Forskning i multi-indeks omfattende kvalitetsevaluering af cistanches Herba baseret på CRITIC-vægtmetoden

WEI Wei, QI Yuning, CHEN Weiying, ZHU Shunjuan, HOU Jianzhong
(Jiuquan kvalitetsinspektions- og testcenter i Gansu-provinsen, Jiuquan, Gansu 735000, Kina)

Abstrakt:Målet var at etablere en multi-indeks omfattende evalueringsmetode til vurdering af kvaliteten af ​​Cistanche deserticola, og at videnskabeligt evaluere kvalitetsforskellene mellem Cistanches Herba fra forskellige kilder (Cistanche deserticola og Cistanche tubulosa) og forskellige produktionsområder. Indholdet af fem phenylethanoidglycosider (echinacosid, verbascosid, tubulosid A, isoacteosid og 2'-acetylacteosid) blev bestemt ved hjælp af højtydende væskekromatografi (HPLC). CRITIC-vægtningsmetoden blev anvendt til at beregne vægten af ​​hver komponent, og prøvernes omfattende score blev beregnet. Klyngeanalyse blev anvendt til at analysere mønstrene for kvalitetsforskelle mellem prøverne. Resultaterne viste, at der blev observeret kvalitetsforskelle mellem Cistanche deserticola og Cistanche tubulosa. Evalueringsscorerne for Cistanche tubulosa var generelt højere end for Cistanche deserticola. Klyngeanalyse grupperede Cistanche deserticola og Cistanche tubulosa i forskellige kategorier. Kvaliteten af ​​Cistanche deserticola viste minimal variation, mens kvaliteten af ​​Cistanche tubulosa varierede på tværs af forskellige produktionsområder. Modellen etableret i denne undersøgelse kan objektivt kvantificere kvalitetsforskellene mellem Cistanches Herba fra forskellige oprindelser og produktionsområder, hvilket giver et videnskabeligt grundlag for kvalitetsevalueringen af ​​Cistanche.

Nøgleord: Cistanches Herba;CRITIC vægt metode; klyngeanalyse;kvalitetsevaluering

Cistanche herba ekstrakt til salg

 

 

 

 

 

Cistanches Herba består af de tørrede, skællende saftige stængler af Cistanche deserticola YC Ma eller Cistanche tubulosa (Schenk) Wight, førstnævnte almindeligvis kendt som ørkencistanche. Cistanches Herba er varm af natur og sød og salt i smagen. Det tonificerer nyre-yang, gavner essens og blod og fugter tarmene for at lindre forstoppelse. Det bruges til nyre-yang-mangel, mangel på essens og blod, impotens og infertilitet, ømhed og svaghed i talje og knæ, svaghed i muskler og knogler og tørhed i tarmen med forstoppelse. Dets farmakologisk aktive komponenter - såsom phenylethanoidglycosider, polysaccharider og iridoider - er blevet bekræftet at have antioxidant-, anti-aldrings-, immunmodulerende og neurobeskyttende aktiviteter. Som et berømt traditionelt kinesisk medicinsk materiale er det opført som en top-grade urt i Shennongs Classic of Materia Medica og er kendt som "ørkenens ginseng." Det er hovedsageligt fordelt i de nordvestlige regioner i Indre Mongoliet, Gansu, Xinjiang og Ningxia.

Med stigende markedsefterspørgsel er vilde ressourcer ved at blive udtømt, og kunstig dyrkning er blevet mainstream. 2005-udgaven af ​​Folkerepublikken Kinas Pharmacopoeia udvidede Cistanche tubulosa som en lovlig botanisk kilde til Cistanches Herba. De to kilder har separate testgrænser, men kun for ekstraktiver og indholdet af echinacosid og verbascoside, som ikke fuldt ud kan afspejle multikomponent-, multi-target-egenskaberne ved traditionel kinesisk medicin. Den kemiske sammensætning af Cistanches Herba varierer på grund af produktionsområde, høsttid og forarbejdningsmetoder. Derfor er etablering af et videnskabeligt og systematisk kvalitetsevalueringssystem af stor betydning for at sikre sikkerheden og effektiviteten af ​​medicinske materialer og fremme bæredygtig industriel udvikling. I denne undersøgelse blev 20 partier af Cistanches Herba fra forskellige produktionsområder i Jiuquan analyseret. HPLC blev brugt til samtidig at bestemme fem phenylethanoidglycosider-echinacosid, tubulosid A, verbascosid, isoacteosid og 2'-acetylacteosid. CRITIC-vægtningsmetoden blev brugt til at tildele vægte til hver indikator for en omfattende kvalitetsevaluering af de to botaniske kilder, og klyngeanalyse (CA) blev brugt til at fortolke forskelle efter botanisk oprindelse og produktionsområde med det formål at give et videnskabeligt grundlag for kvalitetsevaluering af Cistanches Herba.

1 Instrumenter og materialer af cistanche

1.1 Instrumenter og udstyr

Agilent 1260 Infinity HPLC-system [inklusive en kvartær pumpe, autosampler, kolonneovn og DAD-detektor; Agilent Technologies (China) Co., Ltd.]; XP205DR elektronisk analytisk vægt (Mettler-Toledo Instruments Co., Ltd.); KQ-500DE ultralydsrenser (Kunshan Ultrasonic Instruments Co., Ltd.).

 

1.2 Reagenser

Referencestandarder: verbascosid (batchnr.. 111530-201914, renhed 95,2 %) og echinacosid (batchnr.. 111670-201706, renhed 89,7 %) blev købt fra National Institutes for Food and Drug Control; tubulosid A (batchnr. B20471, renhed større end eller lig med 98%), isoacteosid (batchnr. B21535, renhed større end eller lig med 98%) og 2'-acetylacteosid (batchnr. B21779, renhed større end eller lig med 98% BioTech.Yanology, Shanghai, Shanghai, Yuan %) Methanol var af HPLC-kvalitet (Merck). Ultrarent vand blev tilberedt internt. Andre reagenser var af analytisk kvalitet.

 

1.3 Prøver

Ti partier Cistanche deserticola og ti partier Cistanche tubulosa blev indsamlet fra Cistanches Herba-dyrkningsbaser og apoteker i Jiuquan-området, mærket R1-R20 (se tabel 1). De blev identificeret af vicedirektør og TCM-farmaceut Hou Jianzhong fra Jiuquan Quality Inspection and Testing Center som de tørrede, skællende saftige stængler af Cistanche deserticola YC Ma eller Cistanche tubulosa (Schenk) Wight. Kuponprøver deponeres hos Drug and Cosmetics Testing Institute i Jiuquan Quality Inspection and Testing Center.

Tabel 1 Kildeoplysninger om prøver fra Cistanches Herba

R1|Cistanche deserticola|Dazhuangzi Town, Jinta County, Jiuquan City

R2|Cistanche deserticola|Jiashan New Town, Suzhou District, Jiuquan City

R3|Cistanche deserticola|Xiqu Town, Jinta County, Jiuquan City

R4|Cistanche deserticola|Zhonghe Town, Jinta County, Jiuquan City

R5|Cistanche deserticola|Shuanglong Town, Suzhou District, Jiuquan City

R6|Cistanche deserticola|Hongliu Town, Guazhou County, Jiuquan City

R7|Cistanche deserticola|Hongshagang Town, Dunhuang City, Jiuquan

R8|Cistanche deserticola|Yumen City, Jiuquan

R9|Cistanche deserticola|Tashi Town, Guazhou County, Jiuquan City

R10|Cistanche deserticola|Zongtai Township, Yumen City, Jiuquan

R11|Cistanche tubulosa|Dazhuangzi Town, Jinta County, Jiuquan City

R12|Cistanche tubulosa|Suzhou-distriktet, Jiuquan City

R13|Cistanche tubulosa|Suzhou-distriktet, Jiuquan City

R14|Cistanche tubulosa|Suzhou-distriktet, Jiuquan City

15 kr|Cistanche tubulosa|Suzhou-distriktet, Jiuquan City

R16|Cistanche tubulosa|Hongshagang Town, Dunhuang City, Jiuquan

R17|Cistanche tubulosa|Hongshagang Town, Dunhuang City, Jiuquan

R18|Cistanche tubulosa|Hongshagang Town, Dunhuang City, Jiuquan

R19|Cistanche tubulosa|Liangzhong Township, Yumen City, Jiuquan

20 kr|Cistanche tubulosa|Liugou Township, Anxi County, Jiuquan

 

2 Metoder og resultater

2.1 Fremstilling af blandet referenceopløsning

Vej nøjagtigt verbascosid 10,45 mg, echinacosid 11,56 mg, tubulosid A 10,59 mg, isoacteosid 19,63 mg og 2'-acetylacteosid 9,03 mg i separate 50 ml målekolber, opløs med 5 volumenprocent methanol. Bland godt for at opnå stamreferenceopløsningerne. Derefter pipetteres nøjagtigt 1,00 mL af hver stamopløsning i en 10 mL målekolbe, fortyndes til volumen med 50 % methanol, og blandes for at opnå den blandede referenceopløsning.

Supportive Service Of Wecistanche-For flere detaljer om samarbejde
E-mail:wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/tlf.:+86 15292862950

 

2.2 Forberedelse af testopløsninger

Før prøvepulver gennem en Nej. 3 sigte; vej ca. 1 g nøjagtigt i en 100 ml brun målekolbe. Tilsæt 80 ml 50 % methanol, prop, ryst, vej, blød i 30 minutter og soniker i 40 minutter (250 W, 35 kHz). Afkøl til stuetemperatur, vej igen, tilsæt 50 % methanol for at kompensere for vægttab, ryst godt, lad det stå, dekantér supernatanten og filtrer. Saml det efterfølgende filtrat som testopløsningen.

 

2.3 Kromatografiske forhold

Brug en InertSustain C18-søjle (4,6 mm × 250,0 mm, 5 μm). Mobil fase: methanol (A) og 0,1 % phosphorsyreopløsning (B). Gradient for fase A: 0–6 min, 20 %; 6–18 min, 20 %→30 %; 18–35 min., 30 %→45 %. Strømningshastighed: 1,0 ml/min; kolonnetemperatur: 35 grader; detektionsbølgelængde: 330 nm; injektionsvolumen: 10 μL. Teoretiske plader for hver komponent var ikke mindre end 5.000. Kromatogrammerne for den blandede referenceopløsning og testopløsningerne er vist i figur 1.

 

2.4 Metodevalidering til indholdsbestemmelse

2.4.1 Præcisionstest

Injicer den blandede referenceopløsning fra afsnit 2.1 seks gange i træk under betingelserne i afsnit 2.3. RSD'erne for toparealer for alle analytter var mindre end eller lig med 0,86%, hvilket indikerer god instrumentpræcision.

 

2.4.2 Repeterbarhedstest

Vej nøjagtigt seks portioner af prøve R2 (ca. 1,0 g hver) og klargør seks testopløsninger pr. afsnit 2.2. Analyser under betingelserne i afsnit 2.3. RSD'erne for topområder var mindre end eller lig med 1,12%, hvilket indikerer god metodegentagelighed.

 

2.4.3 Stabilitetstest

Forbered en testopløsning fra prøve R1 som i afsnit 2.2. Injicer ved 0, 2, 4, 8, 12 og 24 timer under betingelserne i afsnit 2.3. RSD'erne for topområder var mindre end eller lig med 1,20%, hvilket indikerer god opløsningsstabilitet inden for 24 timer.

 

2.4.4 Linearitet

Forbered en række blandede referenceopløsninger ved nøjagtigt at pipettere 0,2, 0,4, 0,6, 0,8, 1,0 og 2,0 ml af hver stamopløsning i 10 ml målekolber og fortynde til volumen med 50 % methanol. Injicer under betingelserne i afsnit 2.3. Plot koncentration versus topareal for at opnå kalibreringsligninger og lineære områder (tabel 2). Resultaterne viste god linearitet for echinacosid, tubulosid A, verbascosid, isoacteosid og 2'-acetylacteosid inden for deres respektive områder.

Tabel 2 Resultater af linearitetsundersøgelsen

Echinacoside|y=2397.4x − 15,363|r=0.9987|lineært område: 0,0046–0,0462 mg·L−1

Tubulosid A|y=9428.7x − 7,104|r=0.9984|lineært område: 0,0024–0,0242 mg·L−1

Verbascoside|y=12609.5x − 8,507|r=0.9986|lineært område: 0,0024–0,0418 mg·L−1

Isoacteosid|y=11600.3x − 11,359|r=0.9985|lineært område: 0,0079–0,0786 mg·L−1

2'-Acetylacteosid|y=10901.8x − 5,216|r=0.9985|lineært område: 0,0036–0,0362 mg·L−1

2.4.5 Genopretning
Forbered ni portioner af en prøve med kendt indhold (R1), ca. 0,5 g hver. Spike ved 50 %, 100 % og 150 % af det nominelle indhold med passende mængder af verbascosid, echinacosid, tubulosid A, isoacteosid og 2'-acetylacteosid. Forbered testopløsninger i henhold til afsnit 2.2 og analyser i henhold til afsnit 2.3. Gennemsnitlige gendannelser var 99,58%, 99,24%, 100,26%, 99,84% og 100,46%, med RSD'er på henholdsvis 1,26%, 1,67%, 1,03%, 1,39% og 1,71%, hvilket indikerer god nøjagtighed.

 

2.4.6 Indholdsbestemmelse

Vej nøjagtigt ca. 1 g Cistanche deserticola og Cistanche tubulosa-pulvere, klargør testopløsninger i henhold til afsnit 2.2, analyser i henhold til afsnit 2.3, og beregn indholdet af verbascosid, echinacosid, tubulosid A, isoacteosid og 2'-acetylacteosid. Resultaterne er vist i tabel 3.

Tabel 3 Bestemmelsesresultater af indholdet af fem komponenter i Cistanches Herba (mg·g−1)

R1: Echinacoside 4,81|Tubulosid A 0,16|Verbascoside 0,58|Isoacteosid 0,26|2'-acetylacteosid 0,49

R2: 5.02 | 0.13 | 0.70 | 0.30 | 0.61

R3: 6.62 | 0.24 | 0.67 | 0.21 | 0.43

R4: 5.25 | 0.18 | 0.82 | 0.34 | 0.67

R5: 5.63 | 0.17 | 0.75 | 0.21 | 0.39

R6: 6.85 | 0.24 | 0.91 | 0.29 | 0.44

R7: 6.08 | 0.23 | 0.63 | 0.20 | 0.54

R8: 5.17 | - | 0.49 | 0.18 | 0.24

R9: 6.78 | 0.28 | 0.73 | 0.27 | 0.37

R10: 5.44 | 0.19 | 0.68 | 0.24 | 0.26

R11: 16.77 | 0.97 | 1.20 | 1.19 | -

R12: 13.80 | 1.22 | 2.07 | 1.98 | 0.08

R13: 17.06 | 2.09 | 4.82 | 2.08 | 0.14

R14: 18.56 | 2.86 | 4.76 | 2.89 | 0.16

R15: 20.47 | 3.62 | 5.17 | 1.84 | 0.21

R16: 15.38 | 3.16 | 3.86 | 1.09 | 0.18

R17: 16.23 | 2.97 | 4.43 | 1.44 | 0.17

R18: 15.02 | 2.40 | 3.59 | 1.38 | 0.18

R19: 17.56 | 3.06 | 4.91 | 1.52 | 0.19

R20: 14.87 | 2.64 | 4.05 | 1.26 | 0.20

 

2.5 Kvalitetsevaluering ved hjælp af vægtningsmetoden CRITIC

2.5.1 Datastandardisering

Da det målte indhold af indikatorerne varierede væsentligt, blev hver indikator behandlet som en fordels-type indikator og standardiseret til [0, 1] området ved hjælp af formel (1).

 

2.5.2 Bestemmelse af vægte

De standardiserede resultater af de 20 batches blev importeret til SPSSPRO online databehandlingsplatformen, og CRITIC-metoden blev brugt til at beregne vægte (tabel 4). Som vist i tabel 4 var informationsindholdet (1,936) af 2'-acetylacteosid signifikant højere end for andre indikatorer (0,683-0,758), hovedsagelig på grund af dets meget høje konfliktmål (6,786), hvilket indikerer meget lav korrelation med andre indikatorer. Det gav således unik information i evalueringssystemet og tegnede sig for 40,112% af den samlede vægt, og blev den dominerende indikator. Vægten af ​​de andre fire indikatorer (echinacosid, tubulosid A, verbascosid og isoacteosid) var relativt afbalancerede.

Tabel 4 Beregningsresultater af vægtningsfaktorer

Indikator: Echinacoside|Variabilitet 0,367|Konflikt 2.064|Oplysninger 0,758|Vægt 15,705 %

Indikator: Tubulosid A|0,352|1.940|0,683|14,150 %

Indikator: Verbascoside|0,392|1.881|0,737|15,275 %

Indikator: Isoacteosid|0,330|2.157|0,713|14,759 %

Indikator: 2′-Acetylacteosid|0,285|6.786|1.936|40,112 %

 

2.5.3 Omfattende evaluering

Baseret på de fastlagte vægte blev de omfattende evalueringsscore for de 20 batches beregnet ved hjælp af formel (2). Resultaterne er vist i tabel 5. Der blev fundet markante scoreforskelle mellem de to botaniske kilder. Cistanche tubulosa havde generelt højere indhold af echinacosid og verbascosid, hvilket førte til højere omfattende score end Cistanche deserticola.

Tabel 5 CRITIC omfattende evalueringsscore for Cistanches Herba

R1: 0,307 (rang 14)

R2: 0,386 (rang 10)

R3: 0,292 (rang 15)

R4: 0,432 (rang 8)

R5: 0,258 (rang 17)

R6: 0,313 (rang 13)

R7: 0,351 (rang 12)

R8: 0,147 (rang 20)

R9: 0,265 (rang 16)

R10: 0,179 (rang 19)

R11: 0,236 (rang 18)

R12: 0,335 (rang 12)

R13: 0,533 (rang 4)

R14: 0,632 (rang 2)

R15: 0,667 (rang 1)

R16: 0,497 (rang 6)

R17: 0,530 (rang 5)

R18: 0,469 (rang 7)

R19: 0,565 (rang 3)

R20: 0,425 (rang 9)
 

 

2.6 Klyngeanalyse

Det målte indhold af de 20 batches blev importeret til SPSS 20.0. Den fjerneste nabometode og kvadreret euklidisk afstand blev brugt som metrik, og kobling mellem grupper blev anvendt til klyngedannelse (se figur 2). Resultaterne indikerede forskelle i kvalitet mellem de to botaniske kilder: Cistanche deserticola og Cistanche tubulosa samlet i separate grupper. Cistanche deserticola viste lille intragruppe variation, mens Cistanche tubulosa udviste kvalitetsforskelle mellem produktionsområder og kunne yderligere opdeles i tre undergrupper, hvilket generelt var i overensstemmelse med den CRITIC-baserede omfattende evaluering.