Eksperimentel undersøgelse af beskyttende virkning af Cistanche-glykosider forbehandling på nyreiskæmi-reperfusionsskade

for flere oplysninger:ali.ma@wecistanche.com

Zhu Jun, Zhao Ximin

(Kirurgisk afdeling, Baoshan District Hospital of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine, Shanghai 201900)

【Abstrakt】Formål At etablere en genoplivningsmodel for hæmoragisk shock hos rotter og observere den beskyttende effekt afCistanchetotale glykosider (CTG) på nyreiskæmi-reperfusionsskade. Metoder SD-rotter blev tilfældigt opdelt i 3 grupper: simuleret operationsgruppe, forsøgsgruppe (chok-genoplivningsgruppe), CTG-behandlingsgruppe, 10 rotter i hver gruppe. Forsøgsgruppen og CTG-behandlingsgruppen etablerede nyreiskæmi-reperfusionsmodeller. Rotterne i behandlingsgruppen blev injiceret med CTG 400 mg/kg intraperitonealt, og forsøgsgruppen og den falske operationsgruppe blev injiceret med saltvand. Blodets myokardieindhold, urinstofnitrogenindholdet og cystatin C i hver gruppe blev detekteret for at bestemme nyrefunktionen, flowcytometrianalyse blev brugt til at detektere nyrecelleapoptosehastigheden; enzym-linked immunoassay (ELISA) blev brugt til at påvise X-kromosom-binding hos rotternyrevævsekspression af X-bundet inhibitor af apoptoseprotein (XIAP). Resultater Ved at sammenligne CTG-gruppen med forsøgsgruppen blev blod-Cr, BUN og Cystatin C signifikant reduceret (P<0.01), renal="" cell="" apoptosis="" was="" reduced=""><0.05), ctg="" can="" significantly="" increase="" the="" expression="" of="" xiap=""><0.05). conclusion="" the="" total="" glycosides="" of="">cistanchehave en beskyttende effekt på nyreiskæmi-reperfusionsskade hos rotter, hvilket kan være relateret til fremme af ekspressionen af ​​XIAP.

[Søgeord] nyre; iskæmi-reperfusionsskade; totale glycosider af cistanche; kromosombundet inhibitor af apoptoseprotein; apoptose; rotte

[Klassifikationsnummer for kinesisk bibliotek] R692 [Dokumentmærkningskode] A [Artikelnummer] 1008 -0392 (2015) 02-0037 -04

Click to Cistanche EKSTRAKTER PULVER til nyre

Iskæmi-reperfusion (I/R) skade er et almindeligt patofysiologisk fænomen af ​​nyreskade i processen med hæmoragisk shock, alvorlige traumer,nyretransplantation ognyretumorkirurgi. Undersøgelser har vist, at apoptose er en vigtig del af nyrefunktionsskader forårsaget af I/R-skade (1). X-linked inhibitor of apoptosis protein (XIAP) er en af ​​de hidtil stærkeste endogene apoptoseinhibitorer fundet (2). Der er få undersøgelser af den anti-apoptotiske effekt af XIAP i nyrevæv efter I/R-skade.Cistanchetotalglykosider (CTG) er en phenylethanoid totalglykosiderforbindelse ekstraheret fraCistanche, som har forskellige biologiske funktioner. Der er få undersøgelser af dets nyrebeskyttelse efter I/R-skade. . Denne undersøgelse etablerede en model for genoplivning af hæmoragisk shock hos rotter og etablerede en model for systemisk I/R-skade for at udforske den beskyttende effekt af totale glykosider af kødbrok pånyrefra I/R-skade og udforske dens mulige mekanisme.

1 Materialer og metoder

1.1 Dyr og gruppering

Der er 30 rene og sunde hanrotter leveret af Experimental Center of Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, der vejer (320 ± 30) g. Tilfældigt opdelt i 3 grupper: simuleret operationsgruppe, forsøgsgruppe (chok-genoplivningsgruppe), CTG-gruppe, hver med 10 rotter.

1.2 Vigtigste reagenser og instrumenter

De samlede glykosider af glutinøse ris (batchnummer: 20081516) blev købt fra Zhejiang Hangzhou Xinghui Tianli Pharmaceutical Co., Ltd.; natriumpentobarbital, Hoechst 33258, og propionyliodid blev købt fra Sigma, USA; muse X-kromosom-koblet apoptoseinhibitor Protein Assay Kit (XIAP) og ELISA Kit blev købt fra Shanghai Kemin Biotechnology Co., Ltd.; mikropladelæser blev købt fra Thermo Company, USA; multi-parameter fysiologisk detektor blev købt fra Nihon Kohden Company, Japan; flowcytometer BDFACSAria blev købt fra Becton, USA - Dickinson Company; 24G trokar blev købt fra Shandong Jierui Medical Devices Company.

1.3 Eksperimentel metode

1.3.1 Fremstilling af dyremodel SD-rotter blev fastet 12 timer før eksperimentet og bedøvet ved intraperitoneal injektion af natriumpentobarbital (50 mg/kg).

Rotten blev fikseret i liggende stilling, et 3 cm snit blev lavet i venstre nedre del af maven, lårbensarterien blev adskilt, en 24G trokar blev indsat, og en multiparameter fysiologisk detektor blev tilsluttet. Det gennemsnitlige blodtryk for rotten blev målt som (113 ± 15) mmHg, 20 ml sprøjteheparin. Blodtrykket blev sænket til 40 mmHg (l mmHg=0. 133 kPa) med en kemisk forbindelse trevejsanordning. Chokket blev anset for at være startet, og blodtrykket blev holdt i 90 min. Blodudladningsvolumenet var (13 ± 3) ml, og derefter tager det autologe blod i sprøjten. Langsom reinfusion tager omkring 30 minutter, og blodtrykket vender tilbage til mere end 90 procent af grundværdien, og genoplivningen anses for vellykket (3). . Trokaren blev trukket ud, lårbensarterien blev ligeret, og snittet blev syet. Efter at rotterne var vågne, blev de returneret til buret til observation, og de kunne frit spise og drikke. 24 timer efter genoplivning blev der anvendt intraperitoneal injektion af natriumpentobarbital (50 mg/kg) til anæstesi, laparotomi, 5 ml blod blev opsamlet fra inferior vena cava, rotterne blev straks aflivet, og venstre og højre nyre blev taget ud for brug.

1.3.2 Medicineringsmetoder CTG-behandlingsgruppen blev givet CTG 2 timer før blodudladningen af ​​rotterne og injiceret i bughulen i en dosis på 400 mg/kg. Forsøgsgruppen blev intraperitonealt injiceret med 3 ml normalt saltvand 2 timer før blodudtagning; fupoperationsgruppen gennemgik kun anæstesi, laparotomi og adskillelse af lårbensarterien, placering af en trokar og sutur af snittet, men ingen blødning eller genoplivning. Resten var de samme som forsøgsgruppen.

1. 4 detektionsindikatorer og metoder

1.4.1 Bestemmelse af indhold af BUN, Cr og cystatin C i blodet Cystatin C er en endogen markør for ændringer i glomerulær filtrationshastighed. Når nyrefunktionen er nedsat, falder glomerulær filtrationshastighed, koncentrationen af ​​cystatin C i blodet kan stige 10 gange, og den diagnostiske nøjagtighed af cystatin C er signifikant bedre end for serummuskelforgiftning. Indholdet af BUN, Cr og Cystatin C i blodet blev sendt til laboratoriet på vores hospital til bestemmelse.

1.4.2 Bestemmelse af celleapoptosehastighed Flowcytometri blev brugt til at detektere apoptosehastigheden af ​​nyreceller. Tag nyren og hak den med et blad, tilsæt lidt PBS og overfør det i et reagensglas. Tilsæt 0,3 procent trypsin til fordøjelse i et 37 P vandbad, inkuber i 20 min., når indholdet i reagensglasset bliver grumset, tilsæt 2 gange PBS for at stoppe fordøjelsen, filtrer med et 300 mesh nylonnet, kasser urenheder, og centrifuger i en lavtemperaturcentrifuge. Centrifuger radius 8 cm, 12, 000 r/min, centrifuger i 5 minutter, kassér supernatanten, juster cellekoncentrationen til 1 ~ 1,5 x 106/ml, tag 0,4 ml af ovennævnte cellesuspension og tilsæt 1,2 ml Hoechst 33258 (10 pil/ml), mørk 37 t: inkuber i vandbad, dæk reagensglasset, skyl med PBS efter 5 min, centrifugeradius 8 cm, 12 000 r/min, centrifuger i 5 min. , kasser supernatanten, Skyl igen på samme måde. Tilsæt 0,4 ml PI, farvet i 5 minutter, og påvis procentdelen af ​​normale, nekrotiske og apoptotiske celler i nyren. Ifølge affiniteten af ​​de to farvestoffer af forskellige celletyper er det kendt, at kun PI-farvede celler er døde celler, kun Hoechst 33258-farvede celler er apoptotiske celler, og ingen af ​​dem er farvede normale levende celler.

1.4.3 Enzym-linked immunoassay (ELISA) til påvisning af XIAP-ekspression i rottenyrevæv. Tag hver gruppe nyrer og behandl friskt nyrevæv med vævslysat. Centrifuger i en lavtemperaturcentrifuge ved 12 000 r/min i 5 min. Tag supernatanten og betjen i henhold til instruktionerne i XIAP ELISA Kit-sættet. Shanghai Jiaotong University Fenghe Technology Co., Ltd. er ansvarlig for testning.

1.5 Statistisk behandling

De eksperimentelle data for hver gruppe er repræsenteret af Yuan soil s og SPSS 17. 0 software bruges til statistisk analyse. P<0.05 indicates="" that="" the="" difference="" is="" statistically="">

Cistanche kan forbedre den seksuelle funktion

2 resultater

Nyrefunktionsindekser Cr, BUN og Cystatin C værdier var statistisk signifikante (F<0.01); the="" experimental="" group="" was="" significantly="" higher="" than="" the="" sham="" operation="" group="" (p=""><0.01), indicating="" that="" the="" rat="" the="" kidney="" i/r="" model="" was="" successfully="" prepared;="" compared="" with="" the="" experimental="" group,="" the="" values="" of="" cr,="" bun="" and="" cystatin="" c="" in="" the="" ctg="" group="" were="" significantly="" reduced=""><0.01). renal="" cell="" apoptosis="" rate:="" in="" the="" sham-operated="" group,="" only="" a="" few="" cells="" in="" the="" kidney="" tissue="" experienced="" apoptosis.="" apoptotic="" cells="" accounted="" for="" 0.42%="" ±="" 0.08%,="" and="" the="" experimental="" group="" had="" a="" significant="" increase="" in="" apoptosis,="" accounting="" for="" 18.="" 22%="" ±="" 5.="" 32%="" (p=""><0.01). compared="" with="" the="" experimental="" group,="" the="" ctg="" group="" showed="" apoptosis="" the="" number="" decreased="" to="" 12.71%="" ±="" 3.81%="">< 0.01).="" the="" effect="" of="" ctg="" on="" the="" expression="" of="" xiap="" in="" i/r="" injured="" renal="" tissue:="" the="" sham="" operation="" group="" only="" had="" weak="" xiap="" expression,="" while="" the="" experimental="" group="" xiap="" expression="" increased="" significantly,="">< 0.01).="" compared="" with="" the="" experimental="" group,="" the="" ctg="" group="" can="" significantly="" increase="" the="" expression="" of="" xiap="" (f=""><0.05), see="" table="">

Tabel 1 Nyrefunktionsindekser Cr, BUN og Cystatin-C værdier for rotter i hver gruppe Tab. 1 Nyrefunktionsindekser i tre grupper

Sammenlignet med den falske operationsgruppe, *P<0.01; compared="" with="" the="" experimental="" group,=""><0.05><>

Mekanismen for iskæmi-reperfusion nyreskade er meget kompliceret. Det er en patologisk proces, der forekommer på mange måder under påvirkning af forskellige faktorer, såsom calciumionoverbelastning, lipidperoxidationsskader, celleapoptose og nekrose, blandt hvilke caspaseafhængig celleapoptose er en af ​​de vigtigste former for renale tubulære epitelceller skade forårsaget af I/R nyreskade (4). Familien af ​​inhibitorer af apoptoseprotein (IAP) er den eneste endogene caspasehæmmer, der hidtil er fundet i pattedyrsceller, hvilket effektivt kan forhindre forekomsten af ​​celleapoptose. XIAP er det medlem med den stærkeste hæmmende effekt på caspase i IAP-familien. Det kan hæmme celleapoptose forårsaget af en række patologiske stimuli og have en beskyttende effekt på beskadigede organer (5).

På nuværende tidspunkt er de fleste af metoderne til etablering af dyremodeller for nyre-I/R-skade at fjerne den ene nyre og klemme den anden side af nyrepedikelen eller nyrearterien ⑹ for at simulere tilstanden af ​​nyretransplantation. Denne undersøgelse anvender en hemorragisk shock/genoplivningsmodel, som er tættere på den patofysiologiske proces med systemisk iskæmi-reperfusion, der opstår ved klinisk traumatisk shock. I dette eksperiment er BUN-, Cr- og cystatin C-niveauerne i blodet hos SD-rotter. Signifikant forbedring, alvorligt nedsat nyrefunktion, er en ideel dyremodel til at studere I/R-nyreskade.

CTG er en vigtig medicinsk ingrediens i traditionel kinesisk medicin kødpigepasta. Auberginepasta, som er varm af natur, sød og salt, vender tilbage til nyre- og tyktarmsmeridianen og var oprindeligt indeholdt i Shennongs Materia Medica. "Ben Sutra": Vigtigste fem veer og syv skader, nærer midten, nærer de fem indre organer, styrker yin, nærer essens og qi;Cistanchehar været brugt i mit land i to tusinde år. Den rangerer som nr. 1 i styrkeforøgende formler tidligere og rangerer nr. 2 i nærende formler efter ginseng. Det har undersøgelser vistCistanchekanforbedre den seksuelle funktion, regulere neuroendokrine, ogforbedre immunfunktionen. , Antioxidanter, fremme materiale metabolisme, beskytte iskæmisk myokardium og andre funktioner. Som den vigtigste medicinske ingrediens i kødfamiliepuré har CTG mange funktioner. Forskning i cerebral iskæmi-reperfusionsmodeller viste, at CTG kan reducere de excitatoriske aminosyrer i hjernevævet efter iskæmi-reperfusion og beskytte hjernevævet hos SD-rotter (7). CTG har enantioxidant virkningpå musevæv og har en vis beskyttende effekt på akut cerebral hypoxi hos mus og hjertemuskelskader hos mus (9). CTG kan markant forbedre neuroadfærden afParkinsonsmodellere mus og hæmme faldet i antallet af dopaminneuroner i substantia nigra (9). Ved at øge aktiviteten af ​​frie radikaler, der fjerner enzymer, forhindre lipidperoxidation, hæmme aflejringen af ​​B-amyloid peptid i hjernen og hæmme hjernecelleapoptose, forbedrer CTG signifikant indlæringen afAlzheimers sygdommus forårsaget af B-amyloid peptid Hukommelsesevne w. Denne undersøgelse viste, at efter påføring af CTG-forbehandling faldt indholdet af BUN, Cr og cystatin C i blodet i rotter signifikant, og nyreskaden blev reduceret. CTG øgede det apoptose-hæmmende protein XIAP i I/R-skadet nyrevæv og blokerede celleapoptose. Forekomsten af ​​dødsfald har en beskyttende effekt på skaden på nyren.