Identifikation af hydrogenperoxidresponsive EST'er involveret i phenylethanoidglycosidbiosyntese i Cistanche Salsa-cellekultur

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp / hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com

J. CHEN et al

Abstrakt
Hydrogenperoxid er en effektiv abiotisk elicitor, der kan inducere sekundær metabolitbiosyntese i planter. Vi viser, at i cellesuspensionskulturen af en salttolerant lægeplanteCistanchesalsa, produktion af bioaktive komponenterphenylethanoidGlycosider(Peg'er) blev øget efter H2O2-behandling. At identificere gener relateret til Peg'er(phenylethanoidglycosider)biosyntese påvirket af H2O2, konstruerede vi et suppression subtraktivt hybridiseringsbibliotek af H2O2-responsive gener ved hjælp af enCistanchesalsacellelinje og identificerede 105 udtrykte sekvensmærker (EST'er) og 85 gener. EST-bibliotekets funktionelle annotation og gen ontologianalyser viste gener relateret til forskellige stressresponser, biosyntese af sekundære metabolitter og transkriptionel regulering. Blandt dem identificerede vi to gener relateret til Peg'erne(phenylethanoidglycosider)biosyntesevej (4-coumarat coenzym A ligase og cinnamat 4-hydroxylase) og to WRKY type transkriptionsfaktorer. Ekspressionerne af udvalgte gener efter H2O2-behandlingen blev analyseret af RT-qPCR. Tidlig øget transkription af PeG(phenylethanoidglycosider)biosyntese pathway gener efter behandlingen afslørede, at H2O2 inducerede PeGs(phenylethanoidglycosider)biosyntese via opregulering af dens nøglegener.
Yderligere nøgleord: cinnamate-4-hydroxylase, 4-coumarat coenzym A ligase, undertrykkelse subtraktiv hybridisering.Cistanchesalsa.phenylethanoidGlycosider.

Indførelsen

Cistanchesalsaer en flerårig planteparasit på roden af Haloxylos ammodendrun, og den vokser i ørkenområdet i det vestlige Kina. I århundreder,Cistanchearter er blevet brugt som traditionel urtemedicin (Wang et al. 2012). Bioaktive komponenter erphenylethanoidGlycosider(Peg'er), som har en bemærkelsesværdig effekt på reaktive iltarter (ROS) clearance, strålingsbeskyttelse, immunitetsforbedring og anti-aging (Nan et al. 2013). Pløkker(phenylethanoidglycosider)biosyntese iCistancheinitieres fra phenylalanin (fig. 1 Suppl.), og syntetiseret koffeinsyre glykosyleres yderligere for at danne forskellige PeGs(phenylethanoidglycosider)(Wang et al. 2012). Tre vigtigste Peg'er(phenylethanoidglycosider), echinacosid, acteosid og 2'-acetylacteosid anses for at være de mest aktive komponenter iCistanche(Kobayashi et al. 1984). For at forbedre deres indhold iCistanchecellekultur, forskellige elicitorer er blevet testet, herunder chitosan, putrescine, Ag + og osmotisk stress (Ouyang et al. 2005a, b, Cheng et al. 2005, 2006, Liu et al. 2007, Liu og Cheng 2008). Imidlertid er gener involveret i Peg'er(phenylethanoidglycosider)biosyntese iCistanche, hovedsagelig phenylalanin metabolisme pathway gener, er sjældent blevet identificeret. Kun et gen, der koder for phenylalanin ammoniak-lyase (PAL) blev for nylig identificeret i Cistanche deserticola (Hu et al. 2011). Andre gener, der koder for f.eks. cinnamat-4-hydroxylase (C4H), som kan katalysere omdannelsen af cinnamat til cumarsyre, og 4-coumarat coenzym A-ligase (4CL), et essentielt gen for lignin- og flavanoidbiosyntetser, er ikke fundet iCistanche.
Vi brugte cellekulturen afCistanchesalsaat studere Peg'er(phenylethanoidglycosider)biosyntese og beslægtede gener ekspression. Vi undersøgte også effekten af en effektiv fremkalder H2O2 på peg'er(phenylethanoidglycosider)biosyntese. Desuden at finde tidlige responsive gener involveret i Peg'er(phenylethanoidglycosider)biosyntese, udførte vi undertrykkelse subtraktiv hybridisering (SSH) for at konstruere et cDNA-bibliotek af H2O2-responsive gener.

Fig. 1. Relativ genekspression bestemt af RT-qPCR efter H2O2-behandling. CsWRKY1 - WRKY transkriptionsfaktor (Contig07), CsC4H1 - cinnamat 4-hydroxylase (Contig09), Cs4CL1 - 4-coumarat: ligase (Contig03), CsHSP1 - varmechokprotein 70 kDa (Contig 01) og CsSOD1 - superoxiddsmutase (Contig16). Celler blev behandlet med 80 μg dm-3 H2O2 i et flydende medium i 2 timer, og ekspressionerne blev sammenlignet med en kontrol behandlet med vand. Midler +- SD af tre biologiske gentagelser; * - P< 0.05,="" **="" -="" p=""><>

Materialer og metoder

CS2001-cellelinjen blev etableret ud fra kronblade afCistanchesalsa(C.A. Mey.) Beck samlede i Neimenggu-provinsen og subkultiverede. Kulturmetoden lignede en protokol, der tidligere blev offentliggjort (Liu et al. 2007). Generelt en solid Murashige og Skoog (1962; MS) medium blev brugt til subkultur og et flydende medium til PeGs(phenylethanoidglycosider)biosyntese (det var det modificerede MS-medium suppleret med 30 g dm-3 glucose og 2,0 mg dm-3 indol-3-eddikesyre). Til H2O2-behandling blev 5,0 ± 0,2 g celler i en hurtig vækstperiode, normalt 20 til 30 d, efter at de blev subkultureret i det faste medium, podet i et 50 cm3 flydende medium i en 250 cm3 Erlenmeyer-kolbe og dyrket i mørke med eller uden forskellige H2O2-koncentrationer. Pegerne(phenylethanoidglycosider)indhold efter 10 d induktion af H2O2 blev analyseret i henhold til en metode, der tidligere er offentliggjort (Liu et al. 2007) baseret på omvendt fase højtydende væskekromatografi med methanolgradienteluering.

Cellerne 2 timer efter H2O2-behandlingen blev opsamlet fra mediet af filterpapir ved hjælp af en Büchner-tragt, og derefter blev de frosset i flydende nitrogen og formalet til pulver. Hver 2 g cellepulver blev lyseret under anvendelse af en blanding af 1 cm3 2-mercaptoethanol, 1 cm3 af 200 g dm-3 sarcosyl og 8 cm3 af en GTC-buffer (5 M guanidiniumisothiocyanat, 62,5 mM Tris-HCi, pH 8,0, 6,25 mM EDTA, pH 8,0, 5 mM thiourinstof og 10 mM dithiothreitol). Cellerne blev derefter inkuberet på is i 15 minutter, derefter blev 1/3 volumen på 8,5 M CH3COOK, pH 6,0, tilsat, og cellerne blev inkuberet på is i 15 minutter og derefter centrifugeret ved 15 000 g i 15 minutter. Supernatanten blev tilsat til et lige stort volumen isopropanol for at udfælde totalt RNA. Det samlede RNA blev yderligere renset af et RNeasy mini-kit (Qiagen, Hilden, USA) i henhold til producentens anvisninger. Messenger RNA blev isoleret fra total RNA ved anvendelse af et Oligotex mRNA midi kit (Qiagen).

phenylethanoidGlycosideriCistancheSalsa

Et SSH-bibliotek blev genereret fra kontrol og 30 % H2O2-fremkaldte celleprøver 2 timer efter udløsningen ved hjælp af et PCR-udvalgt cDNA-subtraktionssæt (Clontech, Mountain View, USA). Til bibliotekskonstruktion blev produkterne renset separat ved hjælp af et gelrensningssæt (Qiagen) og klonet til en pGEM-vektor ved hjælp af et TA-kloningssæt (Tiangen, Beijing, Kina). Plasmider fra uafhængige kloner blev isoleret og sekventeret ved hjælp af T7-primer. Alle EST-sekvenser (Expressed Sequence Tag) fra biblioteket (med vektorsekvenserne fjernet) blev brugt til contig assembly med CAP3 (http://doua.prabi.fr/software/cap3). EST'erne blev grupperet i contigs og singletons; de blev brugt til homologisøgning ved hjælp af BLASTx-programmet ved NCBI (http://blast.ncbi. nlm.nih.gov). Sekvenser blev derefter kommenteret, analyseret og klassificeret i henhold til gen ontologi (GO) udtryk ved hjælp af Blast2GO (http://www. blast2go.com).
Real-time kvantitativ polymerasekædereaktion (RT-qPCR) blev udført ifølge Bustin et al. (2009). CDNA-prøverne blev syntetiseret under anvendelse af et PrimeScript RT-reagenssæt (Takara, Dalian, Kina) fra 0,5 μg totalt RNA. RT-qPCR blev udført ved hjælp af SYBR Premix Ex Taq II og ROX plus kits (Takara) på et ABI 7300 real-time PCR-system (Applied Biosystems, Foster City, USA) med tre tekniske replikater. Primere blev designet ved hjælp af online Primer3-softwaren i henhold til instruktionen fra Takara; primere, der anvendes i denne undersøgelse, er angivet i tabel 1 Suppl. Genekspressionerne blev normaliseret til 18S RNA, hvis ekspression var stabil i alle prøverne.

Resultaterne blev analyseret ved hjælp af R version 3.1.1, betydningen af forskelle blev verificeret af den studerendes t-test.

Resultater

Hydrogenperoxid-induceret biosyntesen af alle tre vigtigste Peg'er(phenylethanoidglycosider)iCistanchesalsasuspensionsceller (tabel 1), men uden nogen åbenbar effekt på cellevæksten (fig. S2). Indholdet af echinacosid steg allerede efter 10 μg dm-3 H2O2-behandlingen (P< 0.05),="" a="" higher="" increase="" was="" recorded="" after="" the="" 20="" μg="" dm-3="" h2o2="" treatment="" (p="">< 0.01),="" and="" the="" highest="" increase="" was="" after="" the="" 40,="" 80,="" and="" 160="" μg="" dm-3="" h2o2="" treatments.="" similar="" results="" are="" shown="" for="" acteoside,="" but="" its="" content="" peaked="" after="" the="" 80="" μg="" dm-3="" h2o2="" treatment.="" the="" biosynthesis="" of="" 2'-acetylacteoside="" was="" less="" sensitive="" to="" h2o2="" treatment;="" a="" significant="" increase="" of="" its="" content="" (p="">< 0.05)="" was="" at="" h2o2="" concentrations="" over="" 40="" μg="" dm-3.="" after="" the="" 80="" μg="" dm-3="" h2o2="" treatment,="" the="" amount="" of="" all="" the="" three="" main="" pegs="">(phenylethanoidglycosider)signifikant forøget (P< 0.01)="" over="" the="" control.="" therefore,="" this="" concentration="" was="" used="" in="" further="">
For at generere et bibliotek beriget til tidlige responsive gener, der er opreguleret af H2O2, brugte vi cDNA fraCistanchesalsasuspensionsceller behandlet med 80 μg dm-3 H2O2 i 2 timer. Enkeltpassekventering af 129 rekombinante kloner i SSH-biblioteket gav 105 rene ET'er efter eksklusion af vektorsekvens. Disse klare ET'er blev anvendt til samling af CAP3, og der blev genereret 18 contigs og 67 singletons (tabel 2). Således blev 85 gener isoleret i dette bibliotek. Den gennemsnitlige længde af de rene 105 EST'er var 527 bp, hvilket er tilstrækkeligt til en sekvenslighedsbaseret funktionel klassificering.

phenylethanoidGlycosideriCistancheSalsa

Alle 85 gener opnået i biblioteket blev hentet af BLASTx mod GenBanks ikke-redundante proteindatabase for sekvenslighed (E-værdi ≤ 0,001). Enogtyve gener viste ingen hits i databasen, de kan være specifikke forCistanchesalsa. Resultaterne med BLASThits blev importeret til Blast2GO-softwaren for yderligere GO- og KEGG-vejberigelsesanalyser. Af de 64 gener med BLAST-hits blev 50 kommenteret i henhold til beskrivelsen af homologe gener fra andre arter. De kommenterede gener blev navngivet i henhold til beskrivelsen af BLAST-hits. GO-analysen (fig. 3 Suppl.) viser, at der blandt disse 50 gener var 14 gener involveret i reaktioner på stimuli og over 30 gener relateret til metaboliske processer (tabel 1 og 2). Blandt disse gener blev to PeG-biosyntesevejs-genhomologer isoleret som forventet: 4-coumarat coenzym A-ligase (kaldet Cs4CL1: Contig03) og cinnamat 4-hydroxylase (kaldet CsC4H1: Contig14). Endvidere blev RT-qPCR udført for at bekræfte inducerede ekspressioner af gener fra biblioteket efter H2O2-behandlingen.

For at bekræfte, at essentielle gener identificeret fra SSH-biblioteket reagerede på H2O2-behandlingen, udtrykkes to Peg'er(phenylethanoidglycosider)biosyntese pathway-relaterede gener (Cs4CL1, CsC4H1), to ROS-inducerede gener (CsSOD1: Contig 16, CsHSP1: CISTH099) og et WRKY-familie transkriptionsfaktorlignende gen (CsWRKY1: Contig 07) blev målt ved RT-qPCR efter behandlingen med H2O2 (fig. 1). CsC4H1-, Cs4CL1-, CsSOD1- og CsWRKY1-ekspressionerne blev opreguleret mere end 15 gange, 3 gange, 45 gange og 4 gange henholdsvis 2 timer efter H2O2-behandlingen. Ekspressionen af CsHSP1 blev kun ændret 1,8 gange efter H2O2-behandlingen.
Tidsforløbet af ekspressionerne af CsWRKY1, CsC4H1 og Cs4CL1 efter H2O2-behandlingen blev yderligere analyseret af RT-qPCR (fig. 2). CsC4H1- og Cs4CL1-ekspressionerne blev stærkt forøget (henholdsvis mere end 80 gange og 50 gange) efter 16-timers behandlingen og derefter nedreguleret efter 32 timer. Ekspressionen af CsWRKY1 blev opreguleret mere end 20 gange ved 4 timer og faldt derefter fra 8 timer bagefter (fig. 2).

Fig. 2. Den relative ekspression af CsWRKY1 (A), CsC4H1 (B) og Cs4CL1 (C) på forskellige tidspunkter efter behandling med 80 μg dm-3 H2O2. Udtrykkene blev normaliseret til en kontrol; (behandlet med vand). Midler +- SD af tre biologiske gentagelser; * - P< 0.05,="" **="" -="" p=""><>

Diskussion

Hydrogenperoxid er en velkendt planteelektor, der viser forskellige virkninger på planter. Ligesom ROS kan det inducere ROS-oprensningssystemet sammensat af superoxiddimutase, katalase, peroxidaser osv., Og det tjener som nedstrøms signal om salt, osmotisk og dehydrering

understreger (Wi et al. 2006, Kar 2011, Furlan et al. 2013, Sathiyaraj et al. 2014). Det blev foreslået, at H2O2-generation i planter ledsages af induceret sekundærmetabolitbiosyntese iCistanchesalsacellekultur. Som forventet afslører vores resultater, at PeGs(phenylethanoidglycosider)biosyntese iCistanche salsacellekultur blev induceret efter H2O2-behandlingen (tabel 1). Indholdet af tre vigtigste Peg'er(phenylethanoidglycosider)øget efter H2O2-behandlingen, hvilket indikerer dens centrale rolle i PeGs biosyntese. Gener beriget i SSH-biblioteket foreslog yderligere dets virkning på Peg'er(phenylethanoidglycosider)biosyntese induktion iCistanche salsa.

Mange kendte H2O2-responsive gener, såsom ascorbatperoxidase (CISTH069, Karyotou og Donaldson 2005), h-quinonoxidoreduktase (CISTH125, Bello, et al. 2001), CsSOD1, CsHSP1 (Baruah et al. 2014) og sygdomsresistensresponsgener (Contig10, Nanda, et al. 2010), blev beriget i SSH-biblioteket (tabel 3, tabel 2 Suppl.). Nogle af disse typiske ROS-responsive gener med et induceret udtryk efter H2O2-behandlingen blev yderligere bekræftet af RT-qPCR (fig. 1 og 2), hvilket indikerer, at der blev konstrueret et kvalificeret SSH-bibliotek her. To PeG-biosyntesevejsgener, CsC4H1 og Cs4CL1, blev også fundet i dette bibliotek, og disse to genekspressioner blev induceret af H2O2-behandlingen på en tidsafhængig måde (fig. 2). Det tyder på, at H2O2-behandlingen inducerede Peg'er(phenylethanoidglycosider)biosyntese på genetisk niveau via regulering af PAL-pathway gener. PAL og andre nedstrøms PeGs biosyntesegener (Wang et al. 2012) blev imidlertid ikke identificeret i SSH-biblioteket; det kan skyldes, at biblioteket ikke er blevet sekventeret tilstrækkeligt. En sammenhæng mellem CsC4H1- og Cs4CL1-inducerede ekspressioner og en øget PeGs-biosyntese efter H2O2-behandlingen bør afklares ved yderligere analyse.

Ud over PAL-pathway-generne induceret af H2O2-behandlingen blev der fundet to WRKY-familietranskriptionsfaktorer (CsWRKY1, CsWRKY2) i SSH-biblioteket (tabel 3 og tabel 2 Suppl.), Og et CsWRKY1-induceret ekspression blev bekræftet af RT-qPCR. Dens ekspression reagerede på H2O2-behandlingen tidligere end ekspressionen af to PAL-pathway gener, Cs4CL1 og CsC4H1 (fig. 2). Fra tidligere undersøgelser er der observeret co-ekspression af nogle WRKY-transkriptionsfaktorer og PAL-vejgener i ris (Gupta et al. 2012). Desuden er PAL-genekspression opreguleret i en OsWRKY03-overekspressionsmutant (Liu et al. 2005). De ovennævnte to WRKY-familietranskriptionsfaktorer kan også være involveret i Peg'er(phenylethanoidglycosider)biosyntese iCistanchesalsa. Interessant nok blev dehydreringsrelaterede EST'er (CISTH067, CISTH064) fundet i SSH-biblioteket, hvilket kan tyde på, at H2O2-behandlingen var relateret til dehydreringsresponsive geners ekspression iCistanchesalsasom observeret i andre planter (Schmidt et al. 2013, Zhou et al. 2013). Et gibberellin (GA) signalrelateret gen, gibberellinreceptor gid1b-lignende (CISTH092), blev identificeret i SSH-biblioteket, hvilket indebar forbindelsen mellem GA-signalering og H2O2-behandling iCistanchesalsa, som også blev rapporteret i byg (Bahin et al. 2011). Der er dog behov for flere undersøgelser for at bekræfte, om disse gener er relateret til Peg'er(phenylethanoidglycosider)biosyntese. Bortset fra de ovennævnte gener præsenterer SSH-biblioteket, der er konstrueret her, også gener med eller uden BLAST-hits. Det forbedrer vores forståelse af H2O2-effekten på C. salsa og leverer for det første informationen om dets gener, der er involveret i PeGs biosyntese.

Afslutningsvis vurderede vi effekten af H2O2 på peg'er(phenylethanoidglycosider)induktion iCistanchesalsacellekultur. SSH-biblioteket blev bygget efter H2O2-behandlingen, og ekspressionen af udvalgte gener blev bekræftet af RT-qPCR. To PeG-biosyntesevejsrelaterede gener og andre H2O2-responsive gener blev identificeret. Disse resultater vil udvide vores forståelse af H2O2-inducerede Ping'er(phenylethanoidglycosider)biosyntese iCistanchesalsatil molekylært niveau, der giver information til genmanipulation afCistanchesalsacellekulturer til forbedring af Peg'er(phenylethanoidglycosider)produktion.

Fra: 'Identifikation af hydrogenperoxidresponsive EST'er involveret i phenylethanoidglycosidbiosyntese i Cistanche salsacellekultur' vedJ. CHEN et al.

--- BIOLOGIA PLANTARUM 59 (4): 695-700, 2015 J. CHEN et al. DOI: 10.1007/s10535-015-0541-y

Referencer

Bahin, E., Bailly, C., Sotta, B., Kranner, I., Corbineau, F., Leymarie, J.: Krydstale mellem reaktive iltarter og hormonelle signalveje regulerer korndvale i byg. - Plantecellemiljø. 34: 980-993, 2011.
Baruah, K., Norouzitallab, P., Linayati, L., Sorgeloos, P., Bossie,r P.: Reaktive iltarter genereret af et varmechokprotein (Hsp) inducerende produkt bidrager til Hsp70-produktion og Hsp70-medieret beskyttende immunitet i Artemia franciscana mod patogene vibrios. - Dev. Comp. 46: 470-479, 2014.
Bello, R.I., Gomez-Diaz, C., Navarro, F., Alcain, F.J., Villalba, J.M.: Ekspression af NAD(P)H: quinonoxidoreduktase 1 i HeLa-celler  hydrogenperoxids rolle og vækstfase. - J. biol. 276: 44379-44384, 2001.
Bustin, S.A., Vandesompele, J., Pfaffl, M.W.: Standardisering af qPCR og RT-qPCR. - Genet. Eng. Bioteknol. Nyheder 29: 40-43, 2009.
Cheng, X.Y., Wei, T., Guo, B., N, I W., Liu, C.Z.:Cistanchedeserticola celle suspension kulturer:phenylethanoidGlycosiderbiosyntese og antioxidantaktivitet. - Proces Biochem. 40: 3119-3124, 2005.
Cheng, X.Y., Zhou, H.Y., Cui, X., Ni, W., Liu, C.Z. Forbedring afphenylethanoidGlycosiderbiosyntese iCistanchedeserticola celle suspension kulturer af chitosan elicitor. - J. Bioteknol. 121: 253-260, 2006.
Furlan, A., Llanes, A., Luna, V., Castro, S.: Abscisinsyre medierer hydrogenperoxidproduktion i jordnødde induceret af vandstress. - Biol. Plante. 57: 555-558, 2013.
Gupta, S.K., Ra,i A.K., Kanwar, S.S., Chand, D., Singh, N.K., Sharma, T.R.: Det eneste funktionelle blastresistensgen Pi54 aktiverer en kompleks forsvarsmekanisme i ris. - J. exp. Bot. 63: 757-772, 2012.
Hu, G.S., Jia, J.M., Hur, Y.J., Chung, Y.S., Lee, J.H., Yun, D.J., Chung, W.S., Yi, G.H., Kim, T.H., Kim, D.H.: Molekylær karakterisering af phenylalanin ammoniak-lyase gen fraCistanchedeserticola. - Mol. Biol. Rep.
Kar, RK: Plantereaktioner på vandstress: rolle af reaktive iltarter. - Plantesignaladfærd 6: 1741-1745, 2011.
Karyotou, K., Donaldson, R.P.: Ascorbatperoxidase, en scavenger af hydrogenperoxid i glyoxysomale membraner. - Arc h. Biokemi. Biofys. 434: 248-257, 2005.
H. Kobayashi, H. Karasawa, T. Miyase, S. Fukushima: Undersøgelser af bestanddelene icistancheer herba. 4. Isolering og strukturer af 2 nye phenylpropanoidglycosider, cistanosid-C og cistanosid-D. - Chem. 32: 3880-3885, 1984.

Liu, C.Z., Cheng, X.Y.: Forbedring afphenylethanoidGlycosiderbiosyntese i cellekulturer afCistanchedeserticola ved osmotisk stress. - Plantecelle Rep.
Liu, J.Y., Guo, Z.G., Zeng, Z.L.: Forbedret akkumulering afphenylethanoidGlycosiderved forløber fodring til suspension kultur afCistanchesalsa. - Biokemi. Eng. J. 33: 88-93, 2007.
Liu, X.Q., Bai, X.Q., Qian, Q., Wang, X.J., Chen, M.S., Chu, C.C.: OsWRKY03, en ristranskriptionsaktivator, der fungerer i forsvarssignalvejen opstrøms for OsNPR1. 15: 593-603, 2005.
Murashige, T., Skoog, F.: Et revideret medium til hurtig vækst og bioassays med tobaksvævskulturer. - Fysiol. 15: 473-497, 1962.
Nan, Z.D., Zeng, K.W., Shi, S.P., Zhao, M.B., Jiang, Y., Tu, P.F.:PhenylethanoidGlycosidermed antiinflammatoriske aktiviteter fra stilkene afCistanchedeserticola dyrket i Tarim ørkenen. - Fitoterapia 89: 167-174, 2013.
Nanda, A.K., Andrio, E., Marino, D., Pauly, N., Dunand, C.: Reaktive iltarter under tidlige interaktioner mellem planter og mikroorganismer. - J. Integr. Plantebiol. 52: 195-204, 2010.
Ouyang, J., Wang, X.D., Zhao, B., Wang, Y.C.: Forbedret produktion afphenylethanoid Glycosiderved forløberfodring til cellekulturen afCistanchedeserticola. - Proces Biochem. 40: 3480-3484, 2005a.
Ouyang, J., Wang, X.D., Zhao, B., Wang, Y.C.: Forbedret produktion afphenylethanoidGlycosidervedCistanchedeserticola celler dyrket i en intern loop airlift bioreaktor med sigtestige. - Enzym mikrobiol. Teknisk. 36: 982-988, 2005b.
Salcedo-Morales, G., Jimenez-Aparicio, A.R., Cruz-Sosa, F., Trejo-Tapia, G.: Anatomisk og histokemisk karakterisering af in vitro haustorium fra rødder af Castilleja tenuiflora. - Biol. Plante. 58: 164-168, 2014.
Sathiyaraj, G., Srinivasan, S., Kim, Y.J., Lee, O.R., Parvin, S., Balusamy, S.R., Khorolragchaa, A., Yang, D.C.: Akklimatisering af hydrogenperoxid forbedrer salttolerancen ved at aktivere forsvarsrelaterede proteiner i Panax ginseng C.A. Meyer. - Mol. Biol. Rep.
Schmidt, R., Mieulet, D., Hubberten, H.M., Obata, T., Hoefgen, R., Fernie, A.R., Fisahn, J., Segundo, B.S., Guiderdoni, E., Schippers, J.H.M., Mueller-Roeber, B.: SALTRESPONSIVE ERF1 regulerer reaktiv iltartsafhængig signalering under den første reaktion på saltstress
i ris. - Plantecelle 25: 2115-2131, 2013.
Wang, T., Zhang, X.Y., Xie, W.Y.:Cistanchedeserticola Y.C. Ma, "Desert Ginseng": en anmeldelse. - Amer. Med. 40: 1123-1141, 2012.
Wi, S.G., Chung, B.Y., Kim, J.H., Lee, K.S., Kim, J.S. Aflejringsmønster af hydrogenperoxid i risens bladskeder under saltstress. - Biol. Plante. 50: 469-472, 2006.
Zhou, X.F., Jin, Y.H., Yoo, C.Y., Lin, X.L., Kim, W.Y., Yun, D.J., Bressan, R.A., Hasegawa, P.M., Jin, J.B.: CYCLIN H1 regulerer tørkestressresponser og blå lysinduceret stomatal åbning ved at hæmme reaktiv iltartsakkumulering i Arabidopsis. - Plantephysiol. 162: 1030-1041, 2013.