E-mail:joanna.jia@wecistanche.com

De antidepressive og kognitive forbedringsaktiviteter af den traditionelle kinesiske urt Cistanche

Dongfang Wang,1 Haizhen Wang,2 og Li Gu2

1State Key Laboratory of Biocontrol, Institute of Aquatic Economic Animals og Guangdong Province Key Laboratory for Aquatic Economic Animals, School of Life Sciences, Sun Yat-sen University, Guangzhou 510275, Kina

2Food and Health Engineering Research Center of State Education Ministry, Sun Yat-sen University, Guangzhou 510275, Kina

Korrespondance skal rettes til Li Gu; Modtaget 20. februar 2017; Revideret 11. maj 2017; Godkendt 28. maj 2017; Udgivet 28. juni 2017 Akademisk redaktør: Ki-Wan Oh Copyright © 2017 Dongfang Wang et al. Dette er en artikel med åben adgang distribueret under Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat at det originale værk er korrekt citeret. Mere end ti procent af mennesker lider af mindst én episode af depression og relaterede psykiske lidelser i løbet af et liv, og depression og relaterede psykiske lidelser er et af verdens største folkesundhedsproblemer. En multiple system teori hævder, at dysregulering af de multiple systemer ligger til grund for patogenesen af ​​depression og relaterede psykiske lidelser, og nye terapier baseret på multipel system dysreguleringsteorien er et presserende behov. I denne undersøgelse, den antidepressive effekt af afkog fra urterCistanchedeserticolaYCMa og Cistanchetubulosablev undersøgt. UrtCistancheafkog reducerede immobilitetsperioden betydeligt i musehalesuspensionstesten. Mus behandlet med urteafkog viste en forbedret evne til rumlig indlæring og hukommelse i Morris-vandlabyrinten. Grupper behandlet urteafkog udviste en nedreguleret monoaminoxidase (MAO) aktivitet; dopamin (DA) koncentrationen i hjernen blev opreguleret, hvilket tyder på urtCistancheafkog forbedrede nervens excitabilitet; serumkoncentrationen af ​​corticosteron (CORT) blev nedreguleret, hvilket viste, at mus havde fordel af et reduceret stressniveau. Derfor den traditionelle antidepressive effekt og mekanismekinesiskurtCistancheblev udforsket i denne undersøgelse. UrtCistancheviste et potentiale til at blive udviklet som en komplementær og alternativ terapi for depression.

Forebyg Alzheimers sygdom med cistanche

1. Introduktion

Depression og relaterede stemningslidelser, med et estimat på 12-17 procent af befolkningen, der oplever mindst én episode i et liv, er blandt de førende årsager til mentale handicap og betragtes som et af verdens største folkesundhedsproblemer[1].Af særlig relevans er det, at en betydelig del af patienter med depression lider af hukommelsestab, koncentrationsproblemer, nedsat energi eller træthed, tab af interesse eller fornøjelse i hobbyer og aktiviteter, søvnbesvær, opvågning tidligt om morgenen eller oversøvn. Selvom de neurale substrater for abnormitet i depression og relaterede syndromer er uklare, er det almindeligt accepteret, at svækkelsen af ​​neuroplasticitet og cellulær modstandskraft giver anledning til patofysiologien af ​​depression, og vellykket behandling kan afhænge af indgrebet af neurotransmitterniveauet[2]. Tilgangen til depressionsmedicin er grundlæggende baseret på det klassiske monoaminsystem

hypotese, som hævder, at dysregulering af monoaminer, især serotonin (5-HT) og noradrenalin (NE) bidrager til depressionspatogenesen, og intervention af neurotransmittersystemet med dopaminagonister og dopamin-noradrenerge modulatorer ville lindre symptomerne på svær depression lidelse [3]. Selvom det er almindeligt ordineret, er antidepressivaets helbredende effekt tvivlsom, og bivirkningen kan ikke ignoreres, fordi en betydelig del af patienterne ikke reagerer på monoaminsystemets manipulation [4]. For nylig peger nye teorier om depressionspatogenese på, at flere systemer, herunder inflammatoriske veje, den oxidative stress-vej, hypothalamus-hypofyse-binyre (HPA) aksen, det metaboliske og bioenergetiske system, neurotrofiske veje, glutamatsystemet, opioidsystemet og det kolinerge system, er tæt forbundet med depressionsforekomsten [3]. Evidens viser, at multipel målintervention gav bedre effekt end én enkelt målintervention [5]. Der er et presserende behov for nye terapier baseret på teorien om dysregulering af flere systemer.

Urteprodukter forbrugte angiveligt mere end halvdelen af ​​den amerikanske befolkning[6];interesse og efterspørgsel efter urter eller urteprodukter som en supplerende måde at behandle depression på vokser over hele verden. Flere medicinske planter har vist sig at demonstrere den depressionslindrende gavnlige virkning. Urter, der rapporteres at have effekten af ​​at undertrykke depression og forbedre kognitiv funktion omfatter havtorn [7], Ginkgo biloba[8], Piper nigrum[9], Hypericum perforatum [10], Griffonia simplicifolia[11]. En kombinationsadministration af ferulinsyre og piperin viste en synergistisk antidepressiv-lignende effekt i mus ved at manipulere det monoaminerge system[7]. Albiflorin var karakteriseret ved en høj selektiv affinitet til neurotransmitterreceptorer og -transportører og signifikant øgede ekstracellulære koncentrationer af 5-HT og NE i hypothalamus hos frit bevægende rotter[12]. En medicinsk urt Melissa officinalis L. lindrede den depressive adfærd hos mus ved at udøve en indflydelse på det serotonerge neurotransmitterniveau[13].Disse urter eller afkog, udviklet som alternative midler mod depression, hjælper med at lindre symptomerne på depression og giver en ny kilde til udvikling af antidepressive lægemidler. UrtCistanchearter, der er udbredt i tørre områder og ørkener i den nordlige del af Kina, er traditionelle kinesiske medicinurter og er meget brugt til behandling af forskellige sygdomme i mere end 1,000 år i Kina. De mange virkninger af urterCistancheafkogsområdet mellem afrodisiakum [14], immunfremmende[15], antioxidativ [16] og leverbeskyttende [17] ejendomme. C. deserticola-afkog inducerer testikelsteroidogene enzymer [18], fremmer erektil respons på penis og forkorter latensperioden for erektil reaktion hos kastrerede rotter [19]. UrtCistancheer blevet rapporteret at hæmme aktiviteterne af dopaminerge neuroner ved at regulere de hæmmende apoptosegener og neurotrofiske faktorer [20]. C.tubulosaafkog ændrede den kognitive dysfunktion forårsaget af A� 1-42 via blokering af amyloidaflejring og genoplivede den kolinerge og hippocampale dopaminerge neuronale funktion [21]. Den neurobeskyttende egenskab af urte Cistanche indebærer det terapeutiske potentiale i kognitiv-relaterede sygdomme. Depression er en almindelig blandet tilstand af følelsesmæssige reaktioner med glemsomhed og kognitiv tilbagegang som de almindelige symptomer [22]. Herb Cistanche blev almindeligvis brugt som en traditionel kinesisk medicin til at behandle glemsomhed; desuden viser en nylig rapport, at en tidligt voksende behandling af majsmel suppleret med C.tubulosaer gavnlig for fremme af lang levetid og olfaktorisk associeret indlæring og forbedring af hukommelsen i Drosophila-modellen for ikke-hvirveldyr [23]. Disse kendsgerninger indikerer urtens kognitivt forbedrende egenskabCistanche; her i denne forskning karakteriserede vi for første gang den antidepressive egenskab og dens forhold til kognitive forbedringsaktiviteter i pattedyrsmodellen ved at regulere monoaminsystemet og HPA-aksen. Belysning af urtens antidepressive egenskab og foreløbige mekanismeCistanchekunne udvide anvendelsesspektret af urt Cistanche, som kunne udvikles som et alternativt middel mod depression.

2. Materialer og metoder

1.1. Plantemateriale og afkogsforberedelse. C. deserticola YCMa blev opnået fra Nei Mongol Autonome Region, Kina; C.tubulosablev hentet fra den autonome region Xinjiang Uygur, Kina. Inden afkog blev urten (C. deserticola YCMa eller C. tubulosa) inspiceret for at påvise indholdet af echinacosid og verbascosid ved hjælp af HPLC (high-performance væskekromatografi) (Milford, MA, Waters, USA), og det støtteberettigede produkt (iht. til Pharmacopoeia of the People's Republic of China) blev brugt til dyreforsøgene. Afkogningen blev erhvervet baseret på vanddampningsmetoden udviklet af Food and Health Engineering Research Center ved det statslige undervisningsministerium, Sun Yat-sen University. Tørret Cistanche deserticola YCMa på 125 g blev knust og sigtet ved hjælp af 120-mesh-skærm, og derefter blev pulveret opløst i 3 L ultrarent vand, opvarmet

ved 100∘C i 2 timer, derefter afkølet til stuetemperatur og sigtet; supernatanten blev genbrugt. Sedimentet blev derefter opløst i 2 L ultrarent vand og derefter opvarmet i 1,5 time og afkølet som nævnt ovenfor for at recirkulere supernatanten; sedimentet blev derefter brugt til genanvendelse af supernatanten. Indholdet af al supernatanten blev beriget med rotationsvakuumfordampere ved 60°C; til sidst blev rålægemiddelkoncentrationen sat til 0,5 g/ml, og produktet blev opbevaret ved -20∘C.

1.2. Echinacoside og Verbascoside Assay ved HPLC-analyse. HPLC (højtydende væskekromatografi) blev brugt til at måle det kvalitative og kvantitative assay af echinacosid og verbascosid; verbascoside (renhed > 93 procent) og echinacosid (renhed > 93 procent) blev købt fra National Institutes for Food and Drug Control (Beijing, Kina) og brugt som standardkontrol.

1.3. Dyrepleje og forsøgsadfærd. Forsøgspersonerne var SPF (specifik patogenfri) Kunming hanmus, der vejede 21-25 gram, leveret af Medical Experimental Animal Center i Guangdong-provinsen. Dyrene blev anbragt i plastikbure (ti pr. bur); miljøbetingelserne blev indstillet som følger: fugtighed 40-70 procent, stuetemperatur 21 ± 1 °C og en 12 timer: 12 timer lys-mørke periode. Alle dyreforsøg blev godkendt af den dyreetiske komité ved Sun Yat-sen University.

1.4. Test af haleophæng. Haleophængningstesten blev udført i overensstemmelse med protokollen beskrevet af Cryan et al. [24] med beskedne ændringer. Kort fortalt blev musene på dag 21 suspenderet i halen under anvendelse af metalliske galger bundet med nylonkateter med hovedet i en højde af 50 mm fra gulvet. Musene blev hængt på krogen på klæbende tape 10-20 mm fra den yderste ende af dens hale og blev isoleret akustisk og visuelt isoleret med klapper. Musens kropsbevægelser blev registreret, og åndedrætsbevægelserne blev ignoreret. Før dagen for forsøget blev musene suspenderet i 8 minutter til tilpasning.

1.5. Morris Water Maze Test. Vandlabyrint-testen blev udført i henhold til beskrivelsen af ​​Vorhees et al. [25-27] ved hjælp af enheden udviklet af det kinesiske akademi for medicinske videnskaber. En cirkulær pool (150 cm i diameter) fyldt med vand (26

± 1∘C; fælghøjde (afstand vandoverflade til vægkant): 10 cm)

Tabel 1: Indholdet af echinacosid og verbascosid i pulver og afkog af C. deserticola YCMa og C.tubulosa.

blev brugt, cirkulær redningsplatform (diameter: 11 cm; afstand

Prøver

ECH procent VerBS procent mellem platformens midtpunkt og poolvæg: 27 cm) blev nedsænket 1-1,5 cm under vandoverfladen, og testområdet blev belyst med indirekte belysning (50 ± 10 lux) for at undgå refleksioner. Der blev brugt fire startsteder, N, S, E og W. Til den rumlige indlæringstesten blev dyr trænet dagligt på dag 9-11 på det faste startsted. Escape latensperioden måles for at vise musenes rumlige hukommelse og indlæringsevne. Hvis musene ikke kunne finde eller klatre op på platformen, ville musene blive ført til platformen og blive i 10 s. Efter at have holdt pause i 60 s, ville den næste træningssession blive startet. Data opnået fra den sidste rumlige indlæringstest blev brugt som en basisværdi for støbning. På dag 23-28 blev der udført stedsnavigationstest og rumlig sonde. Pladsnavigationstesten varede i 6 dage og blev taget kl. 13.00, dyrene blev anbragt i vandet med hovedet vendt mod bassinvæggen med uret, og latensperioden (inden for 2 min) blev registreret. Efter at stednavigationstesten var udført, blev platformen fjernet. Musene blev placeret i vand med hovedet vendt mod bassinvæggen på et tilfældigt sted, og bevægelsessporet og frekvensen, som mus svømmede henover, hvor platformen var inden for 2 minutter, blev registreret. Bevægelsessporet blev registreret af en multifunktionel autonom optager af musebevægelser (YLS-1A, Yiyan Technology, Jinan, Kina).

echinacoside i cistanche

1.6. Påvisning af MAO-aktiviteten. MAO-aktiviteten blev målt ved hjælp af et MAO-detektionskit (A034, Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Nanjing, Kina), og påvisningen blev udført i henhold til producentens protokol. Homogenat fra hjernevæv blev opnået; 500 �l blev blandet med 300 �l Middel 1 og 300 �l Middel 2, inkuberet i 3 timer ved 37 ∘C og derefter successivt tilsat 300 �l Middel 3, 3 ml Middel 4 og vortex for 2 min. Reaktionsblandingen blev centrifugeret ved 3,000 rpm i 10 minutter, og den optiske tæthed af supernatanten blev bestemt ved hjælp af ultraviolet og synligt spektrum spektrofotometer (Lambda 25, PerkinElmer, USA) under anvendelse af 242 nm excitationslys.

1.7. Enzym-linked immunosorbent assay af neurotransmittere og ACTH og CORT. Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) detektionskit for dopamin (DA), noradrenalin (NE) og 5-hydroxytryptamin (5-HT) blev købt fra BLUE GENE, Shanghai. ELISA-detektionskit blev købt fra Qiyun Biotech, Guangzhou.

Procedurerne er som følger: eksperimentet blev udført ved stuetemperatur. Beklæd brøndene på en PVC-mikrotiterplade med indfangningsantistoffet i en koncentration på 1-10 �g/mL i carbonat/bicarbonatbuffer (pH 9,6). Forsegl pladen og inkuber natten over ved 4∘C; vask pladen med PBS/tween 3 gange, og de uspecifikke bindingssteder blokeres af blokopløsning; vask derefter pladen med PBS/tween 3 gange. Standarder og prøver fortyndes i blokeringsopløsning, og 100 �l tilsættes til pladens brønd, og pladen forsegles og inkuberes ved 37∘C i 1 time. Tilsæt 100 �l fortyndet detektionsantistof og inkuber pladen kl

C. deserticola pulver 1,27 ± 0.009 0.52 ± 0.003

C. tubulosapulver 19,81 ± 0.66 2.45 ± 0.12

C. deserticola afkog {{0}}.90 ± 0.001 0.20 ± 0,001 C.tubulosaafkog 5,90 ± 0.12 0.54 ± 0,05 Echinacoside, ECH; phenylethanoidglycosider, PeG'er; verbascoside, VerBS.

37°C i 1 time; vask pladen med PBS/Tween 3 gange. Tilsæt 50 �l farvefremkalderopløsning og hold pladen væk fra lyset og inkuber den ved stuetemperatur i 15 min. 50 �l stopbuffer tilsættes for at stoppe reaktionen. Mål den optiske densitet (OD) for hver brønd med en mikropladelæser indstillet til 405 nm på 30 min.

1.8. Statistisk analyse. Alle data blev repræsenteret som middelværdi ± SEM (standardfejl af middelværdien), den signifikante forskel blev analyseret ved t-test eller envejs ANOVA efterfulgt af Duncans multiple range-test ved brug af SPSS 16.0 og forskelle mellem grupper med � < 0.05="" blev="" betragtet="" som="" statistisk="">

2. Resultater

2.1. Bestemmelse af indholdet af bioaktive hovedingredienser i C. deserticola YCMa og C.tubulosaPrøver. Phenylethanoid glycosider såsom echinacoside og verbascoside betragtes generelt som de vigtigste bioaktive ingredienser; derfor indholdet af echinacosid og verbascoside i både C. deserticola YCMa og C.tubulosaprøver blev bestemt ved HPLC. HPLC-chromatogrammerne er vist i figur1, og resultaterne viser, at det totale indhold af phenylethanoidglycosider fra C. deserticola YCMa var ca. det dobbelte af det fra C. tubulosa. Echinacoside- og verbascoside-vægte udgør henholdsvis 1,27 ± 0.009 procent og {{10}}.52 ± 0,003 procent af pulveret fremstillet af C. deserticola YCMa og 19,81 ± 0,66 procent og 2,45 ± 0,12 procent af pulveret fremstillet ud fra C.tubulosa. Echinacoside og verbascoside-vægte tegner sig for henholdsvis {{0}}.90 ± 0.{{10}}01 procent og 0,20 ± 0,001 procent af C. deserticola YCMa-afkog og 5,90 ± 0,12 procent og 0,54 ± 0,05 procent af pulver fremstillet af C.tubulosa(Bord1).

2.2. Afkog af C. deserticola YCMa og C. tubulosa lindrede stress- og depressionsniveauet. Tail suspension test (TST) er en hurtig og klassisk metode til at vurdere den antidepressive effekt af lægemidler i mus [24]; i denne forskning blev den immobile status, forårsaget af den kortvarige og uundgåelige stress ved at blive suspenderet i halen, brugt som en egenskab til at afspejle depressionsniveauet hos mus. Vi tjekkede om afkog af C. deserticola YCMa og C.tubulosakunne vende immobiliteten og fremme forekomsten af ​​flugtrelateret adfærd. Sammenlignet med kontrolgrupper steg immobilitetsperioden for stressgruppen med 27,4 procent; i forhold til stressen

Figur 1: HPLC-kromatografisk profil af phenylethanoidglycosider fra C. deserticola YCMa- og C. tubulosa-pulveret. Toppe 1 og 2 repræsenterer henholdsvis echinacoside og verbascoside.

Figur 2: Virkning af C. deserticola YCMa og C. tubulosa afkog på immobilitetsperiode for halesuspensionsmus i 5 min. Efter tilpasning blev forsøgsgrupperne administreret med urte-cistanche-afkog ved sondemad i 21 dage og derefter suspenderet i halen, og bevægelsen blev overvåget i 5 minutter efter suspension; hver gruppe bestod af 10 mus. L, M og H repræsenterer henholdsvis lav, medium og høj; CD og CT repræsenterer henholdsvis

C. deserticola YCMa og C. tubulosa afkog. Alle data blev repræsenteret som middel ± SEM; P< 0.05="" was="" considered="" as="" significantly="" different="" and="" was="" marked="" as="">

grupper,

grupper, grupperne behandlet med medium, høj koncentration af C. deserticola YCMa urteafkog viste et statistisk signifikant fald i immobilitetsperioden hver med 44,1 procent og 56,1 procent; grupperne behandlet med middel, høj koncentration af

C. tubulosa urteafkog viste et statistisk signifikant fald i immobilitetsperioden hver med 41,9 procent og 47,7 procent (figur2). Disse resultater indikerer, at afkog af C. deserticola YCMa og C.tubulosakunne mindske stress- og depressionsniveauet hos mus, og C. deserticola YCMa-afkog udviste lidt højere effektivitet end C.tubulosaafkog.

1.1. Afkog af C. deserticola YCMa og C. tubulosa Forbedrede musenes rumlige indlæring og hukommelse. Mennesker (både unge og voksne) ramt af depression er tilbøjelige

at lide indlæringsvanskeligheder [28]; afkog af C. deserticola YCMa og C.tubulosaviste sig at lindre stress- og depressionsniveauet; derefter valgte vi at vurdere, om afkog af C. deserticola YCMa og C. tubulosa kunne påvirke den rumlige indlæring og hukommelse ved at bruge Morris vandlabyrint-modellen, som er almindeligt anvendt til at vurdere den rumlige indlæring og hukommelsesfunktionen af ​​relateret hjerneområde[29]. Bevægelsessporene er klassificeret i fire under søgelatensen; en retlinet bane viste, at musene udpegede redningsplatformens position, en tendensbane viste, at musene udviste en grundlæggende ret orientering, og den edgy type bane viste, at musene enten var i den tidlige træningsperiode eller led af demens og forsøgte at lokaliser målsted baseret på instinkt; den tilfældige søgebane viste, at mus havde den lave evne til at positionere og søgte målstedet formålsløst. Data blev indsamlet i henhold til kriterierne.

Effekten af ​​C. deserticola YCMa og C. tubulosa afkog på rumindlæring og hukommelsesevne hos tilbageholdende stressede mus er vist i figur3. Efter halesuspensionstesten viste mus en signifikant forlænget latensperiode. Sammenlignet med stressgrupperne, viste musene behandlet moderat, høj dosis C. deserticola YCMa og lav, høj dosis C. tubulosa afkog en forkortet latensperiode; hyppigheden af, at mus svømmede på den skjulte platform, var opreguleret signifikant i grupperne behandlet med moderat, høj dosis C. deserticola YCMa afkog. Disse resultater indikerer, at de stressede mus havde fordel af administrationen af ​​urte Cistanche-afkog og viste en forbedring i rumlig indlæring og hukommelse.

1.2. Afkog af C. deserticola YCMa og C.tubulosaNedregulerede monoaminoxidaseaktiviteten. MAO katalyserer den oxidative deaminering af aminer såsom tyramin, katecholamin og 5-hydroxytryptamin (5-HT) i hjernen og perifere væv; hæmning af MAO-aktivitet resulterer i den antidepressive effekt [30]. Vi søgte at forklare den antidepressive effekt af C. deserticola YCMa og C.tubulosa; derefter blev MAO-aktiviteten i hjernen bestemt. Efter halesuspensionstesten blev MAO-aktiviteten opreguleret signifikant; MAO-aktiviteten i grupperne behandlet med halesuspension og derefter efterfulgt af moderat, høj dosis

Figur 3: Effekten af ​​C. deserticola YCMa og C.tubulosaafkog på rumindlæring og hukommelsesevne hos de tilbageholdende stressede mus. Efter tilpasning blev forsøgsgrupperne administreret med urte Cistanche afkog ved sonde i 21 dage og derefter testet med

R. Morris vandlabyrint til bestemmelse af rumlig indlæring og hukommelse. L, M og H repræsenterer henholdsvis lav, medium og høj; CD og CT repræsenterer henholdsvis C. deserticola YCMa og C.tubulosaafkog. "#" og "∗" repræsenterer hver P< 0.05="" and="" p="" <="">

Figur 4: Virkning af C. deserticola YCMa og C. tubulosa afkog på hjerne monoaminoxidase (MAO) aktivitet af halesuspension stressede mus. Efter tilpasning blev forsøgsgrupperne administreret med urte Cistanche afkog ved sonde i 21 dage og derefter suspenderet i halen i 5 minutter, hver gruppe bestod af 10 mus, og musene blev aflivet for at høste hjernevævet og bruges til MAO-aktivitetsmåling. L, M og H repræsenterer henholdsvis lav, medium og høj; CD og CT repræsenterer henholdsvis C. deserticola YCMa og C. tubulosa afkog. P= 10; alle data blev repræsenteret som middel ± SEM; P < 0,05="" blev="" betragtet="" som="" signifikant="" anderledes="" og="" blev="" markeret="" som="">

et afkog fra C. deserticola YCMa viste et signifikant fald med ca. 13,9 procent ~12,3 procent; MAO-aktiviteten i grupperne behandlet med halesuspension og derefter højdosisafkog fra C. tubulosa viste et signifikant fald med omkring 13,2 procent (figur4).Dataene viste, at afkog fra både C. deserticola YCMa og C. tubulosa kunne hæmme aktiviteten af ​​MAO og kan bidrage til det antidepressive middel

effekt og afkog af C. deserticola YCMa viste en stærkere effekt end C. tubulosa.

1.1. Administrationen af ​​C. deserticola YCMa og C. tubulosa afkog resulterede i opregulering af central dopaminkoncentration og nedregulering af serumkortikosteronkoncentration. Niveauet af DA og NE i

Figur 5: Virkning af C. deserticola YCMa og C. tubulosa afkog på hjernen neurotransmitter niveauer af halesuspension stressede mus. Efter tilpasning blev de eksperimentelle grupper administreret med urte-cistanche-afkog ved sondemad i 21 dage og derefter suspenderet i halen i 5 minutter, hver gruppe bestod af 10 mus, og musene blev ofret for at høste hjernevævet og brugt til hjernens neurotransmitter niveaumåling. L, M og H repræsenterer henholdsvis lav, medium og høj; CD og CT repræsenterer henholdsvis C. deserticola YCMa og C. tubulosa afkog. P= 10; alle data blev repræsenteret som middel ± SEM; P< 0.05="" was="" considered="" as="" significantly="" different="" and="" was="" marked="" as="">

central

centralnervesystemet blev målt for at bestemme nerveexcitabilitet. Efter 4 ugers haleophængstest, sammenlignet med stressgrupperne, er DA-niveauet for grupper behandlet med moderat dosis C. deserticola YCMa opreguleret signifikant hver med 43,5 procent; DA-niveauet for grupper behandlet med moderat dosis C. tubulosa blev også opreguleret signifikant (figur5(a)). Niveauet af NE var mildt opreguleret i grupperne behandlet med et afkog af begge urter sammenlignet med stressgrupperne, og der blev ikke fundet nogen statistisk forskel (figur5(b)).Disse resultater kan forklare den molekylære mekanisme bag den antidepressive virkning af urten Cistanche.

Adrenokortikotropt hormon (ACTH), et polypeptidhormon, der produceres og udskilles af den forreste hypofyse, stimulerer sekretionen af ​​glukokortikosteroid ved at virke på binyrebarken, zona fasciculata [31]; kortikosteron, et steroidhormon, der produceres af cortex i binyrerne, er involveret i reguleringen af ​​de fysiologiske processer såsom energiforstærkning, immunitetsreaktion og stressrespons [32], så vi valgte at undersøge effekten af ​​urteafkog på HPA-aksen. Og ACTH og kortikosteronkoncentration i serum blev målt. Efter 4 ugers halesuspensionstest var ACTH- og corticosteronkoncentrationen i stressgruppen signifikant opreguleret (figur6).Ingen signifikante ændringer blev observeret i behandlingsgrupperne til behandling af urte Cistanche afkog sammenlignet med stressgruppen (figur6(a)).Sammenlignet med stressgruppen blev corticosteron-serumkoncentrationen i grupper behandlet med moderat høj dosis C. deserticola YCMa-afkog nedreguleret signifikant; kortikosteronkoncentrationen i grupper behandlet med høj dosis C. tubulosa var nedreguleret, men ikke til en signifikant statistisk forskel

(Figur5(b)).Dataene viste, at afkog fra begge

C. deserticola YCMa og C. tubulosa kunne reducere corticosteron-serumkoncentrationen og kunne være involveret i reguleringen af ​​HPA-aksen, og afkog af C. deserticola YCMa viste en stærkere effekt end C. tubulosa.

1. Diskussion

I denne undersøgelse blev de antidepressive aktiviteter og forbedring af hukommelse og indlæring af urten Cistanche defineret, hvilket kan kaste nyt lys over urtens Cistanche-funktion og give fingerpeg om at udvide det terapeutiske anvendelsesområde. Tidligere undersøgelser viser, at herb Cistanche er et multifunktionelt kinesisk lægemiddel med biologiske virkninger af antialdring, antioxidant, østrogen, antiosteoporotisk, elskovsmiddel og anti-inflammation.33]. Herb Cistanche er blevet anerkendt som en behandling for nyremangel, infertilitet og kronisk forstoppelse (Pharmacopoeia Committee of China, 2010). Herb Cistanche afkog er sammensat af flygtige olier, ikke-flygtige phenylethanoid glycosider (PeGs), iridoider, lignaner, alditoler, oligosaccharider og polysaccharider. Echinacoside og verbascoside betragtes generelt som de vigtigste bioaktive ingredienser [34]. Der er fire vigtigste Cistanche-arter, herunder C. deserticola YCMa, C. tubulosa, Cistanche Sinensis G. Beck og Cistanche salsa var. albiflorashi et al. [35]; vi valgte C. deserticola YCMa og C. tubulosa som vores model til at bestemme PeGs indholdet, og C. deserticola YCMa havde et højere indhold af PeGs (figur1), hvilket kan forklare den højere effektivitet af C. deserticola YCMa. Resultaterne indikerer, at indholdet af de vigtigste bioaktive ingredienser bestemmer effektiviteten af ​​urten Cistanche.

Figur 6: Effekt af C. deserticola YCMa og C. tubulosa afkog på serumhormonkoncentrationer i hængende stressede mus. Efter tilpasning blev forsøgsgrupperne administreret med urte-cistanche-afkog ved sondemad i 21 dage og derefter suspenderet i halen i 5 minutter, hver gruppe bestod af 10 mus, og blodet blev høstet og brugt til bestemmelsen af serum adrenokortikotrofisk hormon (ACTH) og corticosteron (CORT) niveau. L, M og H repræsenterer henholdsvis lav, medium og høj; CD og CT repræsenterer henholdsvis C. deserticola YCMa og C. tubulosa afkog. P=10; alle data blev repræsenteret som middel ± SEM; P < 0,05="" blev="" betragtet="" som="" signifikant="" forskellige="" og="" blev="" markeret="" som="">

Tidligere undersøgelser indikerer, at urte-Cistanche-produkter er gavnlige til behandling af neurodegenerative lidelser ved at opregulere nervevækstfaktor (NGF) i hippocampus hos mus [36,37], men der er ikke rapporteret forskning i de antidepressive og kognitive læringsaktiviteter af urten Cistanche i pattedyrsmodellerne. I denne undersøgelse blev urte Cistanche afkog bevist at være effektiv til at lindre stressniveauet og væsentligt øge overlevelsesadfærden i haleophængstesten (figur2) og forbedre den rumlige lærings- og hukommelseskapacitet i vandlabyrintmodellen (figur3). Lin et al. bevist, at urten Cistanche forbedrede den olfaktoriske associerede hukommelse i frugtfluemodellen [23]; vi fokuserede vores forskning på den antidepressive effekt og adopterede en anden dyremodel; resultatet viste, at urten Cistanche forbedrede en variant af kognitiv funktion, nemlig den rumlige indlæringsevne hos mus. Ifølge monoaminteorien er stressoplevelsen og depressionen tæt forbundet med hjerneniveauet af monoamin-neurotransmittere, såsom DA, NE, 5-HT og epinephrin [38]. Og vi fandt ud af, at urten Cistanche-afkog kunne underminere MAO-aktiviteten (figur4) og øge den centrale DA-koncentration (figur5(en)). Overraskende nok blev den centrale 5-HT-koncentration nedreguleret af urte Cistanche-afkogsbehandling (data ikke vist), fordi tidligere forskning viste, at den reducerede centrale 5-HT-aktivitet er forbundet med depression [39]. Dysregulering af hypothalamus-hypofyse-binyreaksen er ofte forbundet med depression [40], intervention med glucocorticoid receptor (GR) systemet vendte med succes den depressive fænotype i mus[41], og vi fandt ud af, at urten Cistanche lindrede serumet betydeligt

koncentration af CORT (figur6(b)).Modulation af monoaminsystemet og HPA-aksen bidrager begge til den antidepressive effekt af urten Cistanche. Echinacosidet kunne krydse blod-hjerne-barrieren frit og virke på centralnervesystemet [42], hvilket kan forklare, hvorfor urte-cistanche-afkog havde en antidepressiv funktion. For første gang karakteriserede vi den antidepressive egenskab og dens forhold til kognitive forbedringsaktiviteter i musemodellen, og den foreløbige mekanisme blev undersøgt. Alligevel er mekanismen for Cistanches antidepressive egenskaber ikke blevet klarlagt på molekylært niveau, og yderligere forskning er nødvendig for at belyse den omfattende antidepressive mekanisme af urten Cistanche.

I betragtning af, at urte-cistanche-afkog er en blanding af forbindelser, kan der være flere måder, hvorpå urte-cistanche-afkog udøver den antidepressive effekt og øger indlæringsevnen. Oxidativ stress påvirker mange cellulære funktioner af neuroner, og overproduktion af reaktive oxygenarter (ROS) forårsager celleskade, apoptose og død [43]. Echinacosid ekstraheret fra stilkene af C. salsa udviser en neurobeskyttende effekt ved at reducere produktionen af ​​ROS og mitokondrier-medieret apoptose [44]; acteosid, en ekstremt stærk antioxidativ forbindelse, kan være delvist ansvarlig for den neurobeskyttende effekt[45]. Udover den traditionelle afkogsmetode kan anvendelsen af ​​moderne farmaceutiske metoder såsom glycosidkapsler med kontrolleret frigivelse øge effekten af ​​urteafkog, fordi de bioaktive ingredienser kan fordøjes og nedbrydes af mave-tarmkanalen [37].

Tidligere undersøgelser indikerer, at urte-Cistanche-produkter er gavnlige til behandling af neurodegenerative lidelser ved at opregulere nervevækstfaktor (NGF) i hippocampus hos mus [36,37], men der er ikke rapporteret forskning i de antidepressive og kognitive læringsaktiviteter af urten Cistanche i pattedyrsmodellerne. I denne undersøgelse blev urte Cistanche afkog bevist at være effektiv til at lindre stressniveauet og væsentligt øge overlevelsesadfærden i haleophængstest (figur2) og forbedre den rumlige lærings- og hukommelseskapacitet i vandlabyrintmodellen (figur3). Lin et al. bevist, at urten Cistanche forbedrede den olfaktoriske associerede hukommelse i frugtfluemodellen [23]; vi fokuserede vores forskning på den antidepressive effekt og adopterede en anden dyremodel; resultatet viste, at urten Cistanche forbedrede en variant af kognitiv funktion, nemlig den rumlige indlæringsevne hos mus. Ifølge monoaminteorien er stressoplevelsen og depressionen tæt forbundet med hjerneniveauet af monoamin-neurotransmittere, såsom DA, NE, 5-HT og epinephrin [38]. Og vi fandt ud af, at urten Cistanche-afkog kunne underminere MAO-aktiviteten (figur4) og øge den centrale DA-koncentration (figur5(en)). Overraskende nok blev den centrale 5-HT-koncentration nedreguleret af urte Cistanche-afkogsbehandling (data ikke vist), fordi tidligere forskning viste, at den reducerede centrale 5-HT-aktivitet er forbundet med depression [39]. Dysregulering af hypothalamus-hypofyse-binyreaksen er ofte forbundet med depression [40], indgreb med glukokortikoid receptor (GR) systemet vendte med succes den depressive fænotype i mus[41], og vi fandt ud af, at urten Cistanche lindrede serumet betydeligt

koncentration af CORT (figur6(b)).Modulation af monoaminsystemet og HPA-aksen bidrager begge til den antidepressive effekt af urten Cistanche. Echinacosidet kunne krydse blod-hjerne-barrieren frit og virke på centralnervesystemet [42], hvilket kan forklare, hvorfor urte-cistanche-afkog havde en antidepressiv funktion. For første gang karakteriserede vi den antidepressive egenskab og dens forhold til kognitive forbedringsaktiviteter i musemodellen, og den foreløbige mekanisme blev undersøgt. Alligevel er mekanismen for Cistanches antidepressive egenskaber ikke blevet klarlagt på molekylært niveau, og yderligere forskning er nødvendig for at belyse den omfattende antidepressive mekanisme af urten Cistanche.

I betragtning af, at urte-cistanche-afkog er en blanding af forbindelser, kan der være flere måder, hvorpå urte-cistanche-afkog udøver den antidepressive effekt og øger indlæringsevnen. Oxidativ stress påvirker mange cellulære funktioner af neuroner, og overproduktion af reaktive oxygenarter (ROS) forårsager celleskade, apoptose og død [43]. Echinacosid ekstraheret fra stilkene af C. salsa udviser en neurobeskyttende effekt ved at reducere produktionen af ​​ROS og mitokondrier-medieret apoptose [44]; acetonid, en ekstrem stærk antioxidativ forbindelse, kan være delvist ansvarlig for den neurobeskyttende effekt[45]. Udover den traditionelle afkogsmetode kan anvendelsen af ​​moderne farmaceutiske metoder såsom glycosidkapsler med kontrolleret frigivelse øge effekten af ​​urteafkog, fordi de bioaktive ingredienser kan fordøjes og nedbrydes af mave-tarmkanalen [37].

1. Konklusioner

I denne undersøgelse fandt vi, at afkog af C. deserticola

YCMa og C. tubulosa udviste en antidepressiv effekt og forbedrede den rumlige indlærings- og hukommelsesevne i musemodellen, og afkog af C. deserticola YCMa og C. tubulosa havde en signifikant indflydelse på HPA-aksen;

C. deserticola YCMa viste en stærkere farmakologisk funktion. C. deserticola og C. tubulosa kan rumme potentialet til at blive udviklet som alternativ behandlingsmedicin mod depression.

Afsløring

De synspunkter, der er udtrykt heri, er forfatternes og afspejler ikke nødvendigvis synspunkterne fra nogen af ​​disse agenturer.

Interessekonflikt

Forfatterne erklærer, at de ikke har nogen interessekonflikter.

Anerkendelser

Dette projekt blev støttet af tilskud fra National Natural Science Foundation (81503333) og Science and Technology Support by Project i den autonome region Xinjiang Uygur (Kina) (200840102-15).

Referencer

[1] RC Kessler, KA McGonagle, S. Zhao, et al., "Lifetime and 12-month prevalens of DSM-III-R psykiatriske lidelser i USA: resultater fra National Comorbidity Survey," Archives of Almen Psykiatri, bd. 51, nr. 1, s. 8-19, 1994.

[2] HK Manji, GJ Moore, G. Rajkowska og G. Chen, "Neuroplasticitet og cellulær modstandskraft ved humørsygdomme," Molecular Psychiatry, vol. 5, nr. 6, s. 578-593, 2000.

[3] JD Rosenblat, RS McIntyre, GS Alves, KN ​​Fountoulakis og AF Carvalho, "Beyond monoamines-novel targets for treatment-resistant depression: A comprehensive review," Current Neuropharmacology, vol. 13, nr. 5, s. 636-655, 2015.

[4] K. Wilson og P. Mottram, "En sammenligning af bivirkninger af selektive serotonin-genoptagelseshæmmere og tricykliske antidepressiva hos ældre deprimerede patienter: En metaanalyse," International Journal of Geriatric Psychiatry, vol. 19, nr. 8, s. 754-762, 2004.

[5] S. Vezmar, B. Miljkovic´, K. Vucˇic´evic´ et al., "Farmakokinetik og effektivitet af fluvoxamin og amitriptylin ved depression," Journal of Pharmacological Sciences, vol. 110, nr. 1, s. 98-104, 2009.

[6] CH Halsted, "Kosttilskud og funktionelle fødevarer: 2 sider af en mønt?" American Journal of Clinical Nutrition, vol. 77, s. 1001S–1007S, 2003.

[7] J.-S. Tian, ​​C.-C. Liu, H. Xiang et al., "Undersøgelse af den antidepressive virkning af havtornfrøolie gennem den GC-MS-baserede metabolomiske tilgang kombineret med multivariat analyse," Food and Function, vol. 6, nr. 11, s. 3585-3592, 2015.

[8] Y. Hou, MA Aboukhatwa, D.-L. Lei, K. Manaye, I. Khan og

Y. Luo, "Anti-depressive naturlige flavonoler modulerer BDNF og

beta-amyloid i neuroner og hippocampus af dobbelte TgAD-mus," Neuropharmacology, vol. 58, nr. 6, pp. 911-920, 2010.

[9] J. Wattanathorn, P. Chonpathompikunlert, S. Muchimapura,

A. Priprem og O. Tankamnerdthai, "Piperine, den potentielle funktionelle mad til humør og kognitive lidelser," Food and Chemical Toxicology, vol. 46, nr. 9, s. 3106-3110, 2008.

[10] M. Shirai, Y. Kawai, R. Yamanishi og J. Terao, "Tilgang til nye funktionelle fødevarer til stresskontrol 5. Antioxidantaktivitetsprofiler af antidepressive urter og deres aktive komponenter," Journal of Medical Investigation, vol. 52, s. 249-251, 2005.

[11] PS Kumar, T. Praveen, NP Jain og B. Jitendra, "En gennemgang af Griffonia simplicifollia - et ideelt urte-antidepressivt middel," International Journal of Pharmacy & Life Sciences, 2010.

[12] Z.-L. Jin, N. Gao, W. Xu et al., "Receptor- og transportørbindings- og aktivitetsprofiler for albiflorin ekstraheret fra Radix Paeonia Alba," Scientific Reports, vol. 6, artikel-id 33793, 2016.

[13] S.-H. Lin, M.-L. Chou, W.-C. Chen et al., "En lægeurt, Melissa officinalis L. forbedrer depressiv-lignende adfærd hos rotter i tvungen svømmetest ved at regulere den serotonerge neurotransmitter," Journal of Ethnopharmacology, vol. 175, artikelnr. 9741, s. 266-272, 2015.

[14] H. Shimoda, J. Tanaka, Y. Takahara, K. Takemoto, S.-J. Shan og M.-H. Su, "De hypokolesterolæmiske virkninger af Cistanche tubulosa-ekstrakt, en kinesisk traditionel råmedicin, hos mus," American Journal of Chinese Medicine, vol. 37, nr. 6, s. 1125-1138, 2009.

[15] LI Xia, MA Yong-Qing, YX Song, JF Shui og LI Xiu-Wei, "Effekten af ​​forskellige plantevækstregulatorer på transplantationsoverlevelsesforhold for haloxyfop ammodendron frøplante og parasitforholdet mellem cistanche deserticola," Journal of Chinese Medicinske materialer, vol. 32, s. 1651-1654, 2009.

[16] Q. Xiong, S. Kadota, T. Tani og T. Namba, "Antioxidative virkninger af phenylethanoider fra Cistanche deserticola," Biologisk og farmaceutisk bulletin, vol. 19, nr. 12, s. 1580-1585, 1996.

[17] Y. Wu, L. Li, T. Wen og Y.-Q. Li, "Beskyttende virkninger af echinacoside på carbontetrachlorid-induceret hepatotoksicitet hos rotter," Toxicology, vol. 232, nr. 1-2, s. 50-56, 2007.

[18] T. Wang, C. Chen, M. Yang, B. Deng, GM Kirby og X. Zhang, "Cistanche tubulosa ethanolekstrakt medierer rotte kønshormonniveauer ved induktion af testikelsteroidogene enzymer," Pharmaceutical Biology, vol. 54, nr. 3, s. 481-487, 2016.

[19] L. Gu, WT Xiong, YL Zhuang, JS Zhang og X. Liu, "Effects of Cistanche deserticola extract on penis erectile response in castrated rotter," Pakistan Journal of Pharmaceutical Sciences, vol. 29, nr. 2, s. 557-562, 2016.

[20] SG Lin, SF Ye, JM Huang, et al., "Hvordan hæmmer kinesisk medicin, der tonificerer nyren, dopaminerge neuronapoptose?" Neural Regeneration Research, vol. 8, nr. 30, s. 2820-2826, 2013.

[21] C.-R. Wu, H.-C. Lin og M.-H. Su, "Reversering med vandige ekstrakter af Cistanche tubulosa fra adfærdsmæssige underskud i Alzheimers sygdomslignende rottemodel: relevans for amyloidaflejring og central neurotransmitterfunktion," BMC Complementary and Alternative Medicine, vol. 14, s. 1-11, 2014.

[22] DR Lara, LW Bisol og LR Munari, "Antidepressive, humørstabiliserende og prokognitive virkninger af meget lav dosis sublingualt ketamin i refraktær unipolar og bipolar depression," International Journal of Neuropsychopharmacology, vol. 16, nr. 9, s. 2111-2117, 2013.

[23] W. Lin, C. Yao, J. Cheng, S. Kao, F. Tsai og H. Liu, "Molekylære veje relateret til fremme af lang levetid og kognitiv forbedring af Cistanche tubulosa i Drosophila,"

Phytomedicine, vol. 26, s. 37-44, 2017.

[24] JF Cryan, C. Mombereau og A. Vassout, "Halesuspensionstesten som model til vurdering af antidepressiv aktivitet: Gennemgang af farmakologiske og genetiske undersøgelser i mus," Neuroscience and Biobehavioral Reviews, vol. 29, nr. 4-5, s. 571-625, 2005.

[25] CV Vorhees og MT Williams, "Morris vandlabyrint: procedurer til vurdering af rumlige og relaterede former for læring og hukommelse," Nature Protocols, vol. 1, nr. 2, s. 848-858, 2006.

[26] R. Morris, "Udviklinger af en vand-labyrint-procedure til at studere rumlig læring hos rotter," Journal of Neuroscience Methods, vol. 11, nr. 1, s. 47-60, 1984.

[27] A. Wolf, B. Bauer, EL Abner, T. Ashkenazy-Frolinger og A.

MS Hartz, "Et omfattende adfærdstestbatteri til at vurdere indlæring og hukommelse i 129S6/Tg2576-mus," PLoS ONE, vol. 11, nr. 1, artikel-id e0147733, 2016.

[28] BP Rourke, GC Young og AA Leenaars, "En indlæringsvanskelighed i barndommen, der disponerer dem, der er ramt af depression og selvmordsrisiko for unge og voksne." Journal of Learning Disabilities, vol. 22, nr. 3, s. 169-175, 1989.

[29] R. D'Hooge og PP De Deyn, "Anvendelser af Morris vandlabyrint i studiet af indlæring og hukommelse," Brain Research Reviews, vol. 36, nr. 1, s. 60-90, 2001.

[30] JC Shih, K. Chen og MJ Ridd, "Monoaminoxidase: fra gener til adfærd," Annual Review of Neuroscience, vol. 22, s. 197-217, 1999.

[31] SR Bornstein, WC Engeland, M. Ehrhart-Bornstein og JP Herman, "Dissociation of ACTH and glucocorticoids," Trends in Endocrinology and Metabolism, vol. 19, nr. 5, s. 175-180, 2008.

[32] S. Whirledge og JA Cidlowski, "Glucocorticoids, stress, and fertility," Minerva Endocrinologica, vol. 35, nr. 2, s. 109-125, 2010.

[33] L. Wang, H. Ding, H. Yu et al., "Cistanches Herba: Chemical Constituents and Pharmacological Effects," Chinese Herbal Medicines, vol. 7, nr. 2, s. 135-142, 2015.

[34] Z. Li, H. Lin, L. Gu, J. Gao og C.-M. Tzeng, "Herba Cistanche (Rou Cong-Rong): En af de bedste farmaceutiske gaver inden for traditionel kinesisk medicin," Frontiers in Pharmacology, vol. 7, artikel 41, 2016.

[35] HM Shi, J. Wang, MY Wang, PF Tu og XB Li, "Identifikation af Cistanche-arter ved kemisk og inter-simple sekvens gentaget fingeraftryk," Biological and Pharmaceutical Bulletin, vol. 32, nr. 1, s. 142-146, 2009.

[36] JG Choi, M. Moon, HU Jeong, MC Kim, SY Kim og

MS Oh, "Cistanches Herba forbedrer indlæring og hukommelse ved at inducere nervevækstfaktor," Behavioral Brain Research, vol. 216, nr. 2, s. 652-658, 2011.

[37] Q. Guo, Y. Zhou, C.-J. Wang et al., "En åben, ikke-placebokontrolleret undersøgelse af cistanche tubulosa glycosidkapsler (Memoregain®) til behandling af moderat Alzheimers sygdom," American Journal of Alzheimer's Disease and other Dementias, vol. 28, nr. 4, s. 363-370, 2013.

[38] M. Popoli, M. Gennarelli og G. Racagni, "Modulation of synaptic plasticity by stress and antidepressants," Bipolar Disorders, vol. 4, nr. 3, s. 166-182, 2002.

[39] AJ Cleare, A. McGregor og V. O'Keane, "Neuroendokrine beviser for en sammenhæng mellem hypothyroidisme, reduceret central 5-HT-aktivitet og depression," Clinical Endocrinology, vol. 43, nr. 6, s. 713-719, 1995.

[40] NL Lopez-Duran, M. Kovacs og CJ George, "Hypothalamus-hypofyse-binyreakse dysregulering hos deprimerede børn og unge: en meta-analyse," Psychoneuroendocrinology, vol. 34, nr. 9, s. 1272-1283, 2009.

[41] N. Barden, "Implikation af hypothalamus-hypofyse-binyre-aksen i depressionens fysiopatologi," Journal of Psychiatry and Neuroscience, vol. 29, nr. 3, s. 185-193, 2004.

[42] M. Zhu, C. Lu og W. Li, "Forbigående eksponering for echinacosid er tilstrækkelig til at aktivere Trk-signalering og beskytte neuronale celler mod rotenon," Journal of Neurochemistry, vol. 124, nr. 4, s. 571-580, 2013.

[43] T.-H. Lu, C.-C. Su, F.-C. Tang et al., "Chloreddikesyre udløser apoptose i neuronale celler via en reaktiv oxygenarter-induceret endoplasmatisk retikulumstresssignalvej," Chemico-Biological Interactions, vol. 225, s. 1-12, 2015.

[44] Y.-H. Wang, Z.-H. Xuan, S. Tian og G.-H. Du, "Echinacoside beskytter mod 6-hydroxydopamin-induceret mitokondriel dysfunktion og inflammatoriske reaktioner i PC12-celler via reduktion af ROS-produktion," Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine, vol. 2015, artikel-id 189239, 9 sider, 2015.

[45] WF Chiou, LC Lin og CF Chen, "Acteosid beskytter endotelceller mod frie radikaler-induceret oxidativ stress," Journal of Pharmacy and Pharmacology, vol. 56, nr. 6, s. 743-748, 2004.