Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Abstrakt:Druestokke er affaldsbiomasse fra vindyrkning, der indeholder bioaktive polyfenoler værdifulde inkosmetik. Mens adskillige undersøgelser rapporterede de kosmetiske aktiviteter af E-resveratrol, beskrev kun nogle få potentialet af E-ε-vinifera, den anden hovedbestanddel af druerørekstrakter (GCE), og ingen af ​​dem undersøgte GCE som en naturlig blanding af polyphenoler til kosmetiske anvendelser . I denne undersøgelse betragtede vi potentialet af GCE fra polyphenolrige druesorter som multifunktionelle kosmetiske ingredienser. HPLC-analyse blev udført for at kvantificere større polyphenoler i GCE, dvs. catechin, epicatechin, E-resveratrol, E-piceatannol, ampelopsin A, E-ε-vinifera, hopeaphenol, isohopeaphenol, E-miyabenol C og E-vitamin B fra udvalgte kultivarer . Hudblegningpotentiale igennemtyrosinaseinhiberingsassay og aktiveringskapaciteten af ​​cellelevetidsprotein (SIRT1) af GCE blev sammenlignet med ren E-resveratrol og E-ε-vinifera. Lægemiddellignendehed af GCE polyphenoler blev beregnet, hvilket muliggjorde forudsigelse af hudpermeabilitet og biotilgængelighed. Endelig muliggjorde de nuværende data overvejelse af GCE fra polyphenolrige varianter som multifunktionelle kosmetiske ingredienser i overensstemmelse med grønkemipraksis.

Nøgleord:ekstrakter af druerør; naturlige ingredienser; polyphenoler; E-resveratrol; E-e-vinifera; sirtuinaktivering;tyrosinasehæmning; stoflignende

cistanche er en tyrosinasehæmmer

1. Introduktion

Bevidst design af nye hudplejeformuleringer baseret på naturlige ingredienser er blevet et nøgleemne i kosmetikindustrien i overensstemmelse med miljøansvar. Botaniske ekstrakter udvælges i henhold til deres sammensætning, biologiske aktivitet, stabilitet og hudpermeabilitet. Disse faktorer bestemmer ingrediensens samlede effektivitet og dens kosmetiske potentiale. I dag er der en stigende efterspørgsel efter nye naturressourcer med effektive hudplejekomponenter, der beskytter mod stresskilder, herunder miljøforurening, skadelig stråling samt forkert kost og stressende livsstil [1]. Derudover leder kunderne efter miljøvenlig naturkosmetik, og planterester-genanvendte biomolekyler tilbyder nye perspektiver i retning af bæredygtig indkøb.

Vinavl (og vinsektoren) er en af ​​de ældste og mest udviklede industrier i verden, hvor cirka 80 procent af grapefrugterne bruges til vinfremstilling [2]. Det er velkendt, at grapebær er en rig kilde til værdifulde forbindelser med sundhedsmæssige fordele såsom anthocyaniner, phenolsyrer, flavan-3-oler, flavonoler, proanthocyanidiner, stilbenoider, melanin, fedtsyrer, mineraler samt vitaminer [2]. Vinfremstilling genererer forskellige biomolekyle-rige biprodukter, herunder affaldsrester (skind og frø), bærme, samt andet fast affald som druestokke [3]. Blandt dem repræsenterer druetræbiomasse, som kasseres efter vinterbeskæring, et stort potentiale for udvikling af nye naturlige kosmetiske ingredienser på grund af en stor overflod og tilstedeværelsen af ​​polyfenoler, herunder stilbenoider [2,4]. Tidligere undersøgelser rapporterede, at valg af druesort er afgørende for udvikling af polyphenolrigt GCE [4-6].

E-resveratrol, en velkendt drueforsvarsforbindelse, udviser adskillige biologiske aktiviteter, herunder antioxidant [7], anticancer [8,9], antifungale [10] og antiinflammatoriske egenskaber [11]. Det udviser også betydelig aktivitet mod huden aldringsprocessen igennemtyrosinasehæmning [12,13], som er en nøglemekanisme til at hæmme misfarvning af huden. Processen med hudpigmentering er relateret til tilstedeværelsen af ​​melanin og lipofuscin, hvoraf overskydende og unormal fordeling i huden forårsagede mørke pletter. Ujævn hudfarve er et af de vigtigste symptomer på denne ældningsproces. Melanin dannes under indflydelse aftyrosinaseunder melanogenese, regulerer biosyntesen af ​​vitamin D3 og øger hudens modstand mod solskoldning og tumorer [13,14]. Når lokal hyperpigmentering opstår, kan det udover æstetiske problemer også øge risikoen for melanom. Derfor kan tyrosinasehæmmere som E-resveratrol være attraktive i kosmetik- og medicinalindustrien som depigmenteringsmidler [15].

Derudover kan opbremsningen af ​​hudens ældningsprocesser også forekomme gennem aktivering af naturlige cellereparationsmekanismer. Det kan opnås ved at anvende sirtuin-aktiverende forbindelser [1]. En stimulering af SIRT1-aktivitet, som opretholder cellelevetid, transkriptionsfaktorer og andre DNA-reparerende proteiner [16], er blevet rapporteret at være afgørende i kontrollen af ​​oxidativt stress og i regulering af aldringsprocessen [17]. Sirtuiner reguleres normalt på transkriptionsniveau, translation, proteinstabilitet og oxidation af naturlige inhibitorer såsom nikotinamid. Pattedyrsirtuiner som SIRT1 fungerer som transkriptionsregulatorer for de udvalgte receptorer og DNA-reparationsproteiner. De kontrollerer også energimetabolisme, celleoverlevelse, DNA-reparation, vævsregenerering, inflammationsmekanismer samt neuronal signalering [1].

Tilstedeværelsen af ​​E-resveratrol og dets derivater i druestokke giver en fantastisk mulighed for brugen af ​​denne naturlige kosmetiske ingrediens i kosmetikindustrien som effektive anti-aldringsmidler viasirtuin-aktiverende ogtyrosinase-hæmmende aktiviteter [1,16].

Kravene til moderne kosmetiske ingredienser omfatter deres multifunktionalitet, sikkerhed og effektivitet. Den bekræftede biologiske effekt af et aktivt molekyle er normalt ikke tilstrækkelig til at opnå den innovative kosmetiske formulering. Adskillige fysisk-kemiske egenskaber ved en biologisk aktiv forbindelse er afgørende for at sikre en samlet anvendelighed efter topisk applikation [18]. Biotilgængelighed og hudpermeabilitet er begrænsende faktorer for kosmetisk brug af mange potentielle aktive stoffer [19]. Anvendelsen af ​​naturlige forbindelser som kosmetiske ingredienser får en ny betydning i tilfælde af naturlige ekstrakter, som indeholder en blanding af molekyler med forskellige fysisk-kemiske egenskaber. til dette faktum er der stadig et spørgsmål om sammenligningen af ​​hudabsorptionen af ​​rene forbindelser som E-resveratrol eller E-ε-vinifera med blandinger rige på stilbenoider (f.eks. GCE). Den fysisk-kemiske karakter af et rent stof er det afgørende parameter, der kan begrænse dens permeabilitet. Fra et andet synspunkt ville anvendelsen af ​​sådanne blandinger sikre en bred vifte af biologiske aktiviteter fra overfladen af ​​stratum corneum, gennem epidermis til dybe lag af dermis.

I denne undersøgelse evaluerede vi det kosmetiske potentiale af GCE fra tidligere udvalgte polyphenolrige kultivarer [20] som multifunktionelle foryngende midler gennem to forskellige mekanismer; (1) hudblegningviatyrosinaseinhibering ved hjælp af enzymatiske assays og docking-data, (2) forsinkelse af cellulær senescens ved hjælp af sirtuin-aktiveringsassays. Aktiviteterne af rene bestanddele af GCE som E-resveratrol og E-ε-vinifera blev sammenlignet med GCE, en naturlig biosource blanding af stilbenoider. Til sidst vurderede vi tilgængeligheden af ​​de vigtigste bestanddele af GCE og deres evne til at trænge igennem hudbarrieren.

2. Resultater og diskussion

2.1. Koncentration af polyfenoler i GCE

Koncentrationen af ​​større polyphenoler til stede i GCE fra fem tidligere udvalgte kultivarer blev kvantificeret ved HPLC-analyser (tabel 1) [20]. Ti hovedforbindelser blev identificeret: to flavonoider (catechin, epicatechin) samt otte stilbenoider (ampelopsin A, E-resveratrol, E-piceatannol, hopeaphenol, isohopeaphenol, E-ε-vinifera, E-miyabenol C og E-vitamin B ). De kemiske strukturer af forbindelserne er vist i figur 1.

Otte polyphenoler blev identificeret ved deres sammenligning med rene standarder, dvs. E-resveratrol, E-piceatannol, catechin, epicatechin, E-ε-vinifera, hopeaphenol, ampelopsin A og E-vitisin B. To forbindelser (isohopeaphenol og E-miyabenol C) blev tildelt i henhold til elueringsrækkefølge, UV-spektre og MS-data fra litteraturen [21]. HPLC-analyser viste meget høje koncentrationer af totale polyphenoler i GCE fra de fem udvalgte kultivarer, der spænder fra 16,8 procent ± 7,4 procent for Sauvignon til 39,4 procent ± 3 procent for Villard Noir. Savagnin blanc GCE indeholdt den højeste koncentration i E-resveratrol (12,0 procent ± 4,4 procent ), mens Villard Noir GCE var karakteriseret ved det højeste indhold i E-ε-vinifera (3,6 procent ± 0 0,2 procent) og E-vitisin B (17,2 procent ± 1 procent). Disse sortsspecifikke polyphenolsammensætninger kan drive forskellige niveauer af kosmetiske aktiviteter.

2.2. Sirtuin aktivering

Som et første skridt evaluerede vi anti-aldringsvirkningen af ​​GCE fra de fem kultivarer (Villard Noir, Sauvignon, Savagnin, Riesling og Magdeleine Noire des Charentes). Figur 2A viser resultaterne af aktivering af sirtuin med to rene stilbenoider (E-resveratrol og E-ε-viniferin) i et koncentrationsområde på 1-100 µM sammenlignet med nikotinamid som den negative kontrol.

Som vist i figur 2A, sammenlignet med kontrolprøven, var den effektive koncentration af begge sirtuinaktivatorer (E-resveratrol og E-ε-viniferin) mindst 5 µM og nåede en 3- gange stigning ved 100 µM.E- resveratrol var hurtig til en let højere SIRT1-aktivering (fra 130 procent ± 13 procent for 5 µM til 307 procent ± 30 procent for 100 µM) sammenlignet med E-ε-viniferin (henholdsvis 95 procent ± 15 procent og 280 procent ± 24 procent).

Det er allerede kendt, at E-resveratrol udviser en gavnlig aktivitet for den menneskelige organisme gennem aktiveringen af ​​SIRT1. Horwitz et al., 2003 [16] rapporterede, at E-resveratrol sænker MichaelisMenten-konstanten for SIRT1 og øger celleoverlevelse ved at stimulere SIRT1-afhængig deacetylering af p53. I gær efterligner E-resveratrol kaloriebegrænsning ved stimulering af SIR2, hvilket øger DNA-stabiliteten og forlænger levetiden med 70 procent. Stacchiotti et al. (2016) [22] bekræftede, at E-resveratrols første funktion er at reducere inflammation og begrænse oxidativ skade i væv. E-resveratrols antialdringsegenskaber via SIRT1-aktivering er også forbundet med forbedring af oxidativ metabolisme i vigtige organer som hjerte, kar, muskler og nyrer [22]. I andre undersøgelser, i nærvær af en SIRT1-hæmmer som nikotinamid, stimulerede E-resveratrol SIRT1 [16]. Desuden blev der observeret koncentrationsafhængige virkninger for dets aktivitet. Hvad mere er, ved stimulering af SIRT1-afhængig deacetylering af p53 øger E-resveratrol-molekylet celleoverlevelse under ugunstige forhold [16]. Det er også blevet påvist, at E-resveratrol har evnen til at beskytte menneskelige celler mod lipidskader, hvilket kan være væsentligt for at forhindre nedbrydning af lipofile hudbarrierestrukturer. Selvom den komplette mekanisme for E-resveratrol-aktivitet stadig mangler at blive forklaret fuldt ud af yderligere undersøgelser, er sirtuin-aktiveringen hovedaktiviteten af ​​E-resveratrol til at fastslå dets forskellige sundhedsmæssige fordele [23]. På trods af en velbeskrevet sirtuin-aktivering af E-resveratrol [1,16], meget lidt er stadig kendt om virkningen af ​​E-ε-viniferin. Den beskyttende rolle af E-e-viniferin blev beskrevet af Fu et al. (2012) [24] i Huntingtons sygdomscellemodeller. Det blev påvist, at E-ε-viniferin sænker niveauet af Reactive OxygenSpecies (ROS) og forhindrer tab af mitokondrielt membranpotentiale i celler, der udtrykker mutantHuntington-proteinet. Ekspressionen af ​​dette protein resulterer i den reducerede deacetylaseaktivitet af SIRT3 og fører som et resultat til en reduktion i cellulære NAD(plus) niveauer og mitokondriel biogenese i celler.Ifølge undersøgelserne aktiverer E-ε-viniferin AMP-aktiveret kinase og forbedrer mitochondrialbiogenese [24]. I vores forskning viste vi, at E-ε-viniferin var en sirtuin-aktivator, der svarer til E-resveratrol. Vi testede yderligere potentialet af GCE polyphenol-rig naturligt ekstrakt til at aktivere SIRT1. Det meste af GCE (Riesling, Magdeleine Noire, Villard Noir og Savagnin) viste en relativt høj SIRT1-aktivering sammenlignet med kontrolprøven. Riesling var den mest lovende kultivar med 171 procent SIRT1-aktivering efterfulgt af Magdeleine Noire (165 procent), Villard Noir (162 procent) og Savagnin (142 procent). Kun GCE fra Sauvignon viste ingen induktionseffekt for SIRT1. SIRT1-aktivering af GCE fra Magdeleine Noire, Villard Noir og Savagnin var mindst ækvivalent med aktivering med 5 µME-resveratrol. De første sirtuin-aktivatorer blev opdaget for SIRT1 i 2003, og den mest potente var E-resveratrol [1]. Flere undersøgelser beskrev også SIRT1-aktivering af botaniske ekstrakter. Corbi et al., (2018) rapporterede lovende resultater for citronbibørste (Lippia citriodora), radise (Raphanus sativus) og tomat (Solanum Lycopersicum) ekstrakter [25]. Wang et al. rapporterede også sirtuin-induktionsaktiviteten af ​​traditionelle kinesiske lægemidler. Milkvetch (Astragalus membranaceus), kinesisk ginseng (Panax ginseng) og tre-syv rod (Panax notoginseng) er blevet rapporteret at udøve beskyttende virkning mod oxidativ stress i mitokondrier. Resultaterne viste, at disse ekstrakter øgede den deacetylerede aktivitet af SIRT1 og hæmmede dannelsen af ​​intracellulær reaktive oxygenarter [26]. Så repræsenterer GCE lovende naturlige ingredienser til hudforyngelse, især i sammenligning med de stærke SIRT1-aktivatorer som E-resveratrol og E-ε-viniferin. Det er blevet vist, at sirtuin-regulering af E-resveratrol og dets derivater virker via komplekse direkte interaktioner på en isoform-specifik måde [27]. Resveratrol hæmmer det menneskelige SIRT3 og stimulerer SIRT5 og SIRT1 afhængigt af komplekse bindinger med den katalytiske lomme.

2.3. Tyrosinasehæmning

2.3.1. Enzym assay

Figur 3A visertyrosinaseinhibering af to rene stilbenoider (E-ε-viniferin og E-resveratrol) og figur 3B viser tyrosinaseinhibering af GCE fra udvalgte kultivarer i sammenligning med kojinsyre, E-resveratrol og E-ε-viniferin som positive referenceforbindelser.

Som vist i figur 3B er alle de testede GCE såvel som E-resveratrol, E-ε-viniferin relativt aktive tyrosinaseinhibitorer. Det højeste potentiale blev vist for E-ε-viniferin (76 procent ±2 procent) og E-resveratrol (75 procent ± 4 procent). GCE præsenterede forskellige kapaciteter til at hæmmetyrosinase. Riesling og Villard Noir GCE var de mest aktive med hæmningsniveauer på henholdsvis 62,5 procent og 58,5 procent. Magdeleine Noire des Charente GCE (42,5 procent) og Savagnin GCE (39,5 procent) udviste også relativt stærketyrosinasehæmningsaktivitet, hvorimod Sauvignon GCE var mindre effektiv, dog med et ganske effektivt hæmningsniveau (30,4 procent). Vitis vinifera L. bladekstrakter blev allerede nævnt i litteraturen som naturlige kilder til tyrosinasehæmmere [28]. Et E-resveratrol-derivat, oxyresveratrol, har vist sig at hæmme brunfarvning i uklar æblejuice ved en koncentration så lav som 0.01 procent. Det blev fundet, at denne stilbenoid var omkring 0,2 procent mere potent end kojinsyre [29].

Selvom druestokke akkumulerede meget flere stilbenoider end drueblade, er tyrosinaseinhiberingsassays på druestokke uden fortilfælde. Tyrosinase-hæmning af GCE i sammenligning med referenceforbindelser med kendteblegningaktivitet som E-resveratrol og E-ε-viniferin bekræftede potentialet af GCE som nye kosmetiske aktive ingredienser. Den nuværende undersøgelse viste, at alle GCE-testede var meget kraftige tyrosinasehæmmere, hvilket er afgørende for at overveje deres potentiale som hudblegemidler.

2.3.2. IC50 Bestemmelse

Svampens kinetiske adfærdtyrosinaseunder inhibering af E-resveratrol og E-ε-viniferin blev undersøgt. De kinetiske parametre for svampetyrosinase opnået fra et Lineweaver-Burkplot til inhibering af E-resveratrol (Figur 4A, linje 1) viser, at Km var lig med 1.02 (0 µM, kontrol) til 3,43 (100 µM) mM og Vmax var lig med 74,63 µM/min (0 µM, kontrol) versus et gennemsnit lig med 66,38 ± 6,44 µM/min for de forskellige testede E-resveratrol koncentrationer. Et Lineweaver-Burk plot for inhibering af E-ε-viniferin (Figur 4B, linje 2) viser, at Km var lig med 1,02 (0 µM, kontrol) til 7,63 (100 µM) mM og Vmax var lig med 74,63 µM/min (0) µM, kontrol) versus et gennemsnit lig med 73,01 ± 1,14 µM/min for de forskellige testede E-resveratrol-koncentrationer. Resultaterne præsenteret i figur 4 viste, at både E-resveratrol og E-ε-viniferin er kompetitive inhibitorer, fordi forøgelse af koncentrationen af ​​forbindelserne resulterede i en linje med fælles skæring på 1/v-aksen, men med forskellige hældninger. Hæmningskonstanterne for hver inhibitor, KI for binding til det frie enzym (til dannelse af EI-kompleks) og KIS for binding til enzym-substratkomplekset (for at danne ESI-kompleks) blev bestemt ved hjælp af det sekundære plot og det sekundære replot (figur 4), henholdsvis. De sekundære plots, der repræsenterer hældninger (Km/Vmax) af de dobbelte reciproke plots mod inhibitorkoncentrationen, tillod os at beregne en EI-dissociationskonstant (KI) på henholdsvis 46,25 og 24,22 µM for E-Resveratroland E-ε-viniferin. De sekundære replots, der repræsenterer opsnapninger af den dobbelte reciprokale relation mod inhibitorkoncentrationerne, gjorde det muligt for os at beregne en ESI-dissociationskonstant (KIS) på 364.86 og 2355.73 µM for henholdsvis E-resveratrol og E-ε-viniferin. Derfor, hvis disse beregninger foreslog en formodet binding, der kunne forekomme enten til det frie tyrosinaseenzym eller til tyrosinaseenzym forbundet med dets substrat (de nuværende resultater med 7.9- og 97.3-gange højere værdier af KIS for E -resveratrol og E-ε-viniferin, antydede disse resultater stærkt en meget svagere bindingsaffinitet til tyrosinase-enzym-substrat-komplekset snarere end til det frie tyrosinase-enzym, hvilket indikerer, at den dominerende hæmningsmekanisme for hver inhibitor er konkurrencedygtig.

Vi beregnede IC50-værdier på 52,93 µM for E-ε-viniferin og 60,75 µM for E-resveratrol. Disse IC50-værdier lå inden for intervaller til dem, der er rapporteret i litteraturen [13].

Den nuværende undersøgelse har fastslået, at E-resveratrol og E-ε-viniferin hæmmer enzymet meget effektivt. GCE udstillede ogsåtyrosinasehæmning på et relativt højt niveau. Tidligere rapporter viste, at E-ε-viniferin er den mest aktive tyrosinasehæmmer med en IC 50=4.1 µM. Den er fire gange mere potent end kojinsyre (IC50=16.9 µM) og 62-fold mere aktiv end ascorbinsyre (IC50=255 µM) til at hæmme tyrosinase. E-resveratrol har en moderat hæmmende aktivitet (IC50=52.8 µM), meget lig toarbutin (IC50=55.1 µM) [12].

2.4. Molekylær docking til binding af E-resveratrol og E-ε-viniferin med tyrosinase2.4. Molekylær docking til binding af E-resveratrol og E-ε-viniferin med tyrosinase

Figur 5 viser dockingdataene lavet for E-resveratrol og E-ε-viniferin. Resultaterne af dockingdataene indikerer klart, at E-resveratrol og E-ε-viniferin udviste tyrosinaseinhiberingspotentiale. Affiniteten for E-ε-viniferin er dog lidt højere med en beregnet affinitet på -7,73 versus -5,95 kcal/mol som følge af interaktioner med His85 og His244 gennem hydrogenbundne og π-π-stabling versus kun én hydrogenbundet interaktion med Met280 for henholdsvis E-ε-viniferinversus E-resveratrol. Begge affiniteter var stærkere for disse to stilbenoider end den, der blev observeret for kojinsyre (-5,7 kcal/mol [30]), såvel som for glabridin (-7,15 kcal/mol [31]) ved brug af en lignende docking-tilgang. Sammenlignet med l-DOPA binder disse to stilbenoider sig tiltyrosinasepå samme sted, hvilket bekræfter deres kompetitive hæmningsmekanisme [31]. Affiniteter for disse to stilbenoider var inden for området af det, der blev observeret for l-DOPA (dvs. -6,98 kcal/mol [31]).

Resultaterne bekræftede de tidligere enzymassay-resultater, hvor E-ε-viniferin var en mere potent tyrosinasehæmmer end E-resveratrol.

Tyrosinasedysfunktioner udvikler sig med aldring og kan føre til malignt melanom, såvel som pigmentforstyrrelser såsom fregner eller melisma [17]. E-resveratrol og E-ε-viniferin-rige GCE er et godt alternativ som en naturlig kilde til disse stilbenoider til forebyggelse af visse pigmenteringssygdomme.

2.5. Biotilgængelighed og hudpermeabilitetspotentiale

Figur 6 viser de afgørende fysisk-kemiske egenskaber af hovedbestanddele af GCE, der bestemmer deres samlede biotilgængelighed og hudpermeabilitet.

Permeabilitetsevalueringen vurderer ved første øjekast evnen til at penetrere et molekyle gennem huden. Lyserøde centrale zoner i radarkortene i figur 6 repræsenterer den optimale rækkevidde for hver egenskab. Fordelingskoefficientens logaritme logP (lipofilicitet) bør opnå værdier mellem −0.7 og plus 5.0, molekylvægt (molekylestørrelse) skal være mellem 150 og 500 g/M , polaritet (topologisk polært overfladeareal, TPSA) bør ligge mellem 20 og 130 Å2, opløselighed (log S) bør ikke være højere end 6, mætning (fraktion af kulstof i sp3-hybridiseringen) bør ikke være mindre end 0,25 og fleksibilitet ikke mere end 9 roterbare bindinger [32]. Baseret på disse beregninger blev det vurderet, at GCE-molekyler med størst sandsynlighed vil blive absorberet i kroppen er catechin og epicatechin (med de samme fysisk-kemiske egenskaber), E-resveratrol, E-piceatannol samt ampelopsin A. Disse molekyler var karakteriseret ved propermolekylær størrelse , elektronfordeling, polaritet og molekylekarakter. Molekyler karakteriseret ved højere molekylvægt som E-miyabenol C, E-vitisin B samt hopeaphenol og isohopeaphenol (med de samme fysisk-kemiske egenskaber) fra et fysisk-kemisk synspunkt er bemærkelsesværdige at blive assimileret, da de næppe overvinder de fysiske barrierer som f.eks. membraner, såvel som dermis. E-ε-vinifera opfylder størstedelen af ​​de regler, der kræves for god hudgennemtrængelighed. Molekylernes polaritet, lipofilicitet, uopløselighed, fleksibilitet og molekylstørrelse blev estimeret ved matematiske ligninger. Værd at påpege er det faktum, at beregningerne kun er estimeringsmetoder for den samlede hudpermeabilitet, og dermal penetrationstest vil være påkrævet for at bekræfte forudsigelser.

I løbet af de sidste årtier blev der etableret forskellige regelsæt, som hjalp med at definere passende forudsigelser om lægemiddelabsorption. De mest populære kriterier er Lipinskis regel om fem [33], men flere andre tilgange er også tilgængelige [34-37]. Tabel 2 viser oplysningerne om GCE-polyphenolers overensstemmelse med almindelige kendte biotilgængelighedsregler: Lipinski (MW < 500,="" logp="">< 4,15,="" antal="" nor="" o-atomer="">< 10,="" antal="" n-="" eller="" oh-grupper="">< 5)="" [="" 33],="" ghose="" (160="">< mw="">< 480,="" -0,4="">< logp="">< 5,6,40="">< mw="">< 130,="" 20="">< antal="" atomer="">< 70)="" [34],="" veber="" (antal="" roterbare="" bindinger="">< 10,="">< 140)="" [35],="" egan="" (logp="" <="" 5.88,="" tpsa="" <="" 131.6)="" [36]="" and="" muegge="" (200="" <="" mw="" <="" 600,="" −2="" <="" logp="" <="" 5,="" tpsa="">< 150,="" numbers="" of="" rings="" <="" 7,="" number="" of="" carbons="" >="" 4,="" number="" of="" heteroatoms="" >="" 1,="" number="" of="" rotatable="" bonds="" <="" 15,="" nha="" <="" 10,="" nhd="" <="" 5)="">

Baseret på disse beregninger kan det med relativt stor sandsynlighed angives, hvilke strukturer der med størst sandsynlighed trænger ind i hudbarrieren. GCE polyphenoler karakteriseret med MW over 500 g/mol (hopeaphenol, isohopeaphenol, E-miyabenol C og E-vitisin B) er samtidig for lipofile (logP > 5) og karakteriseret ved forkert elektronfordeling (TPSA > 140) samt hydrogenbindingsegenskaber (NHD > 5 eller NHA > 10). Desuden kan molekylære volumener af disse molekyler begrænse deres hudabsorption, og fra et rumligt synspunkt vil deres molekylære bindingsbrud yderligere begrænse deres evne til at være aktive i hudstrukturerne. Sådanne forbindelser forbliver efter topisk påføring som en rest på overfladen eller trænger, afhængigt af hudtilstande, kun ind i de ydre lag af det hydrofobe hornlag. Hudbarriereegenskaber er baseret på lipid-dobbeltlag. De vellykkede transdermale lægemidler er blevet begrænset af parametertærskler, der er endnu mere restriktive end fem-reglen [19]. Derfor forklarer nyligt tilgængelige statistiske beregninger meget nøjagtige regler for transdermale ruter for aktive stoffer. Basen er hovedsageligt på deres fysisk-kemiske parametre. De nye tærskler for nuværende transdermale lægemidler er MW < 335,="" nhd="" mindre="" end="" eller="" lig="" med="" 2,="" nha="" mindre="" end="" eller="" lig="" med="" 5,="" og="" logp="">< 5="">

På trods af deres manglende evne til at overvinde stratum corneum-barrieren, er højmolekylære stilbenoider (trimere og tetramerer af resveratrol) stadig af stor interesse på grund af deres gavnlige aktiviteter for huden. Som allerede vist i mange undersøgelser, udviser disse metabolitter stærke antioxidantegenskaber [38], og sideløbende, på grund af deres karakter, er de kendetegnet ved høj kompartment til intercellulære komponenter og den lipofile beskyttende barriere af huden. I tilfælde af skadelige tilstande og overtørret hud kan disse polyfenoler spille en vigtig rolle som aktive blødgørende midler med regenererende og antioxidantevne på hudens overflade [39].

I betragtning af de ovennævnte regler for hudpenetration er de mest potente kandidater til kosmetiske aktive ingredienser catechin, epicatechin, E-piceatannol, E-resveratrol og E-ε-vinifera. Vores beregninger forudsiger, at disse polyfenoler kan overvinde hudbarrierer og virke inden for strukturen af ​​dermis, hvilket er særligt vigtigt med hensyn til deres aktivitet for hudens enzymatiske funktioner. Bekræftet evne til at moduleretyrosinaseog sirtuin-aktivitet og deres gode forudsigelse for hudpenetration gør det muligt for lavmolekylære stilbenoider (monomerer og dimerer af resveratrol) som E-resveratrol og E-ε-vinifera at virke foryngende ogblegningagenter. Derudover sikrer deres høje antioxidantaktivitet effekt på flere niveauer for hudceller. GCE er blandinger af polyphenoler, som udviser forskellige biologiske aktiviteter og er karakteriseret ved forskellige fysisk-kemiske karakteregenskaber. Derfor sikrer ekstrakterne multidirektionelle terapeutiske effekter samt effektiv beskyttelse af menneskelig hud.

Derfor kan det hævdes, at polyphenol-rigt GCE ville være mere gavnligt i hudplejebehandlinger end indkapslede rene stilbenoider [22]. Yderligere eksperimenter på hudmodeller er stadig nødvendige for at bekræfte potentialet af GCE som en naturlig multifunktionel ingrediens til miljøvenlig dermo-kosmetik.

3. Materialer og metoder

3.1. Kemikalier og reagens

E-resveratrol og andre standarder blev købt fra Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA). E-ε-vinifera blev oprenset fra druestokke som tidligere beskrevet [40]. Champignontyrosinaseopløsning og L-DOPA blev opnået fra Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA). Ultrarent vand blev opnået fra et Millipore Milli-Q vandrensningssystem (Merck Millipore, by, Tyskland).

3.2. Plantemateriale

Druestokke fra fem udvalgte sorter (Villard Noir, Sauvignon, Savagnin, Riesling og Magdeleine Noire des Charentes) blev høstet i januar 2016 på INRA druelageret "Domaine de Vassal" (34340 Marseillan-Plage, Frankrig: http://www. .1.montpellier.inra.fr/vassal). Femogtyve druestængler blev høstet for hver sort efter beskæring af fem stilke fra fem forskellige vinstokke. Druestængler blev skåret i 10 cm lange sektioner og opbevaret i 10 uger ved 20 ◦C i mørke, hvilket muliggjorde akkumulering af E-resveratrol og E-piceatannol efter høst. Derefter blev druestængler først malet med en afkølet analytisk kværn (Ika-Werke, Staufen, Tyskland) og yderligere med en skæremølle (Polymic PX-MFC 90 D, Kinematica AG, Luzern, Schweiz) for at opnå en partikel på 1 mm. Pulveret blev lyofiliseret og opbevaret ved -20 ◦C indtil ekstraktion [41]. I alt blev 20 g tørret pulver ekstraheret med 500 ml ethanol/vand-blanding (60/40; v/v). Prøver blev ekstraheret i 45 minutter under tilbagesvaling ved 83 ◦C og filtreret. Derefter blev supernatanter fordampet under anvendelse af en Heidolph 94200 rotavapor (Bio-blok, Schwabach, Tyskland) koblet med en vakuumpumpe (Vacuubrand PC500-serien, Wertheim, Tyskland). De resulterende ekstrakter blev lyofiliseret, hvilket gav tørret GCE tilgængeligt til yderligere in vitro-assays.

3.3. HPLC-analyser

HPLC-systemet var lavet af en Waters 717 plus autosampler, en Waters 996 fotodiode arraydetektor og en Waters 600 controller (Waters, Milford, MA, USA) pumpe og blev styret af Empower 2 software (Waters , Milford, MA, USA). Vi opnåede analytadskillelse gennem injektion af 20 µL ekstrakter på en kolonne pakket med 3 µm partikler (250 × 4 mm, Multospher 120 RP18HP;CS-Service, Langerwehe, Tyskland) ved 24 ◦C. Den mobile fase var lavet af 0,1 procent phosphorsyre (opløsningsmiddel A) og acetonitril (opløsningsmiddel B) pumpet ved 0,5 ml min-1. Vi brugte en lineær gradient, der startede ved 5 procent B og steg til 72,5 procent på 60 min. Kvantificering blev udført ved hjælp af ren standard ved hjælp af en fempunkts kalibreringskurve (0-100 ppm) i Maxplot-detektionstilstand. Isohopeaphenolen blev kvantificeret ved hjælp af hopeaphenol-kalibreringskurven.

3.4. Sirtuin aktivering

Evaluering af Sirtuin-aktivering (SIRT1) blev udført under anvendelse af GCE ved 50 µg/ml sammenlignet med 10 µM rent E-resveratrol og E-ε-viniferin (som aktivatorer) og nikotinamid (som inhibitor). SIRT1-aktivitet blev bestemt ved hjælp af SIRT1. Assaykit (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) efter producentens instruktioner og ved hjælp af et fluorescerende spektrometer (Biorad VersaFluor, Marnes-la-Coquette, Frankrig) indstillet med 340 nm excitation og 430 nm emissionsbølgelængder. Den relative SIRT1-aktivitet blev afsløret som en relativ procentdel til den tilsvarende kontrol (tilsætning af det samme volumen ekstraktionsopløsningsmiddel) for hver ekstrakt.

3.5. Tyrosinasehæmning

3.5.1. Enzym assay

Tyrosinaseinhiberingsassayet blev målt som beskrevet af Neely et al. (2009) [42]. Hver 1 mLassay indeholdt en slutkoncentration på 100 mM natriumphosphat (pH 6,5) og 2 mM L-DOPA. Til sidst blev 0,2 mg/ml svampetyrosinaseopløsning (Sigma-Aldrich) tilsat til blandingen. Kontrol med en tilsvarende mængde af ekstraktionsopløsningsmiddel, der erstattede ekstraktet, blev rutinemæssigt udført. Reaktionsprocesser blev sporet ved at bruge en mikropladelæser (BioTek ELX800; BioTek Instruments Inc., Winooski, VT, USA) ved en bølgelængde på 475 nm. Dettyrosinaseinhiberende virkning blev udtrykt som en procent af inhibering i forhold til den tilsvarende kontrol for hver ekstrakt. Standardforbindelseskoncentrationer anvendt i en undersøgelse var 100 µM, og koncentrationen af ​​testede ekstrakter var 50 µg/ml. Forsøgene blev gentaget tre gange, og de gennemsnitlige resultater med standardafvigelsesværdier blev givet i figur 3B.

Cistanche hæmmer tyrosinaseekspression

3.5.2. IC50 Bestemmelse

For at antage intervallet af inhibitormængder, der er nødvendige for beregningen af ​​IC50-værdien, blev der anvendt forskellige koncentrationer af E-resveratrol og E-ε-viniferin. Assays anvendt til beregningerne blev fremstillet inden for området af inhibitorer fra 1 til 100 µM. I tilfælde af en signifikant ændring i formen af ​​aktivitetstidskurven blev satserne beregnet baseret på steady-state rateregioner. Koncentrationen af ​​inhibitor, der forårsagede 50 procent tyrosinaseaktivitetsinhibering, blev ekstrapoleret fra procent aktivitet-hæmmerkurver [42]. Forsøgene blev gentaget tre gange, og gennemsnittet af IC50-værdierne blev givet i figur 4A og 4B.

3.6. Dockingdata til binding af E-resveratrol og E-ε-viniferin med tyrosinase

Molekylær dockingsimulering af E-resveratrol og E-ε-viniferin blev udført med Ligplot plus software (European Bioinformatics Institute, Cambridge, UK), autodock Vina (The Scripps ResearchInstitute, La Jolla, CA, USA) og Pymol v2.1.1 ( Schrodinger, New York, NY, USA) for at forudsige konformationen af ​​disse molekyle ligander inden for det passende målbindingssted fortyrosinase(PDB: 2Y9X).

3.7. Biotilgængelighed og hudpermeabilitetspotentiale

Lægemiddellignende potentiale såvel som hudpermeabilitet, som afgørende faktorer for aktiv molekyleeffektivitet, kan defineres som en kompleks balance mellem forskellige fysisk-kemiske egenskaber og strukturelle egenskaber, der bestemmer, om molekylet ligner de kendte lægemidler. Disse egenskaber, hovedsageligt hydrofobicitet, elektronisk distribution, hydrogenbindingsegenskaber, molekylestørrelse, fleksibilitet og tilstedeværelsen af ​​forskellige farmakoforiske egenskaber, påvirker adfærden af ​​molekyler i en levende organisme, herunder biotilgængelighed, transportegenskaber, affinitet til proteiner, reaktivitet, toksicitet, metabolisk stabilitet og mange andre [43]. Simple tællekriterier (som grænser for molekylvægt, logP eller antallet af hydrogenbindingsdonorer eller acceptorer) har også relativt begrænset anvendelighed og er kun nyttige til at kassere nogle af de potentielle aktive molekyler fra yderligere forskning [19]. Værdierne for Molecular PolarSurface Area (TPSA) for alle strukturerne blev beregnet baseret på metoden offentliggjort af Ertl et al. [44] som en sum af fragmentbidrag i hele molekylet. O- og N-centrerede polarfragmenter blev også overvejet. Metode til beregning af molekylevolumen samt logaritmeværdier for partitionskoefficient (log) blev udviklet ved hjælp af SwissADME [32]. 3D molekylære geometrier for et træningssæt blev fuldt optimeret ved den semi-empiriske AM1 metode [45,46]. Lipinskis "Rule ofFive" siger, at de fleste "lægemiddellignende" molekyler har logP mindre end eller lig med 5, molekylvægt mindre end eller lig med 500, antal hydrogenbindingsacceptorer mindre end eller lig med 10 og antal hydrogenbindingsdonorer mindre end eller lig med 5. Molekyler, der overtræder mere end en af ​​disse regler, kan have meget lav eller slet ingen biotilgængelighed [33]. Biologisk aktivitet forudsigelsesberegninger er baseret på Bayesianske statistikker for at sammenligne strukturer af repræsentative ligander aktive på det bestemte mål med strukturer af inaktive molekyler og for at identificere understrukturegenskaber (som igen bestemmer fysisk-kemiske egenskaber) typiske for aktive molekyler [47].

4 konklusioner

Polyphenol-beriget GCE var i stand til at aktivere SIRT1 ved niveauer svarende til 5 µM E-resveratrol eller E-ε-viniferin. Hudblegningpotentiale viatyrosinaseinhiberingsassay viste, at GCE-kapaciteter var sammenlignelige med ren E-resveratrol og E-ε-viniferin. Specielt Villard Noir og Riesling GCE kan være nyttige som hudlysende midler og kan bruges mod mørke pletter i dermo-kosmetik. Derudover viste lægemiddellignende stoffer af GCE-komponenter forskellige egenskaber i hudgennemtrængning, hvilket giver tilstrækkelig effektivitet i forskellige dermisstrukturer. Hudfysiologiske processer understøttet af disse aktive forbindelser sikrer de rigtige hudbarrierefunktioner samt effektiv genopretning af hudvæv. Som konklusion er den potentielle anvendelse af GCE af enorm interesse, ikke kun for industrien, men også for forbrugere, der i stigende grad efterspørger naturlige ingredienser, som er nødvendige i den såkaldte "økokosmetik".

Referencer

1. Bonkowski, MS; Sinclair, DA Bremse aldring ved design: Fremkomsten af ​​NAD plus og sirtuin-aktiverende forbindelser. Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 2016, 17, 679-690. [CrossRef]

2. Nunes, MA; Rodrigues, F.; Oliveira, MBPP Drueforarbejdning af biprodukter som aktive ingredienser til kosmetiske forslag. I Handbook of Grape Processing Bi-Products: Sustainable Solutions; Elsevier Inc.: Wien, Østrig, 2017;pp. 267-292. ISBN 9780128098714.

3. Piñeiro, Z.; Guerrero, RF; Fernandez-Marin, MI; Cantos-Villar, E.; Palma, M. Ultralydsassisteret udvinding af stilbenoider fra druestængler. J. Agric. Food Chem. 2013, 61, 12549-12556. [CrossRef]

4. Houillé, B.; Besseau, S.; Delanoue, G.; Oudin, A.; Papon, N.; Clastre, M.; Simkin, AJ; Guérin, L.;Courdavault, V.; Giglioli-Guivarc'H, N.; et al. Sammensætning og vævsspecifik fordeling af stilbenoidsin-druestokke påvirkes af dunet meldugtryk i vingården. J. Agric. Food Chem. 2015, 63.[CrossRef]

5. Lambert, C.; Richard, T.; Renouf, E.; Bisson, J.; Waffo-Téguo, P.; Bordenave, L.; Ollat, N.; Mérillon, J.-M.; Cluzet, S. Sammenlignende analyser af stilbenoider i stokke af Major Vitis vinifera L. Cultivars. J. Agric. Food Chem.2013, 61, 11392-11399. [CrossRef] [PubMed]

6. Çetin, ES; Altinöz, D.; Tarçan, E.; Göktürk Baydar, N. Kemisk sammensætning af druestokke. Ind. Afgrøder Prod.2011, 34, 994–998. [CrossRef]

7. Torres, P.; Avila, JG; De Vivar, AR; García, AM; Marín, JC; Aranda, E.; Céspedes, CL Antioxidant- og insektvækstregulerende aktiviteter af stilbener og ekstrakter fra Yucca periculosa. Phytochemistry 2003,64, 463-473. [CrossRef]

8. Xue, YQ; Di, JM; Luo, Y.; Cheng, KJ; Wei, X.; Shi, Z. Resveratrol-oligomerer til forebyggelse og behandling af cancer. Oxid. Med. Celle. Longev. 2014, 2014. [CrossRef]

9. Jang, M.; Cai, L.; Udeani, GO; Langsommere, KV; Thomas, CF; Beecher, CWW; Fong, HHS; Farnsworth, NR; Kinghorn, AD; Mehta, RG; et al. Kræft kemoforebyggende aktivitet af resveratrol, et naturligt produkt afledt af druer. Science 1997, 275, 218-220. [CrossRef]

10. Adrian, M.; Jeandet, P.; Veneau, J.; Weston, LA; Bessis, R. Biologisk aktivitet af resveratrol, en stilbenisk forbindelse fra vinstokke, mod Botrytis cinerea, årsagsmidlet til gråskimmel. J. Chem. Ecol. 1997,23, 1689-1702. [CrossRef]

11. Liu, F.; Tsai, Y.; Tsai, H.; Yu, H. Anti-inflammatoriske og organbeskyttende virkninger af resveratrol ved traume-hæmoragisk skade. Mediators Inflammation 2015, 2015, 38-42. [CrossRef]

12. Morel-Salmi, C.; Julia, A.; Vigor, C.; Vercauteren, J. En enorm PVDF-adsorptionsforskel mellem resveratrol og ε-vinifera gør det muligt at oprense dem kvantitativt og vurdere deres anti-tyrosinase-egenskaber.Chromatographia 2014, 77, 957-961. [CrossRef] [PubMed]

13. Honisch, C.; Otto, A.; de Matos, AD; Vincenzi, S.; Ruzza, P. Isolering af en tyrosinaseinhibitor fra umodne druesaft: En spektrofotometrisk undersøgelse. Food Chem. 2019, 305, 125506. [CrossRef] [PubMed]

14. Skoczy ´nska, A.; Budzisz, E.; Trznadel-Grodzka, E.; Rotsztejn, H. Melanin og lipofuscin som kendetegn ved hudældning. Postep. Dermatologi i Alergol. 2017, 34, 97-103. [CrossRef] [PubMed]

15. Zolghadri, S.; Bahrami, A.; Hassan Khan, MT; Munoz-Munoz, J.; Garcia-Molina, F.; Garcia-Canovas, F.; Saboury, AAA omfattende gennemgang af tyrosinasehæmmere. J. Enzyme Inhib. Med. Chem. 2019, 34, 279-309. [CrossRef]

16. Howitz, KT; Bitterman, KJ; Cohen, HY; Lamming, DW; Lavu, S.; Wood, JG; Zipkin, RE; Chung, P.; Kisielewski, A.; Zhang, LL; et al. Små molekyle aktivatorer af sirtuins forlænger Saccharomyces cerevisiae levetid. Nature 2003, 425, 191-196. [CrossRef]

17. Abbasi, BH; Siddiquah, A.; Tungmunnithum, D.; Bose, S.; Younas, M.; Garros, L.; Drouet, S.; Giglioli-Guivarc'h, N.; Hano, C. Isodon rugosus (Wall. ex Benth.) torsk in vitro kulturer: Etablering, fytokemisk karakterisering og in vitro antioxidant- og anti-aldringsaktiviteter. Int. J. Mol. Sci. 2019, 20.[CrossRef]

18. Malinowska, M.; Miroslaw, B.; Sikora, E.; Ogonowski, J.; Wojtkiewicz, AM; Szaleniec, M.; Pasikowska-Piwko, M.; Eris, I. Nye lupeolestere som aktive stoffer i behandlingen af ​​hudskader.PLoS ONE 2019, 14, 1–15. [CrossRef]

19. Choy, YB; Prausnitz, MR Reglen på fem for ikke-orale lægemiddelafgivelsesveje: Oftalmologisk, inhalations- og transdermal. Pharm. Res. 2011, 28, 943-948. [CrossRef]

20. Billet, K.; Dugé de Bernonville, T.; Oudin, A.; Courdavault, V.; Brousseau, S.; Giglioli-Guivarc'h, N.; Lanoue, A. Behandling efter høst på træbiomasse fra en stor samling af europæiske druesorter: Indvirkning på udvælgelsen af ​​polyphenolrige biprodukter. ACS Sustain. Chem. Eng.. indsendt.

21. Billet, K.; Houillé, B.; Dugé de Bernonville, T.; Besseau, S.; Oudin, A.; Courdavault, V.; Delanoue, G.; Guérin, L.; Clastre, M.; Giglioli-Guivarc'h, N.; et al. Feltbaseret metabolomik af Vitis vinifera L. stammer giver ny indsigt i genotypediskrimination og strukturering af polyphenolmetabolisme. Foran. Plant Sci.2018, 9, 1-15. [CrossRef]

22. Stacchiotti, A.; Favero, G.; Rezzani, R. Resveratrol og SIRT1 aktivatorer til behandling af aldring og aldersrelaterede sygdomme. I Resveratrol—føje liv til år, ikke tilføje år til livet; IntechOpen: London, Storbritannien, 2019. [CrossRef]

23. Malik, S.; Mohar, D. Sirtuin-systemet: Resveratrols hellige gral? J. Clin. Exp. Kardiologi. 2012, 3, 216-219.[CrossRef]

24. Fu, J.; Jin, J.; Cichewicz, RH; Hageman, SA; Ellis, TK; Xiang, L.; Peng, Q.; Jiang, M.; Arbez, N.; Hotaling, K.; et al. Trans-(-)-ε-vinifera øger mitochondrial sirtuin 3 (SIRT3), aktiverer AMP-aktiveret proteinkinase (AMPK) og beskytter celler i modeller af Huntingtons sygdom. J. Biol. Chem. 2012, 287, 24460-24472. [CrossRef] [PubMed]

25. Corbi, G.; Conti, V.; Komici, K.; Manzo, V.; Filippelli, A.; Palazzo, M.; Vizzari, F.; Davinelli, S.; Di Costanzo, A.; Scapagnini, G.; et al. Fenoliske planteekstrakter inducerer sirt1-aktivitet og øger antioxidantniveauet i kaninens hjerte og lever. Oxid. Med. Celle. Longev. 2018, 2018. [CrossRef] [PubMed]

26. Wang, Y.; Liang, X.; Chen, Y.; Zhao, X. Screening af SIRT1-aktivatorer fra lægeplanter som bioaktive forbindelser mod oxidativ skade i mitokondriel funktion. Oxid. Med. Celle. Longev. 2016, 2016, 1-10.[CrossRef]

27. Gertz, M.; Nguyen, GTT; Fischer, F.; Suenkel, B.; Schlicker, C.; Fränzel, B.; Tomaschewski, J.; Aladini, F.; Becker, C.; Wolters, D.; et al. En molekylær mekanisme til direkte Sirtuin-aktivering af Resveratrol. PLoS ONE2012, 7, 1-12. [CrossRef]

28. Lin, YS; Chen, HJ; Huang, JP; Lee, PC; Tsai, CR; Hsu, TF; Huang, WY Kinetik af tyrosinaseinhiberende aktivitet ved hjælp af Vitis vinifera bladekstrakter. Biomed Res. Int. 2017, 2017. [CrossRef]

29. Likhitwitayawuid, K. Stilbenes med tyrosinaseinhiberende aktivitet. Curr. Sci. 2008, 94, 44-52.

30. Ullah, S.; Park, Y.; Ikram, M.; Lee, S.; Park, C.; Kang, D.; Yang, J.; Akter, J.; Yoon, S.; Chun, P.; et al. Design, syntese og anti-melanogen effekt af kanelderivater. Bioorganisk Med. Chem. 2018, 26, 5672-5681.[CrossRef]

31. Chen, J.; Yu, X.; Huang, Y. Inhiberende mekanismer af glabridin på tyrosinase. Spectrochim. Acta-del A Mol.Biomol. Spectrosc. 2016, 168, 111-117. [CrossRef]

32. Daina, A.; Michielin, O.; Zoete, V. SwissADME: Et gratis webværktøj til at evaluere små molekylers farmakokinetik, lægemiddellignendehed og medicinsk kemi. Sci. Rep. 2017, 7, 1-13. [CrossRef]

33. Lipinski, CA; Lombardo, F.; Dominy, BW; Feeney, PJ Eksperimentelle og beregningsmæssige tilgange til at vurdere opløselighed og permeabilitet i lægemiddelopdagelse og udviklingsmiljøer. Adv. Drug Deliv. Rev.2012, 64, 4-17. [CrossRef]

34. Ghose, AK; Viswanathan, VN; Wendoloski, JJ En vidensbaseret tilgang til design af kombinatoriske eller medicinske kemiske biblioteker til lægemiddelopdagelse. 1. Kvalitativ og kvantitativ karakterisering af kendte lægemiddeldatabaser. J. Comb. Chem. 1999, 1, 55-68. [CrossRef] [PubMed]

35. Veber, DF; Johnson, SR; Cheng, HY; Smith, BR; Ward, KW; Kopple, KD Molekylære egenskaber, der påvirker den orale biotilgængelighed af lægemiddelkandidater. J. Med. Chem. 2002, 45, 2615-2623. [CrossRef] [PubMed]

36. Egan, WJ; Merz, KM; Baldwin, JJ Forudsigelse af lægemiddelabsorption ved hjælp af multivariat statistik. J. Med. Chem. 2000, 43, 3867-3877. [CrossRef]

37. Muegge, I.; Heald, SL; Brittelli, D. Simple udvælgelseskriterier for det lægemiddellignende kemiske stof. J. Med. Chem. 2001, 44, 1841-1846. [CrossRef]

38. Soural, I.; Vrchotová, N.; Tˇríska, J.; Balík, J.; Horník, Š.; Cuˇrínová, P.; Sýkora, J. Forskellige ekstraktionsmetoder til opnåelse af stilbener fra druestokke af Vitis vinifera L. Molecules 2015, 20, 6093-6112. [CrossRef]

39. Chen, CP; Chen, CC; Huang, CW; Chang, YC Evaluering af molekylære egenskaber involveret i transporten af ​​små molekyler i stratum corneum: Et kvantitativt struktur-aktivitetsforhold for hudpermeabilitet.Molecules 2018, 23. [CrossRef]

40. Houillé, B.; Papon, N.; Boudesocque, L.; Bourdeaud, E.; Besseau, S.; Courdavault, V.; Enguehard-Gueiffier, C.; Delanoue, G.; Guérin, L.; Bouchara, J.-P.; et al. Antifungal aktivitet af resveratrolderivater mod candidaarter. J. Nat. Prod. 2014, 77, 1658-1662. [CrossRef]

41. Billet, K.; Houillé, B.; Brousseau, S.; Mélin, C.; Oudin, A.; Papon, N.; Courdavault, V.; Castro, M.; Giglioli-Guivarc'h, N.; Lanoue, A. Mekanisk stress inducerer hurtigt E-resveratrol og E-piceatannolbiosyntese i druestokke opbevaret som et friskbeskåret biprodukt. Food Chem. 2018, 240, 1022-1027.[CrossRef]

42. Neeley, E.; Fritch, G.; Fuller, A.; Wolfe, J.; Wright, J.; Flurkey, W. Variationer i IC50-værdier med renheden af ​​svampetyrosinase. Int. J. Mol. Sci. 2009, 10, 3811-3823. [CrossRef]

43. Mignani, S.; Rodrigues, J.; Tomas, H.; Jalal, R.; Singh, PP; Majoral, JP; Vishwakarma, RA Præsenterer lægemiddellignende filtre i medicinsk kemi under hit- og lead-optimeringsprocessen: Hvor langt kan de forenkles? Drug Discov. I dag 2018, 23, 605-615. [CrossRef] [PubMed]

44. Ertl, P.; Rohde, B.; Selzer, P. Hurtig beregning af molekylært polært overfladeareal som en sum af fragmentbaserede bidrag og dets anvendelse til forudsigelse af lægemiddeltransportegenskaber. J. Med. Chem. 2000, 43, 3714-3717. [CrossRef][PubMed]

45. Dewar, MJS; Zoebisch, EG; Healy, EF; Stewart, JJP AM1: En ny generel kvantemekanisk molekylær model1. J. Am. Chem. Soc. 1985, 107, 3902-3909. [CrossRef]

46. ​​Rocha, GB; Freire, RO; Simas, AM; Stewart, JJP RM1: En reparameterisering af AM1 for H, C, N, O, P, S, F, Cl, Br og IJ Comput. Chem. 2006, 27, 1101-1111. [CrossRef]

47. Rocchetti, G.; Gatti, M.; Bavaresco, L.; Lucini, L. Umålrettet metabolomik for at undersøge phenolsammensætningen af ​​Chardonnay-vine fra forskellig oprindelse. J. Food Compos. Anal. 2018, 71, 87-93. [CrossRef]