Effekter af Jianpi Bushen Yiqi afkog på immunfunktion og neuromuskulære forbindelser hos EAMG-mus

2.3 Histomorfologisk sammenligning af thymus og lymfeknuder i hver gruppe af mus

Som vist iFigur 1, thymus cortex og medulla itom kontrolgruppemus var tydeligt afgrænsede med velordnede celler. I modsætning hertilmodel kontrolgruppeudviste uklare kortikale-medullære grænser og sparsom cellefordeling. Sammenlignet med modelgruppen er mus iprednison gruppeoglav-, mellem- og højdosis Jianpi Bushen Yiqi afkogsgrupperviste relativt klare kortikale-medullære grænser og tætte, velorganiserede celler.

Figur 2viser, at lymfeknudeceller i den tomme kontrolgruppe viste komplet struktur og ordnet arrangement. Primære lymfoide follikler var synlige i cortex, uden sekundære follikler eller germinale centre. I modelgruppen var cellulær struktur uorganiseret, med prolifererede primære follikler og synlige sekundære follikler og germinale centre. Prednison- og Jianpi Bushen Yiqi-grupperne udviste reduceret lymfoid follikelhyperplasi.

Tabel 3viser, at sammenlignet med den tomme kontrolgruppe havde modelgruppen et reduceret cortex-til-medulla-arealforhold i thymus og øgede germinale centre i lymfeknuder (P < 0,05 eller P < 0,01). Sammenlignet med modelgruppen erprednisonoghøjdosis Jianpi

 

 

 

Figur 1 Sammenligning af histopatologisk morfologi af thymusvæv blandt forskellige grupper af mus (HE-farvning)

 

Tabel 3. Sammenligning af thymus kortikalt-marvarealforhold og antallet af lymfeknude germinale centre i hver gruppe mus

Enhed: (x̄ ± s)

Gruppe	n	Thymic Cortex/Medulla Area Ratio	Kimcenternummer (pr. LN)
Blank kontrol	3	3.62 ± 0.18	0.00 ± 0.00
Model kontrol	3	1.74 ± 0.11 ᵃ	6.47 ± 1.51 ᵃ
Prednison	3	4.62 ± 1.41 ᵇ ᶜ	3.52 ± 0.35 ᵇ ᶜ
Afkog Lav Dosis	3	2.91 ± 0.42 ᶜ	5.77 ± 0.66 ᶜ
Afkog Medium Dosis	3	3.41 ± 1.05 ᶜ	4.12 ± 0.25 ᶜ
Afkog Højdosis	3	4.60 ± 0.55 ᵇ ᶜ	3.00 ± 0.71 ᶜ

Noter:

ᵃ: P < 0,01 vs. Blank kontrol

ᵇ: P < 0,05 vs. modelkontrol

ᶜ: P < 0,01 vs. Modelkontrol

Bushen Yiqigrupper viste et højere cortex-til-medulla-arealforhold. Alle interventionsgrupper, inklusive prednison og alle tre afkogsdoser, reducerede signifikant antallet af germinale centre (P < 0,01). Sammenlignet med prednisongruppen er afkogetslav- og mellemdosisgrupperviste stadig lidt flere germinale centre, mens denhøjdosis gruppehavde ingen signifikant forskel.

Bemærk: De sorte pile peger på lymfefollikler, og de røde pile peger på germinale centre.

Figur 2 Sammenligning af histopatologisk morfologi af lymfeknudevæv blandt forskellige grupper af mus (HE-farvning)

 

 

 

 

2.4 Sammenligning af Th1-, Th2-, Th17-, Treg- og Tfh-celleprocenter i miltcellesuspensioner

Som vist iTabel 4, sammenlignet med den tomme kontrolgruppe, denmodel gruppeviste øgede procenter af Th1-, Th2-, Th17- og Tfh-celler og en reduceret Treg-procent (P < 0,05 eller P < 0,01). Sammenlignet med modelgruppen ermellem- og højdosis afkogsgrupperhavde reduceret Th1-procenter og øget Treg-procenter; alle tre afkogsgrupper viste reducerede Th17- og Tfh-procenter. Især denprednison gruppereducerede Treg-procenter, hvilket giver anledning til bekymring om dets potentiale til at forstyrre immunhomeostase.

Sammenlignet med prednisongruppen viste alle afkogsgrupper reduktioner i Th2-, Th17- og Tfh-celler. Demellem- og højdosisgrupperyderligere reduceret Th1 og øget Treg celler (P < 0,05 eller P < 0,01), hvilket indikerer en mere afbalanceret immunregulering.

 

 

 

Bemærk: NMJ, neuromuskulær forbindelse; AChR, acetylcholinreceptor.

Figur 3 Sammenligning af AChR-morfologi ved de neuromuskulære samlinger af muskelgrupper mellem forskellige grupper af mus
(immunfluorescensfarvning, ×100)

 

Tabel 4. Sammenligning af procenterne af Th1-, Th2-, Th17-, Treg- og Tfh-celler i miltcellesuspensioner blandt forskellige grupper af mus

Enhed: (% , x̄ ± s)

Gruppe	n	Th1	Th2	Th17	Treg	Tfh
Blank kontrol	6	0.05 ± 0.04	0.03 ± 0.02	0.11 ± 0.06	16.42 ± 2.59	9.45 ± 3.29
Model kontrol	7	3.43 ± 1.11 ᵃ	0.82 ± 0.22 ᵃ	1.64 ± 0.65 ᵇ	7.99 ± 3.26 ᵃ	18.27 ± 4.21 ᵃ
Prednison	7	1.84 ± 0.26	0.84 ± 0.47	1.03 ± 0.71	5.02 ± 1.58 ᵃ	15.32 ± 3.84
Afkog Lav Dosis	7	1.42 ± 0.59 ᶜ ᵉ	0.60 ± 0.16 ᶜ ᶠ	0.73 ± 0.24 ᶜ ᶠ	14.97 ± 2.11 ᶠ	10.35 ± 3.72 ᶜ ᶠ
Afkog Medium Dosis	7	1.08 ± 0.59 ᶜ ᵉ	0.47 ± 0.14 ᶜ ᶠ	0.45 ± 0.20 ᶜ ᶠ	13.82 ± 2.21 ᶠ	9.87 ± 3.65 ᶜ ᶠ
Afkog Højdosis	7	1.23 ± 0.62 ᶜ ᵉ	0.32 ± 0.14 ᶠ	0.34 ± 0.22 ᶜ ᶠ	13.50 ± 2.47 ᶠ	7.97 ± 3.60 ᶜ ᶠ

Noter:

ᵃ: P < 0,01 vs. Blank kontrol

ᵇ: P < 0,05 vs. tom kontrol

ᶜ: P < 0,01 vs. Modelkontrol

ᵈ: P < 0,05 vs. modelkontrol

ᵉ: P < 0,05 vs. Prednison

ᶠ: P < 0,01 vs. Prednison

 

 

2.5 Sammenligning af AChR-morfologi ved NMJ i hver muskelgruppe

Figur 3viser, at NMJ AChR'erne i den tomme kontrolgruppe var strukturelt intakte og fremstod som kompakte, kringlelignende formationer. I modelgruppen forekom NMJ'er i okulære, sternocleidomastoid-, deltoid- og tibialis anterior-muskler fragmenterede og deforme, mens tygge-, interkostal- og diafragmamuskler udviste alvorligt forstyrrede strukturer. Alle interventionsgrupper udviste varierende grader af forbedring i AChR-morfologi.

Som vist iTabel 5sammenlignet med den tomme kontrolgruppe havde modelgruppen signifikant reduceret AChR-arealforhold i flere muskler (P < 0,05 eller P < 0,01). Sammenlignet med modelgruppen erprednisonogmellemdosis afkoggrupper viste øget AChR-areal i okulære muskler. Delavdosis afkogsgruppeforbedrede AChR-områder i deltoideus og tibialis anterior. Dehøjdosis gruppeforbedrede AChR-områder i de okulære, sternocleidomastoideus, deltoid og tibialis anterior muskler.

Sammenlignet med prednisonlavdosis gruppeforbedrede AChR-områder i de okulære og tyggemuskler; demedium-dosis gruppei tyggemuskler; og denhøjdosis gruppei sternocleidomastoid og tibialis anterior (P < 0,05 eller P < 0,01).

Tabel 5. Sammenligning af AChR-området ved det neuromuskulære kryds i hver gruppe af muses muskelgrupper

Enhed: (% , x̄ ± s)

Gruppe	n	Øjenmuskel	Tyggemuskel	Sternocleidomastoid	Deltoideus muskel	Interkostal muskel	Diafragma	Tibialis anterior
Blank kontrol	3	3.83 ± 0.28	4.28 ± 0.29	4.48 ± 0.77	3.79 ± 0.12	3.78 ± 0.22	4.80 ± 0.26	3.60 ± 0.32
Model kontrol	3	2.58 ± 0.34 ᵃ	2.55 ± 0.45 ᵃ	2.15 ± 0.31 ᵇ	2.33 ± 0.15	2.55 ± 0.33	2.98 ± 0.34ᵇ	2.95 ± 0.49
Prednison	3	3.33 ± 0.49ᶜ	2.67 ± 0.55	3.83 ± 0.54	3.49 ± 0.38	3.60 ± 0.16	3.45 ± 0.67	3.02 ± 0.40
Afkog Lav Dosis	3	2.76 ± 0.49ᵉ	3.05 ± 0.37ᵉ	3.77 ± 0.64	2.77 ± 0.44ᶜ	3.03 ± 0.25	3.33 ± 0.33	3.44 ± 0.71ᶜ
Afkog Medium Dosis	3	3.32 ± 0.40ᶜ	3.27 ± 0.75ᵉ	3.98 ± 0.43	3.27 ± 0.65	3.50 ± 0.28	3.85 ± 0.42	3.56 ± 0.52
Afkog Højdosis	3	3.46 ± 0.37ᶜ	3.34 ± 0.23ᵉ	4.54 ± 0.67ᶜ	3.69 ± 0.39	3.75 ± 0.36	3.75 ± 0.35	3.84 ± 0.52ᶜ

Noter:

ᵃ: P < 0,05 vs. tom kontrol

ᵇ: P < 0,01 vs. tom kontrol

ᶜ: P < 0,05 vs. modelkontrol

ᵈ: P < 0,01 vs. modelkontrol

ᵉ: P < 0,05 vs. Prednison

 

Tabel 6. Sammenligning af serumniveauer af AChR-Ab, IL-6 og TNF- blandt forskellige grupper af mus

Enhed: (x̄ ± s)

Gruppe	n	AChR-Ab (P⁻¹)	IL-6 (pg·ml⁻¹)	TNF- (pg·ml⁻¹)
Blank kontrol	12	1.00 ± 0.13	110.66 ± 30.75	25.84 ± 9.71
Model kontrol	12	3.13 ± 0.97 ᵃ	327.91 ± 38.71 ᵃ	124.15 ± 37.61 ᵃ
Prednison	11	2.05 ± 0.29 ᵇ ᶜ	487.21 ± 124.09 ᵇ	78.76 ± 22.35 ᵇ ᶜ
Afkog Lav Dosis	13	2.50 ± 0.49ᵉ	306.42 ± 93.91ᶜ	89.14 ± 25.90 ᶜ
Afkog Medium Dosis	13	1.98 ± 0.34 ᶜ	278.60 ± 63.97ᶜ	80.36 ± 21.95ᶜ
Afkog Højdosis	13	1.42 ± 0.33 ᶜ	224.43 ± 49.03ᶜ	84.26 ± 36.60ᶜ

Noter:

ᵃ: P < 0,01 vs. Blank kontrol

ᵇ: P < 0,01 vs. modelkontrol

ᶜ: P < 0,01 vs. Modelkontrol

ᵈ: P < 0,05 vs. Prednison

ᵉ: P < 0,01 vs. Prednison

2.6 Sammenligning af serum AChR-Ab, IL-6 og TNF-niveauer

Tabel 6illustrerer, at sammenlignet med den tomme kontrolgruppemodel gruppehavde signifikant forhøjede niveauer af AChR-Ab, IL-6 og TNF- (P < 0,01). Sammenlignet med modelgruppen erprednisonogmellem- og højdosis afkogsgruppersignifikant reduceret AChR-Ab. Imidlertid,prednison steg IL-6, menshøjdosis afkogsgruppe faldt IL-6. Både prednison ogmellem- og højdosisgrupperreduceret TNF- (P < 0,05 eller P < 0,01).

Sammenlignet med prednisonlavdosis afkogsgruppehavde et højere AChR-Ab niveau, menalle afkogsgruppersænket IL-6 og undgår de pro-inflammatoriske virkninger af prednison.

3. Diskussion

Klinisk er MG kategoriseret i okulær myasthenia gravis (oMG) og generaliseret MG (gMG). oMG manifesterer sig primært som ptosis og diplopi og kan udvikle sig til gMG, karakteriseret ved systemisk skeletmuskelsvaghed [1]. Teorien om traditionel kinesisk medicin (TCM) tilskriver patogenesen af ​​MG til dysfunktioner imilt og nyre. Milten styrer muskler og lemmer, idet den er den postnatale rod og kilden til Qi og blod. Nyren lagrer essens og styrer knogler og marv. Mangel på begge fører til muskelsvaghed, som det ses i MG [15-16].

Baseret på TCM-princippet om at "behandle roden",tonificering af milten og nyrenbliver centralt. DeJianpi Bushen Yiqi afkoginkarnerer denne tilgang. Dens hovedingrediens,Astragalus membranaceus, booster milt Qi og løfter Yang.Skildpaddeskal limoghjortegevir limberiger nyreessens og yang, styrker muskler og knogler.Codonopsis, Angelica sinensis, Bupleurum, Cimicifuga, oghonningstegt lakridsarbejde synergistisk for at nære blod, hæve Yang og harmonisere formlen.

En vigtig tilføjelse til denne formulering erCistanche deserticola, en kendt urt fortonificerende nyre-yang og genopfyldning af vital essens. Cistanche har vist sig at forbedre immunmodulation og forbedre træthedsmodstand, hvilket gør den ideel til tilstande som MG. Ifølge XJCistanche understøtter Cistanche-ekstraktnerve- og muskelvitalitet, fremmerneurotransmitter balance, og forbedrerimmun homeostase-mekanismer direkte relevante for MG patofysiologi.

Denne undersøgelse brugte en EAMG-musemodel til at evaluere afkogningens virkninger på tværs af adfærdsmæssige, immun- og NMJ-strukturelle dimensioner. Det viste resultaterneprednisonforbedret grebsstyrke og Lennon-score, men forårsagede betydeligevægttab, i overensstemmelse med kendte glukokortikoid bivirkninger [19]. Derimod alle afkogsdoserøget kropsvægt, hvilket indikerer bedre sikkerhed.

Terapeutisk effekt vardosisafhængig, medhøjdosis gruppeopnår sammenlignelige forbedringer i grebsstyrke og Lennon-score med prednison, der tilbyder beggeeffektivitet og sikkerhed.

Immunorganindekser afslørede, at prednison reducerede thymusindeks og forårsagede kortikal-medullær atrofi, hvilket svækkede den centrale tolerance [20]. Afkogningen bevarede eller forbedrede imidlertid thymusstrukturen, især ved høje doser. Miltindekser fulgte abifasisk reguleringsmønster, med lave og mellemstore doser, der undertrykker unormal immunproliferation, mens den høje dosis opretholdt balancen.

Alle afkogsgrupper reducerede lymfeknudefollikelhyperplasi, selvom kun højdosis matchede prednison i germinal center suppression, hvilket tyder på højdosis overlegen regulering af både central og perifer immunitet.

Da CD4⁺ T-celle ubalance ligger til grund for EAMG [4], er afkogningens evne til atrebalancere Th1/Th2/Th17/Tfh og Tregceller er afgørende. I modsætning til prednison, som reducerede Treg, afkoget (især mellemstore og høje doser)forbedret Tregog undertrykte pro-inflammatoriske undergrupper. Denneimmunmodulation, i stedet for immunsuppression, passer bedre til behovene for autoimmune sygdomme som MG.

For NMJ-integritet demonstrerede afkogningenmulti-muskel AChR reparation, udkonkurrerende prednison i flere muskelgrupper. Desuden reducerede det effektivtAChR-Ab, IL-6 og TNF-, med høj dosis, der viser den mest omfattende anti-inflammatoriske virkning - uden prednisons IL-6 forhøjelse.

 

Konklusion

DeJianpi Bushen Yiqi afkog, beriget medCistanche deserticola, udøver multi-target terapeutiske effekter i EAMG mus. Det:

Rebalancerer Th/Treg-aksen og undertrykker Tfh-medieret B-celleaktivering

Reducerer patogene antistoffer og inflammatoriske cytokiner

Reparerer NMJ-strukturer og genopretter muskelfunktionen

Sammenlignet med prednison tilbyder det overlegentsikkerhed, genopretning af immunforsvaret, ogmulti-muskel målretning, der fremhæver dets potentiale som enklinisk alternativellersupplerende terapifor MG.

Fremtidige undersøgelser bør undersøge detbioaktive forbindelser, metaboliske veje, ogmolekylære mål, muligvis igennemnetværksfarmakologiogproteomik, for at accelerere dets udvikling som et nyt TCM-baseret terapeutisk middel.