Abstrakt

Det plante-afledte toksin aristolochic acid (AA) er årsagen til urte-nefropati og Balkan-nefropati. Højdosis AA-indtagelse kan forårsage akut nyreskade, mens kronisk lavdosis AA-indtagelse kan føre til progressiv nyresygdom. Indtaget AA optages af renale tubulære epitelceller, hvilket fører til DNA-skade og celledød. Procyclin D (CypD) er involveret i mitokondrierafhængig celledød, men hvorvidt denne mekanisme spiller en rolle ved akut eller kronisk AA-induceret nyreskade er uklart. Vi adresserede dette spørgsmål ved at udsætte CypD-/- og vildtype (WT) mus for akut højdosis eller kronisk lavdosis AA. 5 mg/kg AA-sondesonde i 3 dage i WT-mus inducerede akut nyreskade som påvist ved tab af nyrefunktion, tubulær celleskade og død og neutrofil infiltration. Alle disse parametre blev signifikant reduceret i CypD-/- mus. kronisk lavdosis (2 mg/kg AA) administration i WT-mus resulterede i kronisk nyresygdom med nedsat nyrefunktion og nyrefibrose efter 28 dage. CypD-/- mus var imidlertid ikke beskyttet mod AA-induceret kronisk nyresygdom. Som konklusion fremmer CypD AA-induceret akut nyreskade, men CypD fremmer ikke overgangen fra akut nyreskade til kronisk nyresygdom under vedvarende AA-eksponering.

Nøgleord

akut nyreskade; aristolochic syre; celledød; kronisk nyresygdom; cyclophilin D; betændelse; nyrefibrose;Cistanche tubulosa

Klik her for at købeCistanche ekstrakt

Introduktion

Aristolochic acid (AA) er en nitrophenanthrencarboxylsyre, der findes i familien Aristolochiaceae, som omfatter næsten 500 plantearter.AA består hovedsageligt af en blanding af to metabolitter, 8-methoxy-6-nekrofil-(3) ,4-d)-1,3-deoxy-5-carboxylsyre (AAI) og 6-nekrofil-(3,4-d){{ 13}},3-deoxy-5-carboxylsyre (AAII) [1]. Undersøgelser af endemisk nyresygdom på Balkan identificerede AA som det nefrotoksin, der er ansvarligt for denne miljørelaterede sygdom [2]. Aristolochia-arter, der vokser i marker med kornafgrøder i regionen, forurener bagemel, og langsigtet forbrug af AA forårsager kronisk nyresygdom, nyresten og blærekræft [1]. Aristolochia spp. bruges også til fremstilling af forskellige naturlægemidler, hvor AA er blevet identificeret som et forårsagende toksin ved urte-nefropati [3]. I en undersøgelse af 300 patienter med urte-nefropati var akut nyreskade og langsommere fremadskridende kronisk nyresygdom forbundet med henholdsvis høje eller lave niveauer af AA-indtag [4]. Identifikation af AA som et almindeligt toksin i disse sygdomme fører til udtrykket aristolochic acid nefropati (AAN). Der er ingen behandling for AAN, så det er afgørende at forstå de mekanismer, hvorved AA inducerer akut og kronisk nyreskade.

Renale tubulære epitelceller er meget følsomme over for AA-toksicitet, fordi de udtrykker det organiske aniontransporterprotein OAT1/3, som effektivt er i stand til at optage AA i cellerne [5]. Intracellulært reagerer AA med DNA-baser for at producere DNA-addukter, der kan føre til en: T → T: en transformation, hvilket resulterer i DNA-skade og muligvis kræftudvikling [1]. Derudover inducerer AA døden af ​​dyrkede tubulære epitelceller ved at inducere høje niveauer af reaktive oxygenarter (ROS) [6]. Både mus og rotter er følsomme over for de toksiske virkninger af AA, og derfor kan mekanismen for AA-induceret nefrotoksicitet undersøges in vivo. En enkelt høj dosis af AA-induceret akut nyresvigt med tubulær nekrose hos dyr, hvorimod gentagne lave doser af AA-induceret kronisk nyresygdom med tubulær atrofi og fibrose [7,8].

Procycliner er en gruppe af bredt udtrykte enzymer med peptidyl cis-trans isomerase (PPIase) aktivitet, der er involveret i proteinfoldning. Cyclophilin D (CypD), også kendt som Peptidylprolyl Isomerase F (PPIF), er en komponent i den mitokondrielle membranpermeabilitetsovergangspore (mPTP). Efter celleskade åbnes mPTP på grund af overskydende ROS eller andre stressfaktorer, hvilket fører til frigivelse af cytokrom c i cytoplasmaet og efterfølgende celledød [9]. CypD-gendeletionsmus er fænotypisk normale, men CypD-/- mus er resistente over for nyreiskæmi/reperfusionsskade eller cisplatin-toksicitetsinduceret tubulær nekrose og akut nyresvigt [10-13]. Derudover er CypD-/- mus beskyttet mod den unilaterale ureterale obstruktion (UUO) model for nyrefibrose [14]. Det er dog ikke klart, om CypD spiller en rolle i AA-induceret TEC-skade. I denne undersøgelse undersøgte vi rollen af ​​CypD i højdosis AA-induceret akut nyreskade og kronisk lavdosis AA-induceret nyrefibrose.

Urte Cistanche

Resultater

Cyclophilin D deletion beskytter mod aristolochic syre-induceret akut nyreskade

Plasma-kreatininniveauer i sunde vildtype (WT) C57BL6/J mus varierede fra 8 til 16 μ mol/L. Administration af 5 mg/kg AA til WT-mus resulterede i et akut fald i nyrefunktionen på dag 3, defineret som en 3-fold stigning i plasmakreatininniveauer (interval 30 til 53 μ mol/L). Sammenlignet med WT-kontrolmus blev tubulære epitelceller fra WT-mus signifikant og histologisk beskadiget på dag 3 efter AA-administration. Den apikale børstekant gik tabt, celler var hævede, kerner gik tabt, celler blev kastet ind i det rørformede lumen, og der blev dannet afstøbninger i det rørformede lumen. Tubulær nekrose var synlig under høj forstørrelse. Vi vurderede også celledød ved farvning for spaltet caspase 3. WT-kontrolmus manglede spaltede caspase 3-farvninger, men på dag 3 efter AA-administration viste et stort antal tubulære epitelceller spaltede caspase 3-farvninger. I overensstemmelse med disse histologiske træk ved celleskade og celledød var mRNA-niveauer af den tubulære skadesmarkør Kim1 signifikant forhøjet, hvorimod mRNA-niveauer af det beskyttende protein -Klotho var signifikant reduceret.

Nyrestrukturen og funktionen var normal i CypD-gendeletion (CypD-/-) mus. En enkelt administration af 5 mg/kg AA beskyttede signifikant CypD-/- mus mod akut nyreskade. Selvom plasmakreatininniveauer var let forhøjede i 5/10 CypD-/- mus, var gennemsnitlige plasmakreatininniveauer signifikant lavere end i WT AA-gruppen og ikke signifikant forskellige fra dem for CypD-/-, der ikke var behandlet med AA. Et lignende billede var tydeligt i analysen af ​​renal tubulær skade, hvor CypD-/- dag 3 AA-gruppen viste signifikante reduktioner i histologisk tubulær skade, spaltede caspase--3--farvede celleantal og Kim1-mRNA-niveauer, samt en betydelig beskyttelse mod reducerede -Klotho mRNA niveauer.

Cyclophilin D-deletion beskytter mod akut aristolochic syre-induceret leukocytinfiltration

Neutrofiler var stort set fraværende i nyrerne i WT- og CypD-/- kontrolgrupperne. Et stort antal Ly6G plus neutrofile infiltrater var imidlertid tydelige i området med tubulær skade i WT-mus på dag 3 efter AA-administration. neutrofil infiltration blev signifikant reduceret i CypD-/-a-gruppen. I modsætning til neutrofiler var der et stort antal residente F4/80 plus makrofager i WT og CypD-/- kontrolnyrer. Selvom makrofager var øget i området med tubulær skade, nåede de ikke statistisk signifikans i hverken WT AA-gruppen eller CypD-/- AA-gruppen. t-celler var stort set fraværende i WT- og CypD-/- kontrolnyrer. Et lille, men signifikant T-celleinfiltrat blev set i nyrerne af både WT- og CypD-A-mus på dag 3 AA, selvom der ikke var nogen forskelle mellem WT- og CypD-/- mus.

Cyclophilin D deletion beskytter ikke mod kronisk aristolochic syre-induceret nyresygdom

WT-mus givet 2 mg/kg AA hver 2. dag i 28 dage resulterede i kronisk nyresygdom med en 2.6--fold stigning i plasmakreatininniveauer. Histologisk undersøgelse afslørede fremtrædende tubulær atrofi og dilatation, delvis tubulær støbning og i det væsentlige normale glomeruli. dag 28 AA af WT viste ikke signifikant tubulær nekrose, men der var signifikant lysis af et stort antal caspase 3-farvede celler (sandsynligvis apoptotiske celler), selvom dette var reduceret med 66 procent sammenlignet med dag 3 af WT AA (P < 0.001). Kim1-mRNA-niveauer steg, og a-Klotho-mRNA-niveauer faldt i WT AA-gruppen på dag 28; disse ændringer var større end i WT AA-gruppen på dag 3 (;p < 0,001). CypD-/- mus var ikke beskyttet mod kronisk AA-induceret nyresygdom. De udviste plasmakreatininniveauer, histologiske skader, Kiml- og a-Klotho-mRNA-niveauer og et antal spaltede caspase-3--farvede celler, der kan sammenlignes med dem fra dag 28 AA WT-mus.

Cyclophilin D deletion beskytter ikke mod kronisk aristolochic syre-induceret nyrefibrose

Interstitiel fibrose er et kendetegn for kronisk nyresygdom og er karakteriseret ved kollagenaflejring, aggregering af -SMA plus myofibroblaster, makrofaginfiltration og tab af peritubulære kapillærer [15]. Sammenlignet med WT og CypD-/- kontrolnyrer, hvor type IV kollagen var lokaliseret til de glomerulære og tubulære basalmembraner (såvel som karvæggen), var diffus type IV kollagenaflejring øget i den interstitielle region af 28- dag AA WT mus. En 2-fold stigning i interstitiel type IV kollagenaflejring var forbundet med en signifikant stigning i nyre type I kollagen mRNA niveauer. en 3.5- stigning i A - SMA mRNA-niveauer blev set med en signifikant akkumulering af myofibroblaster. I WT-mus var der også signifikant makrofaginfiltration på dag 28 AA, hvilket fremgår af forhøjede niveauer af CD68-mRNA og signifikant forhøjet ekspression af CD206 - en alternativt aktiveret makrofagmarkør forbundet med fremme af nyrefibrose [15]. Derudover viste AA WT-mus et signifikant fravær af CD31 plus peritubulære kapillærer på dag 28 sammenlignet med WT-kontrolmus.

Urte Cistanche

Diskussion

Tubulær nekrose er et træk ved akut nyreskade, når giftige kemikalier, såsom lægemidler (f.eks. cisplatin, vancomycin, gentamicin og mucin) og phytonephrotoksiner (f.eks. aristolochic acid og Cynarin) fortrinsvis optages af renale tubulære epitelceller [16] . Et fælles træk ved denne toksin-inducerede tubulære celledød er mitokondriel skade. For eksempel, ud over at forårsage DNA-skade, er akut nyreskade induceret af høje doser af cisplatin eller aa direkte forbundet med alvorlig mitokondriel skade i renale tubulære epitelceller [17,18].

CypD spiller en vigtig rolle i toksin-induceret mitokondrier-afhængig celledød gennem åbningen af ​​mPTP [9]. Denne undersøgelse viser for første gang, at CypD er påkrævet ved højdosis aa-induceret tubulær epitelcelledød og akut nyreskade. Denne konklusion er baseret på CypD-/- mus, der udviser signifikant bedre nyrefunktion, reduceret tubulær vævsskade og tubulær celledød (som vist ved spaltet caspase 3-farvning), reduceret ekspression af den tubulære skadesmarkør Kim-1 og en beskyttende effekt mod tab af a-Klotho-ekspression. Disse resultater er i overensstemmelse med tidligere in vitro-undersøgelser om, at AA inducerer tubulær epitelcelledød via induktion af mitokondrier-afledte reaktive oxygenarter [19], og at CypD er påkrævet for reaktiv oxygenarter-induceret celledød i dyrkede tubulære epitelceller [14]. I den akutte AA-model blev akkumuleringen af ​​neutrofiler desuden signifikant reduceret i CypD-/- mus. Lidt er kendt om funktionen af ​​CypD i neutrofiler; dog kan reduktionen i neutrofil infiltration kun være en indirekte effekt af reduceret tubulær celleskade og celledød, hvor en reduceret frigivelse af risikorelaterede molekylære mønstre fører til reduceret neutrofil rekruttering.10 Selvom neutrofiler fremmer en "anden bølge" af tubulære mønstre. celledød i modeller af nyreiskæmi/reperfusionsskade "[20-22], rollen af ​​neutrofiler selv i akut AA-induceret akut nyreskade er ikke blevet bestemt. Der var også en let, men signifikant infiltration af T-celler på dagen 3 af AA, men der var ingen forskelle mellem WT- og CypD-/- mus Der var ingen signifikant forskel i antallet af nyremakrofager på dag 3 af AA-modellen sammenlignet med kontroller.

CypD-/- mus er beskyttet mod højdosis AA-induceret akut nyreskade, hvilket er i overensstemmelse med undersøgelser af, at CypD-/- mus er beskyttet mod tubulær epitelcelledød og tab af nyrefunktion efter cisplatin eller nyreiskæmi/reperfusionsskade ( IRI) [10-12], og at behandling med procyclidinhæmmere beskytter mod IRI-induceret akut nyreskade [23].

Efter at have fastslået, at CypD-/- mus er beskyttet mod højdosis AA-induceret akut nyreskade, antog vi, at disse mus også ville være beskyttet mod langvarig eksponering for lavdosis AA-induceret tubulær celledød og progressiv nyresygdom. Dette var imidlertid ikke tilfældet, og CypD-/- mus udviste niveauer af tubulær celleskade (baseret på Kim-1 og -Klotho), nyresvigt og nyrefibrose efter kronisk lavdosis AA-administration, der ikke adskiller sig fra WT-mus.

Der kan være flere årsager til den manglende beskyttelse hos CypD-/- mus under kronisk lavdosis AA-eksponering. Histologisk analyse viste tubulær nekrose i den akutte højdosis AA-model, men ikke i den kroniske lavdosis AA-model efter 28 dage, hvor skade var tydelig i form af atrofi og apoptotisk celledød (som vist ved lysis caspase 3 farvning) . Dette tyder på, at højdosis AA inducerer tubulær nekrose, men ikke lavdosis AA. Dette kan skyldes forskelle i induktion af reaktive oxygenarter induceret af lav- og højdosis AA, eller at overlevende tubulære celler er resistente over for AA-induceret nekrose. Yderligere detaljerede undersøgelser er nødvendige for at isolere disse mulige mekanismer eller for at identificere en anden potentiel forklaring, såsom tubulær celleskade forårsaget af akkumuleret DNA-skade i en kronisk AA-eksponeringsmodel. Det er imidlertid klart, at CypD-gendeletion ikke beskytter tubuli mod gentagen skade ved lave doser af AA. Faktisk blev lignende fund fundet i disse akutte og kroniske AA-eksponeringsmodeller [24] under anvendelse af JUN amino-terminal kinase (JNK) hæmmere. både JNK og CypD er involveret i ROS-induceret, mitokondrierafhængig tubuluscelledød [14,24]. jNK-hæmmerbehandling hæmmer tubuluscelledød i akutte højdosis AA-modeller, men i kroniske lavdosis AA-modeller [24] havde ingen effekt på tubulær celledød eller udvikling af nyrefibrose.

Cistanche tillæg

Den specifikke rolle af CypD i nyrefibrose er blevet beskrevet i tre tidligere undersøgelser. I modellen med unilateral ureteral obstruktion (UUO) forhindrede systemisk administration af procyclidinhæmmere eller brugen af ​​CypD-/- mus tubulær celledød, myofibroblastakkumulering, kollagenaflejring og peritubulært kapillærtab [14,23]. Men dyrkede WT og CypD-/- nyrefibroblaster adskilte sig ikke i PDG-induceret celleproliferation og TGF- 1-induceret aktivering og kollagenproduktion [14], hvilket tyder på, at CypD ikke direkte påvirker kollagenproducerende myofibroblaster i udviklingen af nyrefibrose. I UUO-modellen blev den beskyttende effekt af CypD-/- på nyrefibrose hos mus således tilskrevet en reduktion i tubulær epitelcelledød og tab af peritubulære kapillærer [14]. I modsætning hertil fandt en anden undersøgelse, at CypD-/- mus udviste mere alvorlig glomerulosklerose i en streptozotocin-induceret type 1 diabetisk nefropati-model, hvorimod behandling med en procyclidinhæmmer ikke kunne ændre udviklingen af ​​glomerulosklerose i en DB/DB-model af type 2-diabetikere nefropati [25]. Den nuværende undersøgelse fandt, at CypD-mangel ikke havde nogen effekt på udviklingen af ​​nyrefibrose i en kronisk lavdosis AA-eksponeringsmodel, ej heller på tubulær epitelcelledød eller peritubulært kapillærtab. Disse sammenlignende resultater i tre forskellige sygdomsmodeller tyder på, at CypD's rolle i udviklingen af ​​nyrefibrose er meget afhængig af arten af ​​den underliggende nyreskade og muligvis ikke er af generel betydning for nyrefibrose.

Konklusioner

Denne undersøgelse bekræfter involveringen af ​​CypD i akut tubulær nekrose og akut nyreskade induceret af højdosis AA-eksponering. I modsætning hertil bidrager CypD ikke til de toksiske virkninger af kronisk lavdosis AA-eksponeringsinduceret kronisk nyresygdom.

REFERENCER

1. Jadot, II; Declèves, A.-E.; Nortier, J.; Caron, N. Et integreret syn på Aristolochic Acid Nephropathy: Opdatering af litteraturen. Int. J. Mol. Sci. 2017, 18, 297.

2. Debelle, FD; Vanherweghem, JL; Nortier, JL Aristolochic acid nefropati: Et verdensomspændende problem. Nyre Int. 2008, 74, 158-169.

3. Yang, B.; Xie, Y.; Guo, M.; Rosner, MH; Yang, H.; Ronco, C. Nefrotoksicitet og kinesisk urtemedicin. Clin. J. Am. Soc. Nephrol. 2018, 13, 1605-1611.

4. Yang, L.; Su, T.; Li, X.-M.; Wang, X.; Cai, S.-Q.; Meng, L.-Q.; Zou, W.-Z.; Wang, H.-Y. Aristolochic acid nefropati: Variation i præsentation og prognose. Nephrol. Urskive. Transplantation. 2011, 27, 292-298.

5. Bakhiya, N.; Arlt, VM; Bahn, A.; Burckhardt, G.; Phillips, D.; Glatt, H. Molekylær bevis for en involvering af organiske aniontransportører (OAT'er) i aristolochic acid nefropati. Toksikologi 2009, 264, 74-79.

6. Yu, FY; Wu, TS; Chen, TW; Liu, BH Aristolochic acid I inducerede oxidativ DNA-skade forbundet med glutathiondepletering og ERK1/2-aktivering i humane celler. Toxicol. In Vitro 2011, 25, 810-816.

7. Zhou, L.; Fu, P.; Huang, XR; Liu, F.; Chung, ACK; Lai, KN; Lan, HY Mekanisme af kronisk aristolochic syre nefropati: Rolle af Smad3. Er. J. Physiol. Physiol. 2010, 298, F1006-F1017.

8. Zhou, L.; Fu, P.; Huang, XR; Liu, F.; Lai, KN; Lan, HY Aktivering af p53 fremmer nyreskade ved akut aristolochic acid nefropati. J. Am. Soc. Nephrol. 2009, 21, 31-41.

9. Elrod, JW; Molkentin, JD Fysiologiske funktioner af cyclophilin D og den mitokondrielle permeabilitetsovergangspore. Circ. J. 2013, 77, 1111-1122.

10. Devalaraja-Narashimha, K.; Diener, AM; Padanilam, BJ Cyclophilin D-genablation beskytter mus mod iskæmisk nyreskade. Er. J. Physiol. Physiol. 2009, 297, F749–F759.

11. Jang, H.-S.; Nej, M.; Jung, E.-M.; Kim, W.-Y.; Southekal, S.; Guda, C.; Foster, KW; Oupicky, D.; Ferrer, FA; Padanilam, BJ Proximal tubuli cyclophilin D regulerer fedtsyreoxidation ved cisplatin-induceret akut nyreskade. Nyre Int. 2020, 97, 327-339.

12. Linkermann, A.; Bräsen, JH; Darding, M.; Jin, MK; Sanz, AB; Heller, J.-O.; De Zen, F.; Weinlich, R.; Ortiz, A.; Walczak, H.; et al. To uafhængige veje for reguleret nekrose medierer iskæmi-reperfusionsskade. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2013, 110, 12024-12029.

13. Park, JS; Pasupulati, R.; Feldkamp, ​​T.; Roeser, NF; Weinberg, JM Cyclophilin D og den mitokondrielle permeabilitetsovergang i nyreproksimale tubuli efter hypoxisk og iskæmisk skade. Er. J. Physiol. Physiol. 2011, 301, F134–F150.

14. Hou, W.; Leong, KG; Ozols, E.; Tesch, GH; Nikolic-Paterson, DJ; Ma, FY Cyclophilin D fremmer tubulær celleskade og udviklingen af ​​interstitiel fibrose i den obstruerede nyre. Clin. Exp. Pharmacol. Physiol. 2017, 45, 250-260.

15. Tang, PMK; Nikolic-Paterson, DJ; Lan, H.-Y. Makrofager: Alsidige spillere i nyrebetændelse og fifibrose. Nat. Rev. Nephrol. 2019, 15, 144-158.

16. Petejova, N.; Martinek, A.; Zadrazil, J.; Teplan, V. Akut giftig nyreskade. Ren. Svigte. 2019, 41, 576-594.

17. Jiang, Z.; Bao, Q.; Sun, L.; Huang, X.; Wang, T.; Zhang, S.; Li, H.; Zhang, L. Mulig rolle af mtDNA-depletering og respiratoriske kædedefekter i aristolochinsyre I-induceret akut nefrotoksicitet. Toxicol. Appl. Pharmacol. 2013, 266, 198-203.

18. Yang, Y.; Liu, H.; Liu, F.; Dong, Z. Mitokondriel dysregulering og beskyttelse i cisplatin nefrotoksicitet. Arch. Toxicol. 2014, 88, 1249-1256.

19. Huang, X.; Wu, J.; Liu, X.; Wu, H.; Fan, J.; Yang, X. Nrf2's beskyttende rolle mod aristolochic syre-induceret renal tubulær epitelcelleskade. Toxicol. Mech. Metoder 2020, 30, 580-589.

20. Klausner, JM; Paterson, IS; Goldman, G.; Kobzik, L.; Rodzen, C.; Lawrence, R.; Valeri, CR; Shepro, D.; Hechtman, HB Postiskæmisk nyreskade medieres af neutrofiler og leukotriener. Er. J. Physiol. Physiol. 1989, 256, F794–F802.

21. Ryan, J.; Kanellis, J.; Blease, K.; Ma, FY; Nikolic-Paterson, DJ Milttyrosinkinasesignalering fremmer rekruttering af myeloidceller og nyreskade efter nyreiskæmi/reperfusionsskade. Er. J. Pathol. 2016, 186, 2032-2042.

22. Singbartl, K.; Ley, K. Beskyttelse mod iskæmi-reperfusion induceret alvorlig akut nyresvigt ved at blokere E-selectin. Crit. Care Med. 2000, 28, 2507-2514.

23. Leong, KG; Ozols, E.; Kanellis, J.; Badal, SS; Liles, JT; Nikolic-Paterson, DJ; Ma, FY Cyclophilin-hæmning beskytter mod eksperimentel akut nyreskade og nyre interstitiel fibrose. Int. J. Mol. Sci. 2020, 22, 271.

24. Yang, F.; Ozols, E.; Ma, FY; Leong, KG; Tesch, GH; Jiang, X.; Nikolic-Paterson, DJ c-Jun Aminoterminal kinasesignalering fremmer aristolochic syre-induceret akut nyreskade. Foran. Physiol. 2021, 12.

25. Lindblom, RS; Higgins, GC; Nguyen, T.-V.; Arnstein, M.; Henstridge, DC; Granata, C.; Snelson, M.; Thallas-Bonke, V.; Cooper, ME; Forbes, JM; et al. Afgrænsning af en rolle for mitokondriel permeabilitetsovergangspore i diabetisk nyresygdom ved at målrette cyclophilin D. Clin. Sci. 2020, 134, 239-259.

Khai Gene Leong, Elyce Ozols, John Kanellis, Frank Y. Ma og David J. Nikolic-Paterson