Virkninger af Cistanche Deserticola Deserticola og Kaempferol på udviklingen af ​​granulosaceller i kyllingeforaggregerede follikler

Abstrakt:For at udforske virkningerne af Cistanche deserticola og Kaempferol på kyllingens follikulær udvikling, analyserede eksperimentet virkningerne af forskellige koncentrationer af Cistanche deserticola og Kaempferol på aktiviteten af ​​kyllingeprægraderede granulosaceller ved hjælp af MTT-metoden og bestemte den optimale koncentration. Real-time fluorescerende kvantitativ PCR blev brugt til at detektere virkningerne af Cistanche deserticola og Kaempferol på proliferation cell nuclear antigen (PCNA), follikel-stimulerende hormon receptor (FSHR) og østrogen receptor af kylling prægraderede granulosaceller (ER ） The virkningen af ​​mRNA-ekspression; Virkningerne af Cistanche deserticola og kaempferol på ovariefollikulær udvikling blev analyseret ved in vitro-dyrkning af ovarievæv. Resultaterne viste, at både Cistanche deserticola og Kaempferol i en koncentration på 1 × Ved 10-4 mol/L , kan betydeligt fremme spredningen af ​​granulosaceller, mens den også fremmer PCNA, FSHR og ER i granulosacellers mRNA-ekspression (P<0.01); Cistanche deserticola and Kaempferol significantly increased the number of follicles in ovarian tissue, and granulosa cells proliferated from monolayer to multilayer. Studies have shown that Cistanche deserticola and Kaempferol can promote the proliferation of aggregate granulosa cells, and promote FSHR and ER α MRNA expression promoting the development of pre-grade follicles towards grade follicles.

Nøgleord: Cistanche deserticola; Kaempferol; Kylling; Granulære celler før kvalitet; Ovarievæv

Kinesisk urtecistanche

For store æglæggende hønebedrifter påvirker niveauet af ægproduktionshastigheden de økonomiske fordele, og udviklingen af ​​æglæggende follikler påvirker direkte produktionsydelsen for æglæggende høner. Follikler er opdelt i tre stadier i henhold til deres funktionelle status: primære follikler, sekundære follikler og modne follikler [1]. Hver dag udvælges en follikel til at udvikle sig til modenhed, og ægget udstødes i æggelederen, passerer gennem tragten, forstørrelsen, isthmus, livmoder og vagina og danner en æglignende struktur [2-3]. Starten af ​​primitive follikler er relateret til udviklingen af ​​follikulære granulosaceller. Follikelstimulerende hormon (FSH) binder sig til follikelstimulerende hormonreceptor (FSHR) på granulosaceller, hvilket inducerer dannelsen af ​​luteiniserende hormonreceptor (LHR) og stimulerer syntesen af ​​steroidhormoner [4-6]. FSH og luteiniserende hormon (LH) virker synergistisk på granulosaceller for at fremme follikulær udvikling og modning, og deltager i udvælgelsen af ​​dominerende follikler. Forskning har fundet ud af, at selvom primordiale follikler, der mangler granulosaceller, er blevet aktiveret, udvikler de i sidste ende alle atresi [7]. Under follikulær udvikling kan østrogen fremme spredningen af ​​ovariegranulosaceller, mens det samarbejder med FSH og LH for at fremme spredningen og differentieringen af ​​ovariegranulosaceller. Når indholdet af østrogen i plasmaet stiger, vil det blive ført negativt tilbage til hypothalamus gennem det perifere kredsløb, og dermed hæmme udskillelsen af ​​Gonadotropin-releasing hormon (GnRH) fra hypothalamus. GnRH kan stimulere adenohypofysen til at syntetisere og udskille FSH og LH for at fremme ovariefollikeludvikling. Når GnRH-sekretionen er lav, kan den hæmme sekretionen af ​​FSH og LH, hvilket i sidste ende fører til hæmning af follikulær udvikling [8-9].

Tidligere undersøgelser viste, at Cistanche deserticola og Cuscuta chinensis havde en god reparationseffekt på atrofiske æggeledere og beskadigede æggeledere efter bedring, og kunne forbedre æglæggende høner [10]. Inden for husdyrproduktion kan anvendelsen af ​​flavonoider forbedre dyreproduktionens ydeevne betydeligt, forbedre dyresygdomsresistens og forbedre dyrenes immunfunktion.

Kinesisk medicin som ginseng, Cistanche deserticola og astragalus

De samlede flavonoider af Cistanche deserticola kan i væsentlig grad fremme spredningen af ​​kyllinge-pre-grade og grad follikulære granulosaceller in vitro, transkriptionsniveauet af steroidogent hurtigt regulatorisk protein (StAR), kolesterol-sidekædespaltningsenzym (CYP11A1) mRNA og sekretionen af progesteron. Den repræsentative komponent af det samlede antal flavonoider i Cistanche deserticola er Cistanche deserticola. Dens molekylvægt er lille, og den har den fordel, at den passerer gennem blod-hjerne-barrieren. Samtidig har det antiinflammatoriske, antitumor- og østrogenlignende virkninger [11]. Den vigtigste kemiske komponent i Cuscuta chinensis er de samlede flavonoider af Cuscuta chinensis. På nuværende tidspunkt er en række flavonoider blevet isoleret fra Cuscuta chinensis, hovedsageligt Quercetin og Kaempferol, som har høj antioxidantaktivitet.

Anvendelsen af ​​dodder frø flavonoid ekstrakt i hunrotter udviser østrogen aktivitet, som har en vis effekt på at fremme forbedringen af ​​ovarie hCG/LH receptor funktion; Det har en Gonadotropin effekt på unge mus og kan fremme udviklingen af ​​deres reproduktive system [12-14].

I dette eksperiment udvalgte vi kyllinge-pre-grade follikulære granulosaceller og undersøgte den fremmende effekt af Cistanche deserticola og Kaempferol på kylling pre-grade follikulær granulosa celleproliferation og relateret receptorekspression gennem virkningen af ​​Cistanche deserticola og Kaempferol på kylling follikulær udvikling, at give en teoretisk reference til forskning og udvikling af sikre, effektive og restfrie fodertilsætningsstoffer for at forbedre produktionen af ​​lag.

Virkninger af Cistanche-tonificerende nyre

1 Materiale og metoder

1.1 Testmaterialer

Cistanche deserticola (renhed større end eller lig med 98 procent) blev købt fra Shanghai Jizhi Biochemical Technology Co., Ltd; Kaempferol (renhed større end eller lig med 98 procent) blev købt fra Shanghai Aladdin Biochemical Technology Co., Ltd.

1.2 Vigtigste reagenser og instrumenter

Hovedreagenser: type II collagenase og DMEM blev købt fra Thermo Fisher Technology (China) Co., Ltd; DMSO blev købt fra Beijing Solebao Technology Co., Ltd; M5 Super qPCR RT-sættet med gDNA-fjernelse af revers transkriptionskit blev købt fra Beijing Jumei Biotechnology Co., Ltd. Hovedinstrument: BCM-1300En rensningsarbejdsbord købt fra Shanghai Boxun Industrial Co., Ltd. Medical Equipment Factory; AXTGL20M højhastigheds frysecentrifugen blev købt fra Hunan Hexi Instrument Equipment Co., Ltd; Heracell 150i GP konstant temperatur inkubator blev købt fra Bingshan Songyang Biotechnology (Dalian) Co., Ltd; LightCycle ® 96-type fluorescens kvantitative PCR-instrument og DR-200BS-type enzymmærkningsinstrument blev begge købt fra Bole Life Medical Products (Shanghai) Co., Ltd.

1.3 Isolering og ekstraktion af granulosaceller fra follikler før kyllingeklassificering

Tredive 150-dage gamle sunde Hailan brune æglæggende høner (leveret af Hebei Baoding Dingnong Company) blev udvalgt, dræbt af halspulsåren, og deres æggestokke blev taget ud aseptisk (in vivo dyreforsøg var efter retningslinjerne godkendt af den dyreetiske komité ved Hebei Agricultural University). Pre-grade follikler kan opdeles i små hvide follikler (SWF,<2 mm), large white follicles (LWF, 3-5 mm), small yellow follicles (SYF, 6-8 mm), and large yellow follicles (LYF, 9-12 mm). Collect granulosa cells from pre-graded follicles with a diameter of 6-8 mm and prior stages. The grading of follicles (see Figure 1). 

Bemærk: SWF repræsenterer små hvide follikler, LWF repræsenterer store hvide follikler, SYF repræsenterer små gule follikler, LYF repræsenterer store gule follikler, og F1, F2, F3, F4 og F5 repræsenterer fem modne follikler.

De opsamlede follikler blev vasket tre gange med 75 procent alkohol og til sidst vasket én gang med PBS. Den sterile nål blev brugt til at frigive blommevæsken i PBS indeholdende 3 procent penicillin og Streptomycin, fjerne membrancellelaget og adskille det granulære cellelag. 15 ml EP-rør blev taget for at tilføje folliklernes afskårne granulosacellelag, og 4 ml 0.1 procent type II collagenase blev tilsat. Den blev rystet i en shaker ved 37 grader i 3 minutter. Efter at oscillationen er afsluttet, tilsæt en lige så stor mængde kulturopløsning indeholdende 0,5 procent FBS for at afslutte fordøjelsen. Filtrer med henholdsvis en 200 mesh sigte og en 400 mesh sigte. Centrifuger filtratet ved stuetemperatur ved 1200 r/min i 5 minutter og gentag centrifugering to gange. Kassér supernatanten, tilsæt dyrkningsmediet, blæs og aspirér jævnt, og fortynd cellesuspensionen til 5 × 106 stykker/ml og tilsættes jævnt i en petriskål med en diameter på 100 mm og dyrket ved 37 grader og 5 procent CO2 .

1.4 Virkninger af Cistanche deserticola og Kaempferol på granulosacelleaktivitet

Granulære celler blev rutinemæssigt dyrket i et DMEM-medium indeholdende 10 procent føtalt bovint serum. Celler i den logaritmiske vækstfase blev taget og fordøjet med 2,5 g/l trypsin. Celler blev jævnt spredt i plader med 96 brønde. Hver plade blev opdelt i 10 grupper med 6 gentagne huller i hver gruppe. Tilføj 200 til hullerne omkring kulturpladen μ L PBS fungerer som en fugtgivende pore. Koncentrationen af ​​Cistanche deserticola er indstillet til 1 × 10-4 mol/L, 1 × 10-5 mol/L, 1 × 10-6 mol/L, 1 × 10-7 mol/ L, 5 × 10-8 mol/L, 1 × 10-8 mol/L, 5 × 10-9 mol/L, 1 × 10-9 mol/L, 1 × {{ 24}} mol/L. Indstil en tom kontrolgruppe. Efter samdyrkning af celler med Cistanche deserticola i 24 timer tilsættes 10 procent til hver brønd μ 5 mg/ml MTT af L. Efter yderligere dyrkning i 4 timer tilsættes 150 til hver brønd μ L DMSO, og osciller i 3 minutter i en konstant temperatur shaker ved 37 grader. Mål absorbansen ved 450 nm. Forsøget blev gentaget tre gange, og processen med at screene den optimale sikre dosis af Kaempferol for granulosaceller var den samme som ovenfor.

Ørken levende cistanche-Tonificerende nyre

1.5 Virkninger af Cistanche deserticola og Kaempferol på prolifererende cellekerneantigen, follikelstimulerende hormonreceptor og østrogenreceptor i granulosaceller

Effekten af ​​mRNA-ekspression blev observeret i granulosaceller i den logaritmiske vækstfase, inokuleret i tre kulturskåle med en celletæthed på 5 x 106 stykker/ml. Petriskåle blev opdelt i tomme kontrolgrupper; Cistanche deserticola gruppe, det vil sige efter 24 timers cellekultur, tilsættes 1 × 10-4 mol/L Cistanche deserticola; I Kaempferol-gruppen tilsættes 1 efter 24 timers cellekultur × 10-4 mol/L Kaempferol; Østrogengruppe, tilsæt 5 efter 24 timers cellekultur × Behandl med 10 til 8 mol/L østrogen. Efter 24 timers dyrkning kasseres alt dyrkningsmediet, skylles med PBS, tilsættes 1 mL bugspytkirtelenzym til fordøjelse, og efter et par minutter tilsættes en tilsvarende mængde dyrkningsmedium for at afslutte fordøjelsen. Centrifuger cellesuspensionen ved 1000 r/min i 5 minutter, kassér supernatanten, og tilsæt Trizol-reagens i en isboks. Efterfølgende blev chloroform tilsat og kraftigt rystet, anbragt i en isboks i ca. 3 minutter og centrifugeret ved 4 grader ved 12000 r/min i 10 minutter. Overfør RNA til et nyt EP-rør, tilsæt et tilsvarende volumen isopropanol, bland forsigtigt godt og lad det stå i en isboks i 10 minutter. Efter centrifugering ved 4 grader i 10 minutter ved 12 000 r/min, kasseres supernatanten og vask bundfaldet med 80 procent ethanol. Centrifuger ved 10 000 r/min og 4 grader i 5 minutter, kassér ethanol, lufttørre i 5-10 minutter, og tilsæt DEPC-vand til blæsning og sugning for at opløse bundfaldet. Mål RNA-koncentrationen ved hjælp af et UV-spektrofotometer.

Brug M5 Super plus qPCR RT-sættet med gDNA-fjernelseskit til omvendt transkription for at opnå cDNA. Påvisning af prolifererende cellekerneantigen, follikelstimulerende hormonreceptor og østrogenreceptor i granulosaceller ved real-time fluorescerende kvantitative PCR MRNA relative transkriptionsniveau. Primerinformationen er vist i tabel 1, og primerne blev designet og syntetiseret af Shenggong Biotechnology (Shanghai) Co., Ltd. Intern referencegruppe - Actin, det relative transkriptionsniveau af mRNA for hvert gen er bestemt af 2- ΔΔ Beregnet ved Ct.

Tabel 1 Primeroplysninger

1.6 In vitro dyrkning og morfologisk observation af ovarievæv

Tag æggestokkene fra 30 40-daggamle Hailan brune æglæggende høner og skyl det tre gange med 75 procent alkohol. Skær ovarievævet i små stykker af 1-2 mm3 i et ultrarent bord med en hastighed på 500 μL pr. og 30 nmol/L natriumselenit). Efter 72 timers dyrkning i inkubatoren, behandles i henhold til grupperingssituationen. Ovarievæv blev opdelt i en tom kontrolgruppe, Cistanche deserticola-gruppe, Kaempferol-gruppe og østrogengruppe. Efter 72 timers dyrkning blev ovarievævet fikseret med 4 procent formaldehyd, og vævssnit blev rutinemæssigt forberedt til observation under et optisk mikroskop.

1.7 Statistik og analyse

qPCR-dataene blev analyseret ved hjælp af Biorad CFX Manager 2.0-software og Microsoft Excel-software, og SPSS 21.0-software blev brugt til envejs ANOVA. Duncans metode blev brugt til flere sammenligninger. Resultaterne er repræsenteret som "middel ± standardafvigelse" og plottet ved hjælp af GraphPad Prism 5.0 software. P<0.05 indicates significant differences, while P<0.01 indicates extremely significant differences.

2 Resultater og analyse

2.1 Virkninger af Cistanche deserticola og Kaempferol på spredningen af ​​granulosaceller

Det kan ses af figur 2 og 3, at både Cistanche deserticola og Kaempferol kan fremme proliferationen af ​​granulosaceller. Ved 1 × 10-4~1 × Inden for en koncentrationsgradient på 10-10 mol/L sammenlignet med blindkontrolgruppen er koncentrationen 1 × 10-4 mol/L, 1 × {{ 9}} mol/L, 1 × 10-6 mol/L, 1 × Ved 10-7 mol/L var forskellen ekstremt signifikant (P<0.01), with a concentration of 5 × The difference was significant at 10-8 mol/L (P<0.05).

Bemærk: "* *" angiver en signifikant forskel sammenlignet med den tomme kontrolgruppe (P<0.01), and "*" indicates a significant difference compared to the blank control group (P<0.05), the same below.

Fig. 2 Absorbansværdier for granulosaceller udsat for Cistanche deserticola ved forskellige koncentrationer i 24 timer

Fig. 3 Absorbansværdier for granulosaceller udsat for Kaempferol ved forskellige koncentrationer i 24 timer

2.2 Virkninger af Cistanche deserticola og Kaempferol på prolifererende cellekerneantigen, follikelstimulerende hormonreceptor og østrogenreceptor i kyllinge-pregranulosaceller. Virkningen af ​​mRNA på relative transkriptionsniveauer

Det kan ses fra tabel 2, at grupperne Cistanche deserticola og Kaempferol har virkninger på prolifererende cellekerneantigen, follikelstimulerende hormonreceptor og østrogenreceptor i kyllingeprægraderede granulosaceller. Det relative transkriptionelle niveau af mRNA var signifikant højere end det for blanke kontrolgruppe og østrogengruppe (P<0.05 or P<0.01), and the follicle-stimulating hormone receptor and estrogen receptor of chicken pre aggregate cells in the Kaempferol group α The transcription level of mRNA is the highest (P<0.01).

Tabel 2 Virkninger af Cistanche deserticola og Kaempferol på prolifererende cellekerneantigen, follikelstimulerende hormonreceptor og østrogenreceptor i kyllinge-pregranulosaceller. Virkningen af ​​mRNA på relative transkriptionsniveauer

2.3 Histologisk observation af æggestokke

Det kan ses af figur 4, at sammenlignet med kontrolgruppen steg antallet af follikler i ovarievæv behandlet med Cistanche deserticola og Kaempferol signifikant, og granulosaceller prolifererede fra monolag til flerlag. Sammenlignet med østrogengruppen har Cistanche deserticola-gruppen og Kaempferol-gruppen en mere indlysende evne til at fremme ovarievævsmodning og -udvikling, og Cistanche deserticola-gruppen og Kaempferol-gruppen har en mere tydelig effekt end Kaempferol-gruppen.

3 Diskussion

3.1 Virkning af Cistanche deserticola og Kaempferol

Hele processen med follikulær udvikling er ledsaget af spredning af granulosaceller, som er af stor betydning for follikulær udvikling. De initierer væksten af ​​primitive follikler ved at konstruere gunstige molekylære mikromiljøer. Under follikulær udvikling spiller apoptose af granulosaceller en vigtig rolle i regulering af follikulær vækst, ægcellemodning og østrogenudskillelse [15-16]. Cistanche deserticola, en kinesisk urtemedicin, har en kønshormonlignende virkning, som kan fremme udviklingen af ​​dyrefollikler og sædproduktion, fremme den normale ankomst af brunst, forbedre ovariefunktion og aktivitet og forbedre reproduktiv funktion. Cuscuta chinensis, som en traditionel nyretonificerende kinesisk medicin, har antioxidant-, reproduktions- og anti-aldringseffekter som dens effektive komponent i flavonoider. Undersøgelser har vist, at en vis dosis af flavonoider fra Cuscuta chinensis har en proliferativ effekt på musetestikulære interstitielle celler [17-18]. I dette eksperiment blev Cistanche deserticola og Kaempferol, som hovedkomponenterne i traditionelle kinesiske lægemidler Cistanche deserticola og dodder, udvalgt til at studere deres virkninger på ekspressionsevnen af ​​kyllingefollikulære granulosaceller og deres relaterede receptorer og ovarievæv for at bekræfte virkningerne af Cistanche deserticola og Kaempferol om udviklingen af ​​fjerkræ-reproduktionssystem.

Virkninger af Cistanche-tonificerende nyre

Klik her for at se produkter fra Cistanche for nyresygdom

【Spørg om mere】 E-mail:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

3.2 Prolifererende cellekerneantigen, follikelstimulerende hormonreceptor og østrogenreceptor Rollen af

PCNA er et prolifererende cellekerneantigen, som spiller en vigtig rolle i initieringen af ​​celleproliferation og er en god indikator for celleproliferation. Derfor bekræftede stigningen i PCNA i testresultaterne, at Cistanche deserticola og Kaempferol fremmer celleproliferation, når de virker på granulosaceller. FSH er det vigtigste hormon, der fremmer follikeludvikling [19], og ekspressionsstedet for follikelstimulerende hormonreceptor (FSHR) er hovedsageligt koncentreret i æggestokkene og folliklerne. Den vigtigste måde, hvorpå FSH deltager i høns' reproduktive aktiviteter, er ved at regulere udviklingen af ​​follikler. Når sekretionen af ​​FSH stiger, kan det fremme stigningen af ​​FSHR i granulosaceller, og kombinationen af ​​de to kan inducere syntesen af ​​LHR ved at aktivere Aromatase. Kyllingen kan fremkalde ægløsning under den synergistiske virkning af FSH og LH [20-22]. Før follikelselektion udtrykker granulosaceller kun basale niveauer af FSHR, som bruges til at modtage FSH-signaler og producere lave niveauer af cyklisk adenosinphosphat for at opretholde celleaktivitet. Når ekspressionen af ​​FSHR er væsentligt opreguleret i granulosaceller i en follikel af prægraduering, tyder det på, at folliklen vil blive udvalgt til at blive en follikel af grad [23-24]. I denne undersøgelse, sammenlignet med kontrolgruppen, var ekspressionen af ​​FSHR mRNA i Cistanche deserticola og Kaempferol grupperne signifikant øget, hvilket indikerer, at Cistanche deserticola og Kaempferol kan fremme transkriptionen af ​​FSHR mRNA, øge sekretionen af ​​FSH og fremme selektionen af follikler som kvalitet follikler. E2 er en slags steroidhormon, der udskilles af theca-celler. Dens funktion er at fremme den seksuelle modenhed af hundyr og vise den anden seksuelle egenskab. Under påvirkning af FSH omdanner aromatase produceret af ovariegranulosaceller androgen til E2, som reguleres af to østrogenreceptorer (ER og ER) Det har virkninger på forskellige organer hos hundyr og spiller en vigtig rolle i dyrenes reproduktion, især i fysiologisk aktiviteter såsom follikulær udvikling Under follikulær vækst er østrogen et centralt intracellulært regulatorisk molekyle, der accelererer proliferationen af ​​granulosaceller og øger virkningerne af FSH og LH på proliferation og differentiering af æggestokkeceller. ER Den vigtigste justering er negativ feedback, ER Udviklingen af ​​follikler reguleres gennem både indre og ydre veje i æggestokken [26] ER Det er hovedsageligt udtrykt i væv og organer såsom mælkekirtlen, livmoderen og vagina hos dyr, mens ER Det er hovedsageligt udtrykt i testiklerne , æggestokke, prostata og hypothalamus [27].

I denne undersøgelse blev ER Ekspressionsniveauerne for Cistanche deserticola og Kaempferol signifikant opreguleret i Cistanche deserticola- og Kaempferol-grupperne, hvilket tyder på, at cistanche og kaempferol har positive effekter på udvikling, modning og ægløsning af kyllingeæggestokke. Resultaterne af denne undersøgelse viste, at ER blev målt. Ekspressionsniveauet er relativt lavt. Dette er i overensstemmelse med Guo Miaos [28] forskningsresultater om, at i den embryonale udvikling af kyllinger, har æggestokkene på tidlige kyllinger specifikke bindingssteder for ER. I de hvide follikler, gule follikler og granulosaceller hos kyllinger, ER Udtrykket er signifikant højere end ER. Sojaflavonoider, som et plantebaseret østrogen, kan øge æglægningshastigheden for æglæggende høner, når de tilsættes til kosten [29], hvilket indikerer en direkte sammenhæng mellem østrogenhormonniveauer og ægproduktionshastighed.

Figur 4 Ovarievæv efter HE-farvning (10 ×）

3.3 Virkninger af Cistanche deserticola og Kaempferol på ovarievæv

I dette eksperiment, ved at dyrke Cistanche deserticola og Kaempferol med henholdsvis ovarievæv, blev det fundet, at antallet af follikler i ovarievæv påvirket af Cistanche deserticola og Kaempferol steg signifikant, og granulosaceller prolifererede fra monolag til flerlag. Dette beviser yderligere, at Cistanche deserticola og Kaempferol kan fremme ovarieudvikling fra et histologisk perspektiv. Det prolifererende celleantigen, follikelstimulerende hormonreceptor og østrogenreceptor målt i resultaterne af dette eksperiment. Ændringerne i indikatorerne bekræftede, at Cistanche deserticola og Kaempferol har østrogenlignende effekter, hvilket giver et eksperimentelt grundlag for at udforske målet for hovedkomponenterne af Cistanche deserticola og dodder.

4. Konklusion

Denne undersøgelse bekræftede, at Cistanche deserticola og Kaempferol kan fremme spredningen af ​​kyllingeprægraderede granulosaceller og øge PCNA, FSHR og ER. Transskriptionsniveauet af mRNA kan i væsentlig grad fremme udviklingen af ​​follikler.

Reference:

［1］Yang Pengyun, Song Beibei, Ma Jinrui, et al. Granulosacellernes rolle i ægdannelsen [J] Poultry Science, 2021 (11): 50-54

［2］ HUO SY,LI YR,GUO Y, et al. Forbedrende virkninger af Epimedi⁃ um flavonoider på de udvalgte reproduktive egenskaber hos laghøns efter tvungen smeltning［J］. Fjerkrævidenskab, 2020,99（5）: 2757-2765.

［3］ HUO SY,LI YR,ZHANG S, et al. Funktioner af Epimedium på regresserede æggeledere og follikler fra kraftsmeltede laghøner ［J］. Journal of World's Poultry Research, 2020,10（2）:326- 335.

［4］ RAJU GR,CHAVAN R,DEENADAYAL M, et al. Luteiniserende hormon og follikelstimulerende hormonsynergi: en gennemgang af rollen i kontrolleret ovariehyperstimulering (J. Journal of human reproductive ences, 2013,6 ​​(4): 227-234.

［5］ SCHMIDT D. Den murine winged-helix transkriptionsfaktor Foxl2 er påkrævet til granulosacelledifferentiering og ovarievedligeholdelse［J］. Udvikling, 2004,131(4):933-942.

［6］ SULLIVAN MW, STEWART-AKERS A, KRASNOW JS, et al. Ovarieresponser hos kvinder på rekombinant follikelstimulerende hormon og luteiniserende hormon (LH): en rolle for LH i de sidste stadier af follikulær modning (J). Journal of clini⁃ cal endocrinology & metabolism, 1999,84（1）:228-232.

［7］ GUO Y, LI YR, ZHANG S, et al. Effekten af ​​totale flavonoider af epimedium på udvikling af granulosaceller hos æglæggende høner ［J］. Fjerkrævidenskab, 2020,99（9）:4598-4606.

［8］ ZHANG WD,LI N,DU ZR, et al. IGF-1-receptor er involveret i de regulerende virkninger af icariin og icaritin i astrocytter under basale tilstande og efter en inflammatorisk udfordring［J］. European journal of pharmacology, 2021,906 (5): 174269- 174278.

［9］ FREDERIQUE RZ, MIGUEL F, GE Y, et al. Regulatorisk arkitektur af L T2 gonadotrope cellen, der ligger til grund for responsen på gonadotropin-frigivende hormon［J］. Grænser i endokrinol⁃ ogi, 2018,9:34.

［10］ Huo Shuying, Kang Jingmin, Li Yurong, et al Effekten af ​​"Yimu Powder" på reparation af æggeledere og æglæggende ydeevne hos æglæggende høner [J] Chinese Poultry, 2018, 40 (19): 4

［11］ WANG S,WANG Q,WANG H, et al. Induktion af ROS- og DNA-skadeafhængig senescens af icaritin bidrager til dets antitumoraktivitet i hepatocellulære carcinomceller［J］. Farmaceutisk biologi, 2019,57（1）:424-431.

［12］ Wang Jianhong, Wang Minzhang, Wu Qinghua, et al. Effekten af ​​flavonoider fra Cuscuta chinensis på ovarieendokrine funktion hos stressede rotter [J] Kinesisk urtemedicin, 2002 (12): 46-48

［13］Miao Jiangxia Fremskridt inden for forskning i aktive komponenter og virkningsmekanisme af dodderfrø til regulering af reproduktion//Proceedings of Academic Conference on Pharmaceutical Phytochemistry and Sustainable Development of Traditional Chinese Medicine Resources (I), 2009: 323-325

［14］ TAO CC, WU Y, GAO X, et al. Antitumorvirkningerne af Icari⁃-tin mod brystkræft er relateret til østrogenreceptorer［J］. Nuværende molekylær medicin,2020,21（1）:73-85.

［15］ MONNIAUX, DANIELLE. Drivning af follikulogenese ved hjælp af oo⁃ cyte-somatisk celledialog: lektioner fra genetiske modeller［J］. The⁃ riogenology, 2016,86（1）:41-53.

［16］TAKASHI SHIMIZU A,NAOMICHI KOSAKA A,CHIAKIMU⁃ RAYAMA A, et al. Apelin- og APJ-receptorekspression i granulosa- og theca-celler under forskellige stadier af follikulær udvikling i den bovine ovarie: involvering af apoptose og hormonregulering - videnskabsdirekte ［J］. Animal Reproduction Science, 2009,116 (1-2):28-37.

［17］ Lin Siwen, Chen Shaobo, Yin Changchang, et al. Østrogen effekt af totale flavonoider af Cistanche deserticola deserticola på at fremme osteogen differentiering ［ J ］ Research and Development of Natural product, 2020, 32 (3): {{4}

［18］ Tao Jinliang, Wang Xiao, Wei Yuanyuan, et al. Flavonoiders beskyttende virkning fra Cuscuta chinensis på BPA-induceret unormal sekretion af mandlige hormoner i musetestikulære interstitielle celler [J] Progress in Animal Medicine 2019, {40 (5): {4}}

［19］ Wang Peng, Hou Deyu, Shi Liguang, et al. Danzhou Chicken FSH Study on Single-nucleotid polymorphism of gene ［ J ］ Heilongjiang Animal Husbandry and Veterinary Medicine, 2018, 10 (19): {{5}

［20］ ZHANG M,SHI H, SEGALOFF DL, et al. Ekspression og lokalisering af luteiniserende hormonreceptor i hunmusens reproduktionskanal［J］. Reproduktionsbiologi, 2001,64（1）: 179-187.

［21］ Li Qin, Wang Qigui TGF- Forskningsfremskridt og udsigter for familiemedlemmer, der regulerer follikulær udvikling hos fjerkræ ［ J ］ Chinese Poultry, 2019, 41 (19): 1-5

［22］Guan Hongbin, Li Qingzhang Forskningsfremskridt vedrørende follikelstimulerende hormon [J] Journal of Northeast Agricultural University, 2002, 8 (3): 306-311

［23］ Wu Xinpei, Wang Shuying Immunhistokemisk lokalisering af FSHR og LHR i æggestokkene på Laiwu Black Goat ［ J ］ Life Science Research, 2006, 25 (4): 367-371

［24］ TISCHKAU SA, HOWELL RE, HICKOK JR, et al. Den lu⁃-teiniserende hormonstigning regulerer det cirkadiske clock-genudtryk i kyllingeæggestokken［J］. Chronobiology international, 2011,28（1）:10-20.

［25］Tang Haifei, Wang Zhiwen, Zheng Xuesong, et al. Fremskridt inden for østrogenfunktionsforskning [J] Reproduction and Contraception, 2019, 39 (4): 334-340

［26］ Liu Lingbin Effekt af monokromatisk strålingslys på østrogenreceptor (ER , ER ）, virkningen af ​​progesteronreceptor (PR-A, PR-B) ekspression i ovarievæv Ya'an: Sichuan Agricultural University, 2013

［27］ COUSE JF, LINDZEY J, GRANDIEN K, et al. Vævsfordeling og kvantitativ analyse af østrogenreceptor-alfa (ERal-pha) og østrogenreceptor-beta (ERbeta) messenger-ribonsyre i vildtype-ribonsyren og ERalpha-knockout-mus［J］. En⁃ docrinology, 1997, 138 (11): 4613-4621.

［28］Guo Miao ER i æglægningsvæv hos æglæggende høner Tilsyneladende regulering af dynamiske ændringer og screening af regulatorgenet Tai'an: Shandong Agricultural University, 2017. [Zhao Biqian Forskningsfremskridt vedrørende anvendelsen af ​​daidzein i produktionen af ​​æglæggende høner [J ] Guangdong Feed, 2017, 26 (8): 31-33