Baggrund.Spidsnyreskade(AKI) er en hyppig komplikation af dekompenseret cirrhose med øget dødelighed. Traditionelle biomarkører såsom serumkreatinin er ikke følsomme til at opdage skader uden funktionel ændring. Vi antager, at urineksosomer potentielt bærer markører, der adskiller typen afnyreskadehos cirrosepatienter.

Metoder.Dette er en prospektiv, enkeltcenter- og observationsundersøgelse af voksne patienter med cirrhose. Patientgrupperne inkluderede sunde normale kontroller, kompenseret cirrose med normalnyrefunktion, dekompenseret skrumpelever med almnyrefunktionog dekompenseret cirrhose med AKI. Data blev udtrukket fra den elektroniske patientjournal, herunder ætiologi af leversygdom, MELD-score, historie med dekompensation, Child-Turcotte-Pugh-score, historie med AKI og medicineksponeringer. Urinprøver blev indsamlet på tidspunktet for samtykke. Urin exosom proteinindhold blev analyseret, og proteomiske data blev valideret ved immunoblotting. Statistisk analyse inkluderede partiel mindste kvadraters-diskriminerende analyse kombineret med variabel betydning i projektionsidentifikation.

Resultater.Atten cirrhotiske forsøgspersoner blev tilmeldt, og seks raske kontrolpersoner blev ekstraheret fra vores biodepot. Urineksosomer blev isoleret, og 1572 proteiner blev identificeret. Maltase-glucoamylase var det mest diskriminerende protein, der blev bekræftet ved western blotting.

Konklusioner. Patienter med cirrhosis og AKI har opregulering af renal brush border disaccharidase, MGAM, i urineksosomer, hvilket kan differentiere typen afnyreskadei skrumpelever; dog kræver den kliniske betydning af dette yderligere validering.

For mere information kontakt venligst:joanna.jia@wecistanche.com

Akut nyreskadeblive behandlet afcistanche

1. Introduktion

Spidsnyreskade(AKI) forekommer hos cirka 20 procent af hospitalsindlagte patienter med cirrhose [1, 2]. AKI hos indlagte cirrosepatienter er ofte progressiv, alvorlig og en uafhængig negativ prædiktor for dødelighed [3]. *Den mest almindelige årsag til AKI i cirrose er hæmodynamisk, hvilket tegner sig for 70 procent af tilfældene. Akut tubulær nekrose (ATN) tegner sig for 30 procent af tilfældene, og postrenale årsager er sjældne og tegner sig for mindre end 1 procent af tilfældene. Hepatorenalt syndrom (HRS) er hæmodynamisk uden identificerbarnyreskadeeller sygdom og forekommer hos cirka 20 procent af cirrosepatienter [4, 5].

Serumkreatinin (Scr) er den mest udbredte biomarkør til at vurderenyrefunktionog identificerenyreskade. SCR er dog suboptimal hos cirrosepatienter til Hindawi Critical Care Research and Practice Volume 2019, adskillige årsager, herunder nedsat leverproduktion, muskelsvind med formindskede lagre, øget distributionsvolumen og protein-kalorie fejlernæring. Gennemsnitlige Scr-værdier er lavere hos cirrosepatienter sammenlignet med den generelle befolkning, hvilket resulterer i forsinket diagnose af AKI baseret på den nuværende definition af AKI [6]. Derudover er Scr en biomarkør fornyrefunktionog er ikke en følsom skadesmarkør. Nye biomarkører for nyreskade er dukket op for at forbedre påvisning af AKI og hjælpe med at differentiere ætiologien af ​​AKI.Nyreskadebiomarkører inklusivnyreskademolekyle-1 (KIM-1), neutrofil gelatinase-associeret lipocalin (NGAL), interleukin-18, leverfedtsyrebindende protein (L-FABP), insulinlignende vækstfaktorbindende protein -7 (IGFBP-7) ​​og vævsinhibitor af metalloproteinase-2 (TIMP-2) kan være forhøjet før en stigning i Scr-forstærkende detektion afnyreskadeuden funktionsændring [7]. Undersøgelser har vist, at disse biomarkører kan differentiere ætiologien af ​​AKI [8, 9]. Forbedrede biomarkører til påvisning og differentiering af AKI repræsenterer vigtige udækkede kliniske behov hos patienter med cirrhose.

Exosomer er nanovesikler, der frigives fra levende celler som en mekanisme for intercellulær kommunikation [10]. *e proteinindhold i exosomer har vist sig at være bemærkelsesværdigt modificeret under patologiske eller stressforhold [11-13]. I dennyre,exosomer leveres til urin fra alle celletyper [14, 15], og urineksosomer kan potentielt betragtes som individets biokemiske signatur. Da urineksosomer ikke rutinemæssigt analyseres, kan de give yderligere ukendt information om proteinbiomarkører for AKI hos patienter med cirrose.

Formålet med denne undersøgelse var at evaluere urin exosom proteomics hos patienter med cirrhose og AKI sammenlignet med raske forsøgspersoner. Vi antog, at indholdet af urineksosomprotein adskiller sig hos patienter med kompenseret eller dekompenseret cirrhose, der oplever AKI sammenlignet med normale raske kontrolpersoner. Ydermere postulerede vi, at differentieret urin exosomalt proteinindhold ville give indsigt i mekanismer fornyreskadeved skrumpelever.

2. Materialer og metoder

Dette er en prospektiv, enkeltcenter- og observationsundersøgelse af voksne patienter med cirrhose. Alle patienter til undersøgelsen blev rekrutteret fra UC San Diego Health-systemet mellem 1. juli 2013 og 1. juni 2014 og gav informeret samtykke. Patienter var berettiget til inklusion, hvis de havde en diagnose af skrumpelever og var i stand til at give en urinprøve. Cirrhose blev bestemt ved leverbiopsi, tværsnitsbilleddannelse eller klinisk (via identifikation af en dekompensationshændelse som bestemt af en hepatolog). Data blev udtrukket fra elektroniske sundhedsjournaler, herunder demografi, antropometri, vitale tegn, komorbide medicinske problemer, ætiologi af cirrhose, komplikationer af cirrhose (ascites, varicer, hepatisk encefalopati og hepatocellulært karcinom), historie med AKI ellerkronisk nyresygdom, og medicineksponeringer inden for 30 dage efter tilmelding. Kun patienter med fuldstændige kliniske data og laboratorietest inden for 30 dage efter tilmelding var berettiget til inklusion i denne undersøgelse. Patienterne blev kategoriseret i grupper som følger:

(1) Gruppe 0: normale sunde kontroller

(2) Gruppe 1: kompenseret cirrhose (Child-Turcotte-Pugh klasse A, MELD 10) uden historie med AKI og normalnyrefunktion

(3) Gruppe 2: dekompenseret cirrhose (Child-Turcotte-Pugh klasse B eller C) uden historie med AKI og normalnyrefunktion

(4) Gruppe 3: dekompenseret cirrhose (Child-Turcotte-Pugh klasse B eller C) og AKI

Normalnyrefunktionblev defineret som en estimeret GFR > 60 ml/min/1,73 m2 (MDRD-formel), ingen albuminuri og ingen historie med AKI. AKI blev defineret i henhold til AKIN-kriterier: Scr-stigning på 0,3 mg/dl på 48 timer eller 50 procent stigning i Scr fra baseline [16]. Patienter med AKI blev rekrutteret under indlæggelser og konsultationer fra den indlagte hepatologiske tjeneste, hvis de havde fået taget blod- og urinprøver under episoden med AKI. Den fjerde gruppe af sunde kontroller blev udvundet fra et sundt normalt biodepot ved UCSD O'Brien Center for AKI Research ved UC San Diego School of Medicine. *arbejdet blev godkendt af Institutional Review Board ved University of California, San Diego.

2.1. Urinprøveudtagning og behandling til exosomisolering.

Urin blev centrifugeret ved 3000 × g i 30 min. Supernatantens pH blev justeret til 7, uddelt i portioner og frosset ved -80 grader C. Exosomer blev fremstillet ved anvendelse af polyethylenglycol-(PEG-)-induceret præcipitation [17]. *e PEG-blandede urinprøver blev holdt ved stuetemperatur i 2 timer og centrifugeret ved 10.000 xg i 30 minutter. *e pellet blev resuspenderet i 10 mM Tris med 1 mM EDTA-Na-salt. * Dette trin blev gentaget to gange for at fjerne urenheder. En-dimensionel SDS PAGE af exosomproteinerne blev udført før in-gel trypsinisering for at forhindre forvirring [18].

2.2. Proteomisk analyse.

Gelen blev skåret til 1 mm × 1 mm og affarvet 3 gange under anvendelse af 100 µL 100 mM ammoniumbicarbonat i 15 minutter efterfulgt af 100 µL acetonitril (ACN) i 15 minutter [19 ]. *e supernatanten blev lyofiliseret, og den resulterende pellet blev reduceret med 200 µL 100 mM ammoniumbicarbonat-10 mM DTT og inkuberet ved 56 grader i 30 minutter. Efter fjernelse af væsken blev gelstykker tilsat til 200 µL 100 mM ammoniumbicarbonat-55 mM iodacetamid. *is blev inkuberet ved stuetemperatur i 20 minutter i mørke. *e supernatanten blev fjernet og vasket med 100 mM ammoniumbicarbonat i 15 min. *da, 100 µL ACN blev tilsat for at dehydrere gelstykkerne, og opløsningen blev lyofiliseret. Iskold trypsin (0,01 µg/µL) i 50 mM ammoniumbicarbonatopløsning blev derefter tilsat for at dække gelstykkerne til fordøjelsesprocessen og sat på is i 30 minutter. Når rehydreringen var afsluttet, blev frisk 50 mM ammoniumbicarbonat tilsat for at erstatte overskud. trypsin og efterlades natten over ved 37 grader. Ekstraktion af peptiderne blev udført to gange ved tilsætning af 50 µl 0,2 procent myresyre og 5 procent ACN og vortexblandet i 30 minutter ved stuetemperatur. Efter fjernelse af supernatanten blev 50 µl 50 procent ACN-0.2 procent myresyre tilsat til prøven, hvirvlet igen i 30 minutter ved stuetemperatur. *is supernatant blev fjernet og kombineret med den foregående supernatant fra den første ekstraktion. Prøver blev analyseret ved hjælp af Eksigent nano-LC-Ultra® 2D med cHiPLC-nano flex-systemet (Eksigent, AB SCIEX Dublin, CA, USA) i en trap-elueringstilstand i kombination med tandem massespektroskopi ved hjælp af QExactive massespektrometer (Thermo Fisher Scientific, San Jose´, CA, USA) med elektrospray-ionisering [17].

2.3. Datastyring.

SEQUEST-søgemaskinen (Thermo Scientific Proteome Discoverer-software, version 1.4) blev brugt i analysen. *e proteindatabase for tryptiske peptidsekvenser for Homo sapiens fra National Center for Biotechnology Information (NCBI) blev brugt til at sammenligne vores eksperimentelle MS/MS-spektre. For at identificere peptidsekvenser og relaterede proteiner brugte vi tidligere offentliggjorte kriterier [17]. For at vurdere statistisk signifikans blev der brugt separate mål- og lokkesøgninger og beregning af klassiske score-baserede falske opdagelsesrater (FDR'er). Til sidst filtrerede vi SEQUEST-outputdataene for at tildele en endelig score til proteiner. Minimumsværdier for korrelationsscore (Xcorr) på 1,5, 2.0, 2.25 og 2.5 blev valgt for henholdsvis enkelt-, dobbelt-, tredobbelt- og quadrupolladede ioner. Tidligere publicerede parametre blev brugt til at garantere en høj stringens [20], og det falske positive peptidforhold var mindre end 3 procent.

2.4. Statistisk analyse.

Den normaliserede spektrale abundansfaktor (NSAF) blev brugt til at beregne den relative overflod af polypeptider [21]. Log-transformation og skalering af peptidtællinger blev udført før statistisk analyse. MetaboAnalyst 2.0 webportal blev brugt til at udføre Elevens t-test, partiel mindste kvadraters diskriminantanalyse (PLS-DA) og variabel betydning i projektion (VIP) med en a priori p < 0.="" 05="" [22].="" *e-forholdet="" mellem="" individuelt="" protein="" og="" total="" koncentration="" blev="" evalueret="" under="" anvendelse="" af="" den="" parrede="" students="" t-test="" for="" hver="" gruppe.="" pls-da="" og="" vip="" blev="" brugt="" til="" at="" identificere="" diskriminerende="" proteiner="" [23].="" vi="" udvalgte="" proteiner="" med="" en="" falsk="" opdagelsesrate="" (fdr)="" på="" mindre="" end="" eller="" lig="" med="" 10="" procent="" for="" at="" validere="" ved="" hjælp="" af="" western="">

2.5. Western Immunoblotting og kvantificering.

Antistoffet mod MGAM blev købt fra Proteintech Group, Inc., (Chicago, IL, USA) og blev brugt til at opløse 100 ug protein fra urineksosomer fra hvert individ. Efter adskillelse blev proteinerne overført til nitrocellulosepapir, blokeret, inkuberet med primært antistof natten over før vask med Tris-bufret saltvand, inkuberet i 1 time med HRP-sekundært antistofkonjugat og visualiseret ved at udvikle som beskrevet i tidligere publikationer fra vores laboratorium [ 24, 25]. ImageJ-software (NIH) blev brugt til at kvantificere vestlige immunoblotbånd [24] og plottet (GraphPad Prism, San Diego, CA, USA).

3. Resultater

3.1. Kliniske karakteristika for skrumpelever og sunde kontrolpersoner.

Seks patienter i hver gruppe med fuldstændige kliniske data blev analyseret og sammenlignet med seks raske kontroller. Demografi og ætiologi af leversygdom er opsummeret i tabel 1. Som forventet i henhold til undersøgelsesdesign varierede Child Turcotte-Pugh og MELD-score signifikant mellem patientgrupper.

3.2. Proteomiske analyser af urineksosomer fra cirrosepatienter og sunde kontroller.

I alt på tværs af alle 4 grupper blev 1572 unikke proteiner identificeret. Der var 36 0 proteiner, der var fælles for alle grupper. Vi fandt 83 unikke exosomale proteiner for gruppe 0 (kontroller), 250 for gruppe 1, 84 for gruppe 2 og 212 for gruppe 3 (figur 1). Vi udførte endvidere multivariat PLS-DA på proteiner, som viste en klar adskillelse mellem den raske kontrolgruppe og forskellige undergrupper af cirrose forsøgspersoner, som vist i figur 2. Kompenserede og dekompenserede cirrose forsøgspersoner udennyreskade(gruppe 1 og 2) udviste betydelig overlap, mens cirrotiske forsøgspersoner med AKI (gruppe 3) viste tydelig adskillelse fra de andre cirrose forsøgspersoner og raske kontrolpersoner. En separat ANOVA af proteiner mellem de fire grupper viste, at 126 proteiner var signifikant ændret (p < 0.05),="" hvoraf="" 13="" nåede="" den="" falske="" opdagelsesrate="" (fdr)="" cut-off=""><10% (table="" 2).="" maltase-glucoamylase="" (mgam)="" was="" the="" top="" discriminant="" protein="" with="" a="" vip="" score="" of="" 4.35="" for="" the="" entire="" study="">

3.3. Maltase-Glucoamylase Protein er øget i dekompenserede cirrhotiske urineksosomer.

De proteomiske data viste en højere koncentration af MGAM i urineksosomer hos dekompenserede cirrosepatienter med og udennyreskade(gruppe 2 og 3). Dette var det enkelte mest diskriminerende protein blandt alle de fire grupper med en VIP-score på 4,35 (figur 3). Bekræftende western blotting af disse exosomer viste kun påvisbart protein hos cirrosepatienter mednyreskade(gruppe 3) (Figur 4).

4. Diskussion

Vi udførte en proteomisk analyse af urin-eksosomindholdet fra patienter med kompenseret cirrhosis, dekompenseret cirrhose og dekompenseret cirrhose med AKI og sammenlignede dem med raske kontroller. Den proteomiske analyse af urineksosomer hos cirrosepatienter identificerede adskillige potentielt vigtige biomarkører fornyreskade, især MGAM, et bifunktionelt enzym. Vi fandt de højeste koncentrationer af MGAM i urineksosomer hos patienter med cirrhose og AKI. Ydermere var MGAM øget hos patienter med cirrose, men ikke i samme omfang som hos dem med AKI. MGAM var fraværende i den raske kontrolgruppe, hvilket fremhævede dens potentielle rolle som en biomarkør for kritisk sygdom.

Denne undersøgelse har flere andre vigtige resultater. For det første, så vidt vi ved, er dette den første rapport om beskrivende analyse af urineksosomproteinindhold i velkarakteriserede cirrose emner. For det andet er dette den første undersøgelse, der rapporterer øget tubulær epitelial disaccharidase icirrose-nyreskadeparadigme. Urin exosom proteomiske data fra de 4 forskellige grupper viste, at MGAM-opregulering i cirrhose AKI-gruppen var robust og konsistent. Maltase er den vigtigste disaccharidase i nyrebørstegrænsemembraner [26, 27], men den præcise funktion af dette enzym er ikke klart belyst; en mulig rolle for de relaterede disaccharidaser, sucrase-isomaltase og trehalase i sukkertransport er imidlertid blevet postuleret [28]. Hos ti pattedyrsarter er disaccharider relateret til MGAM blevet fundet i nyrebørstekanten [27]. Farquhar og kolleger har påvist, at maltase er til stede i mikrovilli af den proksimale indviklede tubulus, måske fungerer i glucose reabsorption og transport; og denne absorptionskapacitet falder mod mere distale dele af nefronet [29]. MGAM viste sig at være til stede i exosomer og mikropartikler i en musemodel af ikke-alkoholisk steatohepatitis (NASH) [30], en almindelig årsag til cirrhose. Da cirrosepatienter har flere underliggende tilstande, der bidrager til et fald i Scr, er påvisningen af ​​AKI problematisk. Derudover er ætiologien af ​​skade ofte ukendt, og det er vanskeligt at skelne mellem hepatorenalt syndrom og andre ætiologier af AKI. Desuden er patofysiologien af ​​dekompenseret cirrhose med AKI uklar, da den kan afspejle hæmodynamiske ændringer eller inflammatoriske mediatorer i tilfælde af akut på kronisk leversvigt [31]. Vi begrundede, at de strukturelle og funktionelle ændringer, som cirrose og portal hypertension medfører inyrefunktionvariere i sværhedsgrad afhængigt af sværhedsgraden af ​​skrumpelever. Disse forskelle mellem den kompenserede og dekompenserede leversygdom mednyreskadekan forstås ved at studere nedstrømsprodukterne franyresåsom urin. I betragtning af den nefroncelle-tilstandsspecifikke last af urineksosomet antog vi, at urineksosomanalyse indeholder nøgleoplysninger, der er relevante for differentieringen af ​​AKI i cirrhose. Denne rapport er det første skridt mod at teste denne hypotese.

Dette studiedesign havde flere begrænsninger. For det første er antallet af analyserede forsøgspersoner per gruppe lille. Større prøvestørrelse kan have øget robustheden af ​​disse data yderligere, og yderligere proteiner kan have nået tærsklen for en acceptabel FDR på<10%. however,="" despite="" this="" small="" sample,="" these="" data="" demonstrating="" mgam="" as="" a="" unique="" exosomal="" protein="" in="" cirrhotic="" patients="" with="" aki="" is="" robust.="" second,="" we="" used="" 1d="" gel="" electrophoresis="" to="" resolve="" the="" exosome="" proteins="" prior="" to="" lc/ms-ms="" analysis="" that="" resulted="" in="" the="" identification="" of="" 1572="" proteins="" overall.="" if="" we="" had="" conducted="" direct="" exosome="" protein="" trypsinization="" instead="" of="" following="" this="" method,="" perhaps="" the="" number="" of="" identified="" proteins="" might="" have="" increased.="" in="" our="" experience,="" exosomes="" are="" packaged="" with="" nonfull="" length="" peptides="" from="" proteolytic="" action="" as="" well="" as="" endogenous="" peptides="" and="" may="" have="" con-founded="" the="" analysis.="" by="" following="" the="" gel="" electrophoresis="" method,="" we="" ensured="" that="" we="" only="" compared="" full-length="" protein="" differences="" between="">

Sammenfattende har vi karakteriseret urin exosom protein forskelle i raske kontroller og kompenseret og dekompenseret cirrhotiske forsøgspersoner med og uden AKI ved proteomiske metoder. Arbejde fra Knepper-gruppen viser, at mange vigtige nyreproteiner (f.eks. aquaporiner, polycystiner og podocin) udskilles i urineksosomet [32, 33]. Vores nuværende rapport tilføjer MGAM til denne gruppe af funktionelt vigtige nyreproteiner identificeret i urineksosomer. Vores resultater tyder på, at MGAM kan differentiere proksimal tubulær skade fra andre typer AKI hos cirrosepatienter. Den kliniske betydning af MGAM-opregulering hos cirrose-patienter med AKI skal imidlertid fastslås i fremtidige undersøgelser.

Datatilgængelighed

De kliniske og proteomiske data, der bruges til at understøtte resultaterne af denne undersøgelse, er begrænset af UCSD institutional review board for at beskytte patientens privatliv.*e data er tilgængelige fra Dr. Linda Awdishu (lawdishu@ucsd.edu) for forskere, der opfylder kriterier for adgang til fortrolige data.

Interessekonflikt

Forfatterne erklærer, at de ikke har nogen interessekonflikter.

Anerkendelser

Forskning støttet gennem NIH NIDDK UAB/UCSD O'Brien Center Grant DK0793337.

Forfatter

Linda Awdishu,^1,2 Shirley Tsunoda,¹ Michelle Pearlman,³ Chanthel Kokoy-Mondragon,²Majid Ghassemian,⁴Robert K. Naviaux,⁵Heather M. Patton,³Ravindra L. Mehta,²Bhavya Vijay,⁶og Satish P.Ramachandra Rao ^2,6,7

1UC San Diego Skaggs School of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences, San Diego, USA

2Biomarkers Laboratory, O'Brien Center forAkut nyreskadeForskning, Nefrologi-Hypertension, UC San Diego, Institut for Medicin, San Diego, USA

3UC San Diego, Institut for Medicin, Afdeling for Gastroenterologi, San Diego, USA

4UC San Diego, Department of Chemistry & Biochemistry, Biomolecular & Proteomics Spectrometry Facility, San Diego, USA

5UC San Diego, afdelinger for medicin, pædiatri og patologi, San Diego, USA

6I-AIM Biomarkers Laboratory, Re University of Trans-Disciplinary Health Sciences and Technology (TDU), Bangalore, Indien

7UC San Diego, Department of Medicine, Division of Infectious Diseases, San Diego, USA

Korrespondance skal rettes til Satish P. Ramachandra Rao; Modtaget 30. oktober 2018; Revideret 31. december 2018; Godkendt 19. februar 2019; Udgivet 16. april 2019 Akademisk redaktør: Antonio Artigas

Copyright © 2019 Linda Awdishu et al. Dette er en artikel med åben adgang distribueret under,som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat at det originale værk er korrekt citeret.

Referencer

[1] F. Fabrizi og P. Messa, "Udfordringer i behandling af nyresvigt før levertransplantation,"Klinikker i Lever Sygdom, bind. 21, nr. 2, s. 303-319, 2017.

[2] P. Tandon, MT James, JG Abraldes, CJ Karvellas, F. Ye og N. Pannu, "Relevansen af ​​nye definitioner for forekomst og prognose af akuttenyreskadehos indlagte patienter med skrumpelever: en retrospektiv befolkningsbaseret kohorteundersøgelse,"PLoS One, bind. 11, nr. 8, artikel-id e0160394, 2016.

[3] JM Belcher, G. Garcia-Tsao, AJ Sanyal et al., "Associering af AKI med dødelighed og komplikationer hos indlagte patienter med cirrhosis,"Hepatologi, bind. 57, nr. 2, s. 753-762, 2013.

[4] G. Garcia-Tsao, CR Parikh og A. Viola, "Akut nyreskadei skrumpelever,"Hepatologi, bind. 48, nr. 6, s. 2064-2077, 2008.

[5] R. Moreau og D. Lebrec, "Akut nyresvigt hos patienter med cirrhosis: perspektiver i en alder af MELD,"Hepatologi, bind. 37, nr. 2, s. 233-243, 2003.

[6] F. Wong, JG O'Leary, KR Reddy, et al., "Ny konsensus definition afakut nyreskadeforudsiger nøjagtigt 30-dagedødelighed hos patienter med cirrhose med infektion,"Gastro-enterologi, bind. 145, nr. 6, s. 1280.e1-1288.e1, 2013.

[7] PT Murray, RL Mehta, A. Shaw, et al., "Potentiel brug af biomarkører iakut nyreskade: rapport og opsummering af anbefalinger fra den 10. konsensuskonference for akut dialysekvalitetsinitiativ,"NyreInternational, bind. 85, nr. 3, s. 513-521, 2014.

[8] WK Han, V. Bailly, R. Abichandani, R. Thadhani og JV Bonventre, "Nyreskademolekyle-1 (KIM-1): en ny biomarkør for human renal proksimal tubuliskade,"Nyre International, bind. 62, nr. 1, s. 237-244, 2002.

[9] SG Coca, GN Nadkarni, AX Garg, et al., "Første postoperative urinvejnyreskadebiomarkører og sammenhæng med varigheden af ​​AKI i TRIBE-AKI kohorten,"PLoS One, bind. 11, nr. 8, artikel-id e0161098, 2016.

[10] C. Looze, D. Yui, L. Leung, et al., "Proteomisk profilering af humane plasma-eksosomer identificerer PPARc som et exosom-associeret protein,"Biokemisk og biofysisk forskningskommunikation, bind. 378, nr. 3, s. 433-438, 2009.

[11] J. Conde-Vancells, E. Rodriguez-Suarez, N. Embade, et al., "Karakterisering og omfattende proteomprofilering af exosomer udskilt af hepatocytter,"Journal of Proteome Research, bind. 7, nr. 12, s. 5157-5166, 2008.

[12] GI Lancaster og MA Febbraio, "Eksosomafhængig handel med HSP70,"Journal of Biological Chemistry, bind. 280, nr. 24, s. 23349-23355, 2005.

[13] GI Lancaster og MA Febbraio, "Mekanismer for stress-induceret cellulær HSP72-frigivelse: implikationer for træningsinducerede stigninger i ekstracellulær HSP72,"TræningsimmunologiAnmeldelse, bind. 11, s. 46-52, 2005.

[14] JPJJ Hegmans, PJ Gerber og BN Lambrecht, "Exosomes," iFunktionel proteomik, bind. 484, s. 97-109, Humana Press, New York City, NY, USA, 2008.

[15] R. Zhan, X. Leng, X. Liu, et al., "Varmechokprotein 70 udskilles fra endotelceller via en ikke-klassisk vej, der involverer exosomer,"Biokemisk og biofysisk forskningskommunikation, bind. 387, nr. 2, s. 229-233, 2009.

[16] RL Mehta, JA Kellum, SV Shah, et al., "Akut nyreskadenetværk: rapport om et initiativ til at forbedre resultaterne ved akut nyreskade,"Kritisk Omsorg, bind. 11, nr. 2, s. R31, 2007.

[17] SP Ramachandra Rao, MA Matthias, C. Kokoy-Mon-dragonet al., "Proteomisk analyse af urineksosomer afslører nyretubuli-respons på leptospiral kolonisering i eksperimentelt inficerede rotter."PLoS Forsømte Tropiske Sygdomme, bind. 9, nr. 3, artikel e0003640, 2015.

[18] HC Christianson, KJ Svensson, TH van Kuppevelt, J.-P. Li og M. Belting, "Cancercelle exosomer afhænger af celleoverflade heparansulfat proteoglycaner for deres internalisering

og funktionel aktivitet,"Sager af det national Videnskabernes Akademi, bind. 110, nr. 43, s. 17380-17385, 2013.

[19] A. Shevchenko, M. Wilm, O. Vorm og M. Mann, "Massespektrometrisk sekventering af proteiner fra sølvfarvede polyakrylamidgeler,"Analytisk kemi, bind. 68, nr. 5, s. 850-858, 1996.

[20] F. Brambilla, F. Lavatelli, D. Di Silvestre, et al., "Shotgun proteinprofil af humant fedtvæv og dets ændringer i forhold til systemiske amyloidoser,"Journal of Proteome Research, bind. 12, nr. 12, s. 5642-5655, 2013.

[21] AC Paoletti, TJ Parmely, C. Tomomori-Sato, et al., "Kvantitativ proteomisk analyse af forskellige pattedyrsmediatorkomplekser ved brug af normaliserede spektrale overflodsfaktorer,"Proceedings of the National Academy of Sciences, bind. 103, nr. 50, s. 18928-18933, 2006.

[22] J. Xia, R. Mandal, IV Sinelnikov, D. Broadhurst og

DS Wishart, "MetaboAnalyst 2.0--en omfattende server til metabolomisk dataanalyse,"Nukleinsyreforskning, bind. 40, nr. W1, s. W127–W133, 2012.

[23] J. Xia, N. Psychogios, N. Young og DS Wishart, "MetaboAnalyst: en webserver til metabolomisk dataanalyse og fortolkning,"Nukleinsyreforskning, bind. 37, nr. S2, s. W652–W660, 2009.

[24] SPR Rao, R. Wassell, MA Shaw og K. Sharma, "Profilering af humane mesangiale cellesubproteomer afslører en rolle for calmodulin i glucoseoptagelsen."American JournalafFysiologi-Nyre Fysiologi, bind. 292, nr. 4, s. F1182–F1189, 2007.

[25] SP Ramachandra Rao, Y. Zhu, T. Ravasi, et al., "Pirfenidon er genbeskyttende idiabetisk nyresygdom," Journal of the American Society of Nephrology, bind 20, nr. 8, s. 1765-1775, 2009.

[26] U. Reiss og B. Sacktor, "Nyrebrush border membrane maltase: purification and properties," Archives of Biochemistry and Biophysics, bind 209, nr. 2, s. 342-348, 1981.

[27] B. Sacktor, "Trehalase og transporten af ​​glucose i pattedyretnyreog tarm," Proceedings of the National Academy of Sciences, bind 60, nr. 3, s. 1007-1014, 1968.

[28] SJ Berger og B. Sacktor, "Isolation og biokemisk karakterisering af børstekanter fra kaninnyre," Journal of Cell Biology, bind. 47, nr. 3, s. 637-645, 1970.

[29] D. Kerjaschki, L. Noronha-Blob, B. Sacktor og

MG Farquhar, "Mikrodomæner med karakteristisk glycoproteinsammensætning inyreproksimal tubuli børstekant,"Journal of Cell Biology, bind. 98, nr. 4, s. 1505-1513, 1984.

[30] D. Povero, A. Eguchi, H. Li et al., "Cirkulerende ekstracellulære vesikler med specifikke proteomer og levermikroRNA'er er potentielle biomarkører for leverskade ved eksperimentel fedtleversygdom."PLoS One, bind. 9, nr. 12, artikel-id e113651, 2014.

[31] R. Hernaez, E. Sola', R. Moreau og P. Gine's, "Akut-on-kronisk leversvigt: en opdatering,"Tarm, bind. 66, nr. 3, s. 541-553, 2017.

[32] T. Pisitkun, R.-F. Shen og MA Knepper, "Identifikation og proteomisk profilering af exosomer i human urin,"Proceedings of the National Academy of Sciences, bind. 101, nr. 36, s. 13368-13373, 2004.

[33] PA Gonzales, T. Pisitkun, JD Hofert, et al., "Storskala proteomics og phosphoproteomics of urinary exosomes,"Tidsskrift af det amerikansk Samfund af Nefrologi, bind. 20, nr. 2, s. 363-379, 2009.