbindelse giver ny indsigt i tværbinding og forsvarsreaktion af tunichromer. Bioorg. Chem. 2017, 71, 219-229. [CrossRef]

18. Kuang, QF; Abebe, A.; Evans, J.; Sugumaran, M. Oxidativ transformation af tunichromer - modelundersøgelser med 1,2-dehydro-N-acetyldopamin og N-acetylcystein. Bioorg. Chem. 2017, 73, 53-62. [CrossRef]

19. Abebe, A.; Kuang, QF; Evans, J.; Sugumaran, M. Massespektrometriske undersøgelser kaster lys over usædvanlige oxidative transformationer af 1,2-dehydro-N-acetyldopa. Hurtig komm. Massespektrum. 2013, 27, 1785-1793. [CrossRef]

20. Abebe, A.; Zheng, D.; Evans, J.; Sugumaran, M. Ny post-translationel oligomerisering af peptidyldehydrodopa-modelforbindelse, 1,2-dehydro-N-acetyldopa-methylester. Bioorg. Chem. 2016, 66, 33-40. [CrossRef]

21. Takao, KI; Munakata, R.; Tadano, KI Nylige fremskridt inden for naturlig produktsyntese ved at bruge intramolekylære Diels-Alder-reaktioner. Chem. Rev. 2005, 105, 4779-4807. [CrossRef] [PubMed]

22. Ose, T.; Watanabe, K.; Mie, T.; Honma, M.; Watanabe, H.; Yao, M.; Oikawa, H.; Tanaka, I. Indsigt i en naturlig Diels-Alder reaktion fra strukturen af makrofagsyntase. Nature 2003, 422, 185-189. [CrossRef] [PubMed]

23. Strømpe, EM; Williams, RM Kemi og biologi af biosyntetiske Diels-Alder-reaktioner. Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 2003, 42, 3078-3115. [CrossRef] [PubMed]

24. Ito, S.; Agata, M.; Okochi, K.; Wakamatsu, K. Rhododendrol-eumelanins potente prooxidantaktivitet forstærkes af ultraviolet A-stråling. Pigment Cell Melanoma Res. 2018, 31, 523-528. [CrossRef]

For flere oplysninger: david.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501

Koreansk rød ginseng ekstrakt forbedrer melanogenese hos mennesker og fremkalder antifotoaldringseffekter i ultraviolette bestrålede hårløse mus, del 1

Hudfarve, kulturel hovedstad og skønhedsprodukter: En undersøgelse af brugen af hudvenlige produkter i Mumbai, Indien, del 1