Nye roller af bevægelige epidermale kloroplaster i planteimmunitet

Abstrakt:

Plantens epidermis indeholder atypiske små kloroplaster. Imidlertid er den fysiologiske rolle for denne organel uklar sammenlignet med den for store mesofyl-kloroplaster, hvis velkendte funktion er fotosyntese. Selvom viden om involvering af kloroplaster i planteimmunitet er blevet udvidet til dato, er forskellene mellem epidermale og mesofyl kloroplaster uden for denne undersøgelses omfang. I betragtning af plantens epidermis rolle som en barriere for miljøbelastninger, herunder patogenangreb, og den immunrelaterede funktion af kloroplaster, er planteforsvarsforskning på epidermale kloroplaster et spirende felt. Nylige undersøgelser har afsløret de dynamiske bevægelser af epidermale kloroplaster som reaktion på svampe- og oomycete-patogener. Desuden er der rapporteret om epidermale chloroplast-associerede proteiner og cellulære hændelser, der er tæt forbundet med epidermal resistens mod patogener. I denne anmeldelse har jeg fokuseret på de seneste fremskridt inden for epidermal chloroplast-medieret planteimmunitet.

Nøgleord: epidermal kloroplast; chloroplast bevægelse; stromule; plantepatogen; trænge ind; ikke-værtsresistens; præinvasivt forsvar; Arabidopsis thaliana; Nicotiana benthamiana; CHUP1.

Planteimmunitet og menneskelig immunitet er to forskellige forsvarsmekanismer, og der er åbenlyse forskelle:

1. Forskellige patogener at bekæmpe: Planter modstår hovedsageligt biologiske patogener såsom bakterier, svampe og vira, mens menneskelig immunitet hovedsageligt modstår bakterier og vira.

2. Forskellige immunresponsmetoder: planteimmunitet forsvarer hovedsageligt mod patogener gennem fysisk isolation, kemisk hæmning og genregulering, mens menneskelig immunitet hovedsageligt modstår patogener gennem makrofager, T-celler og B-celler.

3. Forskellig immunspecificitet: Planteimmunitet anvender den samme forsvarsmetode mod alle patogener, det vil sige uspecifik immunitet, mens menneskelig immunitet er specifik, i stand til at genkende og producere tilsvarende immunresponser mod specifikke patogener.

4. Forskellig immunhukommelse: Planter har ikke evnen til immunhukommelse, det vil sige, at når de først har modstået et bestemt patogen, skal de stadig genstarte immunresponset, næste gang de står over for det samme patogen. Det menneskelige immunsystem har evnen til immunhukommelse, det vil sige, efter at have modstået et patogen, vil det have en langsigtet immunhukommelse for dette patogen, og næste gang det møder det samme patogen igen, kan det hurtigt generere en immunrespons , og derved effektivt kontrollere patogenet Infect. Så til sammenligning er vores menneskelige immunitet også meget vigtig. Vi skal fokusere på at forbedre vores immunitet. Cistanche deserticola kan gøre det. Polysacchariderne i kødet kan regulere det menneskelige immunsystems immunrespons og forbedre immuncellernes stressevne. , Forbedre den bakteriedræbende virkning af immunceller.

Klik cistanche deserticola supplement

1. Introduktion

Epidermis af flercellede organismer, herunder planter, fungerer som en barriere for at beskytte mod en række forskellige belastninger såsom ændringer i det ydre miljø og patogenangreb. Fra patogenernes perspektiv er det at bryde gennem plantens epidermale celler et væsentligt første skridt i invasionen; især svampe- og oomycete-patogener skal trænge direkte ind i plantens epidermis og udvikle invasive hyfer indeni for en vellykket infektion. For eksempel danner anthracnose-svampene Colletotrichum-arterne og risblastsvampen Pyricularia oryzae (syn. Magnaporthe oryzae) en melaniseret kuppelformet celle kaldet et appressorium på planteoverfladen for at udvikle en penetreringspind i værtsplanternes epidermis, efterfulgt af invasiv hyphal extension og udbrud af destruktiv sygdom [1].

Men hvis planten er en ikke-vært, kan disse svampepatogener danne melaniseret appressorium, men kan ikke trænge ind i den epidermale celle på grund af planters præ-invasive nonhost-resistens (NHR), som generelt giver holdbar, robust og bredspektret immunitet og effektivt forhindrer invasionen af ​​et stort antal ikke-tilpassede svampe og oomyceter i uforenelige interaktioner [2,3]. I modellen af ​​brassicaceous-planten Arabidopsis thaliana er det blevet rapporteret, at mange immunbaner og komponenter understøtter udbredelsen af ​​epidermal NHR på en flerlags måde mod indtrængen af ​​ikke-tilpassede svampe- og oomycete-patogener, såsom Blumeria graminis f. sp. hordei [4-12], Colletotrichum tropicale [13-16], P. oryzae [17-22] og Phytophthora infestans [6,7]. En fuldstændig forståelse af det molekylære grundlag for præinvasiv NHR forbliver imidlertid uhåndgribelig. For at opnå en omfattende forståelse af NHR er det vigtigt at identificere ukendte immunrelaterede hændelser og komponenter i plantens epidermis.

I højere planter, bortset fra få planter, såsom tobak, har man længe troet, at ingen kloroplaster eksisterer i epidermale celler udover beskyttelsesceller [23-26]. De fleste undersøgelser af kloroplaster fokuserer på mesofylceller, hvor adskillige typiske store kloroplaster er stærkt differentierede til fotosyntese [27-29]. Imidlertid er klorofylholdige atypiske små kloroplaster også blevet observeret i de epidermale fortovsceller hos A. thaliana, selvom thylakoider, som er ansvarlige for lysafhængige fotosyntesereaktioner, er dårligt udviklede [30-36]. Derfor er den fysiologiske rolle af epidermale kloroplaster et spirende emne inden for plantevidenskab.

Kloroplaster er kendt for at fungere som miljøsensorer mod flere biotiske og abiotiske belastninger [37,38]. For planteimmunresponser mod patogener er sekundære budbringere, såsom reaktive oxygenarter (ROS) og calcium (Ca2 plus ), og forstadier til fytohormoner, såsom salicylsyre (SA), jasmonsyre og abscisinsyre, f.eks. alle afledt af kloroplaster [39-42]. Der er mange fremragende anmeldelser om kloroplasters roller i planteimmunitet. Jeg henviser læserne til nylige anmeldelser, som vil give et overblik over chloroplast-relaterede planteforsvarsreaktioner [43-47].

Der er dog meget få planteforsvarsstudier, der fokuserer på epidermale kloroplaster, og de funktionelle forskelle mellem epidermale og mesofyl kloroplaster i plantens immunsystem har ikke tiltrukket sig den store opmærksomhed. For nylig påviste nogle rapporter involveringen af ​​epidermale kloroplaster i planteimmunitet. I denne gennemgang er det primære fokus på epidermale kloroplaster, og de seneste fremskridt inden for planteepidermal immunitet er blevet beskrevet.

2. Epidermal kloroplastrespons kontrollerer indtrængen af ​​svampepatogener i A. thaliana

2.1. Intracellulære bevægelser af epidermale kloroplaster som svar på svampepatogener i A. thaliana

I steady state af A. thaliana observeres epidermale kloroplaster ikke nær den øvre periclinale væg (overfladen) af fortovscellerne, fordi de normalt er placeret ved de nedre periclinale (nederst) og antiklinale vægge. I en nylig rapport opdagede jeg, at epidermale kloroplaster dukkede op på overfladen af ​​fortovsceller som reaktion på Colletotrichum svampe med melaniseret appressoriumdannelse, og kaldte dette fænomen epidermal kloroplastrespons (ECR) (Figur 1) [48].

Interestingly, ECR occurs more strongly against nonadapted fungi such as the Japanese flowering cherry pathogen Colletotrichum nymphaea PL1-1-b, the cosmos pathogen Colletotrichum fioriniae CC1, and the apple pathogen Colletotrichum siamense MAF1, compared to the adapted Brassicaceae pathogen Colletotrichum higginsianum Abr1-5, which readily penetrates and infects wild-type plants of A. thaliana [48]. Furthermore, the frequency of ECR varies according to the nonadapted fungal strains; the order of ECR-inducing ability in the wild-type plant is as follows: C. nymphaea PL1-1-B > C. fioriniae CC1 > C. siamense MAF1, while two other nonadapted strains, hau tree pathogen C. siamense COC4, and cucurbit pathogen Colletotrichum orbiculare 104-T, do not trigger ECR in the wild-type plant [48]. Importantly, C. siamense COC4 and C. orbiculare 104-T sufficiently induce ECR in plants with a mutation in the PEN2 gene [48], which encodes an atypical myrosinase that works as a core preinvasive NHR contributor against many fungal and oomycete pathogens [6,9,13,17,48–50], although these two nonadapted pathogens cannot invade pen2 mutants. The frequencies of ECR in the pen2 mutant against C. fioriniae CC1 and C. siamense MAF1 are also higher than those in the wild-type plant, whereas other single mutants of immune-related genes such as EDR1, GSH1 EDS5, and CAS have little effect on ECR [48]. These results suggest that ECR is preferentially activated when PEN2-based antifungal preinvasive defense becomes ineffective in epidermal cells. Similarly, in penetration tests on multiple Arabidopsis mutants with many immune-related mutations, these five nonadapted Colletotrichum strains displayed the differential abilities to overcome preinvasive NHR in the same order as the ECR-inducing ability; C. nymphaea PL1-1-B and C. fioriniae CC1 can invade the epidermis of the wild-type plant to some degree and more of the pen2 mutant, whereas C. siamense MAF1, COC4, and C. orbiculare 104-T can break through the epidermal NHR only in the presence of pen2 mutation or with additional mutations such as edr1, gsh1, eds5, and cas (Figure 2, Redrawn from [51]) [48,51]. Thus, there is a tight link between ECR induction in plants and the invasion ability of the nonadapted Colletotrichum fungi, which implies the involvement of ECR in epidermal preinvasive NHR, because these fungal pathogens are incompatible with and definitely cannot infect A. thaliana. The contribution of ECR to preinvasive NHR is described in a later section. Int. J. Mol. Sci. 2022, 23, x FOR PEER REVIEW 3 of 17 readily penetrates and infects wild-type plants of A. thaliana [48]. Furthermore, the frequency of ECR varies according to the nonadapted fungal strains; the order of ECR-inducing ability in the wild-type plant is as follows: C. nymphaea PL1-1-B > C. fioriniae CC1 >C. siamense MAF1, mens to andre ikke-tilpassede stammer, hau tree-patogen C. siamense COC4 og cucurbit-patogen Colletotrichum orbiculare 104-T, ikke udløser ECR i vildtypeplanten [48].

Det er vigtigt, at C. siamense COC4 og C. orbiculare 104-T i tilstrækkelig grad inducerer ECR i planter med en mutation i PEN2-genet [48], som koder for en atypisk myrosinase, der fungerer som en kerne præinvasiv NHR-bidrager mod mange svampe og oomyceter patogener [6,9,13,17,48-50], selvom disse to ikke-tilpassede patogener ikke kan invadere pen2-mutanter. Hyppighederne af ECR ​​i pen2-mutanten mod C. fioriniae CC1 og C. siamense MAF1 er også højere end dem i vildtypeplanten, hvorimod andre enkeltmutanter af immunrelaterede gener såsom EDR1, GSH1 EDS5 og CAS har lidt effekt på ECR [48]. Disse resultater tyder på, at ECR fortrinsvis aktiveres, når PEN2-baseret antifungalt præinvasivt forsvar bliver ineffektivt i epidermale celler.

Tilsvarende viste disse fem ikke-tilpassede Colletotrichum-stammer i penetrationstests på multiple Arabidopsis-mutanter med mange immunrelaterede mutationer de differentielle evner til at overvinde præinvasiv NHR i samme rækkefølge som den ECR-inducerende evne; C. nymphaea PL1-1-B og C. fioriniae CC1 kan invadere vildtypeplantens epidermis til en vis grad og mere af pen2-mutanten, hvorimod C. siamense MAF1, COC4 og C. orbiculare {{8 }}T kan kun bryde gennem den epidermale NHR i nærvær af pen2-mutation eller med yderligere mutationer såsom edr1, gsh1, eds5 og cas (Figur 2, Gentegnet fra [51]) [48,51]. Der er således en tæt sammenhæng mellem ECR-induktion i planter og invasionsevnen af ​​de ikke-tilpassede Colletotrichum-svampe, hvilket indebærer involvering af ECR ​​i epidermal præinvasiv NHR, fordi disse svampepatogener er inkompatible med og absolut ikke kan inficere A. thaliana. Bidraget fra ECR til præinvasiv NHR er ikke-vært Arabidopsis-mutanter blev evalueret baseret på de melaniseret appressorium-medieret entry-rater (MAE) og klassificeret. MAE-raten (procent) blev beregnet ved hjælp af følgende numeriske formel: (antallet af melaniseret appressoria med dannelse af invasive hyfer)/(antallet af melaniseret appressoria). Tilpasset C. higginsianum Abr1-5 (MAFF305635) vises som kontrolelementet. Procentdelen af ​​svampeindtrængningstests som "−", "plus /−", "plus", "plus plus", "plus plus plus" og "plus plus plus plus plus" er 0–2 procent, 2–10 procent, henholdsvis 10-20 procent, 20-35 procent, 35-60 procent og 60-100 procent. nd: ikke bestemt. Tilpasset fra [51].

ECR er ikke specifik for Colletotrichum. Epidermale kloroplaster dukker også op på overfladen efter podning med det ikke-tilpassede patogen P. oryzae, som viser planteinvasion af melaniseret appressorium-medieret indtrængen (MAE), men er fylogenetisk fjernt beslægtet med Colletotrichum [48]. Hyppigheden af ​​P. oryzae-induceret ECR stiger også i pen2-mutanten. ECR kan således være en bredspektret epidermal respons på en lang række svampepatogener. Denne idé er i overensstemmelse med den nye opdagelse, at den ikke-tilpassede svamp Alternaria alternata, som ikke er et MAE-type patogen og danner melaniserede konidier, også inducerer ECR i ikke-værten A. thaliana, især i nærværelse af pen2-mutationen (figur 3). .

2.2. Udløseren af ​​det epidermale kloroplastrespons

Selvom hvordan plantens epidermis genkender svampepatogener og inducerer ECR forbliver et åbent spørgsmål, indikerer nogle data en fascinerende sammenhæng mellem svampeindgangsforsøgsrelaterede karakteristika og ECR-induktion [48]. Nogle af de velundersøgte patogen-afledte molekyler er patogen/mikrobe-associerede molekylære mønstre (PAMPs/MAMPs), som er meget konserverede blandt bredspektrede patogener og bidrager til deres levedygtighed [52]. Skade-associerede molekylære mønstre (DAMP'er), værts-afledte molekyler såsom Pep1 frigivet ekstracellulært under patogeninvasion, er også tegn på medfødte immunresponser [53]. PAMP'er/DAMP'er genkendes af plantemønstergenkendelsesreceptorer (PRR'er), og PAMP/DAMP-udløst immunitet initieres via PRR-associerede proteiner, såsom RLP 23 og RLP30, membranindlejrede receptorlignende proteiner (RLP'er), FLS2 og BAK1 membran-indlejrede receptorlignende kinaser (RLK'er) og BIK1 og PBL1, receptorlignende cytoplasmatiske kinaser (RLCK'er) [54-61].

Ekstraordinære anmeldelser om PRR-signalering i planteimmunitet er blevet offentliggjort af flere forskere [62-65]. Interessant nok er ECR ikke afhængig af BAK1, BIK1, PBL1, Pep1-sensing RLK'er, PEPR1 og PEPR2; derfor er PAMP- og/eller DAMP-signaleringshændelser, i det mindste dem medieret af disse RLK'er og RLCK'er, ikke involveret i induktionen af ​​ECR ​​[48]. Ydermere afslørede kvantificering af ECR ​​i pen2-mutantplanten mod multiple C. orbicular-mutanter, der mangler i forskellige trin af invasionsrelateret morfogenese, at dannelsen af ​​penetrationspløkken, en nålelignende svampestruktur, der dukker op fra appressoriet for vellykket indtræden i planten epidermis, er afgørende for ECR-induktion [48].

Plantepatogene svampe og oomyceter udskiller et arsenal af virulensproteiner, kaldet effektorer, for at manipulere plantecellulære processer og inducere immunundertrykkelse. Adskillige anmeldelser er blevet publiceret om effektorer af plantepatogener [66-70]. I Colletotrichum akkumuleres fluorescensmærkede effektorproteiner fortrinsvis i bunden af ​​appressoriet til sekretion gennem penetrationsstiften [71,72]. Denne effektorsekretion afhænger af den v-SNARE SEC22-medierede intracellulære trafikrute i svampen [72] og korrelerer interessant nok med ECR-induktion [48]. Disse observationer antyder følgende potentielle kandidater som udløsere af ECR: (i) patogen-afledte molekyle(r) udskilt fra penetrationsstiften under svampeindtrængningsforsøg og (ii) plante-afledte signal(er) genereret som reaktion på graden af svampeprogression i forsøget på at trænge ind. ECR er en universel begivenhed mod mange typer svampepatogener, herunder Colletotrichum-arter, P. oryzae og A. alternata (Figur 3) [48]. Derfor er typiske effektorer, der er begrænset til et snævert område af svampepatogener for deres værtsspecificitet, muligvis ikke et tegn på ECR; snarere kan almindelige cellevægsnedbrydende enzymer eller meget konserverede kerneeffektorer af en bred vifte af patogene svampe eller planteskadesignaler, der ikke er forbundet med Pep1, udløse ECR i planteepidermis.

2.3. Regulatorerne af epidermal kloroplastrespons og præinvasiv nonhost-resistens af Arabidopsis

Store mesofyl-kloroplaster viser intracellulære bevægelser baseret på lysets intensitet for sikker og effektiv fotosyntese; de undslipper stærkt lys og migrerer til cellens antiklinale vægge for at forhindre fotoskader (undgåelsesrespons) og bevæger sig mod svagt lys og sætter sig på de periclinale vægge for at øge fotosynteseeffektiviteten (akkumulationsrespons). Mange regulatoriske proteiner af dette adaptive fænomen, kaldet chloroplast-fotoflytningsbevægelser, er blevet identificeret i mesofylceller [73]. Der er dog få rapporter, og man ved kun lidt om de komponenter, der styrer den intracellulære bevægelse af epidermale kloroplaster [74,75]. I denne sammenhæng har jeg for nylig demonstreret, at ECR i epidermale celler deler fælles regulatoriske proteiner med mesofyl-chloroplast-fotoflytningsbevægelser [48]. Det actinbindende protein CHUP1 genererer en chloroplast-actin-baseret drivkraft og er essentiel for både akkumulering og undgåelsesrespons [76-78], mens det auxilin-lignende J-domæneprotein JAC1 regulerer udseendet og forsvinden af ​​chloroplast-actin filamenter og er påkrævet for akkumuleringsresponsen [79]. Den genetisk modificerede A. thaliana viser, at overekspression af CHUP1-proteiner forårsager stærk undertrykkelse af ECR.

Typisk påvises epidermale kloroplaster næppe på overfladen, selv efter inokulering med ikke-tilpassede svampepatogener [48]. Imidlertid fører overekspression af JAC1 eller deletion af CHUP1 til den konstitutive positionering af epidermale chloroplaster på overfladen, uanset svampepodning [48]. CHUP1 og JAC1 regulerer således henholdsvis negativt og positivt placeringen af ​​epidermale kloroplaster ved overfladearealet af fortovsceller (figur 4). Det er bemærkelsesværdigt, at podningen af ​​chup1-mutanten med høje koncentrationer af ikke-tilpassede svampe kun en smule øgede populationen af ​​overfladechloroplaster, hvilket antyder svækkelsen af ​​ECR ​​ved udtømning af CHUP1-proteinet. I modsætning hertil er phototropin 1 og 2, som er blåt lys receptorer ansvarlige for chloroplast foto flytning bevægelser [80-82], undværlige for aktiveringen af ​​ECR ​​[48]. Derfor har chloroplastfotoplacering og ECR forskellige stimulusgenkendelsessystemer for henholdsvis lys og patogener, men deler i det mindste nogle downstream regulatoriske komponenter. Ud fra synspunktet om forskellene mellem mesofyl og epidermale kloroplaster, kan de adaptive systemers alsidighed mod forskellige miljøbelastninger afspejle plantens omfattende overlevelsesstrategi.

Hvorvidt ECR bidrager til planteimmunitet i de epidermale celler hos A. thaliana er et fascinerende spørgsmål. For at tydeliggøre involveringen af ​​ECR ​​i præinvasiv NHR er virkningerne af ECR-svækkelse ved at overudtrykke eller udtømme CHUP1-proteiner på MAE-hastigheden af ​​multiple ikke-tilpassede svampe i planteepidermis blevet undersøgt [48]. C. nymphaea PL1-1-B, som udviste relativt lavere inkompatibilitet med A. thaliana sammenlignet med andre ikke-tilpassede svampe, viste en øget MAE-rate i ECR-hæmmede planter (figur 2) [48]. Desuden, i planter med pen2 eller andre yderligere mutationer såsom edr1, gsh1, eds5 og cas, fremmede en stigning eller et fald i niveauerne af CHUP1-proteiner MAE-hastigheden af ​​C. fioriniae CC1, C. siamense MAF1, COC4 og C . orbiculare 104-T (Figur 2) [48]. Lignende resultater blev opnået for MAE-hastigheden af ​​P. oryzae. Følgelig er ECR en stressreaktion fra planten, hvorved den præinvasive NHR forstærkes i epidermale celler, når svampepatogenerne forsøger at invadere gennem penetreringsstiften.

Som beskrevet aktiveres ECR fortrinsvis i fravær af en PEN2-relateret forsvarsvej. På samme måde inducerede podningen af ​​ikke-tilpasset C. fioriniae CC1 også ekspressionen af ​​mange forsvarsrelaterede gener, såsom PAD3, CYP79B2, CYP71A13, PDF1.2a, MYB51, PR1, FRK1 og NHL10, kun i tilfælde af pen2-mutation, selvom tærsklen for ECR var lavere end for ekspressionen af ​​disse gener [48]. Baseret på den lagdelte struktur af plantens NHR er ECR en af ​​de forsvarsreaktioner, der er programmeret til at bakke op om den præinvasive NHR, når de veje, der er involveret i præinvasivt forsvar på højere lag, inklusive PEN2-relaterede veje, er ineffektive [ 48,51].

Dette er i overensstemmelse med forholdet mellem A. thaliana og det lavere inkompatible ikke-tilpassede patogen C. nymphaea PL1-1-B, som delvist overvinder det højlags præinvasive forsvar [51]; C. nymphaea PL1-1-B udløser kraftigt ECR og inducerer også forsvarsrelaterede gener i vildtypeplanten [48]. Adskillige fytopatogene svampe, såsom C. nymphaea PL1-1-B, der delvist overvinder det højere lag præinvasive forsvar af A. thaliana, formodes at eksistere i naturen. Derfor har planter udviklet ECR som en af ​​mekanismerne for epidermal NHR mod disse slags svampepatogener (figur 4).

3. Epidermale chloroplast-lokaliserede immunkomponenter bidrager til præinvasiv antifungal nonhost-resistens af Arabidopsis

3.1. Den præferentielle lokalisering af immunrelaterede komponenter til bevægelige epidermale kloroplaster i A. thaliana

Hvordan ECR bidrager til præinvasiv NHR mod ikke-tilpassede svampepatogener, mangler at blive fuldstændig belyst. Fluorescens levende cellebilleddannelse afslørede, at immunrelaterede komponenter, såsom -glutamylcysteinsyntetase GSH1, Ca2 plus -sensing receptor CAS, MATE familie transporter EDS5, isochorismat syntase ICS1/SID2 og aminotransferase ALD1, var lokaliseret i epidermale små kloroplaster (Figure chloroplaster) [15,48,83–86]. Interessant nok er de fluorescerende signaler fra disse komponenter i epidermale kloroplaster meget stærkere end dem i store mesofyl kloroplaster [48,83,85,86]. I ECR-aktiverede fortovsceller efter podning med ikke-tilpasset C. fioriniae CC1, blev GSH1-, EDS5- og CAS-proteinerne fundet at lokalisere til overfladearealet sammen med de motile epidermale kloroplaster, hvilket tyder på en tæt forbindelse mellem ECR og den intracellulære positionering af disse immunkomponenter [48]. Disse observationer kunne styrke betydningen af ​​epidermale kloroplaster i planteimmunitet

3.2. Epidermale chloroplast-lokaliserede immunkomponenter og præinvasivt forsvar hos A. thaliana

GSH1 bidrager til planteforsvar via glutathionbiosyntese i både kompatible og inkompatible A. thaliana-patogen interaktioner [15,87]. CAS er involveret i forbigående Ca2 plus-signalering i kloroplaster under planteimmunitet [88], og den CAS-målrettede svampeeffektor af Sclerotinia sclerotiorum interfererer med SA-signalering i værtsplanten [89]. ICS1/SID2 og EDS5 er påkrævet til henholdsvis biosyntese og transport af SA-precursorer under plantens immunrespons [85,90,91]. Den tætte forbindelse mellem disse immunkomponenter og epidermale kloroplaster antyder deres involvering i epidermal NHR mod svampepatogener, der udløser ECR. Bidragene fra GSH1, CAS, EDS5 og ICS1/SID2 til den præinvasive NHR mod ikke-tilpassede svampe er blevet påvist; C. nymphaea PL1-1-B viste øget MAE i epidermis af gsh1-, cas- og eds5-enkeltmutanter sammenlignet med den i vildtypeplanten [51], hvorimod lignende virkninger af disse mutationer på MAE af C. fioriniae CC1, C. siamense MAF1 og P. oryzae blev observeret i hver dobbeltmutant med pen2-mutation (figur 2) [48].

De øgede MAE-rater af mere inkompatible C. siamense COC4 og C. orbiculare 104-T blev bekræftet i pen2 mutantplanter med flere mutationer i immunrelaterede gener (figur 2) [48]. Derfor korrelerer de pen2-afhængige virkninger af disse muterede gener, som koder epidermale chloroplast-lokaliserede proteiner, med ECR udløst af hvert svampepatogen. Denne undersøgelse foreslår, at Arabidopsis epidermale celler implementerer et ECR-centreret immunrespons, hvori den intracellulære repositionering af immunrelaterede proteiner kan forbedre antifungal NHR (Figur 4) [48]. Det epidermale chloroplast-specifikke protein, ALD1, er essentielt for lokal sygdomsresistens og systemisk erhvervet resistens mod både virulente og avirulente bakterielle patogener, og det udøver sin virkning ved at kontrollere SA-akkumulering [86,92-94]. I fremtiden bør det belyses, om ALD1 også fungerer i det præinvasive NHR mod svampepatogener.

4. Epidermale kloroplaster akkumuleres ved grænsefladen med Oomycete-patogen og CHUP1 er påkrævet for penetrationsmodstand i Nicotiana benthamiana

4.1. Fokal akkumulation af epidermale kloroplaster ved grænsefladen med Oomycete-patogen i N. benthamiana

Epidermale kloroplasters rolle som reaktion på oomycete-patogenet P. infestans er også blevet undersøgt i modellen solanaceous plante N. benthamiana [95-97]. I dette afsnit nævner jeg nyere forskning om dynamikken i epidermale chloroplastbevægelser og involvering af CHUP1 i actinomycet-immunitet, selvom der er tvetydighed med hensyn til de adaptive eller ikke-adaptive egenskaber af P. infestans til N. benthamiana, som viser tvetydig aldersrelateret resistens. til P. infestans; modne planter er resistente, mens unge planter er modtagelige [98].

Under responsen fra N. benthamiana på P. infestans viser epidermale kloroplaster intracellulære bevægelser og akkumuleres i grænsefladen med patogenet haustorium, infektionsrelaterede specialiserede hyfer, på en BAK1-uafhængig måde (Figur 5) [96] . Således er fokal immunitet medieret af epidermale chloroplaster blevet foreslået i N. benthamiana-P. infestans patosystem. Et lignende fænomen blev observeret i de ECR-aktiverede celler af A. thaliana under det antifungale respons; dog var de fleste af overfladechloroplasterne spredt i tilfælde af ECR ​​og, i det mindste under mikroskopet, associerede de ikke med patogengrænsefladen [48]. I betragtning af at epidermal chloroplast af N. benthamiana normalt detekteres ved overfladearealet af fortovsceller, uanset patogenpodning, var arbejdsmekanismerne for epidermale chloroplaster som reaktion på patogenangreb ikke helt de samme mellem A. thaliana og N. benthamiana.

Ydermere kan CHUP1-relaterede ECR og fokal akkumulering af epidermale kloroplaster til svampegennemtrængningssteder være uafhængige hændelser i A. thaliana, fordi den patogengrænsefladespecifikke akkumulering af epidermale kloroplaster i N. benthamiana er CHUP{{2} }uafhængig (Figur 5) [97]. I denne sammenhæng mangler det at blive belyst, om en del af de epidermale kloroplaster af A. thaliana, som fokalt akkumuleres ved svampegennemtrængningsstederne, har en særskilt rolle fra ECR-associerede epidermale kloroplaster, såvel som i N. benthamiana.

4.2. CHUP1-Afhængig Callose-aflejring på Oomycete Penetration Site under epidermal resistens af N. benthamiana

Savage et al. rapporterede, at placeringen af ​​epidermale kloroplaster ved grænsefladen mellem N. benthamiana og haustoria af P. infestans forekom uafhængigt af CHUP1 [97], hvilket var lidt anderledes end Arabidopsis ECR [48]. De viste imidlertid, at CHUP1 er påkrævet for penetrationsresistens i epidermale celler af N. benthamiana mod P. infestans [97]. Silencing eller knockout af to CHUP1-alleller i N. benthamiana øger modtageligheden for P. infestans, hvorimod ophobningen af ​​epidermale kloroplaster omkring haustoria ikke er svækket i CHUP1-knockout-mutanten (chup1) [97]. Arabidopsis chup1-mutanten viste også nedsat præinvasiv NHR mod MAE af ikke-tilpassede svampepatogener [48], hvilket tyder på vigtigheden af ​​det chloroplast-associerede protein CHUP1 i epidermal planteimmunitet mod både oomycete og svampepatogener.

Interessant nok er fokal callose-aflejring ved haustoria af P. infestans, som er en af ​​plantens forsvarsreaktioner, CHUP1-afhængig, hvilket tyder på, at det chloroplast-associerede protein CHUP1 bidrager til epidermal immunitet mod oomycete-patogen ved at øge penetrationsmodstand via calloseaflejring (figur 5) [97]. Nøglespørgsmålet er, hvordan forbindelsen mellem denne calloseaflejring og den fokale akkumulering af de epidermale chloroplaster ved patogengrænsefladen eksisterer, fordi CHUP1 er et chloroplast-associeret protein. I denne henseende har Savage et al. viste ingen sammenhæng mellem kalloseaflejring og tilstedeværelsen af ​​kloroplaster omkring haustoriet [97]. I overensstemmelse med dette fund, i A. thaliana-C. orbikulær inkompatibel interaktion, calloseaflejring korrelerer ikke med ECR-aktivering; callosen er tilstrækkeligt aflejret på stederne for patogengennemtrængningsforsøg i vildtypeplanten, hvor ECR næppe aktiveres på grund af en forudgående funktion af højlags præinvasive forsvar(er) [48]. CHUP1-gen-knockout i N. benthamiana påvirker ikke andre kerneimmunprocesser, såsom PAMP-udløst MAPK-phosphorylering, konstitutivt aktiv MEK2DD-induceret hypersensitiv respons (HR)-lignende celledød og effektor-udløst HR-celledød [97].

Derfor har Savage et al. spekulerede i, at i CHUP1-knockout N. benthamiana kunne reduktion i produktionen af ​​epidermale chloroplast-afledte molekyler, såsom ROS- og SA-prækursorer, sandsynligt forårsage svækkelse af callose-akkumulering omkring haustoriet. De udelukkede heller ikke muligheden for, at snapshot-billeddannelse ikke nøjagtigt afspejlede involveringen af ​​epidermal chloroplast-mobilisering til haustoria i fokal callose-aflejring, fordi chloroplasterne kan have bevæget sig væk fra haustoria efter callose-aflejring [97]. Jeg forventer, at fremtidig forskning vil afklare den regulatoriske mekanisme for calloseaflejring ved patogengrænsefladen via chloroplast-associeret CHUP1 i N. benthamiana, og sammenligne det med de epidermale chloroplast-relaterede immunresponser i A. thaliana.

5. Dynamisk morfologi af epidermale kloroplaster og interorganelle interaktioner i planteimmunitet

5.1. Stromuledannelse, udvidelse og hulrumsdannelse

Mesofyl og epidermale kloroplaster vokser dynamiske rørformede forlængelser kaldet stromuler, som er fyldt med stroma [99]. I epidermale celler af N. benthamiana øges stromuler under antivirale og antibakterielle immuniteter, hvor effektor-udløst HR-celledød forekommer [95]. N. benthamiana inducerer også stromuldannelse under PAMP-udløst immunitet mod oomyceten INF1 foruden bakteriel flg22 og svampekitin på en BAK1-afhængig måde [95,96]. Interessant nok er stromule-induktion undertrykt af P. infestans-effektoren AVR3a [96]. Stromule-induktion i epidermale kloroplaster blev også observeret under antibakteriel immunitet hos A. thaliana [95]. Alt i alt indebærer disse observationer den mulige involvering af stromuler i planteforsvarsresponser. Det er vigtigt, at chloroplastbevægelser og forbindelser med andre organeller, såsom kerner, medieres af stromuler under planters immunrespons [95.100]. Desuden kan stromuler transportere det forsvarsrelaterede signalmolekyle ROS og chloroplastforsvarsproteinet NRIP1 til kernen i N. benthamiana [95,101]. NRIP1 er påkrævet for antiviral resistens i N. benthamiana [102]. Immunrelaterede proteiner GSH1, EDS5 og CAS er også lokaliseret til stromuler, der strækker sig fra de epidermale chloroplaster i A. thaliana, selvom lokaliseringssignalet for thylakoidproteinet CAS i stromuler er svagere end det af de to andre proteiner og kan være en artefakt af overekspression [48].

I epidermale celler kan immunrelaterede komponenter således dynamisk ændre deres positionering gennem chloroplastbevægelser og yderligere udvide deres placering til ydersiden af ​​chloroplasterne via stromuler under immunresponser. Det er dog også meget kontroversielt, om øgede stromuler har positive effekter på antimikrobiel resistens. Caplan et al. rapporterede, at CHUP1-gen-dæmpede N. benthamiana- og Arabidopsis chup1-mutanter viste øgede stromuler, som blev visualiseret med NRIP1-GFP-fusionsprotein, i fravær af patogener og fremmede effektor-udløst HR-celledød under antiviral og antibakteriel immunrespons [95]. I modsætning hertil har Savage et al. viste, at chup1-mutanter af både N. benthamiana og A. thaliana udviste nedsatte stromuler, som blev visualiseret med GFP, i fravær af patogener [97].

Desuden kan chup1-mutanten af ​​N. benthamiana inducere stromuldannelse tilstrækkeligt, når den udfordres med P. infestans, på trods af dens øgede modtagelighed for dette patogen [97]. Nedsat præinvasiv NHR i Arabidopsis med en chup1-mutation mod MAE-type svampepatogener er også blevet rapporteret [48]. Disse uoverensstemmelser kan forklares i fremtidige undersøgelser. Det er bemærkelsesværdigt, at i planteimmunitet er stromulinduktion og chloroplastbevægelser, såsom ECR og fokal akkumulering ved patogengrænsefladen, mere relaterede, men forskellige begivenheder, fordi førstnævnte afhænger af PAMP-signaleringskinase BAK1, mens sidstnævnte ikke gør. Derfor kan distinkte patogen-afledte signaler integreres gennem et epidermalt kloroplast-centreret system for at harmonisere forsvarsresponser.

De epidermale kloroplaster er betydeligt mindre end mesofyl kloroplasterne. Spændende nok kunne forstørrede epidermale kloroplaster i ECR-aktiverede celler imidlertid observeres, og populationen af ​​de forstørrede kloroplaster steg gradvist under inkubation med de ikke-tilpassede svampepatogener (figur 6). Forstørrede kloroplaster blev ikke observeret i den tidlige fase af ECR. Dannelsen af ​​hulrum inde i de forstørrede epidermale kloroplaster blev bekræftet (figur 6). Den fysiologiske betydning af disse ændringer i morfologien af ​​de epidermale chloroplaster under ECR er i øjeblikket uklar, men epidermale chloroplaster kan forstærke den præinvasive NHR via disse yderligere hændelser på det sene stadie af ECR. Alternativt kan planteorganelmorfologi blive påvirket af patogeneffektorer, fordi det er blevet rapporteret, at forbigående ekspression af Colletotrichum effektorproteiner fører til udvidelse af kerner i epidermale celler af N. benthamiana [103]. Hvis sådanne organeludvidelser er blandt patogeninfektionsstrategierne via effektorer, er det i overensstemmelse med det faktum, at mange patogeneffektorer går ind i chloroplaster og målretter mod chloroplast-lokaliserede proteiner [46,47].

5.2. Perinukleær klynger af epidermale kloroplaster og nukleare bevægelser

Kloroplaster er kendt for at klynge sig rundt om kernen til kommunikation mellem organerne, hvor transmissionen af ​​retrograde signaler sker som reaktion på forskellige miljøbelastninger (37,38,104-106). I forsvarsreaktionerne fra N. benthamiana er der rapporteret retrograd ROS-signalering fra perinukleære klyngekloroplaster til kernen gennem stromuler (95); det samme er blevet foreslået i A. thaliana (88,107,108). Interessant nok fører tabet af CHUP1-genet til øget perinukleær clustering af epidermale chloroplaster i både N. bnethamiana og A. thaliana (97. Perinukleær clustering af epidermale chloroplaster blev også observeret under Arabidopsis ECR efter patogenpodning eller i CHUP{10}} udtømte tilstande uden patogen [48]. Disse to plantearter har således lignende reguleringsmekanismer til at kontrollere den perinukleære klyngedannelse af epidermale kloroplaster, hvor CHUP1 viser negative effekter. I betragtning af svækkelsen af ​​ECR ​​og præinvasiv NHR ved den konstitutive overfladepositionering af epidermale kloroplaster i chup1-mutanten af ​​A. thaliana [48], større perinukleær klyngning af epidermale kloroplaster kan også forringes funktionelt. I overensstemmelse med denne idé er CHUP1-knockout N. benthamiana mere modtagelig for P. infestans [97] .

Lysinduceret nuklear bevægelse i Arabidopsis mesofyl- og epidermale fortovsceller er CHUP1-afhængig [74,78]. CHUP1 lokaliserer specifikt til hylsteret af chloroplaster, men ikke kerner, og regulerer chloroplastbevægelser; derfor er den CHUP1-medierede intracellulære bevægelse af epidermale kloroplaster en drivkraft for nuklear bevægelse som reaktion på stærkt lys [74,78]. Tilsvarende migrerer kerner, sammen med perinukleære klyngekloroplaster, til overfladearealet under ECR i A. thaliana, som er tæt forbundet med mængden af ​​CHUP1-proteiner [48]. Det perinukleære endoplasmatiske retikulum repositioneres også til den epidermale overflade under ECR [48]. I N. benthamiana bevæger kernen sig til penetrationsstederne for oomyceten P. infestans [96,109]. Dette er også observeret i andre plantepatosystemer, der anvender svampe- og oomycete-patogener [110-112]. Den fokale akkumulering af kernen var ikke påvirket af øget perinukleær clustering af epidermale chloroplaster i CHUP1-knockout N. benthamiana [97]. I betragtning af at overekspression og udtømning af CHUP1-proteiner har modsatte virkninger på epidermale chloroplastbevægelser under Arabidopsis ECR, ville det være interessant at afgøre, om perinukleær clustering af epidermale chloroplaster undertrykkes af CHUP1-overekspression i N. benthamiana, og dermed om den fokale akkumulering af kerne ved P. infestans-grænsefladen er forstyrret.

6. Konklusioner

Betydningen af ​​chloroplastfunktion i planteimmunitet er bredt anerkendt. Forskning med fokus på typerne af kloroplast er nu dukket op inden for antimikrobielle reaktioner. I betragtning af plantens epidermis funktion som en primær højborg til at afvise fjenden, såsom svampe- og oomycete-patogener med direkte penetreringsevne, er epidermale atypiske kloroplaster et ideelt forskningsemne på grund af deres lille mængde information sammenlignet med velkendte typiske mesofyl-kloroplaster .

Især har nyere undersøgelser afsløret en sammenhæng mellem den intracellulære dynamik af epidermale chloroplaster og planteepidermal immunitet, hvor ECR, fokal akkumulering af epidermale chloroplaster til patogengrænsefladen, stromuldannelse, interorganelkommunikation og andre processer kan orkestreres til at øge antimikrobiel resistens [48,95-97,113]. Chloroplast-lokaliseret CHUP1, som oprindeligt blev identificeret som en regulator af chloroplast-fotoflytningsbevægelser i mesofylceller [76], har en nøglefunktion i epidermale chloroplast-relaterede hændelser som reaktion på patogener. JAC1, en regulator af det fotoinducerede akkumuleringsrespons af chloroplaster, er også involveret i den intracellulære positionering af epidermale chloroplaster under ECR [48]. For at forstå den mekanisme, der ligger til grund for epidermal immunitet via motile chloroplast-centrerede reaktioner, er der behov for yderligere analyse af, hvilke og hvordan komponenterne, der anvendes i chloroplast-fotoflytningssystemet, bidrager til forsvarsreaktionerne i planteepidermis.

Finansiering:

Denne forskning blev finansieret af JSPS KAKENHI Grant Numbers 15K18648, 18K05643 og 21H02194 og af MEXT's Leading Initiative for Excellent Young Researchers (LEADER).

Anerkendelser:

Jeg takker Yoshitaka Takano for hans hjælp og nyttige diskussioner.

Interessekonflikt:

Forfatteren erklærer ingen interessekonflikt.

Referencer

1. Kubo, Y.; Furusawa, I. Melaninbiosyntese: Forudsætning for vellykket invasion af planteværten ved appressoria af Colle-totrichum og Pyricularia. I Svampesporen og Sygdomsinitiering hos Planter og Dyr; Cole, GT, Hoch, HC, red.; Plenum Publishing: New York, NY, USA, 1991; s. 205–217.

2. Heath, MC Nonhost-resistens og uspecifikt planteforsvar. Curr. Opin. Plante Biol. 2000, 3, 315-319. [CrossRef]

3. Lee, H.-A.; Lee, H.-Y.; Seo, E.; Lee, J.; Kim, S.-B.; Åh, S.; Choi, E.; Choi, E.; Lee, SE; Choi, D. Nuværende forståelser af plante-ikke-værtsmodstand. Mol. Plante-mikrobe interagerer. 2017, 30, 5-15. [CrossRef] [PubMed]

4. Collins, NC; Thordal-Christensen, H.; Lipka, V.; Bau, S.; Kombrink, E.; Qiu, J.-L.; Hückelhoven, R.; Stein, M.; Freialdenhoven, A.; Somerville, SC; et al. SNARE-protein-medieret sygdomsresistens ved plantecellevæggen. Nature 2003, 425, 973-977. [CrossRef] [PubMed]

5. Jacobs, AK; Lipka, V.; Burton, R.; Panstruga, R.; Strizhov, N.; Schulze-Lefert, P.; Fincher, GB En Arabidopsis Callose Synthase, GSL5, er påkrævet til sår- og papillærcallose-dannelse. Plantecelle 2003, 15, 2503-2513. [CrossRef]

6. Lipka, V.; Dittgen, J.; Bednarek, P.; Bhat, R.; Wiermer, M.; Stein, M.; Landtag, J.; Brandt, W.; Rosahl, S.; Scheel, D.; et al. Forsvar før og efter invasion bidrager begge til ikke-værtsmodstand i Arabidopsis. Science 2005, 310, 1180-1183. [CrossRef] [PubMed]

7. Stein, M.; Dittgen, J.; Sánchez-Rodríguez, C.; Hou, B.-H.; Molina, A.; Schulze-Lefert, P.; Lipka, V.; Somerville, S. Arabidopsis PEN3/PDR8, en ATP-bindende kassettetransporter, bidrager til ikke-værtsmodstand mod upassende patogener, der kommer ind ved direkte penetrering. Plant Cell 2006, 18, 731-746. [CrossRef] [PubMed]

8. Jensen, MK; Hagedorn, PH; de Torres-Zabala, M.; Grant, MR; Rung, JH; Collinge, DB; Lyngkjaer, MF Transkriptionel regulering af en NAC (NAM-ATAF1,2-CUC2) transkriptionsfaktor dæmper ABA-signalering for effektivt basalt forsvar mod Blumeria graminis f. sp. hordei i Arabidopsis. Plant J. 2008, 56, 867–880. [CrossRef] [PubMed]

9. Bednarek, P.; Pi´slewska-Bednarek, M.; Svatoš, A.; Schneider, B.; Doubský, J.; Mansurova, M.; Humphry, M.; Consonni, C.; Panstruga, R.; Sanchez-Vallet, A.; et al. En glucosinolatmetabolismevej i levende planteceller medierer bredspektret antifungalt forsvar. Science 2009, 323, 101-106. [CrossRef]

10. Pinosa, F.; Buhot, N.; Kwaaitaal, M.; Fahlberg, P.; Thordal-Christensen, H.; Ellerström, M.; Andersson, MX Arabidopsis Phospholipase Dδ er involveret i basalforsvar og ikke-værtsresistens over for meldugsvampe. Plante Fysiol. 2013, 163, 896-906. [CrossRef]

11. Campe, R.; Langenbach, C.; Leissing, F.; Popescu, G.; Popescu, SC; Goellner, K.; Beckers, GJM; Conrath, U. ABC-transportør PEN 3/PDR 8/ABCG 36 interagerer med calmodulin, der ligesom PEN 3 er påkrævet for Arabidopsis nonhost-resistens. Ny Phytol. 2015, 209, 294-306. [CrossRef]

12. Nielsen, ME; Jürgens, G.; Thordal-Christensen, H. VPS9a aktiverer Rab5 GTPase ARA7 for at give distinkt præ- og postinvasiv plante-medfødt immunitet. Plantecelle 2017, 29, 1927–1937. [CrossRef] [PubMed]

13. Hiruma, K.; Onozawa-Komori, M.; Takahashi, F.; Asakura, M.; Bednarek, P.; Okuno, T.; Schulze-Lefert, P.; Takano, Y. Indgangstilstand – afhængig funktion af en indolglucosinolatvej i Arabidopsis for ikke-værtsresistens mod anthracnosepatogener. Plant Cell 2010, 22, 2429-2443. [CrossRef]

14. Hiruma, K.; Nishiuchi, T.; Kato, T.; Bednarek, P.; Okuno, T.; Schulze-Lefert, P.; Takano, Y. Arabidopsis ENHANCED SYGDOMRESISTANCE 1 er påkrævet for patogen-induceret ekspression af plantedefensiner i nonhost-resistens og virker gennem interferens af MYC2-medieret repressorfunktion. Plant J. 2011, 67, 980-992. [CrossRef] 15. Hiruma, K.; Fukunaga, S.; Bednarek, P.; Pi´slewska-Bednarek, M.; Watanabe, S.; Narusaka, Y.; Shirasu, K.; Takano, Y. Glutathion og tryptofan metabolisme er påkrævet for Arabidopsis immunitet under den overfølsomme reaktion på hemibiotrofisk. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2013, 110, 9589-9594. [CrossRef] [PubMed]

16. Irieda, H.; Inoue, Y.; Mori, M.; Yamada, K.; Oshikawa, Y.; Saitoh, H.; Uemura, A.; Terauchi, R.; Kitakura, S.; Kosaka, A.; et al. Konserveret svampeeffektor undertrykker PAMP-udløst immunitet ved at målrette planteimmunkinaser. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2018, 116, 496-505. [CrossRef] [PubMed]

17. Maeda, K.; Houjyou, Y.; Komatsu, T.; Hori, H.; Kodaira, T.; Ishikawa, A. AGB1 og PMR5 bidrager til PEN2-medieret præinvasionsmodstand mod Magnaporthe oryzae i Arabidopsis thaliana. Mol. Plante-mikrobe interagerer. 2009, 22, 1331-1340. [CrossRef]

18. Nakao, M.; Nakamura, R.; Kita, K.; Inukai, R.; Ishikawa, A. Ikke-værtsresistens over for penetration og hyphal vækst af Magnaporthe oryzae i Arabidopsis. Sci. Rep. 2011, 1, 171. [CrossRef] [PubMed]

19. Okawa, C.; Ishikawa, A. MPK6 bidrager til ikke-værtsresistens mod Magnaporthe oryzae i Arabidopsis thaliana. Biosci. Biotechnol. Biochem. 2013, 77, 1320-1322. [CrossRef]

20. Takahashi, T.; Shibuya, H.; Ishikawa, A. SOBIR1 bidrager til ikke-værtsresistens over for Magnaporthe oryzae i Arabidopsis. Biosci. Biotechnol. Biochem. 2016, 80, 1577-1579. [CrossRef]

21. Takahashi, T.; Shibuya, H.; Ishikawa, A. ERECTA bidrager til ikke-værtsresistens over for Magnaporthe oryzae i Arabidopsis. Biosci. Biotechnol. Biochem. 2016, 80, 1390-1392. [CrossRef]

22. Takahashi, T.; Murano, T.; Ishikawa, A. SOBIR1 og AGB1 bidrager uafhængigt til nonhost-resistens over for Pyricularia oryzae (syn. Magnaporthe oryzae) i Arabidopsis thaliana. Biosci. Biotechnol. Biochem. 2018, 82, 1922-1930. [CrossRef] [PubMed]

23. DuPree, P.; Pwee, K.-H.; Gray, JC Ekspression af fotosyntese-gen-promotor-fusioner i bladepidermale celler fra transgene tobaksplanter. Plant J. 1991, 1, 115-120. [CrossRef]

24. Bowes, BG; Mauseth, JD Plant Structure—A Color Guide, 2. udg.; Manson Publishing, Ltd.: London, UK, 2008. 25. Vaughan, K. Immunocytochemistry of Plant Cells; Springer: Dordrecht, Holland, 2013.

For more information:1950477648nn@gmail.com