Ethanolisk Bukkehornsekstrakt: Dens molekylære mekanismer mod hudældning og de forbedrede funktioner ved nanoindkapsling 2

Venligst kontaktoscar.xiao@wecistanche.comfor mere information

2.5. Effekt af LNF og Bukkehornsekstrakt på cellelevedygtighed og kollagenproduktion i humane dermale fibroblastceller

For at undersøge cytotoksiciteten af ​​formuleret LNF blev celler behandlet med blind-, LNF- og bukkehornsekstrakter ved {{0}} ug/mL (dobbelt fortynding) i 24 timer. Cellelevedygtighed blev målt under anvendelse af et MTT-assay. Som vist i figur 6a faldt cellelevedygtigheden i ekstraktbehandlede celler, hvorimod ingen effekt blev observeret i blanke og LNF-behandlede celler. Dataene indikerede, at LNF viste lavere toksicitet end ekstrakt. Vi undersøgte yderligere LNF's evne til induktion af kollagenproduktion i humane dermale fibroblastceller. Celler blev behandlet med 7 ug/mL ekstrakt og 1{{20}}0 ug/mL LNF (7 ug/mL ekstraktækvivalens), sammen med blindpartikler som kontrol, for 7 og 14 dage. Som vist i figur 6b blev mængden af ​​farvet kollagen for behandling med LNF øget med 30 procent og 50 procent efter henholdsvis 7 og 14 dage sammenlignet med ekstraktbehandling. I figur 2a forstærkede den formulerede LNF desuden anti-collagenase-aktiviteten, da IC5o var signifikant reduceret til 0,21±0,03 mg/ml sammenlignet med bukkehornsekstrakt (0,57±0,02 mg/ml). Disse resultater viste, at formuleringen af ​​LNF kunne forstærke en induktion af kollagenproduktion i humane dermale fibroblastceller og øge anti-collagenaseaktiviteten af ​​bukkehornsekstrakt. Det er muligt, at nano-formuleringen af ​​bukkehornsekstrakt forbedrer dets styrke som en aktiv ingrediens i anti-aging produkter.

2.6. Rolle af formuleret LNF på MMP1, MMP9, IL-6 og IL-8 hæmning efter UV-eksponering

Vi undersøgte derefter nogle mulige mekanismer af LNF på anti-aldringsaktivitet. UV-eksponering er en af ​​de vigtigste regulatorer af hudens aldring, da det er blevet rapporteret at inducere ekspressionen af ​​visse medlemmer af matrix metalloproteinase (MP) familien, som forårsager kollagen kollaps, herunder MMP1, MMP3 og MMP9 [34,35] . Vi observerede, at UV-eksponering var meget toksisk for co-dyrkede hud-cceller (figur 7a) og øgede produktionen af ​​MMP1- og MMP9-cytokiner (figur 7b). Derudover var behandlingerne af bukkehornsekstrakt og formuleret LNF i stand til signifikant at reducere sekretionerne af MMP1 og MP9 sammenlignet med kontrolceller efter UV-bestråling. Disse resultater var i overensstemmelse med behandlingen af ​​rutin og resveratrol som en anti-aldringskontrol. Især var reduktionen af ​​MMP1- og MMP9-ekspressioner i LNF-behandlede celler signifikant lavere end i ekstraktbehandlingen. Derfor kunne LNF reducere sekretionerne af MPI og MMP9 ved UV-eksponering og efterfølgende forhindre foto-induceret hudældning.

Klik venligst her for at vide mere

Derudover kan eksponeringen af ​​UVR på menneskelig hud også mediere induktion af inflammation og pro-inflammatorisk cytokinaktivering, såsom TNF- og interleukiner, herunder IL-1,IL-2, IL{{4} },og IL-8 [36]. Vi undersøgte derefter funktionen af ​​LNF på inhiberingen af ​​UV-stimuleret inflammatorisk cytokinproduktion, herunder IL-6 og IL-8. I figur 7c observerede vi, at UV-bestråling signifikant forbedrede produktionen af ​​IL{{ 11}} og IL-8 cytokiner i co-dyrkede hudceller. Et signifikant fald i IL-6 og IL-8 udtryk blev observeret med bukkehornsekstraktbehandling sammenlignet med kontrollen. Interessant nok udviste behandlingen af ​​bukkehornsekstrakt betydeligt højere IL-6- og IL-8-hæmninger sammenlignet med rutin, hvor disse hæmmende aktiviteter lignede resveratrol-behandlede grupper. Navnlig var udtryk for IL-6 og IL-8 i LNF-behandlede celler signifikant lavere sammenlignet med bukkehornsekstraktgruppen efter UV-eksponering. Tilsammen indikerede disse resultater, at LNF potentielt kunne hæmme UV-medieret IL-6- og IL-8-produktion og efterfølgende forhindre fotostimuleret hudbetændelse og hudældning.Som en konsekvens tyder disse resultater på, at det ethanoliske ekstrakt af bukkehorn og dets nano-formulering potentielt kan bruges som aktive ingredienser til forebyggelse af aldring.

3. Diskussion

Bukkehornsekstrakt har vist sig at have antioxidante, antiradikale og anti-inflammatoriske aktiviteter i flere undersøgelser [29,37], selvom dets anti-rynkeegenskab stadig ikke er blevet udnyttet. Denne forskning var den første til at identificere en anti-aldringsaktivitet af bukkehornsekstrakt ved hjælp af in vitro kollagenasehæmmende assay. Tidligere undersøgelser har foreslået brugen af ​​planteekstrakter med anti-collagenase aktivitet som en aktiv ingrediens i kosmetiske produkter såsom druepresserekstrakt [38], grøn teekstrakt [39] og svampeekstrakt [40]. Desuden er virkningen af ​​bukkehornsekstrakt på kollagenproduktion i humane dermale fibroblastceller aldrig blevet rapporteret. Tamara et al. (2006) har demonstreret effekten af ​​flavonoider på kollagensyntese i humane fibroblaster ved hjælp af rutin, som en aktiv forbindelse af bukkehornsekstrakt, der hjælper med at øge kollagen [41]. Denne undersøgelse af bukkehorn viste dens lovende anti-aldringsevne og repræsenterede rutin som en biologisk markør.

Rutin (3),4',5.7-tetrahydroxy-flavon-3-rutinosid) blev brugt i denne undersøgelse, da det er et flavonolglycosid, der er blevet rapporteret i flere planter, herunder Fagopyrum esculentum Moench, Ruta graveolens L, Sophora japonica L., Eucalyptus spp. [37l, og bukkehorn[17] Rutin besidder antioxidant, cytobeskyttende, anticarcinogen, neurobeskyttende og hjertebeskyttende aktiviteter, hvilket foreslår dets anvendelse til forebyggelse af aldring og aldringsrelaterede sygdomme. Vores resultater viste, at det tilberedte ekstrakt udviste et højt indhold af rutin, som næppe blev fundet eller påvist som en komponent i bukkehornsekstrakt i andre undersøgelser. De fleste andre undersøgelser har rapporteret trigonellin som en væsentlig kemisk bestanddel af bukkehornsekstrakt [18,37,38,42-47].

Selv bukkehornsekstrakt har en potentiel aktivitet som anti-aldringsmiddel. Dens farve og stabilitet er stadig en udfordring for denne applikation. Nanoindkapsling er blevet rapporteret som en specifik teknologi, der er i stand til at stabilisere, maskere lugten, forbedre vandopløseligheden, kontrollere frigivelsen af ​​biologiske forbindelser [48,49] og forbedre det fysiske udseende af naturlige produkter. Liponisom er blevet anvendt i denne undersøgelse på grund af dets unikke egenskaber, som er sammensat af hydrofile og hydrofobe dele, som kan indkapsle en lang række stoffer med forskellige opløseligheder [50]. Vi formulerede bukkehornsekstrakt indkapslede liposomer (LNF), som er en hybridbærer, der omfatter liposomer og niosomeregenskaber. Hybridkomponenterne i den udviklede LNF blev bekræftet af smeltetemperaturen ved anvendelse af DSC, hvilket afspejler både de termiske egenskaber af liposomer og niosomer.

cistanche kan anti-aging

Stratum corneum er et ydre hudlag, der fungerer som en effektiv barriere mod skadelige stoffer ved at begrænse deres transport gennem huden. Imidlertid har brugen af ​​nanobærere vist sig at forbedre transdermal levering ved at øge indtrængen af ​​lægemidler eller stoffer gennem denne barriere[51]. For at undersøge styrken af ​​LNF ved transdermal levering, er ex vivo porcin hudpenetration blevet anvendt, da dens anatomiske egenskaber for det meste ligner dem for menneskelig hud, hvad angår hudtykkelse, follikulær struktur og hårtæthed [52]. Vores resultater viser, at permeabiliteten af ​​LNF var større og dybere end bukkehornsekstrakt og rutin, og frigivelsesprofilen af ​​LNF havde en langsommere frigivelse end bukkehornsekstrakt, hvilket tyder på, at den formulerede LNF var mærkbart overlegen i forhold til ekstrakt ved hudpenetrering. Derudover øgede den formulerede LNF anti-collagenase-aktivitet, da IC-A var signifikant reduceret til 0.205±0.03mg/ml sammenlignet med bukkehorn ekstrakt (0,567±0,02 mg/ml). Disse resultater viste, at formuleringen af ​​LNF kunne forstærke en induktion af kollagenproduktion i humane dermale fibroblastceller og øge anti-collagenaseaktiviteten af ​​bukkehornsekstrakt. Nano-formulering af bukkehornsekstrakt hjælper potentielt med at forbedre dets styrke ved at bruge det som en aktiv ingrediens til forebyggelse af aldring.

Eksponering for UV-stråling er hovedfaktoren for ydre hudældning, kendt som for tidlig aldring eller fotoældning [53.54]. Strålingen forårsager aktivering af celleoverfladereceptorer af hudkeratinocytter og fibroblaster, hvilket fører til en induktion af dermale ekstracellulære matrixekspressioner, især matrixmetalloproteinaser-familien (MP'er). Det er blevet påvist, at kronisk eksponering for lave doser af UVA forårsager en opregulering af mRNA-niveauer af kollagenase-1 (MMP1),stromelysin-1 (MMP3) og gelatinase A (MMP2)[55]. Som en konsekvens heraf opstår nedbrydningen af ​​hudens kollagenelastiske fibre såvel som en nedlukning af ny kollagensyntese. Dette fænomen påvirker hudens integritet, elasticitet og strukturer efter deregulering af hudens beskyttende funktioner, hvilket er årsag til rynkedannelse og tegn på hudens aldring [54,56]. Derudover medierer eksponeringen af ​​UVR på menneskelig hud et udtryk for TNF-alfa, som er en vigtig regulator af inflammatorisk kaskade i huden. UV-bestråling initierer også aktiveringen af ​​både inflammation og pro-inflammatoriske cytokinsekretioner, såsom interleukin-2 (IL-2) og interleukin-6 (1L-6) [36] . Som et resultat har denne UVR-inducerede inflammatoriske respons en vigtig rolle i induktionen af ​​brændt hud med tegn på rødme, irritation og erytem [35.59].

Derfor, for at forhindre årsagen til for tidlig aldring, ville fundet af nogle nye aktive midler med disse forebyggende funktioner være ideelt. Vores resultater viste, at formuleringen af ​​LNF kunne forstærke en induktion af kollagenproduktion i humane dermale fibroblastceller, kunne reducere sekretionerne af MP1, MP9, IL-6 og IL-8 ved UV-eksponering og kunne forbedre anti-collagenase-aktiviteten af ​​bukkehornsekstrakt. Derfor kan et ethanolisk bukkehornekstrakt og dets nano-formulering være af potentiel brug som en ny aktiv ingrediens i kosmetiske produkter, og denne nanoindkapsling er i stand til at forbedre funktionen og aktiviteten af ​​bukkehornsekstrakt som et anti-aldringsmiddel. 4. Materialer og metoder

4.1.Plantematerialer og kemiske reagenser

Fenugreek seed powder was received from Herbal Acharn'sHome Co.,Ltd. (Bangkok, Thailand). Rutin trihydrate (>98 procent renhed), tricinbuffer, kollagenase fra clostridium histolyticum og FALGPA (N-[3(2-furyl) acryl)-Leu-Gly-Pro-Ala), direkte rød 80, picrinsyre og dimethylsulfoxid blev købt fra Sigma-Aldrich (St.Louis, MO, USA) Acetonitril, ethylacetat, absolut ethanol, myresyre, natriumdehydratphosphat, dinatriumhydrogenphosphat, saltsyre og natriumhydroxid blev købt fra Carlo Erba (Emmendingen, Tyskland). Ethanol af kommerciel kvalitet blev købt fra Italmar Co., Ltd. (Bangkok, Thailand). Kolesterol blev købt fra Cosmeplus Co., Ltd. (Bangkok, Thailand). Propylenglycol og opløsningsmiddelblanding blev købt fra S.Tong Chemicals Co,Ltd. (Nonthaburi, Thailand). Sorbitan-oleat blev købt fra Croda Co., Ltd. (Bangkok, Thailand). Phospholipid (Phospholipon 90G) blev købt fra Cargill Siam Ltd. (Bangkok, Thailand). Tocopherolacetat blev købt fra Namsiang Co, Ltd. (Bangkok, Thailand). Konserveringsmidlet blev købt fra Forecus Co., Ltd. (Bangkok, Thailand). Paraformaldehyd blev købt fra Himadia Laboratories (Mumbai, Indien) og 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazoliumbromid blev købt fra Calbiochem (Burlington, MA, USA).

4.2.Udtrækning

Bukkehornsfrøpulver (500 g) blev udblødt med 95 procent ethanol (1:5) i 3 dage. Ekstraktionen blev gentaget tre gange (3 x 2500 ml). Hele ekstraktopløsningen blev filtreret med ethanol inddampet under 100 mbar ved 40 grader under anvendelse af en rotationsfordamper (Heidolph, Schwabach, Tyskland). Den opnåede ekstrakt var den olieagtige gulbrune pasta med 5 % udbytte (vægt/vægt), og den blev holdt ved 4 grader indtil brug.

4.3. UHPLC-validering og identifikation af rutin i Bukkehornsekstrakt

Rutintrihydrat, som en standardmarkør, blev brugt til at analysere bukkehornsekstrakt. UHPLC-metoden blev udviklet og valideret med hensyn til linearitet, nøjagtighed, præcision og følsomhed[31,32] af et Shimadzu LC-30 AD UHPLC-system omfattende en diodearraydetektor SPD-M20A og en autosampler SIL-30AC. Metoden brugte en SUPLECO Titan C18-søjle (5 cm ×2,1 mm, 1,9 um, SUPLECO, Burlington, VT, USA) ved 30 grader og detekterede en bølgelængde på 26{{ 19}} nm. Den mobile fase blev tilpasset fra Kenny et al. [45]. Kort fortalt, 0.05 procent v/v myresyreopløsning i ultrarent vand(A) og 0,05 procent v/v myresyre i acetonitril (B) blev fremstillet med et flow på 0,25 ml/min i gradienttilstand: startbetingelsen var 10 procent B i 1,0 min., øget til 75 procent B i 3,5 min., nedsat til 10 procent B i 0,75 min. og holdt i 0,25 min.

4.4. Kollagenase-assay

Et collagenase-assay blev udført for at bestemme anti-collagenase-aktivitet [60]. Blandingsopløsningen, der indeholdt 25 μL 50 mM tricinbufferopløsning (pH7,5), 25 μL af 2 enheder/ml collagenase (clostridium histolyticum type IA) og 25 μL af prøven, blev forberedt og inkuberet ved stuetemperatur i 15 min. For at starte reaktionen blev 10 uL af det syntetiske substrat og 2mM N-[3-(2-Furyl)acryloyl-Leu-Gly-Pro-Ala(FALGPA) tilsat til blandingsopløsningen og inkuberet i 20 min. Ændringen i absorbans af hver supernatant blev målt ved 340 nm (Synergy H1 mikropladelæser), og ICso-værdierne blev beregnet ved at plotte en lineær regressionskurve, der viser prøvekoncentrationer på x-aksen og procentvis hæmning på y-aksen. Den procentvise hæmning blev beregnet ved hjælp af følgende ligning:

4.5.Cellekultur

Humane dermale fibroblastceller blev købt fra American Type Culture Collection: ATCC (PCS-201-010), og immortaliserede humane keratinocytter (HaCaT) blev købt fra Cell Lines Service, Tyskland (kat. nr. 300493). Celler blev dyrket i Dulbeccos modificerede Eagles medier (DMEM) (Gibco, UK) suppleret med 10 procent FBS (Gibco, UK), 1 procent penicillin (100 enheder/mL) og streptomycin (100 ug/ml) (Gibco, St. Louis) , MO, USA). Celler blev inkuberet ved 37 grader under et miljø med 5 procent kuldioxid.

4.6. Kollagenindhold og Picrosirius rødfarvning

Humane dermale fibroblastceller blev podet ved 2,5 × 1 04 celler/brønd i 48-brøndsplader og inkuberet i 24 timer. Cellerne blev derefter behandlet med forskellige koncentrationer af liponio-som uden ekstrakter (angivet som blank), liponiosom-indkapslende bukkehornsekstrakt (LNF) og bukkehornekstrakt i 7 og 14 dage med 005 procent DMSO brugt som vehikelkontrol. Medierne blev skiftet hver 2. dag. Cellerne blev derefter vasket med PBS og fikseret med 100 µl 4 procent PFA i 10 min. Celler blev vasket med PBS (to gange) og farvet med 100 µl 0,1 procent direkte rød 80 opløsning i 10 min. Efter farvning blev 0,01 NHC1 i 70% ethanol tilsat for at vaske det overskydende farvestof. Farvet kollagen blev opløst med 10 uL 0,5 N NaOH, og absorbansen blev målt ved 540 nm under anvendelse af en mikropladelæser (Synergy H1 mikropladelæser). Procentdelen af ​​kollagenindhold blev beregnet ved hjælp af følgende ligning:

4.7. Cellelevedygtighedsanalyse

Humane dermale fibroblastceller blev podet ved 2 x 104 celler/brønd i 96-brøndsplader og inkuberet i 24 timer. Efter inkubation blev forskellige koncentrationer (0-100 ug/ml) af liposomerne uden ekstrakter (blank), LNF og bukkehornsekstrakt tilsat og dyrket i 24 timer. Derefter blev 100 μL MTT (1 mg/mL) tilsat til hver brønd og inkuberet i 4 timer. DMSO blev tilsat for at opløse formazanproduktet. Absorbansen blev målt ved 570 nm under anvendelse af en mikropladelæser (Synergy Hl mikropladelæser). Procentdelen af ​​cellelevedygtighed blev beregnet ved hjælp af følgende ligning:

4.8.Liponiosomformulering

Præ-emulgering efter homogenisering blev anvendt til liposomformulering. En blanding af phospholipid og emulgator blev brugt til at danne et sfærisk lipid-dobbeltlag, og kolesterol blev brugt til at øge stivheden af ​​partikler [15]. Kort fortalt blev sojabønnelecithin, kolesterol og emulgator dispergeret i propylenglycol og opvarmet til 70-80 grad (oliefase), som vist i tabel 2. Bukkehornsekstrakt blev opløst i propylenglycol/vand (vandfase) og opvarmet i samme vandbad. Den vandige opløsning af ekstraktet blev tilsat kontinuerligt til lipidkomponenter og homogeniseret ved 8000-100 rpm i 5-10 min under anvendelse af højhastighedsomrøring (Heidolph Silent Crusher M, Kenilworth, N, USA). Blandingen blev afkølet. til 50 grader, og tocopherolacetat blev tilsat og homogeniseret i yderligere 10 min. for at opnå LNF. Morfologien af ​​LNF blev observeret ved transmissionselektronmikroskopi (TEM, JEOL, Peabody, MA, USA), med den hydrodynamiske størrelse, polydispersitetsindeks Pdl og zeta-potentiale undersøgt ved hjælp af dynamisk lysspredning (DLS, Nanosizer ZS, Malvern Instruments, Worcestershire, Storbritannien). Bekræftelsen af ​​liposomsmeltende adfærd blev undersøgt ved hjælp af differentiel scanningskalorimetri (DSC,Mettler Toledo DSC1). Viskositeten af ​​prøven blev målt med et digitalt Brookfield-viskosimeter (model HBDV-IIIU CP). Kort fortalt blev 0,5 g prøver brugt, og viskositeten blev undersøgt ved hjælp af en CP-40-spindel med den kontrollerede hastighed ved 0,5 rpm i 20 minutter ved omgivelsestemperaturen.

For at evaluere stabiliteten af ​​LNF blev partiklerne holdt ved 4 grader, 25 grader og 40 grader i 3 måneder, og ændringerne i partikelstørrelse og morfologi blev undersøgt.

Liposom- og noisomindkapslingsbukkehornekstrakt (LF og NF) blev formuleret ved anvendelse af en lignende metode som LNF. LF blev fremstillet uden tilsætning af sorbitan-oleat til oliefasen, hvorimod niosom (NF) blev fremstillet uden tilsætning af phospholipidkomponenten. Deres fysisk-kemiske karakteriseringer blev rapporteret i den supplerende tabel S1.

4.9. Procentandele af indkapslingseffektivitet og bioaktiv belastning

Indkapslingseffektivitet (procent EE) og bioaktiv belastning (procent BL) af LNF blev beregnet ved at bestemme mængden af ​​indkapslet lægemiddel under anvendelse af en ultrafiltreringsteknik. Mængden af ​​rutin blev brugt som standardmarkør. Efter at 20 mg/ml LNF var opløst i DI-vand, blev det centrifugeret ved 80,000 rpm i 4 timer. Supernatanten blev opsamlet, og derefter blev den uindkapslede rutin evalueret ved hjælp af en ultrahøjtydende væskekromatografiteknik (UHPLC)[61]. Procentdelen EE og procent BL blev beregnet ved følgende ligninger:

4.10.Franz Diffusionscelle

En in vitro permeabel undersøgelse af 7mg/ml bukkehornsekstrakt og LNF blev undersøgt i et Franz diffusionscellesystem [62]. Den syntetiske membran (Biomax 500 kDa ultrafiltreringsskive,Merck, MA, USA) blev placeret mellem en donor og et receptorrum. Phosphatbuffer saltvand (PBS) med en pH på 5,5 blev omrørt ved 50 rpm (37 grader) og anvendt som et receptormedium. Bukkehornsekstrakt og LNF blev påført membranen i donorcellehætten. Prøver blev permeeret gennem membranen og opsamlet fra receptorrummet ved 0,2,4,6,8,12 og 24 timer. Den kumulative permeerede rutin blev evalueret og beregnet ved UHPLC-teknikken.

4.11.Svinehudpermeabilisering

Gennemtrængning af LNF gennem svinehud blev visualiseret ved billeddannende massemikroskop (IMS, SHIMADZU, model: iMScopoe TRIO, Kyoto, Japan). Svineskindet blev skåret i 1,5 x 1,5 cm2. Rutin, bukkehornsekstrakt og LNF blev påført på den afskårne svinehud og opbevaret ved 4 grader i 24 timer. Prøverne blev skåret ved hjælp af en kryostat, anbragt på et indiumtinoxidbelagt glasobjektglas og sprøjtet med en 9-aminoacridinmatrixsubstans (9-AA). Prøverne blev opbevaret ved-20 grad før analysen. En overlejring af de optiske billeder af rutin blev analyseret ved 609,15 m/z.

4.12. Karakterisering af differentielle scanningkalorimetre (DSC).

Differential scanning kalorimetri (DSC) analyse blev udført for at bestemme smeltepunktet for LNF ved hjælp af et differential scanning kalorimeter (DSC,Mettler Toledo DSC1)[63]. Efter nøjagtig vejning blev prøverne anbragt i aluminiumspande og forseglet med låg. I scanningsprocessen blev en opvarmningshastighed på 10 grader påført i temperaturområdet fra 25 til 350 grader under en nitrogengas renset med 40 ml/min. 4.13.Konstruktion af humane co-dyrkede hudceller

Humane dermale fibroblastceller blev podet ved 8,5 x 104 celler/brønd i 12-brønds kulturindsatse (Corning, Corning, NY, USA) og dyrket i 24 timer. Det andet og tredje lag af dermal fibroblast blev gentagne gange tilføjet til det første lag på på hinanden følgende dage. Efter 24 timers tilsætning af det tredje lag blev HaCaT derefter podet ved 8,5 x 10 graders celler/brønd på de dannede fibroblastlag og dyrket i yderligere 24 timer før eksperimentet.

4.14. Undersøgelse af cellelevedygtighed og sekretion af MMP'er efter UV-eksponering i co-dyrkede hudceller

Humane co-dyrkede hudceller blev forbehandlet med 7 ug/mL ekstrakt og 100 ug/mL LNF (7 ug/mL ekstraktækvivalens) sammen med 100 ug/mL blindprøve og 10 ug/mL resveratrol som en positiv kontrol , i 24 timer. Samdyrkede hudceller blev derefter vasket to gange med PBS og udsat for 5J/cm2 UVA og 30mJ/cm2 UVB-bestråling (Solar Simulators, NY, USA). Efter UV-bestråling blev co-dyrkede hudceller yderligere inkuberet med testede prøver i 24 timer. Supernatanten blev derefter opsamlet til MMP1- og MP9-kvantificeringer. Niveauerne af UV-induceret MMP1- og MMP9-sekretioner i humane co-dyrkede hudceller blev målt ved hjælp af enzym-koblede immunosorbent assay kits (MMP1: ab215083 og MMP9: ab100610, abcam, Cambridge, UK) i henhold til fremstillingsprotokoller.

Levedygtigheden af ​​humane co-dyrkede hudceller efter UV-eksponering blev evalueret under anvendelse af et CellTiter-Glo luminescerende cellelevedygtighedsanalysekit (Promega, Madison, WI, USA). Efter 24 timers UV-eksponering blev co-dyrkede hudceller vasket to gange med PBS, og 100 μL Glo Lysis Buffer (Promega, Madison, WI, USA) blev tilsat i hver brønd. Efter inkubation i 10 minutter blev 50 µl CellTiter-Glo-reagens tilsat og inkuberet ved stuetemperatur i 10 minutter. Det luminescerende signal blev derefter målt under anvendelse af et mikropladeluminometer (SpectraMax L, Molecular Devices).

4.15.Statistisk analyse

Resultater blev repræsenteret som middel ± standardafvigelse (SD). Signifikante forskelle blev analyseret ved en Student's-test eller en- eller to-vejs variansanalyse (ANOVA) efterfulgt af Tukey's post hoc test (GraphPad Prism 9), med p-værdier<0.05 considered="" statistically="">

5. Konklusioner

Samlet frembragte denne forskning to alternative forslag. For det første blev rutin ikke kun observeret med hensyn til beskyttelse mod ultraviolet stråling og antioxidativt stof, men blev også brugt som en standardmarkør for kromatogramfingeraftryk og en nøglereference for anti-aldringsaktivitet fra ekstrakt af bukkehornsfrø. For det andet blev molekylære mekanismer, der ligger til grund for ethanolekstrakt mod aldring, demonstreret. Ekstraktet viste nye biologiske egenskaber, såsom anti-collagenase-aktivitet, inducering af kollagenproduktion og inhibering af kollagennedbrydning, hvilket refererer til et potentielt alternativt naturligt anti-aging-middel til anti-aging-produkter. Indkapslingsteknikker kan bruges til at beskytte de bioaktive forbindelser og kemiske og fysiske nedbrydningsprocesser og forlænge deres biologiske aktivitet indtil brug. Denne teknik reducerer også toksiciteten af ​​urteekstrakter. I denne undersøgelse er formulerede liposomer meget stabile og har en forlænget frigivelse. Nano-formulering kan også øge styrken af ​​bukkehornsekstrakt på anti-aldringsegenskaber. På baggrund af denne undersøgelse foreslår vi, at LNF potentielt kan anvendes som en lovende aktiv ingrediens i forebyggelsen af ​​hudens aldring.

Denne artikel er uddraget fra Pharmaceuticals 2022, 15, 254. https://doi.org/10.3390/ph15020254 https://www.mdpi.com/journal/pharmaceuticals