Echinacoside fremmer spredningen af ​​humane renale tubulære epitelceller ved at blokere den HBX/TREM2-medierede NF-κB signalvej

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com

YuFan ZHanG, QinFanG Wu, liMin ZHonG, donGWei GonG

Abstrakt.

Hepatitis B virus X (HBX) protein er påkrævet til replikation af HBV og spiller en rolle i udviklingen af ​​hepatitis hos mennesker. Imidlertid er den underliggende funktion af HBX under HBV-induceret kronisk glomerulonefritis (HBV-Gn) ukendt. (echinacoside fra cistanche)(ecH) er et phenylethanoid glycosid fra Cistanche-slægten, som besidder stærk antiapoptose og neurobeskyttende aktiviteter. i denne undersøgelse blev funktionen af ​​HBX og forholdet mellem HBX og ecH i humane renale tubulære epitelceller (rTecs; HK-2 cellelinje) undersøgt. revers transkription-kvantitative Pcr- og western blot-analyser blev brugt til at kvantificere mRNA- og proteinekspressionsniveauerne af HBX i henholdsvis HK-2-celler. Celletællingskit-8-assayet blev udført for at analysere celleproliferation. Flowcytometrianalyse blev anvendt til at bestemme apoptosehastigheden. HBX viste antiproliferative og proapoptotiske virkninger i HK-2-celler og var positivt forbundet med udløsende receptor udtrykt på myeloid celle 2 (TreM2) ekspression. Ydermere forstyrrede ECH funktionen af ​​HBX i HK-2-celler, der fungerede som en HBX-undertrykker. Desuden blev en specifik NF‑κB-hæmmer, PdTc, brugt til yderligere at undersøge forholdet mellem HBX og nF-κB. Resultaterne antydede, at nF-KB var involveret i HBX/TreM2-signalvejen og negativt reguleret TreM2-ekspression i RTECS. Denne undersøgelse gav ny indsigt i funktionen af ​​HBX og indikerede også den potentielle værdi af ECH som et terapeutisk middel for HBV-Gn.

Introduktion

Hepatitis B-virus (HBV) er en Hepadnaviridae-virus, som fører til akut og kronisk hepatitis hos mennesker (1). HBV forårsager ikke kun vedvarende eller forbigående infektion i leveren, men inficerer også ekstrahepatisk væv, herunder bugspytkirtlen, galdegangen, lymfesystemet og nyrerne (2). Desuden er HBV-infektion tæt forbundet med kronisk glomerulonefritis (HBV-Gn); dog er de molekylære mekanismer af HBV under HBV-Gn ikke fuldstændigt forstået (3,4).

HBV regulatorisk hepatitis B virus X (HBX) protein er påkrævet til HBV replikation (5,6). en række undersøgelser har rapporteret, at HBX fremmer celleproliferation under HBV-infektionsassocieret hepatokarcinom (7-9). Humane renale tubulære epitelceller (rTecs) er en stor del af det renale tubulære interstitium og spiller en aktiv rolle ved nyrebetændelse (10). rTec apoptose er tæt forbundet med dysfunktionen af ​​det tubulære interstitium, som efterfølgende fører til progression af HBV-Gn (10). HBX udtrykkes primært i rTec-celler og forårsager rTec-apoptose og nyrerørlæsioner hos patienter med HBV-Gn (11,12). Ydermere er det blevet rapporteret, at HBX undertrykker spredningen af ​​rotte-rTec'er (13), og HBX-overekspression accelererer cellecyklusprogressionen fra G1- til S-fase i primære rTec'er, hvilket fører til cellecyklusstop i S-fasen (14). Derfor kan identifikation af en HBX-inhibitor give et nyt terapeutisk middel til HBV-Gn. Det præcise molekylære netværk af HBX i humane rTecs er dog ikke fuldstændigt forstået.(echinacoside fra cistanche)(ecH) er en naturlig forbindelse udvundet afCistancheplanter, som viser antiapoptotisk og anti-inflammatorisk virkning (15,16). En tidligere undersøgelse rapporterede, at ecH inducerer proliferation og forhindrer apoptose af tarmepitelceller (17). Ydermere er ecH blevet rapporteret at accelerere knogleregenerering ved at øge proliferationen af ​​osteoblastceller (18). ecH kan også reducere HBV-replikation, antigenekspression og inflammation i rotte-tarm-epitelceller (16,19). Den biologiske effekt af ecH på rTecs er dog ikke blevet fuldstændig belyst.

TreM2-overekspression fremmede proliferationen af ​​gliomceller (22). I modsætning hertil reducerer TreM2 knockdown translokationen af ​​nF-KB til kernen i degenerative humane nucleus pulposus-celler (23). Desuden er TreM2 blevet identificeret som et nyt terapeutisk mål for human intervertebral diskdegeneration (23). Imidlertid er den biologiske funktion af TreM2 i humane rTecs ikke blevet rapporteret. i denne undersøgelse blev HBX-overekspression (oeHBX) induceret i humane rTecs (HK-2-cellelinje) og efterfølgende effekten af ​​ecH(echinacoside fra cistanche) på transficerede oeHBX-celler blev undersøgt. Formålet med denne undersøgelse var at undersøge funktionerne af HBX og den potentielle værdi af ecH som et effektivt terapeutisk middel for HBV-Gn.

Materialer og metoder

Celle kultur.Den humane rTec-cellelinje HK-2 blev købt fra Shanghai Yaji Biotechnology co., ltd. HK-2-celler blev dyrket i DME/F12-medier (kat. nr. SH30023.01B; Hyclone; cytiva) suppleret med 10 procent føtalt bovint serum (kat. nr. 16000-044; Gibco; Thermo Fisher Scientific, inc. .), 2 mM l-glutamin og 1 procent penicillin/streptomycin (kat.nr. P1400-100; Beijing Solarbio Science & Technology co., Ltd.) ved 37˚C med 5 procent CO2.

RNA isolation og baglæns transskriptions-kvantitativ PCR (RT-qPCR).Total rna blev ekstraheret fra HK-2-celler under anvendelse af Trizol® (kat.nr. 1596 -026; Invitrogen; Thermo Fisher Scientific, inc.), i henhold til producentens protokol. Totalt RNA blev omvendt transskriberet til cDNA under anvendelse af First-Strand cDNA Synthesis kit ifølge producentens protokol (kat. nr. K1622; Thermo Fisher Scientific, Inc.). qPCR blev udført ved hjælp af SYBr-Green premix i henhold til producentens protokol (kat.nr. K0223; Thermo Fisher Scientific, Inc.) på en ABI-7300 realtidsdetektor (Applied Biosystems; Thermo Fisher Scientific, Inc.). Betingelserne for PCR var: 95˚C i 10 minutter efterfulgt af 40 cyklusser af 95˚C i 15 sekunder, 60˚C i 45 sekunder. Tre gentagelser var nødvendige for hver reaktion. Følgende primerpar blev brugt til qPCR: HBX forward, 5'-GGcTGcTaGGTTGTacTG-3' og reverse, 5'-caGaGGTGaaGcGaaGTG -3'; TreM2 fremad, 5'-TGGcacTcTcaccaTTacG-3' og tilbage, 5'-ccTccc atTcaTcTTccTTcac-3'; og GaPdH fremad, 5'-AAT cccaTcaccaTcTTc-3' og tilbage, 5'-aGGcTGTTG TcaTacTTc-3'. mRNA-niveauer blev kvantificeret ved hjælp af 2‑ΔΔCq-metoden og normaliseret til det interne referencegenGAPDH (24).

Overekspression og slå ned.For at inducere overekspression af HBX og TreM2 blev fuldlængde HBX eller TreM2 cDNA-sekvenser indsat i plVX-puro vektoren (cleantech laboratories, inc.) ved dobbelt fordøjelse (Hindiii ogEcoRI). Efterfølgende blev det rekombinerede plasmid (1,5 µg) transficeret ind i HK-2-celler (2x105). Det falske plasmid (en tom vektor, 1 µg) blev transient transficeret ind i HK-2-celler (2x105) som en negativ kontrol (oenc) under anvendelse af lipofectamine® 2000 (kat.nr. 11668-027, Invitrogen, Thermo Fisher Scientific, inc.). ecH(echinacoside fra cistanche)(kat. nr. 82854-37-3; Biopurify Phytochemicals, ltd.) blev opløst i DMSO (kat. nr. d2650; Sigma-Aldrich; Merck KGaa) i koncentrationen 1, 2,5, 5, 10, 20 og

50 mg/l henholdsvis; og tilsat til kulturen af ​​transficerede oeHBX- eller oeTreM2-celler. De efterfølgende eksperimenter begyndte 48 timer senere.

For at slå TreM2-ekspression ned blev tre små interfererende (si)RNA'er (siTreM2-1, siTreM2-2 og siTreM2-3; 20 µM) målrettet mod TreM2 syntetiseret (Shanghai Majorbio Bio-Pharm Technology co. ltd.) og efterfølgende transficeret ind i HK-2-celler (2x105) under anvendelse af lipofectamine® 2000 ifølge producentens protokol (Invitrogen; Thermo Fisher Scientific, Inc.). En ikke-specifik krypteret siRNA-sekvens (5'uucuccGaacGuGucacGu3, 25 nM) si-negativ kontrol (nc) blev brugt som den negative kontrol. Det målrettede locus og sekvenserne af TreM2-sirnaerne er angivet i tabel Si. Det efterfølgende forsøg blev udført 48 timer senere.

Vestlig blotting.Totalt protein blev ekstraheret fra HK-2-celler

under anvendelse af RIPA-lysebuffer (kat. nr. BYl40825; Jrdun Biotech Co., Ltd.). Totalt protein blev kvantificeret ved hjælp af Bicinchoninsyre-assay-kittet (kat. nr. PICPI23223; Thermo Fisher Scientific, inc.) i henhold til producentens protokol, og 20 µg protein/bane blev adskilt via SDS-PaGe på en 15 procent gel. Densitometrien af ​​prøver blev bestemt under anvendelse af en mikropladelæser (dnM-9602, Pulangxin). Efterfølgende blev de adskilte proteiner overført til en PVDF-membran. Efter blokering med 5 procent fedtfri tørmælk i 1 time ved stuetemperatur blev membranen inkuberet med primære antistoffer (tabel SII) ved 4˚C natten over og re-inkuberet med det sekundære antistof anti-mus igG (1:1, 000, kat.nr. a0216, Beyotime Institute of Biotechnology) i 1 time ved 37˚C. De immunoreaktive proteinbånd blev visualiseret ved anvendelse af et ecl-system (cytiva). Blots blev udført i tre eksemplarer.GAPDHog H3 blev brugt som ladningskontroller for henholdsvis cytoplasmatiske og nukleare proteiner.

Resultater

ECH (echinacoside fra cistanche)undertrykker funktionen af HBX i HK-2 celler.At vurdere

funktionen af ​​HBX, HBX-overekspression blev induceret i HK-2-celler. De relative mrna- og proteinniveauer af HBX var signifikant opreguleret i oeHBX-celler sammenlignet med oenc-celler (fig. 1a og B). Efterfølgende blev oeHBX-celler dyrket med forskellige koncentrationer af ecH (henholdsvis 1, 2,5, 5, 10, 20 og 50 mg/l; e1, e2,5, e5, e10, e20 og e50). HBX-overekspression reducerede signifikant proliferationen af ​​HK-2-celler, og dette fald blev vendt af ecH på en dosisafhængig måde ved 24 og 48 timer (fig. 1c).

Desuden viste proliferationshastigheden af ​​oeHBX-celler ingen signifikant forskel sammenlignet med E1-behandlede celler (fig. 1c). I modsætning hertil øgede e10-behandling signifikant proliferationshastigheden af ​​oeHBX-celler sammenlignet med E20- og E50-behandling, som ikke udviste nogen signifikant forskel (fig. 1c). Derfor blev effekten af ​​ecH på apoptose undersøgt i e2.5, e5 og e10-behandlede celler. HBX-overekspression øgede signifikant apoptosen af ​​HK-2-celler, og apoptosehastigheden af ​​oeHBX-celler faldt med ecH-behandling på en dosisafhængig måde (fig. 1d). samlet set tydede resultaterne på, at ecH hæmmede funktionen af ​​HBX i HK-2-celler på en dosisafhængig måde.

TREM2 udtryk er hæmmet ved ECH(echinacoside fra cistanche) i transficeret oeHBX

celler.rT-qPcr og western blotting blev brugt til at undersøge de relative mrna- og proteinekspressionsniveauer af TreM2 i henholdsvis oeHBX-celler. TreM2 mrna og proteinekspressionsniveauer var signifikant opreguleret i oeHBX-celler sammenlignet med oenc-celler (fig. 2a og B). ecH reducerede imidlertid ekspressionsniveauerne af TreM2 i transficerede oeHBX-celler på en dosisafhængig måde (fig. 2a og B). Derfor antydede resultaterne, at HBX-ekspression var positivt associeret med TreM2-ekspression og indikerede yderligere den undertrykkende effekt af ecH på HBX i HK-2-celler.

Slå ned og overekspression af TREM2 i HK-2 celler.For yderligere at vurdere funktionen af ​​TreM2 blev TreM2 knockdown og overekspression induceret i HK-2-celler ved hjælp af henholdsvis rna-interferens og en lentiviral vektor. Til knock-down assayet, tre siRNA'er rettet mod det humane genTREM2(siTreM2-1, siTreM2-2 og siTreM2-3) blev transficeret ind i HK-2-celler, og et ikke-specifikt siRNA blev brugt som en negativ kontrol (sinc). alle tre TreM2-sirnaer slog med succes den endogene ekspression af TreM2 ned i HK-2-celler (fig. 3a og B). De laveste relative TreM2 mrna og proteinekspressionsniveauer blev imidlertid observeret i siTreM2-1 og siTreM2-2-transficerede celler (fig. 3a og B), derfor siTreM2-1 og siTreM{{13 }}transficerede celler blev udvalgt til efterfølgende eksperimenter. Til overekspressionsforsøgene blev et plasmid indeholdende den humane TreM2cdna-sekvens i fuld længde konstrueret og efterfølgende transficeret ind i HK-2-celler (oeTreM2). -en

mock plasmid fungerede som en negativ kontrol (oenc). Niveauet af TREM2-ekspression var signifikant forøget i oeTREM2-celler sammenlignet med oenc-celler (fig. 3c og d). Derfor blev oeTreM2-celler brugt til efterfølgende eksperimenter.

TREM2 tavshed falder det apoptose af oeHBX celler.Apoptoseprofilen af ​​oeHBX-celler transficeret med siTREM2 eller sinc blev vurderet. Apoptosehastigheden for oeHBX plus sinc-celler var signifikant højere sammenlignet med åbne celler. Imidlertid var apoptosehastigheden signifikant reduceret i oeHBX plus siTreM2-1- eller siTreM2-2-celler sammenlignet med oeHBX plus sinc-celler (fig. 4a). Resultaterne antydede, at TreM2 knockdown hæmmede funktionen af ​​HBX under HK-2 celleapoptose.

Survivin tilhører inhibitoren af ​​en apoptoseproteinfamilie, som hæmmer apoptotisk aktivitet og undertrykker celledød (25). Targeting Survivin er blevet identificeret som en ny tilgang til behandling af nyrecellekarcinom (26). nF-KB er også en apoptoseinhibitor, der spiller en rolle i antiapoptotiske tumorprocesser (27). Endvidere er caspase3-aktivering tæt forbundet med apoptose (28). i denne undersøgelse blev proteinindholdet af TreM2, Survivin og spaltet caspase3 i HK-2-celler kvantificeret. Niveauet af TREM2-ekspression var signifikant faldet i oeHBX plus siTreM2-1/2-celler sammenlignet med oeHBX plus sinc-celler (fig. 4B). Niveauet af Survivin-ekspression var signifikant øget i oeHBX plus siTreM2-1/2-celler sammenlignet med oeHBX-celler. desuden var niveauet af spaltet caspase3-ekspression signifikant reduceret i oeHBX plus siTreM2-1/2-celler sammenlignet med oeHBX plus sinc-celler (fig. 4B). Ydermere reducerede oeHBX translokationen af ​​NF‑κB til kernen signifikant, og siTREM2‑1/2 transfektion øgede signifikant nF-κB nuklear translokation (fig. 4B). Tilsammen antydede resultaterne, at TreM2 var en nedstrømsfaktor for HBX i HK-2-celler, derfor kunne HBX fremme apoptose ved at regulere TreM2-ekspression i humane rTecs.

TREM2 overekspression undertrykker det translokation afNF‑κB til det kerne i HK-2 celler.Effekten af ​​ecH(echinacoside fra cistanche)på oeTreM2-transficerede celler blev analyseret. TreM2-overekspression fremmede apoptose af HK-2-celler (fig. 5a). Apoptosen af ​​oeTREM2-celler blev signifikant reduceret ved ECH-behandling (E10; Fig. 5A). Desuden reducerede ECH signifikant ekspressionen af ​​TreM2 i oeTreM2-celler. TREM2-overekspression reducerede signifikant ekspressionsniveauerne af Survivin, men dette fald i ekspression blev vendt af ecH. desuden var proteinekspressionsniveauerne af spaltet caspase3 signifikant forøget i oeTreM2-celler sammenlignet med oenc-celler; en effekt, som blev signifikant reduceret ved ECH-behandling. Endvidere fremmede ecH translokationen af ​​nF-KB til kernen i oeTreM2-celler (fig. 5B). Tilsammen viste resultaterne, at ecH også undertrykte funktionen af ​​TreM2 i humane rTec-celler.

HBX-funktioner er undertrykt ved det NF‑κB inhibitor PDTCi human RTEC'er.For yderligere at vurdere forholdet mellem

HBX- og nF-KB, HK-2-celler blev dyrket med en specifik nF-KB-hæmmer, PdTc (10 µmol/l; P10). Celleapoptosehastigheden for oeHBX-celler var signifikant forøget sammenlignet med oenc-celler (fig. 6a). Imidlertid viste oeHBX plus PdTc-celler en signifikant øget apoptoserate sammenlignet med oeHBX-celler. Desuden er de relative mRNA- og proteinekspressionsniveauer af TreM2 faldet i oeHBX plus PdTc-celler sammenlignet med oeHBX-celler (fig. 6B). Derfor resultaterne

foreslog, at nF-KB negativt regulerede TreM2-ekspression i oeHBX-transficerede celler.

NF‑κB inhibitor PDTC undertrykker TREM2 promotor aktivitet i oeHBX celler.en luciferasereporter (pGl3-enhancer-luc2) indeholdende vildtypepromotorsekvensen af ​​TreM2 (pGl3-enhancer-luc2-pTreM2) blev konstrueret og efterfølgende transficeret til oenc, oeHBX og oeHBX plus P10 dyrkede celler.

Luciferaseaktiviteten af ​​reportervektoren indeholdende vildtype TREM2-promotoren var signifikant øget i oeHBX-celler sammenlignet med oenc-celler. Imidlertid undertrykte PdTc signifikant reporterens luciferaseaktivitet i oeHBX-celler (fig. 7). samlet set indikerede resultaterne, at PdTc inhiberede transkriptionen af ​​TreM2 ved at undertrykke promotoraktiviteten af ​​TreM2 i oeHBX-celler.

Diskussion

HBX udtrykkes primært i rTecs hos patienter med HBV-Gn og fungerer som en determinant for viral patogenese (11,29). Derfor er øget viden om funktionen af ​​HBX-molekyletværket et kritisk skridt i udviklingen af ​​en ny tilgang til behandling af HBV-Gn. Formålet med denne undersøgelse var at undersøge funktionen af ​​HBX yderligere og at udforske dets potentielle molekylære netværk i humane rTecs.

HBX hæmmer spredningen af ​​rTecs (11). i denne undersøgelse blev antiproliferation og pro-apoptose funktioner af HBX i humane RTEC'er identificeret, hvilket tyder på, at HBX undertrykte udviklingen af ​​human rTecs.en tidligere undersøgelse indikerede, at ecH(echinacoside fra cistanche)hæmmer HBV-replikation og antigenekspression (19). i nærværende undersøgelse, ecH(echinacoside fra cistanche)behandling forstyrrede funktionen af ​​HBX i HK-2-celler, derfor kan HBX blive påvirket af ecH i HK-2-celler.

Molekylær medicin RAPPORTER 22: 1137-1144, 2020 1143

Desuden tydede resultaterne på, at ecH(echinacoside fra cistanche)kan tjene som et potentielt terapeutisk middel for HBV-Gn.

TreM2 er en medfødt immunreceptor, der spiller en rolle i det inflammatoriske respons (30). I denne undersøgelse var HBX-ekspression positivt forbundet med TreM2-ekspression i humane RTECS. Desuden reducerede TREM2 knockdown signifikant apoptosehastigheden af ​​oeHBX-celler og ecH(echinacoside fra cistanche)behandling reducerede effekten af ​​oeTreM2 på celleapoptose. Tilsammen antydede disse resultater, at TreM2 var målrettet af HBX i HK-2-celler. Derfor har ecH(echinacoside fra cistanche)kan hæmme apoptose af humane rTecs ved at blokere aktiviteten af ​​HBX/TreM2-signalvejen.

En tidligere rapport viste, at nF-KB ikke kun spiller en rolle i celleapoptose, men også er involveret i reguleringen af ​​immunresponser og inflammation (31). Desuden medieres TreM2 af det nF-KB-følsomme mikroRNA-34a under Alzheimers sygdom og makuladegeneration (32,33). i den foreliggende undersøgelse var den apoptotiske hastighed af oeHBX-celler signifikant forøget i nærvær af PdTc. Så vidt vi ved, foreslog den nuværende undersøgelse for første gang, at NF‑κB-hæmmeren PdTc undertrykte promotoraktiviteten af ​​TreM2. Desuden antydede resultaterne, at TreM2 negativt regulerede translokationen af ​​nF-KB til kernen i HK-2-celler, men var positivt forbundet med spaltede caspase3-ekspressionsniveauer. TreM2 spillede en modsat rolle i HK-2-celler til sin rolle i humane degenerative nucleus pulposus- og gliomceller (22,23). Derfor foreslog den nuværende undersøgelse, at TreM2 kan have forskellige funktioner i forskellige typer af humane celler.

Tilsammen indikerede den foreliggende undersøgelse ikke kun, at nF-KB var en ny komponent i HBX/TreM2-signalvejen, men antydede også, at nF-KB negativt regulerer TreM2-ekspression i humane rTecs. De største begrænsninger ved denne undersøgelse var imidlertid manglen påi vivoeksperimenter og kliniske data. Derfor viderei vivoog kliniske undersøgelser er nødvendige for at bekræfte resultaterne af denne undersøgelse.

i denne undersøgelse, funktionen af ​​ecH(echinacoside fra cistanche)blev undersøgt, og resultaterne antydede de potentielle virkninger af ecH(echinacoside fra cistanche)på signalvejene i menneskelige rTecs. Desuden forbedrede denne undersøgelse den eksisterende viden om den biologiske funktion af ecH i humane rTec-celler og foreslog også dets potentiale som et nyt terapeutisk middel for HBV-Gn.

Referencer

1. Karayiannis P: Hepatitis B-virus: virologi, molekylærbiologi, livscyklus og intrahepatisk spredning. Hepatology international 11: 1-9, 2017.

2. Seeger c og Mason WS: Hepatitis B-virusbiologi. Microbiol Mol Biol rev 64: 51-68, 2000.

3. Usama e, ana Maria S, W ray K og Fervenza Fc: Behandling af hepatitis B-virus-associeret nefropati. nephron clin Practice 119: c41-c49, 2011.

4. Zhang Y, li J, Peng W, Yu G, Wang l, chen J og Zheng F: HBV-associeret postinfektiøs akut glomerulonefritis: en rapport med 10 tilfælde. PloS one 11: e0160626, 2016.

5. Slagle Bl og Bouchard MJ: Hepatitis B Virus X og regulering af viral genekspression. cold Spring Harb Perspect Med 6: a021402, 2016.

6. Guerrieri F, Belloni l , d'andrea d, Pediconi n, le Peral , Testoni B, Scisciani c, Floriot o, Zoulim F, Tramontano a,et al: Genom-dækkende identifikation af direkte HBx genomiske mål. BMc genomics 18: 184, 2017.

7. Shi T, Hua Q, Ma Z og lv Q: nedregulering af mir-200a-3p induceret af hepatitis B virus X (HBx) protein fremmer celleproliferation og invasion i HBV-infektionsassocieret hepato-carcinom. Pathol res Practice 213: 1464-1469, 2017.

8. Tian Y, Xiao X, Gong X, Peng F, Xu Y, Jiang Y og Gong G: HBx fremmer celleproliferation ved at forstyrre krydstalen mellem mir-181a og PTen. Sci rep 7: 40089, 2017.

9. Idris Me, Hachem H, Koering c , Merle P, Thénoz M, Montreux F og Wattel e: HBx udløser enten cellulær senescens eller celleproliferation afhængigt af cellulær fænotype. J Viral Hepat 23: 130-138, 2016.

10. Wang X, Wangl, Zhun, Zhou Y, GulJ og Yuan WJ: Hepatitis B-virus X-protein modulerer renale tubulære epitelcelle-inducerede T-celle- og makrofagresponser. Immunol celle Biol 94: 266-273, 2016.

11. He P, Zhang d, li H, Yang X, li d, Zhai Y, Mal og Feng G: Hepatitis B-virus X-protein modulerer apoptose i humane renale proksimale tubulære epitelceller ved at aktivere JaK2/STaT3-signalvejen. int J Mol Med 31: 1017-1029, 2013.

12. Yang Y, Wang X, Zhang Y og Yuan W: Hepatitis B-virus X-protein og proinflammatoriske cytokiner synergerer for at forbedre Trail-induceret apoptose af renale tubulære celler ved opregulering af dr4. int J Biochem cell Biol 97: 62-72, 2018.

13. He P, Zhou G, Qud, Zhang B, Wang Y og li d: HBx inhiberer proliferation og inducerer apoptose via Fas/Fasl-opregulering i rottenyrepitelceller. J nephrol 26: 1033, 2013.

14. Han W, luo M, He M, Zhu Y, Zhong Y, ding H, Hu G, liul, chen Q og lu Y: HBx-gentransfektion påvirker cyklussen af ​​primære renale tubulære epitelceller gennem regulering af cyclinekspression. Mol Med rep 18: 1947-1954, 2018.