Grøn syntese og karakterisering af jernnanopartikler syntetiseret fra vandigt bladekstrakt af Vitex Leucoxylon og dets biomedicinske anvendelser

Abstrakt:Den kolde ekstraktionsmetode blev anvendt til at opnå den vandige ekstrakt afVitex leucoxylonblade i forholdet 1:10. Jernnanopartikler (FeNP'er) blev syntetiseret ved hjælp af vandigt bladekstrakt afV. leucoxylonsom reduktionsmiddel. Den fytomedicinske tilgang blev brugt til at lave FeNP'er ved at blande 1 mL planteekstrakt med 1 mM jernsulfat. Scanningelektronmikroskopi (SEM), Fourier-transform infrarød spektroskopi (FTIR), ultraviolet-synlig spektroskopi (UV-Vis) og energidispergerende røntgenspektroskopi blev brugt til at undersøge de syntetiserede FeNP'er. Den reducerende reaktion blev vist ved en ændring i opløsningens farve, og dannelsen af ​​sort farve bekræfter, at der er dannet FeNP'er. Den største absorptionstoppe (max) blev fundet ved 395 nm i UV-Vis spektralanalyse. FTIR-spektrene afV. leucoxylonvandigt bladekstrakt viste forskydninger i nogle toppe, nemlig 923,96 cm−1 og 1709,89 cm−1, med funktionelle grupper carboxylsyrer, umættede aldehyder og ketoner, som manglede i FTIR-spektrene af FeNP'er og er ansvarlige for dannelse af FeNP'er. FeNP'er med diametre mellem 45 og 100 nm blev observeret i SEM-billeder. Oprettelsen af ​​FeNP'er blev bekræftet af EDX, som viser et stærkt signal i den metalliske jernregion ved 6-8 Kev. XRD afslørede en krystallinsk natur og en gennemsnitlig diameter på 136,43 nm.Antioxidant,anti-inflammatorisk, cytotoksisk ogsårhelingin vitro-tests rapporterede signifikant aktivitet af FeNP'erne. De kumulative resultater af denne undersøgelse indikerer, at den grønne syntese af FeNP'erøger dens biologiske aktivitetog kan tjene somet muligt dermalt sårhelende middelogcellegift mod kræft. Fremtidig undersøgelse er nødvendig om identifikation af mekanismer involveret i syntesen af ​​FeNP'er vedV. leucoxylonog dets biomedicinske anvendelser.

Nøgleord:Vitex leucoxylon; jern nanopartikler; SEM; sårheling; cytotoksisk

CISTANCHE FORDELE FORANTIOXIDANT,ANTI-INFLAMMATORISK, CYTOTOKSISK OGSÅRHELING

1. Introduktion

Anvendelsen af ​​nanoteknologi i videnskab og teknologi til at fremstille nye materialer på nanoskalaniveau er et hastigt voksende område [1]. Nanoteknologi beskæftiger sig med fremstilling af materialer på atomniveau for at opnå karakteristiske egenskaber, som kan manipuleres til foretrukne anvendelser. Dette felt vokser hurtigt med dets anvendelser inden for videnskab og teknologi til fremstilling af nye materialer på nanoskalaniveau [2]. Forskellige industrisektorer har taget nanoteknologi til sig i de senere år på grund af dens anvendelser inden for elektroniske lagringssystemer [3], bioteknologi [4], magnetisk separation og prækoncentration af målanalytter, målrettet lægemiddellevering [5] og vehikler til gener og lægemidler levering [3,5,6]. Disse partikler har derfor potentialet til at gøre en væsentlig indvirkning på samfundet som følge af den brede vifte af anvendelser, de kan bruges til. Nanopartikler (NP'er) er masser af partikler, der har en størrelse på mindre end hundrede nanometer og anses for at være vigtige strukturelle masser inden for nanoteknologi. NP'ernes højere aktivitet er både deres definerende egenskab og den kvalitet, som de er mest bemærkelsesværdige for [7]. Organiske og uorganiske NP'er er de to primære klassifikationer, der kan anvendes på nanopartikler. Uorganiske nanopartikler kan omfatte magnetiske NP'er, ædelmetal-NP'er (såsom guld og sølv) og halvleder-NP'er (såsom titaniumdioxid og zinkoxid). Organiske nanopartikler kan omfatte kulstof-NP'er. Uorganiske nanopartikler tiltrækker enorm opmærksomhed, fordi de tilbyder overlegne materialeegenskaber sammen med funktionel alsidighed. De er blevet undersøgt som mulige værktøjer til medicinsk billeddannelse såvel som til behandling af sygdomme på grund af de størrelsesegenskaber, de besidder [8]. De forskellige kemiske, fysiske og biologiske egenskaber af NP'er er stærkt påvirket af en række parametre, herunder nanopartikelstørrelse og morfologi, samt overfladebelægning, som normalt bestemmes under syntesen af ​​nanopartikler. Tabet af tilsigtet biologisk aktivitet er forårsaget af et fald i kolloid stabilitet. pH, ionstyrke og en række proteiner, der interagerer med AgNP'er under relevante omstændigheder, har alle en indflydelse på kolloid stabilitet. Som et resultat er korrekt valg af synteseteknik afgørende for at opnå de ønskede partikelegenskaber til specifikke anvendelser [9].

I øjeblikket er der en bred vifte af NP'er, der kan syntetiseres ved hjælp af en række fysiske, kemiske, biologiske og hybride processer. Ifølge resultaterne af en lang række forskningsundersøgelser omfatter de fysiske og kemiske processer til fremstilling af nanopartikler brugen af ​​organiske opløsningsmidler, farlige forbindelser, betydelige mængder energi og stabiliseringsmidler, der ikke er biologisk nedbrydelige [10]. Derfor, inden for grøn nanoteknologi, bliver syntesen af ​​NP'er ved hjælp af naturligt tilgængelige materialer såsom planteekstrakter, forskellige mikroorganismer, deres metabolitter og nogle få naturlige humusstoffer [11,12] som reduktions- og dækningsmidler stadig mere populær. Syntesemetoder, der er venlige over for miljøet, er blevet brugt til at producere en lang række metalliske nanopartikler, herunder sølv, guld, jern, kobber og zink. Udviklingen af ​​nemme og miljømæssigt acceptable metoder til syntese af NP'er er et af nanoteknologiens nøglefokus. Biomaterialer såsom mikroorganismer og planteekstrakter kan bruges i processen med at fremstille en lang række NP'er [13,14]. Men fordi nogle organismer er patogener, er det farligt at håndtere dem. For at trives skal mikroorganismer holdes i kultur og udsættes for nøje kontrollerede forhold, herunder temperatur, pH og andre parametre. Fordi det eliminerer den besværlige proces med at opretholde den mikrobielle kultur, kan syntesen af ​​NP'er ved hjælp af plantedele nogle gange vise sig at være mere fordelagtig end andre biologiske processer [15]. Som et resultat har det fået meget opmærksomhed på grund af dets iboende egenskaber, som inkluderer udnyttelse af naturressourcer, hurtighed, miljøvenlighed og godartethed. Disse dragende egenskaber er absolut nødvendige til brug i medicinske applikationer. Nanopartiklerne produceret ved grøn syntese har en størrelse, der er veldefineret og under kontrol, de er fri for forurenende stoffer, og metoden er enkel at skalere op. Dette er nogle af de yderligere fordele ved grøn syntese [16]. Den biologiske aktivitet af de syntetiserede nanopartikler er i høj grad bestemt og finjusteret af de grønne materialer, der anvendes til stabilitet og reduktion af metalioner. En af de ideelle egenskaber ved NP'erne bør være, at den skal have en enestående kapacitet til at skelne mellem potentielle mål (patogener) og pattedyrsceller (værts) [17].

På grund af dette blev det vandige ekstrakt af V. leucoxylon-blade undersøgt for dets potentiale til at lette dannelsen af ​​jernnanopartikler (FeNP'er) i den nuværende forskning. Jern er et af de grundstoffer, der kan findes i den største overflod på Jorden. For nylig er det blevet anerkendt som en ny klasse af vigtige NP'er på grund af det faktum, at det besidder en række unikke egenskaber, herunder høj tvangsevne og superparamagnetisme. Cataly sis, elektroniske enheder, informationslagring, sensorer, lægemiddelleveringsteknologi, biomedicin, magnetiske registreringsenheder og miljøoprydning er blot nogle af de mange spændende applikationer, der har gjort brug af FeNP'er [18]. Desuden kan FeNP'er ifølge en række undersøgelser dannes ud fra forskellige planteekstrakter. Disse planteekstrakter omfatter Eucalyptus globulus-blade [19], granatæbleblade [20] og aske af bananskræl [21]. Planten V. leucoxylon, som blev brugt i den aktuelle undersøgelse, er medlem af familien Verbenaceae. Det er også kendt som det fembladede kyske træ (Kannada: Sengeni, Holenekki, Hollalakki) og kan findes i regionen langs flodbredder i stedsegrønne og semi-stedsegrønne skove og fugtige løvskove langs vandløb. Det kan nå en højde på op til 20 m og er klassificeret som et beskedent til stort løvtræ. Langs længden af ​​Indiens vestlige Ghats-skove kan den findes i stort antal. V. leucoxylon bladekstraktinfusion er blevet rapporteret at have en bred vifte af farmakologiske aktiviteter såsom antiinflammatoriske, antioxidant, antipsykotiske, antidepressive, antiparkinsoniske og antihyperlipidæmiske aktiviteter [22]. Naturprodukter er gennem historien og især i folkemedicinen blevet brugt til behandling af en lang række lidelser og sygdomme. Denne praksis går tilbage til oldtiden. Metoderne til naturlig produktkemi, der har eksisteret i lang tid, har gjort det muligt at finde et stort udvalg af bioaktive sekundære metabolitter, der kommer fra terrestriske og marine kilder. Et betydeligt antal af disse naturligt forekommende stoffer overvejes nu til brug som potentielle lægemidler [23].

Der er et stort antal naturligt forekommende kemikalier og næringsstoffer, som endnu ikke er blevet afsløret, og som er nyttige for menneskeheden. Som en konsekvens af dette er der en øjeblikkelig efterspørgsel efter forskning og udvikling af innovative terapeutiske muligheder, der kan udnyttes med succes i terapeutiske interventioner, samtidig med at der skabes et minimum af bivirkninger.

Den i øjeblikket foreslåede grønne synteseproces for FeNP'er er særskilt og omkostningseffektiv. I den aktuelle undersøgelse blev der gjort et forsøg på at skabe nanopartikler ved stuetemperatur uden brug af kemikalier eller fysiske teknikker. Vitex leucoxylon-planten blev valgt i et forsøg på at syntetisere jernnanopartikler, og omfattende systematiske in vitro-modeller blev udført for at vurdere styrken af ​​jernnanopartikler. Kun et begrænset antal forskningsundersøgelser om begrebet nanopartikler og deres biomedicinske anvendelser er blevet offentliggjort på denne plante. Som en konsekvens besluttede vi, at det ville være fordelagtigt at udføre denne forskning med følgende mål for øje: screening for fytokemikalier og måling af antallet af sekundære metabolitter i V. leucoxylon; grøn syntese og karakterisering af FeNP'er fra V. leucoxylon; sammenlignende undersøgelse af antioxidant- og antiinflammatoriske virkninger af V. leucoxylon og dets FeNP'er in vitro; in vitro cytotoksisk aktivitet af vandigt bladekstrakt af V. leucoxylon og dets FeNP'er mod hudcancer, lungecancer og oral cancer; in vitro sårhelende aktivitet af vandigt bladekstrakt af V. leucoxylon og dets syntetiske FeNP'er ved scratch-assay.

2. Materialer og metoder

2.1. Indsamling af plantemateriale

I marts måned 2022 blev friske blade af V. leucoxylon plukket fra Anshi-skovområdet i de vestlige Ghats i Uttar Kannada-distriktet i staten Karnataka i Indien. Bladene blev identificeret og autentificeret af Dr. Kotresha K., Taxonomist, Department of Botany, Karnataka Science College, Dharwad; Karnataka, ved at henvise til voucher-eksemplaret deponeret i Department of Botany, Karnataka Science College, Dharwad, Karnataka. Efter at være blevet opsamlet blev det friske plantebladsmateriale vasket under rindende postevand, soltørret og derefter malet til et groft pulver ved hjælp af en mekanisk kværn. Pulveret blev opbevaret i beholdere, der blev forseglet ved stuetemperatur, så det kunne bruges senere i processen med rå opløsningsmiddelekstraktion.

2.2. Fremstilling af planteekstrakt

Ved anvendelse af en Soxhlet-anordning blev 25 g pulveriserede blade ekstraheret i 48 timer med 250 ml destilleret vand. Den vandige ekstrakt blev koncentreret yderligere ved hjælp af en rotationsfordamper og blev derefter tørret i ekssikkatorer, før den blev opbevaret i en lukket flaske ved 4 ◦C indtil brug. Til syntesen af ​​FeNP'er blev den vandige ekstrakt brugt som et reducerende og stabiliserende middel.

2.3. Opløsningsmidler og reagenser

Alle de anvendte kemikalier og opløsningsmidler var af analytisk kvalitet og blev købt fra Hi-media (Hubli, Indien).

2.4. Fytokemisk Analyse

Ved at følge proceduren beskrevet af Deepti et al. (2012) blev det rå vandige bladekstrakt V. leucoxylon kvalitativt testet for tilstedeværelsen af ​​forskellige fytokemiske bestanddele såsom flavonoider, alkaloider, phenoler, glycosider, steroler, ligniner, saponiner, anthraquinoner, tanniner og reducerende sukkerarter [24].

2.5. Syntese af jernnanopartikler

Først blev 1 ml V. leucoxylon vandig bladekstrakt tilsat til 1 0 ml 0,05 mM vandig FeS04-opløsning, og blandingen blev rystet. Ved stuetemperatur og i mørke omgivelser blev den fuldstændige reaktionsblandingsproces udført. Oxidations/reduktionsreaktionen var tydeligt synlig, efter at den farveløse reaktionsblanding var blevet inkuberet og reageret i den nødvendige tid [25]. For at fjerne eventuelle spor af vandigt ekstrakt fra de frisksyntetiserede FeNP'er, som fik lov til at tørre i pulver efter centrifugering ved 10,000 rpm i ti og 10 minutter i den ønskede reaktionsperiode, blev den vandige blanding indeholdende FeNP'er centrifugeret en anden gang og redispergeret i dobbeltdestilleret vand og tørret [26].

2.6. Karakterisering af FeNP'er

Adskillige metoder, såsom ultraviolet-synlig spektroskopi (UV-Vis), Fourier-transform infrarød spektroskopi (FTIR), scanning elektronmikroskopi og energidispersiv røntgenspektroskopi, røntgendiffraktion (XRD), partikelstørrelsesanalysator og zeta potentiale, blev brugt til at karakterisere FeNP'erne.

2.6.1. UV-synlig-spektroskopi-baseret analyse

Først blev 1 mL aliquot af kolloid FeNPs-opløsning i kvartskuvetter evalueret ved hjælp af UV-synlig spektroskopi (U-3310, Hitachi, Tokyo, Japan), med destilleret vand som reference og 0.05 mM FeSO4 som en blindprøve for at validere reduktionen af ​​ferri-ionerne i den kolloide opløsning [27].

2.6.2. FTIR-baseret analyse

Funktionsgrupperne (grupper), der var bundet på jernoverfladen og var involveret i syntesen af ​​FeNP'er, blev identificeret ved hjælp af FTIR-spektroskopi (S700, Nicolet, MA, USA), [28]. Efter 72 timers inkubation blev FeNP'erne isoleret ved gentagen centrifugering (3-4 gange) af reaktionsblandingerne ved 10, 000 rpm i 15 min. Supernatanten blev erstattet med deioniseret vand, og pelleten blev opbevaret som pulver. Efter at være blevet tørret, blev FeNP'erne sat gennem en FTIR-analyse ved anvendelse af kaliumbromid-pelleteringsprocessen i et forhold på 1:100.

2.6.3. Scanning-elektron-mikroskopi-baseret analyse

Scanningelektronmikroskopi (JSM-IT 500, Jeol, Boston, MA, USA) blev brugt til at undersøge nanopartiklerne og etablere deres overfladeform. Substrater blev fremstillet på et rent 5 mm x 5 mm Si-substrat spaltet fra en wafer med en diameter på 100 mm. Substratet fik lov til at reagere i 2 timer til 6 timer, og prøven blev fremstillet ved at centrifugere en kolloid opløsning ved 10,000 rpm i 5 minutter. Pelleten blev tørret efter at være blevet gencentrifugeret mange gange, hvorefter den blev redispergeret i deioniseret vand, og proceduren blev gentaget. Til sidst blev den tørre pellet opnået, som yderligere blev underkastet den strukturelle karakterisering ved SEM-analyse i henhold til proceduren beskrevet af National Institute of Standards and Technology, NIST-2007 [29].

2.6.4. Energidispersiv røntgen

Efter tørring på et kulstofbelagt kobbergitter blev de reducerede FeNP'er analyseret ved hjælp af EDX (JSM-IT 500, Jeol, Boston, MA, USA), hvilket også gjorde det muligt at bestemme grundstofsammensætningen.

2.6.5. Zeta-potentiale

Observationer af NP'er Zeta-potentialet er et nyttigt værktøj til at få yderligere indsigt i stabiliteten af ​​de kolloide NP'er. Amplituden af ​​zeta-potentialet giver et hint om kolloidets mulige stabilitet. Ifølge Meléndrez et al. (2010) anses partikler for at være stabile, hvis deres zeta-potentialeværdier enten er mere positive end plus 30 mV eller mere negative end 30 mV [30]. Dette faktum bør tages i betragtning. Laser-zeta-måleren blev brugt til at opnå aflæsninger af overflade-zeta-potentialerne (Malvern zeta seizer 2000, Malvern, UK). De flydende prøver af nanopartiklerne, på i alt 5 milliliter, blev fortyndet med 50 milliliter dobbeltdestilleret vand, og 2 mm pr. kvadratmeter natriumchlorid blev brugt som den suspenderende elektrolytopløsning. Derefter blev pH-værdien modificeret, indtil den nåede det ønskede niveau. Prøverne blev omrørt i i alt 30 min. Efter omrystning af beholderen blev pH ved ligevægt noteret, og zeta-potentialet af de metalliske partikler blev bestemt. Med det formål at bestemme overfladepotentialet af FeNP'erne blev zeta-potentiale udnyttet. I hvert tilfælde var den angivne værdi gennemsnittet af resultaterne af tre individuelle målinger. Når værdierne af zeta-potentialet varierede fra højere end plus 30 mV til lavere end 30 mV, blev kriterierne for stabiliteten af ​​NP'er bestemt [31].

2.6.6. Partikelstørrelsesanalysator

For at bestemme prøvens partikelstørrelse blev PSA-test udført på den, efter at den var blevet lyofiliseret og derefter spredt ved hjælp af en ultralydsapparat (SZ-100, Horiba, Kyoto, Japan).

2.6.7. Røntgendiffraktionsanalyse (XRD) Analyse

De syntetiserede jernnanopartikler fra vandigt bladekstrakt af V. leucoxylon blev underkastet XRD-analyse (Smart Lab SE, Rigaku, Tokyo, Japan) for at bestemme arten såvel som den gennemsnitlige størrelse af nanopartiklerne.

2.7. Bestemmelse af antioxidantaktivitet ved hjælp af in vitro-metoder

2.7.1. Ferric-Ion-Reducing Antioxidant Power Assay (FRAP)

Ifølge Oyaizu (1986), med en mindre modifikation, blev ferri-ioners reducerende kraft vurderet [32]. I 30 minutter ved 50 ◦C blev 2,5 ml 20 mM fosfatbuffer og 2,5 ml 1 procent kaliumferricyanid tilsat til 2,5 ml V. leucoxylon bladekstrakt og dets syntetiserede FeNP'er blandet med kombinationen. Efter inkubationsperioden blev blandingen suppleret med 2,5 ml 10% vægt/volumen trichloreddikesyre og 0,5 ml 0,1% vægt/vægt ferrichlorid, før den blev inkuberet i yderligere 10 minutter. Endelig blev et UV-V spektrofotometer brugt til at detektere absorbansen ved 700 nm. Som standard blev ascorbinsyre anvendt. Hver prøve blev testet tre gange.

2.7.2. Hydrogenperoxid-opfangningsanalyse

Baseret på V. leucoxylons vandige bladekstrakts og dets syntetiske FeNP'ers evne til at opfange hydrogenperoxid, blev antioxidantaktiviteten af ​​disse forbindelser evalueret. Først blev {{0}},6 mL fosfatbuffer (pH-7,4) indeholdende 4 mM H2O2 tilsat til 0,5 mL standard ascorbinsyre i en kendt koncentration, samt rør indeholdende planteekstrakter i forskellige koncentrationer spænder fra 100 µL til 500 µL (pH-7,4). Ved hjælp af en phosphatbuffer og hydrogenperoxid-fri blindopløsning vurderede vi opløsningens absorbans ved 230 nm efter 10 min. Fosfatbuffer blev brugt til at skabe kontrollen i stedet for prøven eller standarden [33]. Hver prøve blev testet tre gange. Formeltilgangen blev brugt til at beregne inhiberingsprocenten.

2.7.3. DPPH fri-radikal-opfangning

Assay V. leucoxylon bladekstrakt og syntetiserede FeNP'er blev testet for deres evne til at opfange frie radikaler ved hjælp af DPPH-radikal som reagens [34]. Prøver blev kombineret med DPPH-radikalopløsning (60 M) i ethanol (100 µL) i forskellige koncentrationer (vægt/volumen). Et UV-Vis-spektrofotometer blev anvendt til at måle absorbansen af ​​blandingen ved 517 nm efter 30 minutters inkubation i mørke ved stuetemperatur. Ascorbinsyre blev anvendt som standard for eksperimentet. Følgende ligning blev brugt til at bestemme hver prøves DPPH-opfangende aktivitet:

hvor Ac repræsenterer absorbansen af ​​kontrolreaktionen, som udføres ved at blande 100 L ethanol med 100 L af DPPH-opløsningen, og At repræsenterer absorbansen af ​​testprøven. Eksperimenter blev udført i tripletter. IC50-værdien blev beregnet for hver prøve. Et højere niveau af fri radikalaktivitet blev angivet ved, at reaktionsblandingen havde en lavere absorbans.

2.7.4. Phosphomolybdæn (PM) assay

Total antioxidantaktivitet blev bestemt under anvendelse af Prieto et al., 1999, standardteknik. Hvert reagensglas indeholdende 3 mL destilleret vand og 1 mL molybdatreagensopløsning modtog et vandigt bladekstrakt af V. leucoxylon og dets FeNP'er i varierede koncentrationer fra 100 µL til 500 µL. Disse rør blev inkuberet i 90 minutter ved 95 ◦C. Absorbansen af ​​reaktionsblandingen blev målt ved 695 nm efter at disse rør blev justeret til stuetemperatur i 20-30 minutter efter inkubation. Referencestandarden var ascorbinsyre [35].

2.8. Evaluering af in vitro antiinflammatorisk aktivitet

Den antiinflammatoriske virkning af V. leucoxylon-bladekstrakt og dets genererede FeNP'er blev vurderet ved hjælp af proteindenatureringsmetoden skitseret af Elias et al., 1988, med små modifikationer [36]. Som standardlægemiddel blev diclofenacnatrium anvendt. En reaktionsblanding omfattende 2 ml kendt koncentration af fremstillede FeNP'er (100 g/ml) med standard diclofenacnatrium (100 g/ml) og 2,8 ml fosfatbufret saltvand (pH 6,4) blev blandet med 2 ml frisk hønseæg albumin (1 mM) og inkuberet ved 27 ± 1 ◦C i 15 min. Denaturering blev induceret ved at sætte reaktionsblandingen i et vandbad ved 70 ◦C i 10 min. Efter afkøling blev absorbansen ved 660 nm målt under anvendelse af dobbeltdestilleret vand som en blindprøve. Hver test blev udført tre gange. Følgende formel blev brugt til at beregne den procentvise inhibering af proteindenaturering:

hvor, Ved=absorbans af testprøve; Ac=absorbans af kontrol.

2.9. Bestemmelse af cytotoksisk og anticanceraktivitet af jernnanopartikler ved hjælp af MTT-assay

Virkningen af ​​V. leucoxylon og dets syntetiserede FeNP'er på levedygtigheden af ​​ikke-cancerøse fibroblastceller L292 og dets anticanceraktivitet på hudkræft (A375), lungecancer (A549) og oral cancer (KB-3-1) blev evalueret under anvendelse af standard MTT assay ifølge Carmichael et al., (1987) [37]. Alle cellelinjerne blev opnået fra National Center for Cell Science (NCCS), Pune, Indien. Procentvis inhibering af cellevækst (IC50)-værdier blev udledt under anvendelse af dosis-respons-kurver for hver cellelinje, og den følgende formel blev brugt til at beregne den procentvise vækstinhibering. Omdannelsen af ​​MTT til et lilla formazan-produkt af raske cellers mitokondrielle dehydrogenase er grundlaget for dette eksperiment [38].

2.10. In vitro sårhelingsundersøgelse ved brug af Scratch Assay Test

Sprednings- og migreringsevnen af ​​L292-cellelinjeceller forårsaget af prøver med kendte koncentrationer af planteekstrakt og jernnanopartikler blev undersøgt i den aktuelle undersøgelse [39]. Dyrecellekulturplader med DMEM-medier suppleret med 10 procent FBS og 2 procent Pen-Strep-antibiotikum (Darmstadt, Tyskland) blev brugt til at starte cellekulturprocessen. En steril plastpipettespids blev brugt til at ridse monolagssammenløbet af celler, efter at de var vokset til ca. 50,000 celler pr. ml. PBS-opløsning blev brugt til at fjerne eventuelle uønskede cellerester. Som en negativ kontrol blev ubehandlede celler anvendt, hvorimod standard ascorbinsyre blev brugt som en positiv kontrol for polymerprøver med kendt koncentration. I de næste 24 timer blev cellerne holdt ved 37 ◦C med 5 procent CO2. Til undersøgelse af relativ cellemigration og sårlukning blev de ridsede cellelag inkuberet og afbildet med intervaller fra 0 timer til 6 timer til 12 timer og 24 timer. MagVision Softwares måling (X64, 2016, Magnus, New Delhi, Indien) kalibrering ved 4× opløsning blev brugt til at kvantificere mellemrummet. For at bestemme sårlukningen og migrationshastigheden blev nedenstående formel brugt:

med hensyn til følgende: A0h=sårareal målt umiddelbart efter ridsning; ATh=sårareal målt efter h timer; Rm=migrationshastighed (µm/h); Wf=initial sårbredde (µm); og T=migreringstid (time).

2.11. Statistisk analyse

Dataene præsenteres som den gennemsnitlige standardafvigelse og standardfejl, og hvert eksperiment blev udført tre gange. SPSS-softwareversion 20 blev brugt til at udføre en envejs-variansanalyse (ANOVA) på forskellene i gennemsnitsscore, der eksisterede mellem grupperne.

Spørg for mere:

E-mail:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Tlf: plus 86 15292862950

BUTIK:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop