Hvorfor Herba Cistanches kan bruges til at behandle nyre-mangelsyndrom?

Metabolisk profilering afslører terapeutiske virkninger af Herba Cistanches i en dyremodel af hydrocortison-induceret 'nyre-mangelsyndrom'

Kontakt: emily.li@wecistanche.com

Yunping Qiu, Minjun Chen, Mingming Su, Guoxiang Xie, Xin Li, Mingmei Zhou, Aihua Zhao, Jian Jiang & Wei Jia

Abstrakt

Baggrund

Herba Cistanches(Roucongrong) er effektiv til behandling af Shenxu Zheng ('nyre-mangel syndrom'). Imidlertid er mekanismerne og de systemiske metaboliske reaktioner på urteinterventionen uklare.

Metoder

Ved at bruge GC-MS-baseret metabolisk profilering undersøgte vi de metaboliske reaktioner påHerba Cistanchesintervention i en rottemodel af den hydrocortison-inducerede 'nyre-mangel syndrom'.

Resultater

Rotternes metaboliske profiler efter hydrocortisoninjektion afveg fra den metaboliske tilstand før dosis på forskellige tidspunkter, varierende fra dag 1 til dag 10, hvorimod de metaboliske profiler for rotterne behandlet med både hydrocortison og vandekstrakt afHerba Cistanchesvendte tilbage til tilstanden før dosis på dag 10.

Konklusion

Indgrebet afHerba Cistanchesforårsagede en systemisk genopretning fra den hydrocortison-inducerede metaboliske forstyrrelse hos rotter. Denne undersøgelse viser også, at metabolisk profilering er nyttig til at studere terapeutiske mekanismer af naturlægemidler.

Baggrund

Gennem modulering af biokemiske reaktioner, kontrolmekanismer og enzymaktiviteter forårsager mange lægemidler eller kemikalier fluktuationer af metabolitter til stede i enkelte celler, væv eller kropsvæsker [1]. Metabolisk profilering, dvs. sondering af metabolitter med lav molekylvægt (MW < 1000="" da)="" ved="" hjælp="" af="" et="" avanceret="" analytisk="" instrument="" kombineret="" med="" multivariat="" statistik,="" kan="" vise="" levende="" systemers="" systemiske="" reaktioner="" på="" xenobiotika.="" det="" er="" også="" teknisk="" muligt="" at="" katalogisere="" alle="" de="" multifaktorielle="" arvelige="" og="" miljøpåvirkede="" metaboliske="" profiler="" af="" en="" organisme,="" herunder="" de="" fysiopatologiske="" konsekvenser="" af="" toksin="" og/eller="" sygdomsinducerede="" forstyrrelser="" eller="" uligevægte="" i="" det="" metaboliske="" regulatoriske="" netværk="" på="" et="" systemisk="" niveau.="" til="" dato="" er="" metabolisk="" profilering="" blevet="" etableret="" i="" screening,="" diagnose,="" prognose="" for="" sygdomme="" [2-4]="" og="" sikkerhedsevaluering="" af="" visse="" lægemidler="" og="" kemikalier="">

Kernemagnetisk resonans (NMR) [12] og massespektrometri (MS) [13], anvendt alene eller i kombination, er blevet brugt til at profilere og karakterisere metaboliske konsekvenser af toksin- og/eller sygdomsinducerede forstyrrelser. NMR, som ikke kræver kedelig prøveforbehandling, er en hurtig og enkel metode til at opnå iboende information fra komplekse og intakte biologiske prøver. På den anden side skyldes den brede anvendelse af bindestreg MS i metabolisk profilering dens høje følsomhed og tilgængelighed [14, 15]. GC-MS-baseret metabolisk profilering er især blevet brugt til at opdage mekanismer for lægemidler og herbicider in vivo, biomarkører for sygdomme [16] og virkninger af ændret genekspression på metabolisme og overvågning af organismers ydeevne i bioteknologiske applikationer [17-20] .

Herba Cistanches(Roucongrong), en almindelig kinesisk tonic urt, der vokser i ørkenen, udviser markante aktiviteter til forbedring af hukommelse [21] og/eller seksuel styrke [22], frie radikaler, anti-aldring [23-26] og neurobeskyttelse [27] , 28]. I århundreder,Herba Cistancheser blevet effektivt brugt til behandling af Shenxu Zheng ('nyre-mangel syndrom') [29]. For nyligHerba Cistanchesblev påvist at have forbedret hydrocortison-inducerede nyresygdomme [30]; dets metaboliske konsekvenser er imidlertid ikke klare. Vores tidligere undersøgelse [31] viste, at metaboliske profiler af rotter udsat for hydrocortison i en høj dosis (dvs. en dyremodel for 'nyre-mangel syndrom') [32], viste et unikt biokemisk mønster af endogene metabolitter i urin. Disse resultater inspirerede os til at studere mekanismerne for konsekvente biokemiske ændringer efter hydrocortisonmodifikation ved at bruge GC-MS-baseret metabolisk profilering til at undersøge, om Herba Cistanches kunne vende eller modvirke afvigende metaboliske virkninger af hydrocortison.

Cistanche kan forbedre nyrefunktionen

Metoder

Materialer og instrument

Herba Cistanchesblev købt fra Shanghai Leiyunshang Pharmaceutical Co Ltd (Kina) og identificeret som Cistanche deserticola YC Ma af Dr. Mengyue Wang (Laboratory of Pharmacognostics, School of Pharmacy, Shanghai Jiao Tong University) i henhold til en standardprotokol [33]. Hydrocortison opløsning til injektion (0,5 procent) blev købt fra Shanghai Xinyi Pharmaceutical Co (Kina). Derivatiseringsreagenserne var N-methyl-N-trimethylsilyltrifluoracetamid (MSTFA) (Sigma-Aldrich Inc, USA) og Trimethyliodosilan (TMSI) (Sigma-Aldrich Inc, USA) blandet i et forhold på 1000:1. Alle reagenser anvendt i eksperimentet var af analytisk kvalitet. Ultrarent vand blev fremstillet med et Millipore-rensningssystem (18,2 MΩ, USA). Metaboliske bure blev købt fra Suzhou Fengshi Laboratory Animal Experiment Co Ltd (Kina).

Fremstilling af Herba Cistanches ekstrakt

Fem hundrede gram groft pulveriseret plantemateriale blev tilbagesvalet med 2 L ultrarent vand i 2 timer. Efter filtrering blev ekstrakten inddampet til ca. en tiendedel af det oprindelige volumen på en Buchi rotationsfordamper og blev fortyndet til 250 ml i en målekolbe med ultrarent vand. Den endelige koncentration af råolieHerba Cistanchesekstrakten var 2 g/ml.

Dosering og prøveudtagning

Håndteringen af ​​alle dyr i denne undersøgelse var i overensstemmelse med de nationale retningslinjer og blev udført på Center for Laboratory Animals, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, Shanghai, Kina. I alt 19 ni uger gamle Wistar-hanrotter blev købt fra Shanghai Laboratory Animal Co Ltd (Kina). Alle dyr blev holdt i et barrieresystem med reguleret temperatur (20-22 grader) og luftfugtighed (60 ± 10 procent), og i en 12 timers mørk/lys-cyklus med lys tændt kl. 8:00 om morgenen. Rotterne fik ad libitum mad og vand. Efter to ugers akklimatisering blev dyrene overført til individuelle metaboliske bure og tilfældigt opdelt i tre grupper: (1) behandlingsgruppe (n=7), hvor hydrocortison (5 procent) blev injiceret ip ved 1,5 mg/100 g af kropsvægt efterfulgt af oral administration afHerba Cistanchesudtræk i 10 dage; (2) modelgruppe (n=7), hvor hydrocortison (5 procent) blev injiceret ip ved 1,5 mg/100 g én gang dagligt i 10 dage; og (3) kontrolgruppe (n=5), hvori vehiklet blev injiceret ip ved ca. 0,6 ml i 10 dage [31].Herba Cistanchesblev administreret til behandlingsgruppen i en dosis på 20 g/kg efter anbefaling fra Shen et al. [30]. 24 timers urinprøver blev indsamlet med specifikke tidsintervaller: før dosis (-24 – 0 timer), dag 1 (0 – 24 timer), dag 3, dag 7 og dag 10. Al urinen prøver blev centrifugeret (6383 × g, LG 16-W, Beijing Jingli Centrifuge Co Ltd, Kina) i 10 minutter for at fjerne suspenderet affald og straks opbevaret ved -80 grad til efterfølgende GC-MS-analyse.

Prøveforberedelse og GC-MS

GC-MS blev udført i henhold til vores tidligere undersøgelse med mindre modifikationer [31]. Kort fortalt blev hver 0,5 μL aliquot af trimethylsilyl (TMS)-derivatiseret analyt injiceret i en kapillarkolonne med fusioneret silica (17 m × 220 μm indvendig diameter, 0,11 μm filmtykkelse; HP Ultra{ {9}}, Agilent J&W Scientific, USA). GC-MS blev udført på en bindestreg PerkinElmer gaskromatografi og TurboMass-Auto system XL massespektrometer (PerkinElmer Inc, USA).

Databehandling og multivariat analyse

GC-MS-dataene blev konverteret til NetCDF-format gennem DataBridge (PerkinElmer Inc, USA). Tilpassede scripts blev kørt i MATLAB 7.0 (The MathWorks Inc, USA) for at udføre baseline-korrektion, peak deconvolution og justering, intern standardekskludering og normalisering til den samlede sum af kromatogrammet. Den resulterende 3-dimensionelle matrix omfattende vilkårligt topindeks (parret retentionstid-m/z), prøver (observationer) og normaliserede topområder (variabler) blev importeret til SIMCA-P 11.0 softwaren pakke (Umetrics, Sverige) til multivariat analyse.

Middel-centrering blev udført kolonnevis for at fjerne forskydningerne. Alle de målte metabolitter blev behandlet på samme niveau med auto-skalering (skaleret til enhedsvarians) før multivariat analyse. Principal komponentanalyse (PCA) blev udført ved hjælp af SIMCA-P 11.0-softwaren for at afsløre den generelle klyngedannelse, gruppering og tendenser blandt emnerne uden forudgående viden. Den første hovedkomponent (PC1) repræsenterer den største varians i dataene. Den anden hovedkomponent (PC2) er ortogonal til PC1 og repræsenterer den maksimale variansmængde, der ikke er forklaret af PC1. De resterende hovedkomponenter blev konstrueret på samme måde. I mellemtiden blev gennemsnitlige baner for PCA-scoringer brugt til at give en dynamisk indikation for opståen, progression og/eller genopretning af syndromet gennem tiden. Korrelationskoefficienter fra de partielle mindste kvadraters - diskriminantanalyse (PLS-DA) blev brugt til at rangere vigtigheden af ​​hver variabel for yderligere at fange de differentielt udtrykte metabolitter, der er ansvarlige for adskillelsen mellem grupper. PLS-DA er afledt af den partielle mindste kvadraters (PLS) metode, som er en generaliseret multipel regressionsmetode, der beskæftiger sig med flere collineære forudsigere og responsvariable [34]. PLS-DA blev udført ved hjælp af SIMCA-P 11.0-softwaren [35]. En typisk 7-runde krydsvalidering blev udført. En syvendedel af prøverne blev udelukket fra modellen i hver runde for at validere modellen. Denne procedure blev gentaget på en iterativ måde til krydsvalidering, indtil hver prøve var blevet udelukket én gang.

Herba Cistanches kan bruges til at behandle nyre-mangel-syndromet

Univariat analyse

De differentielt udtrykte metabolitter identificeret fra den multivariate analyse blev også verificeret i MATLAB 7.0-softwaren (The MathWorks Inc, USA) ved ikke-parametrisk Kruskal-Wallis-test med et signifikansniveau på P < 0.05 .

Resultater og diskussion

Fortolkning af GC-MS spektre

Typiske GC-MS totalionstrøm (TIC) kromatogrammer af rotteurin på dag 10 fra behandlingsgruppen, modelgruppen og kontrolgruppen er vist i figur 1. Brug af vores optimerede GC-MS analyseprotokol i forbindelse med en softwarebaseret top dekonvolutionsproceduren blev i alt 117 individuelle metabolitter konsekvent påvist i mindst 90 procent af urinprøverne. Forbindelsesidentifikation af toppe af interesse blev udført ved at sammenligne det massespektrale fragment med NIST (National Institute of Standards and Technology) referencebiblioteker, Wiley-biblioteker og referencestandarder. Vi var i stand til at verificere 23 ud af de 117 metabolitter (20 procent), hvoraf størstedelen var aminosyrer, polyaminer, fedtsyrer, puriner og binyrehormoner, der hovedsageligt er involveret i energimetabolisme, lipidmetabolisme og aminosyremetabolisme.

Figur 1 Typiske GC-MS totalionstrøm (TIC) kromatogrammer af urin på dag 10 fra behandlingsgruppe (A), modelgruppe (B) og kontrolgruppe (C).

Tidsafhængige ændringer i urinprøver

Gennemsnitsbanerne for PCA-scorerne afledt af modelgruppen og behandlingsgruppen blev illustreret i figur 2. Det forbigående skift i baneplottet afslørede det dynamiske fremskridt af 'nyre-mangel syndrom' induceret af hydrocortison alene eller i kombination medHerba Cistanchesbehandling. I modelgruppen var metaboliske mønstre på dag 1 og dag 3 forskellige fra dem på dag 7 og dag 10, hvilket tyder på, at det metaboliske regulatoriske netværk på dag 1 og dag 3 kan have gennemgået en forbigående periode med høje udsving, og at det forstyrrede netværk kan være blevet genoprettet på dag 7 og dag 10, hvilket i sidste ende førte til et stabilt mønster tæt på tilstanden før dosis. Analogt viste det faktum, at det metaboliske mønster på dag 1 og dag 3 åbenlyst afveg fra præ-dosis i behandlingsgruppen, den dominerende 'nyre-mangel syndrom' stat. I denne periode var virkningerne af hydrocortison sandsynligvis dominerende over virkningerne afHerba Cistanchesuddrag. Disse fund var i overensstemmelse med den generelle observation, at rotter fra begge grupper viste mindre aktivitet på dag 1 og dag 3. Interessant nok nærmede de metaboliske mønstre på dag 7 og dag 10 sig gradvist og signifikant præ-dosis-tilstanden, hvilket tyder på, atHerba Cistancheshavde nogle modvirkende eller terapeutiske virkninger på de rotter, der blev udsat for hydrocortison. Disse resultater understøtter de kliniske resultater, derHerba Cistancheser effektiv til behandling afnyre-mangel syndrom'. Generelt giver begge baner et visuelt, overordnet og dynamisk billede af starten, progressionen og genopretningen afnyre-mangel syndrom'.

Figur 2 Gennemsnitlig bane for PC1 vs PC2-score for urinprøver fra modelgruppen (-●-) og behandlingsgruppen (--●--). Hver prik angiver en gennemsnitlig score på forskellige tidspunkter, dvs. før dosis, dag 1, 3, 7 og 10. Fejlbjælken repræsenterer standardafvigelsen for hvert tidspunkt opnået af den første hovedkomponent.

Sammenlignende metabolisk analyse af urinprøver

For bedre at forstå de metaboliske virkninger af hydrocortison sammenlignede vi de metaboliske profiler opnået fra kontrol-, model- og behandlingsgrupperne. Generel klyngedannelse af de tre grupper kan let observeres på forskellige tidspunkter, dvs. før dosis, dag 3 og dag 10 (figur 3). Mens der ikke er nogen separationstendens i urinprofiler før dosis, afveg de metaboliske profiler fra kontrolgruppens på dag 3 efter hydrocortisoneksponering. Den metaboliske forstyrrelse af hydrocortison optrådte i både model- og behandlingsgrupperne. Men efter en på hinanden følgende 7-dages behandling medHerba Cistanches, blev behandlingsgruppens metaboliske profiler igen sammenlignelige med kontrolgruppens profiler, hvilket indikerer detHerba Cistanchesgenoprettede effektivt det forstyrrede stofskifte.

Figur 3 Sammenligning af metaboliske profiler fra kontrolgruppen (sort diamant), modelgruppen (rød diamant) og behandlingsgruppen (blå diamant) på forskellige tidspunkter: præ-dosis (A), dag 3 (B) og dag 10 (C). Hver prik i PCA-score-plottet repræsenterer data opnået fra en rotte.

Differentiel identifikation af metaboliske profiler

En krydsvalideret PLS-DA-model blev brugt til at identificere nøglemetabolitterne i forskellige metaboliske profiler for lettere differentiering mellem kontrolgruppens rotter og modelgruppen (dvs. hydrocortison-inducerede) rotter med eller udenHerba Cistanchesbehandling på dag 3 (tabel 1). Foldeændringer i den relative koncentration af hver nøglemetabolit mellem grupperne blev bestemt, og den tilsvarende visualisering af ændringerne mellem grupperne ved præ-dosis, dag 3 og dag 10 blev fremstillet (figur 4). Som vist i figur 4 og tabel 1, mens de fleste af de endogene metabolitter steg eller faldt signifikant i modelgruppen, gennemgik dem i behandlingsgruppen en forbigående periode som observeret på dag 1 og dag 3 og nærmede sig gradvist kontrolniveauet (normalt) . For eksempel, sammenlignet med den lille variation (1,1-1,5 gange) af metabolitterne i behandlingsgruppen på dag 10, blev de stærkt forhøjede niveauer (1,7-3,0 gange) af urintyrosin, tyramin, dopamin og noradrenalin observeret i modelgruppe gennem hele forsøget. Vores tidligere undersøgelse viste, at den forbedrede katekolaminmetabolisme induceret af glukokortikoider resulterede i overforbrug af immunfunktioner, hvilket førte tilnyre-mangel syndrom' [31]. Herba Cistanches, en styrkende urt, der forbedrer immunsystemet [36], kan modvirke nogle virkninger af hydrocortison.Herba Cistancheskan også være i stand til at genoprette et normalt metabolisk regulatorisk netværk. Yderligere eksperimenter med forskellige tilgange såsom molekylærbiologi, cellebiologi og plantekemi er nødvendige for at afgrænse handlingerne afHerba Cistanches(og dets bestanddele) i 'nyre-mangel syndrom'.

Tabel 1 En liste over metabolitter inkluderet i den metaboliske profilering af nærværende undersøgelse

Fra: Metabolisk profilering afslører terapeutiske effekter afHerba Cistanchesi en dyremodel af hydrocortison-induceret 'nyre-mangel syndrom'

Bemærk: Korrelationskoefficienterne (corr coeffs) for alle forbindelser blev beregnet ud fra en krydsvalideret PLS-DA-model (Q2Ycum=0.899, en tilfredsstillende model med to komponenter) på dag 3 mellem kontrolgruppen og modelgruppen med eller udenHerba Cistanchesbehandling. Derudover blev foldændringerne testet ved den ikke-parametriske Kruskal-Wallis-test. Kw (P) angiver P-værdierne for testen. H=kontrolgruppe, M=modelgruppe, D=behandlingsgruppe. For eksempel repræsenterer H/M/0 de relative foldændringer (model, der skal kontrolleres) ved tilstanden før dosis.

Figur 4 Foldændringer af nøglemetabolitterne. Rød farve angiver relative forhøjede koncentrationer (foldændringer > 1,5), mens grøn farve angiver relative reducerede koncentrationer (foldændringer < -1.5).="" foldeændringer="" fra="" -1.5="" til="" 1.5="" anses="" for="" at="" være="" fysiologiske="" variationer.="" en="" foldændring="" (m/h,="" d/h)="" er="" koncentrationsforholdet="" mellem="" modelgruppen="" eller="" behandlingsgruppen="" og="">

Konklusion

Den nuværende metaboliske profileringsundersøgelse ved hjælp af GC-MS viste detHerba Cistanchesforårsagede en systemisk genopretning fra den hydrocortison-inducerede metaboliske forstyrrelse hos rotter, en dyremodel fornyre-mangel syndrom'. Denne undersøgelse viser også, at metabolisk profilering er en nyttig metode til at studere de terapeutiske virkninger af naturlægemidler.

Forkortelser

MS: massespektrometri

GC-MS: gaskromatografi-massespektrometri

NMR: kernemagnetisk resonans

PCA: hovedkomponentanalyse

PLS-DA: partielle mindste kvadrater – diskriminantanalyse

Referencer

1. Nicholson JK, Lindon JC, Holmes E: 'Metabonomics': Forståelse af levende systemers metaboliske reaktioner på patofysiologiske stimuli via multivariat statistisk analyse af biologiske NMR-spektroskopiske data. Xenobiotika. 1999, 29 (11): 1181-1189. 10.1080/004982599238047.

2. Brindle JT, Antti H, Holmes E, Tranter G, Nicholson JK, Bethell HWL, Clarke S, Schofield PM, McKilligin E, Mosedale DE, Grainger DJ: Hurtig og ikke-invasiv diagnose af tilstedeværelsen og sværhedsgraden af ​​koronar hjertesygdom ved hjælp af 1H -NMR-baseret metabonomi. Nat Med. 2002, 8 (12): 1439-1444. 10,1038/nm802.

3. Constantinou MA, Papakonstantinou E, Benaki D, Spraul M, Shulpis K, Koupparis MA, Mikros E: Anvendelse af nuklear magnetisk resonansspektroskopi kombineret med hovedkomponentanalyse til påvisning af medfødte metabolismefejl ved hjælp af blodpletter: En metabonomisk tilgang. Anal Chim Acta. 2004, 511 (2): 303-312. 10.1016/j.aca.2004.02.012.

4. Beckonert O, Monnerjahn J, Bonk U, Leibfritz D: Visualisering af metaboliske ændringer i brystkræftvæv ved hjælp af 1H-NMR-spektroskopi og selvorganiserende kort. NMR Biomed. 2003, 16 (1): 1-11. 10.1002/nbm.797.

5. Mortishire-Smith RJ, Skiles GL, Lawrence JW, Spence S, Nicholls AW, Johnson BA, Nicholson JK: Brug af metabonomics til at identificere nedsat fedtsyremetabolisme som mekanismen for lægemiddelinduceret toksicitet. Chem Res Toxicol. 2004, 17 (2): 165-173. 10.1021/tx034123j.

6. Waters NJ, Holmes E, Williams A, Waterfield CJ, Duncan Farrant R, Nicholson JK: NMR- og mønstergenkendelsesundersøgelser af de tidsrelaterede metaboliske virkninger af -naphthylisothiocyanat på lever, urin og plasma i rotten: En integrerende metabonomik nærme sig. Chem Res Toxicol. 2001, 14 (10): 1401-1412. 10.1021/tx010067f.

7. Coen M, Lenz EM, Nicholson JK, Wilson ID, Pognan F, Lindon JC: En integreret metabonomisk undersøgelse af acetaminophen-toksicitet i mus ved hjælp af NMR-spektroskopi. Chem Res Toxicol. 2003, 16 (3): 295-303. 10.1021/tx0256127.

8. Small-Howard A, Turner H: Eksponering for tobaks-afledte materialer inducerer overproduktion af udskilte proteinaser i mastceller. Toxicol Appl Pharmacol. 2005, 204 (2): 152-163. 10.1016/j.taap.2004.09.003.

9. Waters NJ, Waterfield CJ, Farrant RD, Holmes E, Nicholson JK: Metabonomisk dekonvolution af indlejret toksicitet: Anvendelse på thioacetamid hepato- og nefrotoksicitet. Chem Res Toxicol. 2005, 18 (4): 639-654. 10.1021/tx049869b.

10. Robertson DG: Metabonomics in toxicology: A review. Toxicol Sci. 2005, 85 (2): 809-822. 10.1093/toxic/kfi102.

11. Robertson DG, Bulera SJ: High-throughput toksikologi: Praktiske overvejelser. Curr Opin Drug Discovery Dev. 2000, 3 (1): 42-47.

12. Nicholson JK, Connelly J, Lindon JC, Holmes E: Metabonomics: En platform til undersøgelse af lægemiddeltoksicitet og genfunktion. Nat Rev Drug Discov. 2002, 1 (2): 153-161. 10.1038/nrd728.

13. Taylor J, King RD, Altmann T, Fiehn O: Anvendelse af metabolomics til plantegenotypediskrimination ved hjælp af statistik og maskinlæring. Bioinformatik. 2002, 18 (SUPPL 2): S241-S248.

14. Wilson ID, Nicholson JK, Castro-Perez J, Granger JH, Johnson KA, Smith BW, Plumb RS: Høj opløsning "ultra-performance" væskekromatografi koblet til oa-TOF massespektrometri som et værktøj til differentiel metabolisk pathway profilering i funktionelle genomiske undersøgelser. J Proteome Res. 2005, 4 (2): 591-598. 10.1021/pr049769r.

15. Jonsson P, Gullberg J, Nordstrom A, Kusano M, Kowalczyk M, Sjostrom M, Moritz T: En strategi til at identificere forskelle i store serier af metabolomiske prøver analyseret ved GC/MS. Anal Chem. 2004, 76 (6): 1738-1745. 10.1021/ac0352427.

16. Ohdoi C, Nyhan WL, Kuhara T: Kemisk diagnose af Lesch-Nyhan syndrom ved hjælp af gaskromatografi-massespektrometri detektion. J Chromatogr, B: Anal Technol Biomed Life Sci. 2003, 792 (1): 123-130. 10.1016/S1570-0232(03)00277-0.

17. Fiehn O, Kopka J, Dormann P, Altmann T, Trethewey RN, Willmitzer L: Metabolitprofilering for plantefunktionel genomik. Nat Biotechnol. 2000, 18 (11): 1157-1161. 10.1038/81137.

18. Lafaye A, Junot C, Pereira Y, Daniel G, Tabet JC, Ezan E, Labarre J: Kombinerede proteom- og metabolitprofileringsanalyser afslører overraskende indsigt i gærsvovlmetabolisme. J Biol Chem. 2005, 280 (26): 24723-24730. 10.1074/jbc.M502285200.

19. Schauer N, Steinhauser D, Strelkov S, Schomburg D, Allison G, Moritz T, Lundgren K, Roessner-Tunali U, Forbes MG, Willmitzer L, Fernie AR, Kopka J: GC-MS biblioteker til hurtig identifikation af metabolitter i komplekse biologiske prøver. FEBS Lett. 2005, 579 (6): 1332-1337. 10.1016/j.febslet.2005.01.029.

20. Willse A, Belcher AM, Preti G, Wahl JH, Thresher M, Yang P, Yamazaki K, Beauchamp GK: Identifikation af større histokompatibilitetskompleksregulerede kropslugtstoffer ved statistisk analyse af et sammenlignende gaskromatografi/massespektrometrieksperiment. Anal Chem. 2005, 77 (8): 2348-2361. 10.1021/ac048711t.

21. Wang XW, Wang XF, Wu LY: Forbedring af hukommelsen hos mus af phenylethanoidglycosider af Cistanche deserticola. Rep Chin Pharm. 2002, 19: 41-42.

22. Xie JH, Wu CF: Effekt af ethanolekstrakt af Cistanche deserticola på indholdet af monoamin-neurotransmittere i rottehjerne. Zhongcaoyao. 1993, 24: 417-419.

23. Li LL, Wang XW, Wang XF: Antilipidperoxidation og antistrålingsvirkning af glykosider iherba Cistanches.Chin J Chin Mater Med. 1997, 22 (6): 364-367.

24. Shahat AA, Nazif NM, Abousetta LM, Ibrahim NA, Cos P, Van Miert S, Pieters L, Vlietinck AJ: Fytokemisk undersøgelse og antioxidantaktivitet af Duranta repens. Phytother Res. 2005, 19 (12): 1071-1073. 10.1002/ptr.1766.

25. Gao J, Igarashi K, Nukina M: Tre nye phenylethanoidglycosider fra Caryopteris incana og deres antioxidative aktivitet. Chem Pharm Bull. 2000, 48 (7): 1075-1078.

26. Kyriakopoulou I, Magiatis P, Skaltsounis AL, Aligiannis N, Harvala C: Samioside, et nyt phenylethanoid glycosid med frie radikaler og antimikrobielle aktiviteter fra Phlomis samia. J Nat Prod. 2001, 64 (8): 1095-1097. 10.1021/np010128 plus .

27. Deng M, Zhao JY, Ju XD, Tu PF, Jiang Y, Li ZB: Beskyttende virkning af tubulosid B på TNF alfa-induceret apoptose i neuronale celler. Acta Pharmacol Sin. 2004, 25: 1276-1284.

28. Geng XC, Song LW, Pu XP, Tu PF: Neuroprotektive virkninger af phenylethanoidglycosider fra Cistanches salsa mod 1-methyl-4-phenyl-1, 2, 3, 6- tetrahydropyridin (MPTP) inducerede dopaminerg toksicitet i C57-mus. Biol Pharm Bull. 2004, 27: 797-801. 10.1248/bpb.27.797.

29. He W, Shu X, Zong G, Shi M, Xiong Y, Chen M: Nyreforstærkende og yang, der understøtter virkningen af ​​cistanche deserticola YC Ma før og efter tilberedning. Zhongguo Zhong Yao Zazhi. 1996, 21 (9): 534-537. 575

30. Shen LZ, Zhong XY, Wang SX: Virkning af Cistanche deserticola på normale og mangelfulde Shen-yang rotter. Zhongyao Yaoli Yu Linchuang. 2001, 17 (1): 17-18.

31. Chen M, Zhao L, Jia W: Metabonomisk undersøgelse af de biokemiske profiler af en hydrocortison-induceret dyremodel. J Proteome Res. 2005, 4 (6): 2391-2396. 10.1021/pr050158o.

32. Chen Q, Yi NY: Dyremodellerne og lægemidler til Yin-mangel og Yang-mangel. Eksperimentel metodologi for farmakologisk forskning i traditionel kinesisk medicin. Redigeret af: Chen Q. 1993, Beijing: People's Health Publishing House, 982-984.

33. National Committee of Pharmacopoeia: Pharmacopoeia of the People's Republic of China. 2005, Beijing: Press of Chemical Industry, 1: 90-

34. Multi- og Megavariate Data Analysis Del I: Grundlæggende principper og applikationer, Anden reviderede og udvidede udgave. [http://www.umetrics.com/default.asp/pagename/training_literature/c/5]

35. SIMCA-P og SIMCA-P plus 11 Brugervejledning. [http://www.umetrics.com/default.asp/pagename/downloads_brugervejledning/c/3]

36. Chin HL, Su YC: Undersøgelse af de farmakologiske virkninger af Cistanche deserticola Ma. Zhongguo Zhong Yao Zazhi. 1993, 19: 143-146.

Fra: Kinesisk medicin bind 3, artikelnummer: 3 (2008)