Glochidion Littorale bladekstrakt udviser neurobeskyttende virkninger i Caenorhabditis Elegans via DAF-16 aktivering

For mere information kontakt e-mailtina.xiang@wecistanche.com 
Abstrakt:En række planter, der bruges i folkemedicin i Thailand og Østasien, tiltrækker interesse på grund af deres ekstrakters høje bioaktiviteter. Formålet med denne undersøgelse var at screene de spiselige bladekstrakter af 20 planter fundet i Thailand og undersøge de potentielle neurobeskyttende virkninger af den mest bioaktive prøve. Det totale phenol- og flavonoidindhold og 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazylradikal-fjernende aktivitet blev bestemt for alle 20 bladekstrakter. Baseret på disse analyser blev Glochidionlittorale bladekstrakt (GLE), som viste en høj værdi i alle testede parametre, brugt i yderligere eksperimenter til at evaluere dets virkninger på neurodegeneration iCaenorhabditis elegans. GLE-behandling forbedrede H2O2-induceret oxidativ stress ved at dæmpe ophobningen af ​​reaktive oxygenarter og beskytte ormene mod 1-methyl-4-phenylpyridinium-induceret neurodegeneration. De observerede neurobeskyttende virkninger kan være forbundet med aktiveringen af ​​transkriptionsfaktoren DAF-16. Karakteriseringen af ​​dette ekstrakt af LC-MS identificerede adskillige phenoliske forbindelser, herunder myricetin, coumestrin, chlorogensyre og hesperidin, som kan spille en nøglerolle ineurobeskyttelse. Denne undersøgelse rapporterer den nye neurobeskyttende aktivitet af GLE, som kan bruges til at udvikle behandlinger for neurodegenerative sygdomme såsom Parkinsons syndrom.

Nøgleord: Caenorhabditis elegans; bladekstrakt;neurobeskyttelse; antioxidant aktivitet; DAF-16

1. Introduktion 

Neurodegenerative lidelser, herunder Alzheimers sygdom og Parkinsons sygdom (PD), udgør store sundhedsmæssige og økonomiske bekymringer for globale sundhedsorganisationer [1]. Selvom menneskets levetid er steget i de sidste par årtier i industrialiserede lande, er forekomsten af ​​aldersrelaterede sygdomme også steget. Forekomsten af ​​sent opståede lidelser såsom neurologiske forstyrrelser forventes at stige hurtigt i løbet af de næste par årtier. Derfor er det afgørende at tilskynde til undersøgelser og udføre kliniske forsøg på forbindelser, der kan have potentiale til at helbrede, forebygge eller i det mindste forsinke starten af ​​neurodegenerative sygdomme [2]. Et af de karakteristiske træk ved PD er det progressive tab af dopaminerge (DA) neuroner i substantia nigra [3]. I PD-patogenese spiller øget produktion af reaktive oxygenarter (ROS) en nøglerolle i tabet af DA-celler [4]. Derfor betragtes reduktionen i oxidativ stress som en lovende terapeutisk tilgang i PD-behandling [5]. 1-methyl-4-phenylpyridinium (MPP plus ), som hæmmer mitokondriekompleks I-aktivitet, kan inducere PD-lignende symptomer hos mennesker og dyremodeller [6].

Brugen afCaenorhabditis eleganssom en in vivo model giver visse fordele i studiet af PD [7]. Nematoden er enkel, billig og har en kort livscyklus. Det understøtter undersøgelser, der involverer store analyser. Desuden er det neuronale netværk af C. elegans blevet kortlagt fuldstændigt. Den indeholder 8 DA-neuroner og PD-relaterede homologe gener [8]. Neurodegeneration, som efterligner parkinsonsymptomer, kan induceres hos C. elegans via behandling med neurotoksiner såsom MPP plus [9].
Naturlige antioxidantforbindelser repræsenterer attraktive kilder til udvikling af lægemidler til behandling af neurodegenerative sygdomme på grund af deres neurobeskyttende virkninger i dyremodeller og lave toksicitet [3]. Polyfenoler er kendt for at være blandt de mest udbredte antioxidanter i den menneskelige kost [10]. Det er også blevet fastslået, at oxidative processer er involveret i mange patologier, herunder neurodegeneration, cancer, diabetes, kardiovaskulære og antiinflammatoriske sygdomme. Derfor kan det at finde polyphenoler, der udviser antioxidantegenskaber fra naturlige kilder, bidrage til at forebygge eller behandle disse patologier. Denne undersøgelse fokuserede på ekstrakter fra de spiselige blade af planter fundet i Thailand. De fleste sorter, der dyrkes bredt i det nordlige og sydlige Thailand, er blevet brugt som folkemedicin mod generelle skader og sygdomme; der er dog få rapporter om deres neurobeskyttende virkninger.
I denne undersøgelse screenede vi først ekstrakterne af spiselige blade fra 20 planter dyrket i Thailand og vurderede deres phenol- og flflavonoidindhold og deres 2,2-diphenyl-1- picrylhydrazyl (DPPH) radikalfjernende aktivitet. Virkningerne af Glochidion littorale bladekstrakt (GLE), som viste en høj værdi i alle testede parametre, blev evalueret på C. elegans med neurodegeneration. Desuden blev de potentielle veje involveret i den neurobeskyttende effekt af GLE undersøgt sammen med identifikation af hovedkomponenterne i GLE.
Da transkriptionsfaktoren DAF-16 er kendt for at spille en nøglerolle i reguleringen af ​​oxidativt stress [11], blev det antaget, at GLE kan målrette mod DAF-16. C. elegans stammen CF1038, som er en DAF-16 mutantstamme med tab af funktion, blev brugt til at bestemme overlevelsesraten for orme behandlet med og uden GLE. I H2O2-induceret oxidativ stress øgede GLE-behandling ikke overlevelsesraten for transgene orme (figur 1C).

2. Resultater

2.1. Screening af thailandske planteblade

Råekstrakter af spiselige blade fra planter dyrket i Thailand blev fremstillet ved ultralydbehandling. Bladekstrakterne fra 20 planter blev screenet for deres phenol- og flavonoidindhold og antioxidantaktivitet ved DPPH-radikalopfangende assay. Få af de testede prøver, såsom Glochidion sphaerogynum og Mentha piperita, viste sig at have høj radikal-fjernende aktivitet med lavt phenol- og flflavonoidindhold, hvorimod visse prøver, såsom Clinacanthus nutans og Ocimum × citriodorum, udviste den modsatte tendens (tabel 1) ). Bladekstraktet af G. littorale viste høj DPPH radikal-fjernende aktivitet samt højt phenol- og flflavonoidindhold. Derfor blev bioaktiviteterne forbundet med G. littorale yderligere undersøgt.

2.2. GLE forbedret modstand mod oxidativ stress via DAF-16 i C. Elegans

Effekten af ​​GLE på overlevelsen af ​​N2-orme under oxidativ stress blev undersøgt. Behandling med H2O2 (5 mM) inducerede 75 procent død i kontrolgruppen, hvorimod samtidig behandling med 50 µg/ml og højere koncentrationer af GLE var forbundet med en høj overlevelsesrate (figur 1A). Blandt de testede koncentrationer af GLE var 100 µg/mL og 200 µg/mL forbundet med de højeste overlevelsesrater (henholdsvis 82,0 procent og 88,2 procent). Derfor blev disse to koncentrationer brugt i efterfølgende forsøg. For at evaluere antioxidantvirkningen af ​​GLE in vivo blev de intracellulære ROS-niveauer målt i vildtypenematoder under anvendelse af 2',7'-dichlordihydroflfluoresceindiacetat (H2DCF-DA), en velkendt fluorescensprobe til påvisning af intracellulær ROS-produktion. Signifikante fald i fluorescensintensiteterne i de GLE-behandlede grupper blev observeret sammenlignet med det i den ubehandlede gruppe (figur 1B), hvilket bekræfter antioxidantegenskaben af ​​GLE.

2.3. GLE-behandling reducerede dødeligheden af ​​MPP plus -induceret DA neurotoksicitet via DAF-16 i C. Elegans C. elegans besidder 8 DA neuroner [8]. Selektiv degeneration af disse DA-neuroner blev evalueret efter eksponering for MPP plus. Behandlingen af ​​vildtype N2-orme med 0.75 mM MPP plus resulterede i et bemærkelsesværdigt fald i overlevelse (figur 2). Imidlertid øgede samtidig behandling med GLE ormenes overlevelse markant. Effekten af ​​GLE-behandling på daf-16 mutante orme blev undersøgt. Som vist i figur 3 og tabel 2 øgede GLE-behandling ikke overlevelsen af ​​disse orme efter eksponering for MPP plus sammenlignet med den i kontrolgruppen. Disse resultater tyder på, at DAF-16 kan være påkrævet for at mediere den neurobeskyttende effekt af GLE i C. elegans. Dernæst blev en DAF-2 mutantstamme med tab af funktion, CB1370, brugt til at bestemme, om DAF-2 var involveret i de observerede neurobeskyttende virkninger. Som vist i figur 4 og tabel 3 steg median og maksimal overlevelse signifikant i daf-2 mutantorme behandlet med GLE.

2.4. Effekter af GLE på DAF-16 lokalisering

Det er blevet påvist, at DAF-16-aktivering er reguleret af dens nukleare akkumulering [12]. Efterfølgende undersøgte vi, om GLE kunne inducere nuklear akkumulering af DAF-16 i en transgen stamme TJ356, der udtrykker et DAF-16::GFP-fusionsprotein. Resultaterne viste, at efter 48 timers inkubation med 100 µg/mL GLE, steg den grønne fluorescensintensitet af DAF-16 i kernen signifikant sammenlignet med den i den ubehandlede gruppe (figur 5).

2.5. Fytokemisk karakterisering i GLE

LC-MS blev udført til profilering af fytokemikalierne i GLE, og dets resultater er præsenteret i figur6. De kromatografiske toppe blev identificeret ved at sammenligne MS-dataene med databaser baseret på søgningen af ​​m/z-værdier af molekylære iontoppe i positiv tilstand [M plus H]plus. Som følge heraf blev myricetin, coumestrin, chlorogensyre og hesperidin påvist som de vigtigste forbindelser (tabel4).

3. Diskussion

Planteekstrakter er en rig kilde til naturlige bioaktive forbindelser. Mange undersøgelser har evalueret planteekstrakter brugt i sydøstasiatiske lande, herunder Thailand, hvor disse ekstrakter er komponenter i folkemedicin [13,14]. I denne undersøgelse blev ekstrakterne af 20 spiselige planteblade fra Thailand screenet, og G. littorale blev udvalgt til yderligere undersøgelse, fordi den viste højt phenolindhold, flflavonoidindhold og radikalfjernende aktivitet. Adskillige undersøgelser har undersøgt forskellige arter af slægten Glochidion [15-19]; der er dog få undersøgelser vedrørende G. littorales funktionelle egenskaber og bestanddele. Vores data viste, at GLE beskyttede C. elegans mod H2O2-induceret oxidativt stress ved at reducere intracellulær ROS-akkumulering. Dette kan have været på grund af det høje indhold af phenoliske forbindelser såsom flavonoider, som er kendt for at have en stærk antioxidantaktivitet [20]. Disse resultater ligner dem opnået af Duangjan et al. (2019), som viste, at G. zeylanicum bladekstrakter kan beskytte C. elegans mod oxidativ stress [21]. Den insulin/insulin-lignende signalvej (IIS) regulerer vækst, stressrespons og lang levetid hos C. elegans [22,23]. Vi fandt ud af, at daf-16 null-mutant C. elegans behandlet med GLE var modtagelig for oxidativt stress. Dette resultat tyder på, at antioxidantvirkningen af ​​GLE til at reducere oxidativt stress i nematoder muligvis er involveret i ikke kun radikalfjernende aktivitet, men også reguleringen af ​​DAF-16-transkriptionsfaktoren.

De beskyttende virkninger af GLE mod MPP plus-induceret toksicitet i C. elegans blev undersøgt. DA-neuroner i nematoder optager MPP plus hovedsageligt via DA-transportører med høj affinitet, som på samme måde observeres hos pattedyr. Akkumuleringen af ​​MPP plus inde i neuronerne inaktiverer mitokondriekomplekset I i respirationskæden og inducerer celledød [24-27]. GLE-behandling viste sig at reducere dødeligheden i forbindelse med MPP plus-behandling signifikant hos vildtype-orme. IIS-vejen moduleres af insulinlignende peptider gennem DAF-2-receptoren i C. elegans [28]. Under normale forhold hæmmer IIS-vejen phosphoryleringen af ​​DAF-16 og forhindrer dens nukleare translokation. I daf-2 null-mutanter overlevede den GLE-behandlede gruppe længere end kontrolgruppen. I modsætning hertil blev der ikke observeret nogen forskel i overlevelse mellem kontrolgruppen og den GLE-behandlede gruppe, der indeholdt daf-16 null-mutantorme. Det er kendt, at nedreguleret DAF-2-signalering letter indtrængen af ​​DAF-16 i kernen, hvor det kan opregulere ekspressionen af ​​målgener og kontrollere stressresistens og lang levetid [29]. Dette kan forklare, hvorfor daf-2 mutante orme behandlet med GLE viste en relativt højere overlevelse. Desuden blev en øget nuklear akkumulering af DAF-16 i orme behandlet med GLE observeret under anvendelse af transgen TJ356 DAF-16::GFPC. elegans. Kumulativt indikerede disse resultater, at GLE kunne have udvist sine neurobeskyttende virkninger via aktivering af DAF-16.

4.3. Samlet phenolindhold Folin-Ciocalteu-metoden blev brugt til at bestemme det totale phenolindhold. Kort fortalt blev 11,4 µL af ekstraktet (1 mg/ml) blandet med 227,3 µL 2 procent (vægt/volumen) Na2CO3-opløsning, og blandingen fik derefter lov til at stå ved stuetemperatur i 2 minutter. Efter tilsætning af 11,4 µL 10 procent (v/v) Folin-Ciocalteu-reagens. Inkubationen i mørke blev udført i 30 min. Efterfølgende blev absorbansen målt ved 750 nm under anvendelse af en mikropladelæser (Nivo 3F Multimode Plate Reader, PerkinElmer, Waltham, MA, USA). Gallussyre blev brugt som standard for kalibreringskurven. Det totale phenolindhold blev udtrykt som gallussyreækvivalenter (mg gallussyreækvivalent/g planteekstrakt).

4.4. Totalt flavonoidindhold Den kolorimetriske aluminiumchloridmetode blev brugt til at måle det totale flavonoidindhold. Kort fortalt blev 25 µL af ekstraktet (2 mg/ml) blandet med 7,5 µL 5 procent (vægt/volumen) NaNO2-opløsning og 152,5 µL destilleret vand. Efter 6 minutter blev 15 µL 10% (vægt/volumen) AlCl3-opløsning tilsat og fik lov at stå i 5 minutter. Derefter blev 50 µL 1 M NaOH-opløsning tilsat til blandingen. Efterfølgende blev blandingen inkuberet i mørke i 15 minutter, og absorbansen blev målt ved 510 nm under anvendelse af en mikropladelæser. Det totale flavonoidindhold blev beregnet ved at generere en kalibreringskurve under anvendelse af quercetin som standard, og resultaterne blev udtrykt som quercetinækvivalent (mg quercetinækvivalent/g planteekstrakt).4.5. Frie radikaler-fjernende aktivitet Kapaciteten til at opfange frie radikaler blev vurderet ved hjælp af DPPH-assays [32]. Kort fortalt blev 100 µL af ekstraktet (1 mg/ml) blandet med 100 µL DPPH-opløsning. Efter 30 minutter blev absorbansen målt ved 517 nm under anvendelse af en mikropladelæser. Resultaterne blev udtrykt som en procentdel af inhibering af DPPH-radikalerne.

4.10. Nuklear lokalisering af DAF-16Transgen C. elegans TJ356, som udtrykker et DAF-16-GFP-fusionsprotein, blev brugt til at undersøge den intracellulære fordeling af DAF-16. L1 stadie nematoder blev behandlet med GLE i 48 timer ved 2{{30}} ◦C. Ormene blev derefter overført til en 2 procent agarosepude på et objektglas og bedøvet ved at tilsætte en dråbe (ca. 20 µL) 25 µM natriumazid til agarosepuden. Ekspressionen af ​​GFP blev undersøgt via fluorescensmikroskopi (EVOSflfl; Advanced Microscopy Group, Bothell, WA, USA). Den gennemsnitlige fluorescensintensitet af DAF-16 i kernerne blev analyseret ved hjælp af Image J-software (National Institutes of Health, Bethesda, MD, USA). 4.11. Fytokemisk profilering ved hjælp af LC-MS Bladekstraktet blev analyseret ved hjælp af LCMS -8040 (Shimadzu). Massespektre blev opsamlet over et område på m/z 50–1000 ved brug af Q3-scanningstilstanden. Opløsningen blev injiceret på en Inertsil ODS-3 (250 × 2,1 mm, 5 µm, GL Sciences, Tokyo, Japan) ved en kolonnetemperatur ved 40 ◦C under anvendelse af en gradient på (A) 0,1 procent myresyre og (B) ) acetonitril/vand (80/20) indeholdende 0,1 procent myresyre. Følgende gradient med en flowhastighed på 0,2 ml/min blev brugt: 0-100 procent B (0-45 min), 100 procent B (45-50 min) og 0 procent B (50-60 min). Forbindelser blev formodet identificeret ved at matche de eksperimentelle m/z-værdier med biblioteket af teoretiske beregnede m/z-værdier i databaser, herunder Human Metabolome Database og METLIN-databasen. 4.12. Statistisk analyse Data blev udtrykt som middelværdi ± standardafvigelse for hver gruppe. Den signifikante forskel mellem de to grupper blev vurderet ved hjælp af t-testen, hvorimod forskellen mellem tre og flere grupper blev vurderet ved hjælp af envejs ANOVA, efterfulgt af Tukeys post-hoc sammenligningstest. Statistisk signifikans blev sat til p < 0,001="" og="" p="">< 0,0001.="" for="" levetidsanalyser="" blev="" c.="" elegans="" overlevelse="" plottet="" ved="" hjælp="" af="" kaplan-meier="" overlevelseskurver="" og="" analyseret="" via="" log-rank="" tests="" ved="" hjælp="" af="" graphpad="" prism="" software="" (version="" 9.01;="" graphpad="" software,="" san="" diego,="" ca,="">

Abdel Fawaz Bagoudou 1, Yifeng Zheng 2, Masahiro Nakabayashi 2, Saroat Rawdkuen 3, Hyun-Young Park 4, Dhiraj A. Vattem 4,5, Kenji Sato 6, Soichiro Nakamura 1 og Shigeru Katayama 1,2,*

1 Graduate School of Medicine, Science and Technology, Shinshu University, 8304 Minamiminowa, Kamiina, Nagano 399-4598, Japan;

2Institute for Biomedical Sciences, Shinshu University, 8304 Minamiminowa, Kamiina, Nagano 399-4598, Japan;

3 School of Agro-Industry, Mae Fah Luang University, 333 Moo 1, Thasud, Muang, Chiang Rai 57100, Thailand;saroat@mfu.ac.th

4 Edison Biotechnology Institute, Konneker Research Laboratories, Ohio University, Athen, OH 45701, USA;

5 College of Health Sciences & Professions, Ohio University, Athen, OH 45701, USA

6 Graduate School of Agriculture, Kyoto University, Kyoto 606-8502, Japan;

Forfatterbidrag:

Forfatterbidrag: Conceptualization, SR, DAV og SK; undersøgelse, AFB, YZ, MN, SR, H.-YP, DAV og KS; skrivning — originalt udkast til forberedelse, AFB; skrivning — gennemgang og redigering, SK; supervision, SN Alle forfattere har læst og accepteret den offentliggjorte version af manuskriptet.
Finansiering: Denne forskning modtog ingen ekstern finansiering.
Udtalelse fra institutionelle bedømmelsesudvalg: Ikke relevant.
Erklæring om informeret samtykke: Ikke relevant.
Erklæring om datatilgængelighed: Dataene er tilgængelige af den tilsvarende forfatter efter rimelig anmodning.
Interessekonflikter: Forfatterne erklærer ingen interessekonflikter.
Prøvetilgængelighed: Prøver af forbindelserne er ikke tilgængelige fra forfatterne

Referencer

1 Pohl, F.; Lin, PKT Den potentielle brug af plantenaturprodukter og planteekstrakter med antioxidantegenskaber til forebyggelse/behandling af neurodegenerative sygdomme: in vitro, in vivo og kliniske forsøg. Molecules 2018, 23, 3283. [CrossRef] [PubMed]

2. Kim, GH; Kim, JE; Rhie, SJ; Yoon, S. Oxidativ stresss rolle i neurodegenerative sygdomme. Exp. Neurobiol. 2015, 24, 325-340. [CrossRef] [PubMed]

3. Lu, X.-l.; Yao, X.-l.; Liu, Z.; Zhang, H.; Li, W.; Li, Z.; Wang, G.-L.; Pang, J.; Lin, Y.; Xu, Z. Beskyttende virkninger af xyloketal B mod MPP plus-induceret neurotoksicitet i Caenorhabditis elegans og PC12-celler. Brain Res. 2010, 1332, 110-119. [CrossRef]

4. Trimmer, PA; Bennett, JP, Jr. Cybridmodellen for sporadisk Parkinsons sygdom. Exp. Neurol. 2009, 218, 320-325. [CrossRef]

5. Cheon, S.-M.; Jang, I.; Lee, MH; Kim, DK; Jeon, H.; Cha, DS Sorbus alnifolia beskytter dopaminerg neurodegeneration i Caenorhabditis elegans. Pharm. Biol. 2016, 55, 481-486. [CrossRef]

6. Schmidt, N.; Ferger, B. Neurokemiske fund i MPTP-modellen for Parkinsons sygdom. J. Neural Transm. 2001, 108, 1263-1282. [CrossRef] [PubMed]

7. Harrington, A.; Yacoubian, TA; Slone, SR; Caldwell, K.; Caldwell, G. Functional Analysis of VPS41-Mediated Neuroprotection in Caenorhabditis elegans and Mammalian Models of Parkinsons Disease. J. Neurosci. 2012, 32, 2142-2153. [CrossRef] [PubMed]

8. Fu, R.-H.; Harn, H.-J.; Liu, S.-P.; Chen, C.-S.; Chang, W.-L.; Chen, Y.-M.; Huang, J.-E.; Li, R.-J.; Tsai, S.-Y.; Hung, H.-S.; et al. n-butylidenphthalid Beskytter mod dopaminerg neurondegeneration og -synukleinakkumulation i Caenorhabditis elegans modeller for Parkinsons sygdom. PLOS ONE 2014, 9, e85305. [CrossRef]

9. Jadiya, P.; Khan, A.; Sammi, SR; Kaur, S.; Mir, SS; Nazir, A. Anti-Parkinsoniske virkninger af Bacopa monnieri: Indsigt fra transgene og farmakologiske Caenorhabditis elegans modeller af Parkinsons sygdom. Biochem. Biofys. Res. Commun. 2011, 413, 605-610. [CrossRef] 10. Andrade, JMDM; Fasolo, D. Polyphenol-antioxidanter fra naturlige kilder og bidrag til sundhedsfremme. I polyfenoler i menneskers sundhed og sygdom; Elsevier BV: Amsterdam, Holland, 2014; s. 253-265.

11. Hsu, A.-L.; Murphy, CT; Kenyon, C. Regulering af aldring og aldersrelateret sygdom af DAF-16 og Heat-Shock Factor. Science 2003, 300, 1142-1145. [CrossRef]

12. Henderson, ST; Johnson, TE daf-16 integrerer udviklingsmæssige og miljømæssige input til at mediere aldring i nematoden Caenorhabditis elegans. Curr. Biol. 2001, 11, 1975-1980. [CrossRef]

13. Hutadilok-Towatana, N.; Chaiyamutti, P.; Panthong, K.; Mahabusarakam, W.; Rukachaisirikul, V. Antioxidative og frie radikaler rensende aktiviteter af nogle planter, der bruges i thailandsk folkemedicin. Pharm. Biol. 2006, 44, 221-228. [CrossRef]

14. Stewart, P.; Boonsiri, P.; Puthong, S.; Rojpibulstit, P. Antioxidantaktivitet og ultrastrukturelle ændringer i mavekræftcellelinjer induceret af nordøstthailandske spiselige folkeplanteekstrakter. BMC komplement. Altern. Med. 2013, 13, 60. [CrossRef]

15. Hui, W.; Lee, W.; Ng, K.; Chan, C. Forekomsten af ​​triterpenoider og steroider i tre Glochidion-arter. Phytochemistry 1970, 9, 1099-1102. [CrossRef]

16. Takeda, Y.; Mima, C.; Masuda, T.; Hirata, E.; Takushi, A.; Otsuka, H. Glochidioboside, et glucosid af (7S,8R)-dihydrodeh ydrodiconiferyl alkohol fra blade af glochidia obovatum. Phytochemistry 1998, 49, 2137-2139. [CrossRef]

17. Zhang, X.; Chen, J.; Gao, K. Kemiske bestanddele fra Glochidion wrightii Benth. Biochem. Syst. Ecol. 2012, 45, 7-11. [CrossRef]

18. Tian, ​​J.-M.; Fu, X.-Y.; Zhang, Q.; Han, H.-P.; Gao, J.-M.; Hao, X.-J. Kemiske bestanddele fra Glochidion assamicum. Biochem. Syst. Ecol. 2013, 48, 288-292. [CrossRef]

19. Kongkachuichai, R.; Charoensiri, R.; Yakoh, K.; Kringkasemsee, A.; Insung, P. Næringsværdi og antioxidantindhold i indfødte grøntsager fra det sydlige Thailand. Food Chem. 2015, 173, 838-846. [CrossRef]

20. Pietta, P.-G. Flavonoider som antioxidanter. J. Nat. Prod. 2000, 63, 1035-1042. [CrossRef] [PubMed]

21. Duangjan, C.; Rangsinth, P.; Gu, X.; Zhang, S.; Wink, M.; Tencomnao, T. Glochidion zeylanicum bladekstrakter udviser levetidsforlængende og oxidativ stress modstandsegenskaber i Caenorhabditis elegans via DAF-16/FoxO og SKN-1/Nrf-2 signalveje. Phytomedicine 2019, 64, 153061. [CrossRef]

22. Jensen, VL; Gallo, M.; Riddle, DL Targets of DAF-16 involveret i Caenorhabditis elegans voksen levetid og dauer dannelse. Exp. Gerontol. 2006, 41, 922-927. [CrossRef] [PubMed]

23. Daitoku, H.; Fukamizu, A. FOXO-transskriptionsfaktorer i de regulatoriske netværk af lang levetid. J. Biochem. 2007, 141, 769-774. [CrossRef]

24. Lakso, M.; Vartiainen, S.; Moilanen, A.-M.; Sirviö, J.; Thomas, JH; Nass, R.; Blakely, RD; Wong, G. Dopaminergt neuronalt tab og motoriske underskud i Caenorhabditis elegans, der overudtrykker humant -synuclein. J. Neurochem. 2004, 86, 165-172. [CrossRef] [PubMed]

25. Nass, R.; Hall, DH; Miller, DM; Blakely, RD Neurotoxin-induceret degeneration af dopaminneuroner i Caenorhabditis elegans. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2002, 99, 3264-3269. [CrossRef]

26. Wang, Y.-M.; Pu, P.; Uanstændig. ATP-depletering er hovedårsagen til MPP plus induceret dopamin neuronal død og ormedødelighed i -synuclein transgene C. elegans. Neurosci. Tyr. 2007, 23, 329-335. [CrossRef]

27. Braungart, E.; Gerlach, M.; Riederer, P.; Baumeister, R.; Hoener, M. Caenorhabditis elegans MPP plus model for Parkinsons sygdom til screeninger med høj gennemstrømning af lægemidler. Neurodegener. Dis. 2004, 1, 175-183. [CrossRef]

28. Panowski, SH; Dillin, A. Signaler for ungdom: Endokrin regulering af aldring i Caenorhabditis elegans. Trends Endocrinol. Metab. 2009, 20, 259-264. [CrossRef]