Isoastilbin hæmmer neuronal apoptose og oxidativ stress i Arat-model for iskæmi-reperfusionsskade i hjernen: involvering af SIRT1/3/6

For mere information E-mailtina.xiang@wecistanche.com

Abstrakt

Baggrund.Isoastilbin (IAB) har vist sig at haveantioxidativtog anti-apoptotiske funktioner. En nylig undersøgelse viste, at IAB kan reducereoxidativstress ved Alzheimers sygdom. Hvorvidt den antioxidative funktion af IAB også er beskyttende i andre hjernesygdomme er dog stadig ukendt.
Mål.At undersøge roller og underliggende mekanismer af IAB i mellem-cerebral arterie okklusion reperfusion (MCAO/R) hos rotter.
Materialer og metoder.Wistar-hanrotter blev tilfældigt opdelt i 5 grupper: falsk gruppe, MCAO/R-gruppe og 3 MCAO/R-grupper administreret IAB (20 mg/kg, 40 mg/kg eller 80 mg/kg) én gang dagligt i 3 dage. Infarktstørrelse, modificeret neurologisk sværhedsgrad (mNSS),oxidativstressmarkører og neuronale apoptosemarkører blev brugt til at analysere funktionen af ​​IAB.
Resultater.Sammenlignet med MCAO/R-gruppen reducerede administration af IAB infarktstørrelsen og mNSS-score i MCAO/R-rotter. Isoastilbin reducerede også niveauet af malondialdehyd (MDA) og øgede aktiviteten af ​​katalase (CAT), superoxiddismutase (SOD) og glutathionperoxidase (GSH-PX). Isoastilbin-behandling svækkede MCAO/R-induceret neuronalapoptosesammenlignet med MCAO/R-gruppen, som vist ved resultaterne af terminal deoxynukleotidtransferase-medieret X-dUTP nick-end (TUNEL) og western blot-assays. Isoastilbin reverserede også MCAO/R-induceret nedregulering af SIRT1/3/6-proteinekspression.
Konklusioner.Disse observationer tyder på, at IAB beskytter modoxidativstress og neuronal apoptose hos rotter efter cerebral iskæmi-reperfusion (I/R) skade gennem opreguleringen af ​​SIRT1/3/6, hvilket indikerer, at IAB kan være et lovende terapeutisk middel til cerebral I/R-skade.
Nøgleord:apoptose, oxidativt stress, isoastilbin, fokal cerebral iskæmi-reperfusionsskade

Baggrund

Iskæmisk og hæmoragisk slagtilfælde er blandt de førende årsager til invaliditet og død i hele verden.1,2Iskæmisk slagtilfælde er forårsaget af obstruktioner i blodkar, hvorved målorganer risikerer celledød.3Selvom den mest effektive behandling af cerebral iskæmi er at hurtigt genoprette blodforsyningen, kan trombolytisk behandling øge infarktets størrelse og forværre iskæmi-reperfusion (I/R) skade i hjernen.1,4Derfor er der et presserende behov for at udvikle nye lægemidler til behandling af cerebral I/R-skade.

Iskæmi-reperfusionsskade i hjernen involverer kompleks patofysiologi, herunder forekomsten afoxidativstress, apoptose og adenosintrifosfat (ATP) udtømning, som alle kan føre til neuronal skade.5 Reaktive oxygenarter (ROS) produceres under iskæmi, hvilket fører til neuronal skade.apoptoseog neurologisk dysfunktion.6 Specifikt genererer NADPH-oxidaser ROS under I/R-skade, hvilket forårsageroxidativstress. Denne stress er præget af øget lipidperoxidation, nedsat katalase (CAT) og superoxiddismutase (SOD) aktivitet og et nedsat glutathion (GSH) niveau.7-11 Høje niveauer af ROS ogoxidativstressvil igen udløse celledød gennem den mitokondrielle apoptotiske vej efter cerebral I/R-skade.12 Mitokondrielle permeabilitetsovergangsporer kan åbne sig som en konsekvens af den overflødige akkumulering af ROS, hvilket resulterer i lavere mitokondrielt transmembranpotentiale og øget produktion af caspase-aktivatorer som f.eks. som cytochrom c, hvilket i sidste ende initierer caspase-kaskaden og resulterer i celledød.12 Geng et al. foreslået, at apoptose af neuronale celler i det mindste delvist medieres af den mitokondrielle apoptose-vej ved cerebral I/R-skade.13 Som følge heraf lover inhiberingen eller reverseringen af ​​oxidativt stress og neuronal apoptose nye metoder til at dæmpe cerebral I/R-skade.

For at udforske mekanismen, hvorigennem IAB dæmper I/R-inducerede skader, fokuserede vi på SIRT-signaleringskaskaden. Nylige undersøgelser har vist en beskyttende rolle af SIRT1/3/6 i forskellige sygdomme, herunder neural degeneration i hjernen, blodkarbetændelse og fedtophobning. Faktisk fandt vi, at IAB-behandling øger SIRT-ekspressionsniveauet under I/R-skade, hvilket indikerer, at IAB kan beskytte mod cellerapoptoseved at opregulere SIRT-ekspression. Samlet tyder vores resultater på, at IAB er en potentielt nyttig behandling for klinisk cerebral I/R-skade.

Mål

Vores overordnede mål var at undersøge virkningerne og de underliggende mekanismer af IAB i I/R-skade ved hjælp af MCAO/R-dyremodellen.

Materialer og metoder

Dyr

Wistar-hanrotter blev erhvervet fra Shanghai Laboratory Animal Company (Shanghai, Kina). Rotter i alderen 60-90 dage med normal kropsvægt (200-250 g) blev fodret ad libitum med mad og vand og holdt under et ensartet miljø (25 ±2 grader, 40 ±10 procent relativ luftfugtighed og 12 timers lys/mørke cyklus) . Dyr blev håndteret i henhold til retningslinjerne for pleje og brug af forsøgsdyr fra Jiamusi College, Heilongjiang University of Traditional Chinese Medicine, Kina. Den institutionelle dyrepleje- og brugskomité på Jiamusi College, Heilongjiang University of Chinese Medicine godkendte dyreprocedurer (godkendelse nr. 20190815).

Etablering af MCAO/R skade og IAB behandling

Toksiciteten af ​​IAB blev bestemt som tidligere beskrevet.15 Isoastilbin (Chengdu Purechem-Standard Co., Ltd., Chengdu, Kina) blev fortyndet til slutkoncentrationer på 20 mg/kg, 40 mg/kg og 80 mg/kg i fosfat -pufret opløsning (PBS). Dyr blev randomiseret i 5 grupper: 1. sham; 2. MCAO/R; 3. MCAO/R efterfulgt af 20 mg/kg IAB; 4. MCAO/R efterfulgt af 40 mg/kg IAB; og 5. MCAO/R efterfulgt af 80 mg/kg IAB.

Rotter blev bedøvet under anvendelse af intraperitoneal (ip.) injektion af 50 mg/kg natriumpentobarbital (Sinopharm Chemical Reagent, Beijing, Kina). For at introducere MCAO/R afslørede vi halspulsårerne, nemlig den ydre halspulsåre (ECA), højre fælles halspulsåre (CCA) og den indre halspulsåre (ICA). ECA og CCA blev ligeret proksimalt. ICA'et blev ligeret under anvendelse af en 0,285 mm monofilamentsutur, indsat i ICA'ens lumen i ca. 18 mm gennem ECA-stumpen for at obstruere den midterste cerebrale arterie (MCA). En laserDoppler (USCN KIT INC., Wuhan, Kina) blev brugt til at bekræfte, at blodgennemstrømningen var reduceret til mindre end 20 procent af det normale niveau. Fupgruppen gennemgik samme operation; arterierne var imidlertid ikke ligeret. Efter 2 timers okklusion blev de ligerede arterier reperfunderet, og rotterne blev derefter soneret med IAB (20 mg/kg, 40 mg/kg eller 80 mg/kg) eller PBS dagligt i 3 på hinanden følgende dage. Til sidst, 72 timer efter MCAO/R, blev rotternes neurologiske kapacitet vurderet.

Evaluering af rottehjerneinfarktvolumen

Efter IAB-behandling blev hjerner hurtigt vejet for at måle deres våde vægt. Efterfølgende blev hjerner dehydreret ved 100 grader i 24 timer for at vurdere deres tørvægt. Koncentrationen af ​​vand i hjernen blev beregnet som: ((vådvægt ‒ tørvægt)/vådvægt) × 100 procent.

Modificeret neurologisk sværhedsgrad (mNSS)

Sensoriske, motoriske, balance- og refleksneurologiske funktioner blev vurderet 72 timer efter MCAO-kirurgi ved hjælp af mNSS.17 Sværhedsgraden af ​​neurologiske underskud blev rangeret på en skala fra 0 til 10, med en højere score, der indikerer mere alvorlig skade på nervesystem.

Måling af superoxiddismutase (SOD), malondialdehyd (MDA), katalase (CAT) og glutathionperoxidase (GSH-PX)

Efter IAB-behandling blev proteinindholdet bestemt ud fra hjernevæv. Proteinkoncentrationen af ​​kortikale homogenater blev bestemt ved anvendelse af BCA-kits (Beyotime, Shanghai, Kina). SOD, MDA, CAT og GSH-PX blev detekteret ved hjælp af de tilsvarende kits (katalognr. A003-1, A001-3, A007 og A005; Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Nanjing, Kina). Kort fortalt blev supernatanten af ​​kortikalt homogenat opsamlet. For SOD blev prøver inkuberet med WST-8/enzymarbejdsopløsning ved 37 grader i 30 min. Absorptionen blev målt ved en bølgelængde på 450 nm. Én SOD enzymatisk aktivitetsenhed (U) blev defineret som den mængde prøve, der var nødvendig for at opnå en 50 procents inhiberingshastighed af WST-8 formazanfarvestof. For MDA blev prøver blandet med en arbejdsopløsning og derefter opvarmet ved 100 grader i 15 min. Absorptionen af ​​supernatanten blev målt ved en bølgelængde på 532 nm. For CAT blev prøver blandet med CAT-detektionsbuffer og hydrogenperoxidopløsning og derefter inkuberet ved 25 grader i 5 min. Absorptionen blev detekteret ved en bølgelængde på 520 nm. For GSH-PX blev prøver blandet med GSH ved 37 grader i 5 min. Absorptionen af ​​supernatanten blev målt ved en bølgelængde på 412 nm. En enhed (U) enzymaktivitet blev defineret som mængden af ​​GSH-PX i 1 mg protein, der katalyserede forbruget af 1 μmol/L GSH, mens effekten af ​​ikke-enzymreaktionen blev fratrukket.

Terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nick end labeling (TUNEL) farvning

Ipsilateral hemisfære hjernevæv blev isoleret, fikseret i 4 procent paraformaldehyd og indlejret i paraffin. Væv blev derefter skåret i 5-μm skiver og antigen eksponeret efter 10 minutters mikrobølgeopvarmning i citratbuffer. Neuronal apoptose blev vurderet ved hjælp af TUNEL-assayet (In Situ Cell Death Detection Kit; Roche, Penzberg, Tyskland) i henhold til producentens instruktioner. Kort sagt blev hjerneskiver anbragt i iskold 4 procent paraformaldehyd i 30 minutter og derefter inkuberet i mørke med TUNEL-reaktionsblandingen ved 37 grader i 1 time. Efterfølgende blev kernerne farvet med 6-diamidino-2-phenylindol (DAPI; Sigma-Aldrich). Prøver blev afbildet, og apoptoseindekset blev beregnet som antallet af TUNEL-positive celler divideret med det samlede antal celler.

Western blot

Rottehjernevæv blev lyseret under anvendelse af radioimmunpræcipitationsassay (RIPA) buffer (Beyotime, Dalian, Kina). Proteiner blev udsat for 12-15 procent natriumdodecylsulfat-polyacrylamidgelelektroforese (SDS-PAGE) og derefter overført til polyvinylidenfluorid (PVDF) membraner (Millipore, Billerica, USA). Membraner blev blokeret ved hjælp af 5 procent fedtfri mælk og inkuberet med primære antistoffer ved 4 grader natten over. Peberrodsperoxidase (HRP)-konjugerede sekundære antistoffer blev efterfølgende inkuberet ved stuetemperatur i 2 timer. Specifikke signaler af mærkede proteiner blev påvist ved anvendelse af et kemiluminescenssystem. -actinet blev brugt til at normalisere proteinekspressionsniveauerne for Bcl-2, Bax og Sirtuin (SIRT1/3/6). Billeder blev analyseret ved hjælp af ImageJ-software.

Statistiske analyser

Data præsenteres som middelværdi ± standardafvigelse (SD) fra 3 uafhængige eksperimenter. Data fra hver gruppe blev bekræftet til at følge en normal fordeling ved hjælp af Shapiro-Wilk-testen. Forskellene mellem grupperne blev analyseret ved hjælp af envejs-variansanalyse (ANOVA), efterfulgt af Tukeys post hoc-test med Prism v. 8-software (GraphPad Software, San Diego, USA). En værdi på p< 0.05 indicated="" statistical="" significance.="" a post="" hoc="" power="" analysis="" was="" performed="" using="" g*power="" 3.1.9.7="" software="" (heinrich="" heine="" university,="" düsseldorf,="">

Resultater

Isoastilbin beskytter neuroner mod MCAO/R-induceret skade

For at undersøge, om IAB beskyttede neuroner udsat for cerebral I/R, blev koncentrationen af ​​vand i hjernen og infarktvolumen analyseret. Hos kontroldyr var der intet infarkt, og vandkoncentrationen var relativt lav (fig. 1B,C; falsk gruppe). Efter MCAO/R-kirurgi observerede vi signifikante stigninger i infarktstørrelsen og vandkoncentrationen (fig. 1B, C). Infarkt og iskæmisk ødem indikerer, at vores tilgang med succes genererede I/R-modellen hos rotter. Interessant nok, når vi påførte forskellige koncentrationer af IAB (20 mg/kg, 40 mg/kg og 80 mg/kg) umiddelbart efter skade, observerede vi dosisafhængig genopretning af infarkt og iskæmisk cerebralt ødem (fig. 1B, C). Dette resultat tyder på, at IAB beskytter mod iskæmi-induceret hjerneskade. Dernæst undersøgte vi celleapoptoseved at bruge mNSS-analysen. Som vist i fig. 1D udviste sham-opererede rotter ingen åbenlyse neurologiske mangler, hvorimod MCAO/R-rotter viste signifikant øgede mNSS-scores. I overensstemmelse med de morfologiske ændringer vist i fig. 1B og fig. 1C reducerede IAB-behandling signifikant mNSS-scoren for MCAO/R-rotter (fig. 1D). Tilsammen giver disse resultater bevis for, at IAB har en neurobeskyttende funktion i en Vivo-gnavermodel for cerebral I/R-skade. I betragtning af at en højere IAB-koncentration havde bedre beskyttende virkninger uden åbenlyse bivirkninger, brugte vi 80 mg/kg til følgende eksperimenter.

Isoastilbin dæmper oxidativt stress hos MCAO/R-rotter

At vurdere IAB's indflydelse påoxidativt stress, blev GHS-PX-, MDA-, SOD- og CAT-niveauerne vurderet efter IAB-behandling. På grund af stigningen i oxidativt stress havde rotter udsat for MCAO/R højere niveauer af MDA sammenlignet med falske rotter. Denne effekt blev dæmpet ved IAB-behandling (fig. 2A). Ydermere faldt CAT-, SOD- og GHS-PX-niveauer i MCAO/R-rotter sammenlignet med sham-rotter (fig. 2B, D). Behandling med IAB forhøjede niveauerne af CAT, SOD og GHS-PX i MCAO/R-rotter (fig. 2B, D), hvilket tyder på, at IAB beskyttede mod cerebral I/R-skade ved at dæmpe oxidativt stress.

Isoastilbin hæmmer neuronal apoptose hos MCAO/R-rotter

Dernæst brugte vi TUNEL-analysen til at vurdere neuronalapoptoseefter cerebral I/R-skade. Som afbildet i fig. 3A var der et øget antal TUNEL-positive celler i MCAO/R-rotter, som blev reduceret ved IAB-behandling (fig. 3A). For at udforske de underliggende mekanismer for IAB-beskyttelse undersøgte vi ekspressionen af ​​apoptoseproteinerne Bax og Bcl-2 ved hjælp af western blot. Hos rotter udsat for MCAO/R var ekspressionen af ​​Bax (pro-apoptotisk markør) opreguleret, mens ekspressionen af ​​Bcl-2 (anti-apoptotisk markør) var nedreguleret sammenlignet med sham-gruppen (fig. 3B, C) ). Imidlertid forhindrede IAB-behandling MCAO/R-inducerede ændringer (fig. 3B, C). Disse resultater tyder på, at IAB inhiberede neuronal apoptose hos MCAO/R-rotter.

Isoastilbin opregulerer SIRT-ekspression

Dernæst søgte vi at undersøge, hvordan IAB beskytter neuroner modoxidativt stress. SIRT, en NAD plus-afhængig deacetylase hovedsageligt lokaliseret i mitokondrier, har vist sig at være forbundet med celleoverlevelse og apoptose, cellemetabolisme og respons på stress. SIRT kan aktivere mitokondrielle signaler og veje for at fremme mitokondrierproliferation og ATP-generering. Det deltager også i inflammation på en måde, at reduktionen i SIRT fører til stigninger i kroniske inflammationsfaktorer, såsom NFκB og RelA/p65 aktivitet.18-20 Interessant nok har flere undersøgelser fundet, at SIRT udøver en neural beskyttende effekt og dæmper oxidativ effekt. stress i patofysiologien af ​​cerebral I/R-skade.21 Her undersøgte vi hjerneekspressionen af ​​SIRT1/3/6 hos rotter udsat for MCAO/R. Vi fandt ud af, at MCAO/R-skade reducerede proteinniveauerne af SIRT1/3/6, mens IAB-behandling dæmpede disse virkninger (fig. 4A-D). Disse data tyder på, at IAB kan være beskyttende i MCAO/R-rotter ved at opregulere SIRT1/3/6-ekspression i beskyttelse mod oxidativt stress.

Diskussion

ROS-koncentrationen stiger til en top, hvilket potentielt kan inducere apoptose eller cellenekrose.25-28 Der er flere veletablerede markører for oxidativt stress. For eksempel øges MDA, en cytotoksisk forbindelse produceret ved lipidperoxidation,29 i rottekardiomyocytter efter I/R-skader.30 Antioxidantenzymerne SOD, CAT og GHS-PX spiller vigtige roller i at fjerne superoxider og forhindre oxidativ skade.31, 32 Desuden er ændringer i aktiviteten af ​​disse enzymer også relateret til oxidativt stress. Dæmpning af oxidativ stress er en potentiel måde at beskytte væv mod I/R-skade.

En nylig undersøgelse viste, at den neurobeskyttende effekt af IAB kan skyldes moduleringen af ​​oxidativt stress. Specifikt fandt undersøgelsen ud af, at IAB hæmmede ROS-generering og inducerede SOD og GSH-PX for at lindre oxidativ skade i en muse AD-model.15 Det vides dog endnu ikke, om og hvordan IAB beskytter mod I/R-skade i hjernen. I denne undersøgelse viste vi, at IAB med succes dæmper cerebral I/R-skade ved at reducere infarktvolumenet og neurologiske underskud efter MCAO/R-skade. For at teste, om virkningerne af IAB skyldes svækkelsen af ​​ROS-arter, målte vi flere markører for oxidativ stress. Isoastilbin-behandling efter MCAO/R viste sig at reducere MDA-niveauer, men øge CAT-, SOD- og GSH-PX-aktivitet. Disse resultater tyder på, at den underliggende mekanisme for IAB-medieret neurobeskyttelse mod I/R-skade er gennem reduktion af oxidativt stress.

Faktisk er cerebral I/R i stand til at inducere apoptose af neuroner.33,34 Aktiveringen af ​​pro-apoptotiske proteiner (Bax og Bak) og parallel inaktivering af anti-apoptotiske proteiner (såsom Bcl-2) fandt sted under cerebral I/R skade. Både Bcl-2 og Bax findes i den ydre del af mitokondriemembranen og deltager i moduleringen af ​​celleapoptose.35-37 Tidligere undersøgelser har vist, at Bcl-2-overekspression blokerer neuronal død in vitro og in vivo.38Erfani et al. fandt, at Bax/Bcl-2-forholdet blev øget under cerebral I/R-skade, hvilket bidrog til neuronal apoptose.39 Desuden blev Bax-opregulering og Bcl-2-nedregulering fundet i musehjerner udsat for MCAO/R. 40 Derudover har IAB vist sig at modulere proteinekspressionsniveauerne af både Bcl-2 og Bax for at forbedre redoxsystemet i mus med AD, hvilket indikerer IAB's anti-apoptotiske rolle i denne tilstand.15 I den nuværende tilstand. undersøgelse, viste vi, at administrationen af ​​IAB reducerede I/R-induceret neuronal apoptose in vivo ved at nedregulere Bax og opregulere Bcl-2. Disse resultater indebærer, at IAB's neurobeskyttende evne er afhængig af dets anti-apoptotiske aktivitet hos rotter. I/R kan dog også føre til nekrose, som ikke medieres af oxidativt stress.25–28 Det er af stor interesse at undersøge, om IAB også kan fungere ved at hæmme nekrose for at dæmpe I/R-skade.

For at undersøge mekanismen, hvorigennem IAB dæmper oxidativt stress, fokuserede vi på SIRT-proteiner. En tidligere rapport har fundet ud af, at overekspression af SIRT3 hæmmede mitokondriel fission for at beskytte mod cerebral I/R-skade. Ydermere kan SIRT6 beskytte hjernen mod I/R-skader gennem undertrykkelse af oxidativt stress.2 Heri opdagede vi, at SIRT1/3/ 6 var signifikant nedreguleret i MCAO/R-rotter, hvorimod administration af IAB øgede ekspressionen af ​​SIRTl/3/6. Så vidt vi ved, er denne undersøgelse den første, der viser, at IAB kan øge SIRT1/3/6-proteinekspression for at dæmpe oxidativt stress og neuronal apoptose induceret af cerebral I/R-skade.

Begrænsninger

Der er mange forskellige beskyttelsesveje mod oxidativ stress. Her demonstrerede vi, at signaleringsmekanismen for IAB-beskyttelse er gennem SIRT 1/3/6. Andre mekanismer mod oxidativt stress eller cerebral I/R-skade bør dog belyses yderligere. Under I/R-skade er både apoptose og nekrose involveret; dog fokuserede vi kun på apoptose. Yderligere forskning i IAB's rolle i nekrose vil således være nødvendig for fuldt ud at forklare IAB's beskyttende funktion under I/R-skade.

Konklusioner

Her demonstrerede vi, at IAB kan lindre oxidativ stress og apoptose af neuroner hos rotter, der er udsat for cerebral I/R. Desuden kan antioxidativ stress og anti-apoptotiske funktioner af IAB opstå gennem reguleringen af ​​SIRT1/3/6-ekspressionen. Samlet tyder vores data på, at IAB er en kandidatbehandling for cerebral I/R-skade.

ORCID iDs Lifeng An  https://orcid.org/0000-0002-4835-1817 Dandan Zhu  https://orcid.org/0000-0001-9119-9956 Xin Zhang  https://orcid.org/0000-0002-9496-1691 Jingwen Huang  https://orcid.org/0000-0001-6449-5362 Guangbao Lu https://orcid.org/0000-0002-2465-8996

Livng An1,B,D, Dandan Zhu2,B, Xin Zhang2,C, Jingwen Huang1,C, Guangbao Lu1,A,F

1 Jiamusi College, Heilongjiang University of Chinese Medicine, Kina

2 Graduate School, Heilongjiang University of Chinese Medicine, Jiamusi, Kina

A – forskningskoncept og design; B – indsamling og/eller samling af data; C – dataanalyse og fortolkning;

D – skrive artiklen; E – kritisk revision af artiklen; F – endelig godkendelse af artiklen

Referencer

1. Rossi DJ, Brady JD, Mohr C. Astrocytmetabolisme og signalering under hjerneiskæmi. Nat Neurosci. 2007;10(11):1377-1386. doi:10.1038/ nn2004
2. Ribeiro PW, Cola PC, Gatto AR, et al. Forholdet mellem dysfagi, National Institutes Of Health Stroke Scale-score og prædiktorer for lungebetændelse efter iskæmisk slagtilfælde. J Stroke Cerebrovasc Dis. 2015; 24(9):2088-2094. doi:10.1016/j.jstrokecerebrovasdis.2015.05.009
3. Hu X, De Silva TM, Chen J, Faraci FM. Cerebral vaskulær sygdom og neurovaskulær skade ved iskæmisk slagtilfælde. Circ Res. 2017;120(3):449–471. doi:10.1161/circresaha.116.308427
4. Tabassum R, Vaibhav K, Shrivastava P, et al. Perillylalkohol forbedrer funktionelle og histologiske resultater mod iskæmi-reperfusionsskade ved at dæmpe oxidativt stress og undertrykkelse af COX-2, NOS-2 og NF-KB hos okklusionsrotter i den midterste cerebrale arterie. Eur J Pharmacol. 2015;747:190-199. doi:10.1016/j.ejphar.2014.09.015
5. Woodruff TM, Thundyil J, Tang SC, Sobey CG, Taylor SM, Arumugam TV. Patofysiologi, behandling og dyre- og cellulære modeller af humant iskæmisk slagtilfælde. Mol Neurodegener. 2011;6(1):11. doi:10.1186/1750- 1326-6-11
6. Gonzalez-Rodriguez PJ, Xiong F, Li Y, Zhou J, Zhang L. Føtal hypoxi øger sårbarheden af ​​hypoxisk-iskæmisk hjerneskade hos neonatale rotter: Glukokortikoid-receptorernes rolle. Neurobiol Dis. 2014;65:172-179. doi:10.1016/j.nbd.2014.01.020
7. Rodrigo R, Fernández-Gajardo R, Gutiérrez R, et al. Oxidativ stress og patofysiologi af iskæmisk slagtilfælde: nye terapeutiske muligheder. CNS Neurol Disord Drug Targets.2013;12(5):698-714. doi:10.2174/ 1871527311312050015
8. Zhang C, Ling CL, Pang L, et al. Direkte makromolekylær lægemiddellevering til cerebralt iskæmiområde ved hjælp af neutrofilmedierede nanopartikler. Teranostik. 2017;7(13):3260-3275. doi:10.7150/thno.19979
9. Kahles T, Luedike P, Endres M, et al. NADPH-oxidase spiller en central rolle i blod-hjerne-barriereskader i eksperimentelt slagtilfælde. Slag. 2007;38(11):3000-3006. doi:10.1161/strokeaha.107.489765
10. Chen H, Song YS, Chan PH. Hæmning af NADPH-oxidase er neurobeskyttende efter iskæmi-reperfusion. J Cereb Blood Flow Metab. 2009; 29(7):1262-1272. doi:10.1038/jcbfm.2009.47
11. Kapoor M, Sharma N, Sandhir R, Nehru B. Virkning af NADPH-oxidasehæmmeren apocynin på iskæmi-reperfusion hippocampusskade i rottehjerne. Biomed Pharmacother. 2018;97:458-472. doi:10.1016/j. biopha.2017.10.123
12. Yu S, Wang C, Cheng Q, et al. En aktiv komponent i Achyranthes bidentata polypeptider giver neurobeskyttelse gennem inhibering af mitokondrieafhængig apoptotisk vej i dyrkede neuroner og i dyremodeller af cerebral iskæmi. PLoS One. 2014; 9(10):e109923. doi:10.1371/journal.pone.0109923
13. Geng HX, Li RP, Li YG, et al. 14,15-EET undertrykker neuronal apoptose i iskæmi-reperfusion gennem mitokondriel vej. Neurochem Res.2017;42(10):2841-2849. doi:10.1007/s11064-017-2297-6
14. Du Q, Li L, Jerz G. Oprensning af astilbin og isoastilbin i ekstraktet af smilax glabra rhizom ved højhastigheds modstrømskromatografi. J Chromatogr A. 2005;1077(1):98-101. doi:10.1016/j.chroma. 2005.04.072
15. Yu H, Yuan B, Chu Q, Wang C, Bi H. Beskyttende roller af isoastilbin mod Alzheimers sygdom via Nrf2-medieret antioxidation og anti-apoptose. Int J Mol Med.2019;43(3):1406–1416. doi:10.3892/ijmm. 2019.4058
16. Zhou X, Xu Q, Li JX, Chen T. Strukturel revision af to flavanonolglycosider fra Smilax glabra. Planta Med. 2009;75(6):654-655. doi:10. 1055/s-0029-1185360
17. Morimoto J, Yasuhara T, Kameda M, et al. Elektrisk stimulering øger migrationsevnen af ​​transplanterede knoglemarvsstromaceller i en iskæmisk slagtilfældemodel for gnavere. Cell Physiol Biochem. 2018; 46(1):57-68. doi:10.1159/000488409
18. Torrens-Mas M, Pons DG, Sastre-Serra J, Oliver J, Roca P. SIRT3-dæmpning sensibiliserer brystkræftceller over for cytotoksiske behandlinger gennem en stigning i ROS-produktion. J Cell Biochem. 2017;118(2):397-406. doi:10.1002/jcb.25653
19. Nassir F, Arndt JJ, Johnson SA, Ibdah JA. Regulering af mitokondrielt trifunktionelt protein modulerer ikke-alkoholisk fedtleversygdom hos mus. J Lipid Res. 2018;59(6):967-973. doi:10.1194/jlr.M080952
20. Torrens-Mas M, Hernández-López R, Oliver J, Roca P, Sastre-Serra J. Sirtuin 3-silencing forbedrer oxaliplatins effektivitet gennem acetylering af MnSOD i tyktarmskræft. J Cell Physiol. 2018;233(8):6067-6076. doi:10.1002/jcp.26443
21. Hernández-Jiménez M, Hurtado O, Cuartero MI, et al. Lydløs informationsregulator 1 beskytter hjernen mod cerebral iskæmisk skade. Slag. 2013;44(8):2333-2337. doi:10.1161/strokeaha.113.001715
22. Chen GY, Nuñez G. Steril inflammation: sansning og reaktion på skade. Nat Rev Immunol. 2010;10(12):826–837. doi:10.1038/nri2873
23. Eltzschig HK, Eckle T. Iskæmi og reperfusion: Fra mekanisme til translation. Nat Med. 2011;17(11):1391-1401. doi:10.1038/nm.2507
24. Dziedzic T. Systemisk inflammation som et terapeutisk mål ved akut iskæmisk slagtilfælde. Expert Rev Neurother.2015;15(5):523–531. doi:10.1586/ 14737175.2015.1035712
25. Yemisci M, Gursoy-Ozdemir Y, Vural A, Can A, Topalkara K, Dalkara T. Pericytekontraktion induceret af oxidativ-nitrativ stress forringer kapillær reflow på trods af vellykket åbning af en okkluderet cerebral arterie. Nat Med. 2009;15(9):1031-1037. doi:10.1038/nm.2022
26. Chen H, Yoshioka H, ​​Kim GS, et al. Oxidativ stress i iskæmisk hjerneskade: Mekanismer for celledød og potentielle molekylære mål for neurobeskyttelse. Antioxid redox signal. 2011;14(8):1505-1517. doi:10.1089/ars.2010.3576
27. Olmez I, Ozyurt H. Reaktive oxygenarter og iskæmisk cerebrovaskulær sygdom. Neurochem Int. 2012;60(2):208–212. doi:10.1016/j. neuint.2011.11.009
28. Guo J, Cheng C, Chen CS, et al. Overekspression af fibulin-5 dæmper iskæmi/reperfusionsskade efter okklusion af den midterste cerebrale arterie hos rotter. Mol Neurobiol. 2016;53(5):3154-3167. doi:10.1007/s12035- 015-9222-2
29. Qiang M, Xu Y, Lu Y, et al. Autofluorescens af MDA-modificerede proteiner som en in vitro og in vivo probe i oxidativ stressanalyse. Proteincelle. 2014;5(6):484–487. doi:10.1007/s13238-014-0052-1
30. Hou S, Zhao MM, Shen PP, et al. Neurobeskyttende effekt af salvianolsyrer mod cerebral iskæmi/reperfusionsskade. Int J Mol Sci. 2016;17(7). doi:10.3390/ijms17071190
31. Adibhatla RM, Hatcher JF. Lipidoxidation og peroxidation i CNS sundhed og sygdom: Fra molekylære mekanismer til terapeutiske muligheder. Antioxid redox signal. 2010;12(1):125-169. doi:10.1089/ ars.2009.2668
32. Staroń A, Mąkosa G, Koter-Michalak M. Oxidativ stress i erytrocytter fra patienter med reumatoid arthritis. Rheumatol Int. 2012; 32(2):331-334. doi:10.1007/s00296-010-1611-2
33. Aşcı S, Demirci S, Aşcı H, Doğuç DK, Onaran İ. Neuroprotektive virkninger af pregabalin på cerebral iskæmi og reperfusion. Balkan Med J. 2016;33(2):221–227. doi:10.5152/balkanmedj.2015.15742
34. Tao T, Li CL, Yang WC, et al. Beskyttende virkninger af propofol mod hel cerebral iskæmi/reperfusionsskade hos rotter gennem inhibering af den apoptoseinducerende faktorvej. Brain Res.2016;1644: 9-14. doi:10.1016/j.brainres.2016.05.006
35. Martinou JC, Youle RJ. Mitokondrier i apoptose: Bcl-2 familiemedlemmer og mitokondriel dynamik. Dev Cell. 2011;21(1):92-101. doi:10.1016/j.devcel.2011.06.017
36. Borner C, Andrews DW. Den apoptotiske pore på mitokondrier: Brækker vi igennem eller sidder vi stadig fast? Celledød er forskellig. 2014;21(2):187-191. doi:10.1038/cdd.2013.169
37. Siddiqui WA, Ahad A, Ahsan H. Mysteriet med BCL2-familien: Bcl-2-proteiner og apoptose. En opdatering. Arch Toxicol. 2015;89(3):289–317. doi:10.1007/s00204-014-1448-7
38. Maes ME, Schlamp CL, Nickells RW. BAX to basics: Hvordan BCL2-genfamilien kontrollerer døden af ​​retinale ganglieceller. Prog Retin Eye Res. 2017;57:1–25. doi:10.1016/j.preteyeres.2017.01.002
39. Erfani S, Khaksari M, Oryan S, Shamsaei N, Aboutaleb N, Nikbakht F. Nampt/PBEF/visfatin udøver neurobeskyttende virkninger mod iskæmi/reperfusionsskade via modulering af Bax/Bcl-2-forhold og forebyggelse af caspase{ {2}} aktivering. J Mol Neurosci. 2015;56(1):237–243. doi:10.1007/s12031-014-0486-1

40. Chen L, Cao J, Cao D, et al. Beskyttende virkning af dexmedetomidin

mod diabetisk hyperglykæmi-forværret cerebral iskæmi/reperfusionsskade: En in vivo og in vitro undersøgelse, Life Sdi,2019:235:116553.doi; 10.1016/ilfs.2019116553

41. Zhao H, Luo Y, Chen L, et al. Sirt3 hæmmer cerebral iskæmi-reperfusionsskade gennem normalisering af Wnt/-catenin-vejen og blokering af mitokondriel fission. Cellestresschaperoner. 2018;23(5):1079-1092. doi:10.1007/s{11}}å

42. Zhang W, Wei R, Zhang L, Tan Y, Qian C. Sirtuin 6 beskytter hjernen mod cerebral iskæmi/reperfusionsskade gennem NRF2-aktivering. Neuroscience.2017;366:95–104. doi:10.1016/j.neuroscience.2017.09.035