HPLC-bestemmelse af echinacosid i vandig ekstrakt af Cistanche Herba
Jul 21, 2025
Abstrakt: Formål: Der blev etableret en HPLC-metode til bestemmelse af Echinacosid i vandekstraktet fra Cistanche deserticola. Metoder: Echinacosid blev bestemt ved HPLC. Separationen blev udført på en Inertsil ODSSP C18-søjle med en mobil fase bestående af acetonitril(A) og 0,4 % phosphorsyreopløsning(B) ved gradienteluering. Detektionsbølgelængden blev sat til 333 nm, og søjletemperaturen var 30 grader. Strømningshastigheden var 1,0 mL·min-1, og injektionsvolumenet var 10 μL. Resultater: Den lineære relation mellem echinacosid inden for koncentrationsområdet 44,93977-539,2764 ug ·m var god(r=0.9998). Gendannelserne var 94,59 %-105,31 % (RSD= 2.93%,n=9). Indholdet af echinacosid i vandekstrakter af Cistanche herba var 15.527,7.347,12.267 mg·g-1
Konklusion: Den etablerede HPLC-metode med god repeterbarhed er nøjagtig, enkel og gennemførlig. Det er velegnet til bestemmelse af echinacosid i vandekstraktet af Cistanche deserticola.
Nøgleord: HPLC; vandekstrakt af Cistanche deserticola; Echinacoside; fastlæggelse af indhold
Cistanche deserticola er en almindeligt anvendt tonic i traditionel kinesisk medicin i klinisk praksis og har ry for "ørkenginseng". Cistanche deserticola inkluderet i 2015-udgaven af den kinesiske farmakopé er den tørrede, skællende, kødfulde stængel af Orobaceae-planten Cistanche deserticola YC Ma eller Cistanche tubulosa (Schenk) Wright. Den har en varm natur, en sød og salt smag og hører til nyre- og tyktarmens meridianer. Det har virkningerne af tonificering af nyre-yang, gavner essens og blod, fugter tarmene og lindrer forstoppelse [2].
Ørken ginseng
"Shennong Materia Medica Classic" siger, at den kan "nære midten, nære de fem indre organer og styrke yin og nære essensen." Cistanche deserticola indeholder hovedsageligt phenylethanoidglycosider, iridoider og glycosider, lignaner og glycosider, polysaccharider, estere og alkaloider [3]. Phenylethanolglycosider er de vigtigste aktive komponenter i Cistanche deserticola, blandt hvilke echinacea og poolside er indikatorkomponenterne for identifikation og indholdsbestemmelse af Cistanche deserticola i den kinesiske farmakopé.
Phenylethanolglycosid er den vigtigste aktive komponent i Cistanche deserticola
Farmakologiske undersøgelser [4] indikerer, at Cistanche deserticola har forskellige farmakologiske virkninger, såsom at fugte tarmene og lindre forstoppelse, beskytte leveren, modstå osteoporose, antioxidation, anti-aging og anti-træthed. Det vandige ekstrakt af Cistanche deserticola kan fremme det knoglemorfogenetiske protein 2-gener fra osteoblaster i rotter, såvel som den tartrat-resistente syrephosphatase og osteocalcin i serum fra ovarieektomiserede mus, såvel som Smad1- og Smad5-gener og transformerende vækstfaktorer for{8} bone marrow, etc. anti-osteoporose effekt [5-6]. Echinosid kan fremme proliferationen af osteoblaster og fremme differentieringen af knoglemarvs mesenkymale stamceller til osteoblaster in vitro [7-9].
Echinoside, den vigtigste kemiske komponent i Cistanche deserticola
Klik her for at se Natural Cistanche Echinacoside-produkter
【Spørg om mere】 E-mail: xue122522@foxmail.com /WhatsApp: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692
I de senere år har der været mange rapporter om bestemmelse af indholdet af echinacosid og polysid i alkoholekstraktet af Cistanche deserticola og dets sammensatte præparater [10-12], men der er få rapporter om bestemmelsen af indholdet af indikatorkomponenter i vandekstraktet af Cistanche deserticola. I denne undersøgelse blev højtydende væskekromatografi (HPLC) brugt til at bestemme indholdet af echinacosid i vandekstraktet af Cistanche deserticola.
1. Materiale
1.1 Apparatur
LC-20AT højtydende væskekromatografi, SPD-20A detektor, SIL-20A automatisk prøveudtager, CTO-10ASvp kolonnetemperaturboks, LCsolution væskekromatografi arbejdsstation, Shimadzu Corporation i Japan; MES125P-OCE-DU Elektronisk Analytisk Balance, Sartorius, Tyskland; SHZ-D (III) multifunktions vakuumpumpe til cirkulerende vand, Henan Yuhua Instrument Co., Ltd.
1.2RC2BSO25 rotationsfordamper kølecirkulationssystem, RV10DS96 rotationsfordamper, IKA, Tyskland; DK-S26 Electric Thermostatic Water Bath, Shanghai Jinghong Experimental Equipment Co., Ltd; UPR-seriens ultra-rent vandmaskine, Sichuan Youpu Ultra Pure Technology Co., Ltd.
1.2 Medicinske materialer og reagenser
Kød Rong medicinsk materiale, købt fra Guangzhou Lingnan Traditional Chinese Medicine Slices Co., Ltd., batchnummer: 18010011806001, 181001. De tørrede, skællende, kødfulde stængler af Leobaceae-planten Cistanche deserticola identificeret af Thi Affilird Chinese Herbalist i Guangzhou Hospital, som er identificeret af Tu Xing Chief Chinese Herbalist. Traditionel kinesisk medicin opbevares i Drug Inspection Room på det tredje tilknyttede hospital i Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine; Echinoside referencestof, indhold 89,7 %, China Institute for the Control of Food and Drug Control, batchnummer: 111670-201706; Acetonitril er kromatografisk rent (Merck, Tyskland); Methanol og phosphorsyre er analytisk rene (Tianjin Fuyu Fine Chemical Co., Ltd.); Vand er ultrarent vand.
2. Metoder og resultater
2.1 Fremstilling af vandekstrakt fra Cistanche deserticola
Tag cistanche-pulveret, tilsæt 10 gange mængden af destilleret vand, opvarm og tilbagesval for at ekstrahere to gange, hver gang i 1 time. Filtrer, kombiner filtratet og anvend en rotationsfordamper til at koncentrere filtratet til et råt lægemiddelindhold på 0,100 g · ml-1. Opbevares ved 4 grader til standby. 2.2 Kromatografiske forhold og systemegnethed Kromatografisk kolonne: InertsilODS SPC18 kolonne (150 mm × 4,6 mm, 5 μm); Mobil fase: acetonitril (A) - 0.4% phosphorsyreopløsning (B), gradienteluering: 0~5 min, 17% A; 5~25 min, 20%A; 25~30 min., 17%A; Detektionsbølgelængde: 333nm; Søjletemperatur: 30 grader ; Flowhastighed: 1,0 ml · min-1; Injektionsvolumen: 10 μ L. Under denne kromatografiske tilstand er opløsningen mellem toppene af echinacea og tilstødende komponenter større end 1,5, og det teoretiske antal søjler bør ikke være mindre end 4000 for echinacea-toppe. Kromatogrammet er vist i figur 1.
Figur 1 HPLC-kromatogrammer af echinacosid(A) og vandekstrakt af Cistanche herba(B)
2.3 Fremstilling af opløsning
2.3.1 Referenceløsning
Vej en passende mængde Echinacetin-referencestof, vej det nøjagtigt, anbring det i en 10mL målekolbe, tilsæt methanol for at opløse det, og lad det indeholde 898.794 Echinacetin pr. milliliter μG af referenceopløsningen, opbevaret ved 4 grader til standby.
Echinoside af Cistanche deserticola
2.3.2 Testopløsning
Mål 2,0 mL vandig Cistanche deserticola-ekstrakt nøjagtigt, inddamp i et vandbad, opløs i methanol, bring til et konstant volumen i en 10 mL målekolbe, og ryst godt . 0.22 μm mikroporøs membranfiltrering, nemlig.
2.4 Undersøgelse af en lineær sammenhæng
Mål nøjagtigt 0,25, 0,50, 1,00, 2,00, 2,50 og 3,00 ml af referenceopløsningen under 2.3.1, og anbring dem i en 5 ml målekolbe, tilsæt methanol til konstant volumen og ryst godt for at opnå gradientkoncentrationer på 44,89397,897,897,897,44,89397,897,89,87,89,7,8. 359,5176, 449,3970 og 539,2764 μG · ml-1 af referenceopløsningen, 0,22 μM mikroporøs membranfiltrering. Udfør bestemmelsen i henhold til de kromatografiske betingelser i 2.2 og noter toparealet. Ved at bruge massekoncentrationen af referencestoffet som abscissen (X, μ G · mL-1), er toparealet ordinaten (Y), og den lineære regressionsligning opnås: Y=13185.0X-32273.0, r=0.9998. Resultaterne viste, at echinacea varierede fra 44.439.7.μ. Det lineære forhold inden for koncentrationsområdet g · mL-1 er godt.
2.5 Præcisionstest
Tag 539,2764 μG · ml-1 referenceopløsning, injicer prøven kontinuerligt 6 gange i henhold til de kromatografiske betingelser i 2.2, og noter toparealet. Resultater: RSD for toparealet af echinacea var 1,81%, hvilket indikerer god præcision af instrumentet.
2.6 Stabilitetstest
Mål nøjagtigt 2,0 mL vandig Cistanche deserticola-ekstrakt, inddamp til tørhed i et vandbad, opløs i methanol, bring til et konstant volumen i en 10 mL målekolbe, ryst godt, 0,22 μ Filtrer med en mikroporøs membran, injicer prøver til bestemmelse, 2 timer, 42 timer, og 8 timer, 42 timer og 8 timer. til de kromatografiske forhold i 2.2, og optag toparealet. Resultater: RSD for toparealet af echinacea var 1,16%, hvilket indikerer, at testopløsningen havde god stabilitet inden for 24 timer.
2.7 Repeterbarhedstest
Mål nøjagtigt 6 portioner af 2,0 mL vandigt ekstrakt af Cistanche deserticola, tilbered 6 portioner af testopløsningen parallelt i overensstemmelse med metoden beskrevet i 2.3.2, injicer prøver til bestemmelse i henhold til de kromatografiske betingelser beskrevet i 2.2, og noter toparealet. Resultater: RSD for massekoncentrationen af echinacea var 1,28%, hvilket indikerer, at metoden havde god repeterbarhed.
Cistanche deserticola eksperiment
2.8 Prøvetilsætningsgendannelsestest
Mål 9 portioner af 1,0 mL vandig Cistanche deserticola-ekstrakt nøjagtigt, tilsæt 0,8, 1,0 og 1,2 mL referenceopløsning (101,552 mg · mL - 1), inddamp i et vandbad, opløs i methanol, og bring til volumen i en ml volumetrisk ethanol; Ryst godt, 0,22 μ Filter med m mikroporøs filtermembran for at fremstille høj-, medium- og lavkoncentrationsprøveopløsning. Forbered 3 dele af hver koncentration parallelt, mål i overensstemmelse med de kromatografiske betingelser i 2.2, noter toparealet, og beregn prøvetilsætningsgenvindingen. Resultaterne er vist i tabel 1.
2.9 Bestemmelse af prøveindhold
Mål nøjagtigt 3 portioner af 2,0 ml vandekstrakt fra Cistanche deserticola, inddamp til tørhed i et vandbad, opløs i methanol, bring til et konstant volumen i en 10 ml målekolbe, ryst godt, 0,22 μ Filtrer med en mikroporøs membran, mål i henhold til de chromatografiske betingelser, registrer det chromatografiske indhold i 222, og optag spidsværdien. af echinacea. Resultaterne er vist i tabel 2.
Tabel 1: Resultater af restitutionstest af echinacosid
Tabel 2 Resultater af indholdsbestemmelse af echinacosid i vandekstrakt af Cistanche herba
3. Diskussion
3.1 Fremstillingsmetode for testartiklen
Det vandige ekstrakt af Cistanche deserticola indeholder forskellige kemiske komponenter såsom phenylethanolglycosider og polysaccharider, som forårsager en vis interferens med komponenterne, der skal testes. Denne undersøgelse undersøgte to forskellige koncentrationer af opløsningsmidler, 50% methanol og methanol. Resultaterne viste, at adskillelseseffekten af toppene i kromatogrammet af testproduktet under anvendelse af 50% methanol som opløsningsmiddel var dårlig mellem echinacea og tilstødende komponenter. Ved at bruge methanol som opløsningsmiddel er opløsningen af echinacea-glykosid-toppen god, og der er ingen interferens fra andre urenhedstoppe. Derfor blev methanol valgt som opløsningsmiddel for testopløsningen. Ved anvendelse af methanol som opløsningsmiddel blev vandekstrakten af Cistanche deserticola inddampet til tørhed i et vandbad. To behandlingsmetoder blev anvendt: methanolopløsning, konstant volumen omrystning og methanol ultralyd (10 min) opløsning. Resultaterne viste, at der ikke var nogen signifikant forskel mellem de to metoder. Denne metode blev valgt til at fremstille testopløsningen på grund af den simple operation med methanolopløsning og konstant volumenrystning.
Kinesisk urtecistanche
3.2 Valg af mobil fase
I denne undersøgelse blev der henvist til den mobile fase (methanol-0,1% myresyre) anvendt til indholdsbestemmelse af Cistanche deserticola i den kinesiske farmakopé (bind I) (2015). Resultaterne viste, at toppen af echinacea-glycosid udvidedes, og der var et forkantsfænomen, som kan være relateret til den mobile fases svage elueringsevne; Under henvisning til relevant litteratur [12-13] blev acetonitril-0,5% eddikesyre brugt som den mobile fase, men topformen af echinacea var dårlig, og der var et halefænomen. I betragtning af pH-værdien af den mobile fase blev acetonitril-0,4% phosphorsyre til sidst brugt som den mobile fase. Som et resultat heraf var det teoretiske pladetal af echinacea-toppe større end 4000, og opløsningen mellem echinacea og tilstødende komponenttoppe var større end 1,5. Topformen var symmetrisk uden interferens fra urenhedstoppe, og basislinjen var stabil. Derfor blev acetonitril-0,4 % - 0.4 % phosphorsyre i denne undersøgelse brugt som den kromatografiske mobile fase til bestemmelse af echinacea-indhold. I denne undersøgelse blev HPLC-metoden brugt til at bestemme Echinacea i vandigt Cistanche deserticola-ekstrakt.
Cistanche ekstrakt pulver
Metoden er enkel, præcis og reproducerbar. Det er velegnet til bestemmelse af echinacea i vandigt cistanche deserticola-ekstrakt og kan bruges som en kvalitetskontrolmetode for vandigt cistanche deserticola-ekstrakt. Denne undersøgelse bestemte kun indholdet af echinacea i vandekstraktet af Cistanche deserticola. I fremtiden er det planlagt at bestemme indholdet af echinacea i det sammensatte afkog af Cistanche deserticola for at udforske virkningen af forskellige faktorer på indholdet af echinacea, hvilket giver en reference til kvalitetskontrol af afkog, der indeholder Cistanche deserticola.
