Diætanvendelse af methioninkilder og Bacillus Amyloliquefaciens CECT 5940 påvirker vækstpræstation, hepatopancreatisk histologi, fordøjelse, immunitet og fordøjelsesmikrobiota af Litopenaeus Vannamei fodret med reduceret fiskemelsdiæt

Enkel oversigt: Den accelererede ekspansion af rejeopdræt kræver proteinkilder med høj ernæringsværdi for at formulere foder, der opfylder rejernes ernæringskrav. Fiskemel (FM) er den vigtigste proteinkilde til vandfoderformuleringer. Dets begrænsede udbud og høje omkostninger tilskynder dog til forskning i alternative proteinkilder for at formulere mere rentable foderstoffer, der bidrager til akvakulturens bæredygtighed. Sojamel (SBM) og fjerkræbiproduktmel (PBM) er blevet brugt som proteinkilder til at erstatte fiskemel, men deres essentielle aminosyreubalance bidrager til lav rejervækst og påvirker rejers sundhed. Derfor var undersøgelsens formål at evaluere effekten af ​​FM-erstatning med SBM og PBM i diæter suppleret med DL-Met, MET-MET (AQUAVI®), Bacillus amyloliquefaciens CECT 5940 (ECOBIOL®) og deres kombinationer på vækstpræstation og sundhed hos juvenile Litopenaeus vannamei. Resultaterne viste, at FM delvist kunne erstattes med SBM og PBM i rejefoder suppleret med 0,19% MET-MET eller 0,06% MET-MET plus 0,10% B. amyloliquefaciens CECT 5940 uden negativ indvirkning på Litopenaeus vannameis vækstpræstation og velfærd. Disse resultater kan være interessante for at udvikle lavt fiskemelsfoder og bidrage til akvakulturens bæredygtighed.

cistanche supplement fordele-øge immunitet

Abstrakt:Et {{0}}ugers fodringsforsøg undersøgte effekten af ​​erstatning af fiskemel (FM) med sojaskrå (SBM) og fjerkræbiproduktmel (PBM) i diæter suppleret med DL-Met, MET-MET (AQUAVI) ®), Bacillus amyloliquefaciens CECT 5940 (ECOBIOL®) og deres kombinationer på vækstpræstation og sundhed hos juvenile Litopenaeus vannamei. I alt seks eksperimentelle diæter blev formuleret i overensstemmelse med L. vannamei ernæringskrav. I alt 480 rejer (0.30 ± 0.04 g) blev tilfældigt fordelt i 24 tanke (4 gentagelser/hver diæt) , 20 rejer/tank). Rejer blev fodret med kontroldiæt (CD; 200 g/kg fiskemel) og fem diæter med 50% FM-erstatning suppleret med forskellige methioninkilder, probiotika (B. amyloliquefaciens CECT 5940) og deres kombinationer: D1 (0.13 % DL-MET), D2 (0.06 % MET-MET), D3 ({{ 69}},19 % MET-MET), D4 (0,13 % DL-MET plus 0,10 % B. amyloliquefaciens CECT 5940 og D5 (0,06 % MET-MET plus 0,10 % B. amyloliquefaciens CECT 5940). Rejer havde D3 og D5 signifikant højere endelig, ugentlig vægtøgning og endelig biomasse sammenlignet med rejer fodret med CD (p < 0,05). Rejer fodret med D2 til D5 øgede hepatopancreas epitelcellehøjde (p < 0,05). Fordøjelsesenzymatiske aktiviteter var signifikant øget i rejer hepatopancreas fodret D3 (p < 0,05). I mellemtiden havde rejer fodret med D1 signifikant nedregulering af immunrelaterede gener (p < 0,05). Desuden øgede rejer fodret med D3 og D5 mængden af ​​gavnlige prokaryote mikroorganismer såsom Pseudoalteromonas og Demequina relateret til kulhydratmetabolisme og immune stimulation. Rejer fodret med D3 og D5 øgede også overfloden af ​​gavnlige eukaryote mikroorganismer, da Aurantiochytrium og Aplanochytrium var relateret til produktion af eicosapentaensyre (EPA) og docosahexaensyre (DHA), som spiller en rolle i vækstfremmende eller boostning af vandorganismers immunitet. Derfor kunne fiskemel delvist erstattes med op til 50 % af SBM og PBM i diæter suppleret med 0,19 % MET-MET (AQUAVI®) eller 0,06 % MET-MET (AQUAVI®) plus 0,10 % B. amyloliquefaciens CECT 5940 (ECOBIOL®) og forbedre den produktive ydeevne, sundhed og immunitet for hvide rejer. Yderligere forskning er nødvendig for at undersøge de synergistiske effekter af aminosyrer og probiotika i opdrættede rejer, samt for at evaluere, hvordan SBM og PBM påvirker fedtsyresammensætningen af ​​reduceret fiskemelsdiæt og rejemuskelkvalitet. Ikke desto mindre kunne denne information være interessant til at udvikle lavt fiskemelsfoder til akvakultur uden at påvirke væksten og velfærden af ​​akvatiske organismer.

Fordele ved cistanche tubulosa-styrke immunsystemet

Klik her for at se produkter fra Cistanche Enhance Immunity

【Spørg om mere】 E-mail:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

Nøgleord: Litopenaeus vannamei; rejer ernæring; erstatning for fiskemel; methionin; probiotika; ydeevne; sundhed; mikrobiota

1. Introduktion

Rejeopdræt gav næsten 11,2 millioner tons i 2022, og hvide stillehavsrejer (Litopenaeus vannamei) var den mest repræsentative art med 52 % af den samlede produktion [1]. Bæredygtigheden og rentabiliteten af ​​akvakulturproduktion kræver levering af råvarer med høj næringsværdi til foderformulering, der opfylder opdrættede rejers ernæringsbehov [2,3]. Fiskemel er hovedingrediensen i akvafoder på grund af dets høje næringsværdi [4]. Imidlertid kræver det begrænsede udbud og de høje omkostninger ved fiskemel forskning i alternative kilder til foder, der er mere rentable og bidrager til akvakulturens bæredygtighed [5,6]. Tidligere undersøgelser, hovedsageligt fokuseret på rejers produktionsevne, rapporterede, at fiskemel delvist kan erstattes af forskellige animalske og vegetabilske kilder [6]. Blandt vegetabilske proteinkilder har sojaskrå et højt proteinindhold. Tilstedeværelsen af ​​anti-ernæringsfaktorer, dårlig fordøjelighed og en ubalance af essentielle aminosyrer (EAA), der påvirker fordøjelsesmikrobiota, forårsager imidlertid en inflammatorisk reaktion i fordøjelsesorganerne, lav produktivitetsydelse og påvirker vandorganismens immunrespons [5,7, 8]. Fjerkræbiproduktmel er en animalsk kilde med højt proteinindhold, der mangler methionin og lysin, og derfor kan dets anvendelse i reduceret fiskemelsfoder påvirke væksten og velfærden for vandorganismer [9]. Methionin er en EAA knap i akvafoder med lavt indhold af fiskemel og er nødvendig for normal vækst [10], proteinsyntese [11] og immunfunktion [12] af vandorganismer. Derfor er methionintilskud i foder med lavt indhold af fiskemel påkrævet for at balancere aminosyrer og reducere negative påvirkninger på væksten og metabolismen af ​​opdrættede akvatiske organismer [13]. En række methioninressourcer er kommercielt tilgængelige, såsom en racemisk blanding af D-Met og L-Met isomerer kaldet DL-methionin (DL-Met) og en blanding af fire forskellige methionin stereoisomerer (LD-Met-Met, DL-Met -Met, LL-Met-Met og DD-Met-Met) kommercialiseret som AQUAVI® (Met-Met) [10]. AQUAVI® har dog bedre fysisk-kemiske egenskaber såsom meget lav vandopløselighed og højere absorption end DL-Met [10,14]. På den anden side er det blevet rapporteret, at tilskud af probiotika (Bacillus subtilis) har positive effekter på vækstpræstation og sundhed hos hvide rejer (L. vannamei) og oksefrøer (Lithobates catesbeianus) fodret med lavt fiskemelsfoder [15,16]. Probiotika er levende mikroorganismer, der bruges i akvafoder på grund af deres evne til at forbedre foderudnyttelsen, enzymatisk fordøjelse, patogenforebyggelse, immunrespons og vækst [15]. Derfor kan probiotikas inkludering i reduceret fiskemelsfoder forbedre sundheden og velfærden for vandorganismer [16]. Bacillus-bakterier bruges i vid udstrækning i akvakultur som probiotika, fordi de har kapaciteten til at producere antimikrobielle forbindelser og exoenzymer, der forbedrer fordøjelsen af ​​næringsstoffer, hæmning af patogener, modulering af immunrespons, vedligeholdelse af tarmens integritet og dermed vækstpræstation [17]. B. amyloliquefaciens har antibakteriel aktivitet og producerer fordøjelsesenzymer, der understøtter fordøjelsen [18].

På grund af ovenstående er alternative kilder til fiskemel kombineret med mange tilsætningsstoffer blevet brugt i akvafoder for at garantere en essentiel næringsstofforsyning, forbedre produktiviteten, bevare kostens fysisk-kemiske sammensætning og opretholde vandmiljøets kvalitet [19]. Derfor har lavt fiskemelsdiæt suppleret med forskellige methioninkilder og B. amyloliquefaciens forbedret opdrættede akvatiske organismers vækstpræstation og fodringseffektivitet [3,7,8,20,21]. Også B. amyloliquefaciens CECT 5940 og dets virkninger er blevet rapporteret på vækstydeevnen og sundheden hos slagtekyllinger [22] og Nile tilapia (Oreochromis niloticus) [21]. Imidlertid har få undersøgelser valideret virkningerne af lavt fiskemelsdiæt og tilsætningsstoffer på fordøjelsessundheden og immunresponset hos rejer. Derfor var hovedformålet med denne undersøgelse at evaluere effekten af ​​FM-erstatning med SBM og PBM i diæter suppleret med DL-Met, MET-MET (AQUAVI®), B. amyloliquefaciens CECT 5940 (ECOBIOL®) og deres kombinationer på væksten ydeevne, hepatopancreatisk histologi, fordøjelsesenzymatisk aktivitet, transkriptionel respons af immunrelaterede gener og den mikrobielle sammensætning af fordøjelsessystemet af unge stillehavsrejer (L. vannamei).

2. Materialer og metoder

2.1. Eksperimentel kostforberedelse

I alt seks eksperimentelle diæter blev formuleret i overensstemmelse med L. vannamei ernæringskrav [23] og producentens anbefalinger (Evoniks Aqua R & D-gruppe). Kontroldiæten (CD) blev formuleret til at indeholde en blanding af FM-protein (39%), SBM-protein (53%) og PBM-protein (8%) som en typisk kommerciel rejediæt. SBM og PBM var de vigtigste alternative proteinkilder til at erstatte FM, mens hvedemel blev brugt som bindemiddel og fyldstof. Fiskeolie blev brugt som den vigtigste lipidkilde til at opfylde kravene til n-3 essentielle fedtsyrerejer. CD'en havde 2{{10}}0 g/kg fiskemel uden tilskud. De andre fem diæter (D1-D5), hvor SBM og PBM erstattede FM med 5 0 %, blev suppleret med forskellige methioninkilder, B. amyloliquefaciens og deres kombinationer. D1: 0.13 % DL-MET, D2: 0.06 % MET-MET (AQUAVI®), D3: 0,19 % MET-MET (AQUAVI®), D4 : 0,13% DL-MET plus 0,10% B. amyloliquefaciens CECT 5940 (ECOBIOL®) og D5: 0,06% MET-MET (AQUAVI®) plus 0,10% B. amyloliquefaciens CECT 5940 (ECOBIOL®). Derudover blev vandstabilitetsforholdet vurderet som en diæts fysiske egenskab ved en tidligere beskrevet metode [24]. Formuleringen, den nærmeste sammensætning og vandstabilitetsværdierne for de eksperimentelle diæter er vist i tabel 1.

Tabel 1. Ingredienser og nærværende sammensætning af forsøgsdiæterne (g/kg tørvægt).

Tabel 1. Forts.

2.2. Rejer, fodringsforsøg og prøveindsamling

Juvenile L. vannamei blev hentet fra en rejefarm i Sonora, Mexico. Rejerne var patogenfri ifølge procedurer beskrevet i Manual of Diagnostic Tests for Aquatic Animals fra Verdensorganisationen for Dyresundhed [25]. Før foderforsøget blev alle rejer akklimatiseret i akvakulturlaboratoriet i 1500-L-tanke med havvand under kontrollerede forhold (temperatur 30 ± 0,5 ◦C, opløst ilt Større end eller lig med 4 mg/L, saltholdighed 37 g/L, pH større end eller lig med 7 og fotoperioder på 12 lystimer) og fodret med kommercielt foder i 7 dage. Ved starten blev 480 sunde rejer med (0,30 ± 0,02 g) fastet i 24 timer og tilfældigt fordelt til 24 cirkulære tanke (volumen er 150 L) med en tæthed på 20 rejer pr. tank (svarende til en tæthed) på 133 rejer/m3). Der var fire replikattanke, der blev tilfældigt tildelt for hver diætbehandling. Rejer blev fodret til mæthed med en indledende ration på 12 % af deres biomasse fordelt på tre rationer i løbet af dagen (8:00, 13:00 og 16:00 h) for 56 dage, justeret dagligt afhængig af restfodertilstedeværelse eller -fravær. Temperatur (27,84 til 28,36 ◦C), saltholdighed (36,98 til 37,07 g/L), opløst oxygen (4,00 til 5,17 mg/L) og pH (7,41 til 7,84) blev registreret. Hver dag blev 30 % af vandet skiftet. Uspist foder, afføring, molter og døde rejer blev fjernet dagligt. Efter et fodringsforsøg og en fasteperiode på 24 timer blev tre rejer tilfældigt udtaget fra hver replikat for at opnå 400 µL hæmolymfe til genekspressionsanalyse [26]. Rejer, der tidligere var blevet blødt, blev aseptisk dissekeret for at opnå hele deres tarme og hepatopancreas, og blev derefter opbevaret ved -80 ◦C indtil fordøjelsesenzymatisk aktivitet og mikrobiomanalyse. Derudover blev tolv (tre rejer/replikater) hele rejer udtaget tilfældigt fra hver behandling og fikseret i AFA Davidson-opløsning til histologisk analyse.

2.3. Vækstydelse

Alle rejer blev vejet og talt for at beregne vækstpræstationen i henhold til ligningerne rapporteret af tidligere undersøgelser [27-29].

Slutvægt=(Σ Endelig individuel vægt)/Endelig antal rejer. Ugentlig vægtøgning=(endelig vægt − startvægt)/antal uger. Specifik væksthastighed=100 × (i slutvægt − l indledende vægt)/dage af eksperimentet. Overlevelsesrate=100 × (Endeligt antal rejer/Oprindeligt antal rejer). Endelig biomasse=Slutvægt × Endeligt antal rejer. Foderoptagelse=Fodertilførsel (tørvægt) − Foder opsamlet (tørvægt). Foderkonverteringsrate=Foderindtag/Endelig biomasse.

2.4. Hepatopancreas histologi

Prøverne af hepatopancreas fra rejer fikseret i Davidsons opløsning blev behandlet i overensstemmelse med metoden beskrevet af Bell og Lightner [30]. Histologiske snit med en tykkelse på 4 µm blev skåret under anvendelse af en roterende mikrotom (LEICA RM2115RT). Vævsfarvningen, diasobservationen og billedernes digitalisering blev realiseret efter metoden beskrevet af Casillas-Hernández [31]. Billederne af væv blev brugt til at måle hepatopancreas' cellehøjde ved hjælp af det digitale billedsystem Image-Pro Premier software v9.0 (Media Cyvernetics Inc., Rockville, MD, USA).

cistanche tubulosa-forbedrer immunsystemet

2.5. Fordøjelsesenzymers aktivitet

Tarme og hepatopancreas blev separat homogeniseret til et 10% forhold med 0,9% saltvandsopløsning og centrifugeret ved 3500 rpm i 10 minutter ved 4 ◦C, og supernatanten blev straks analyseret for fordøjelsesenzymanalyser med en mikropladelæser (Bio). -Rad, Hercules, CA, USA). Protease- og lipaseaktiviteter blev analyseret med et kommercielt sæt (Sigma-Aldrich®, Louis, MO, USA). Amylaseaktivitet blev målt under anvendelse af opløselig stivelse som substrat [32]. Den totale koncentration af opløseligt protein blev bestemt ved princippet om protein-farvestofbinding under anvendelse af bovint serumalbumin som standard [33]. Assays blev alle kørt i tre replikatprøver. Fordøjelsesenzymaktiviteter udtrykkes som U/mg protein.

2.6. Transkriptionel respons af immunrelaterede gener

Hæmolymfen blev centrifugeret ved 3500 rpm i 10 minutter ved 4 ◦C for at adskille hæmocytterne fra plasmaet. Det totale RNA fra hæmocytter blev ekstraheret med TRIzol Reagent (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) og behandlet med RNA-fri DNase (Promega®, Madison, WI, USA). cDNA blev syntetiseret med Total RNA (500 ng) under anvendelse af ImProm-II™ reverse transcription System (Promega®) og oligo d(T)20 (T4OLIGO). cDNA-syntesen blev realiseret ved revers transkription ved 42 ◦C i 60 minutter; derefter blev revers transkriptase inaktiveret ved 70 ◦C i 15 minutter for at stoppe reaktionen. cDNA'et blev fortyndet med 80 µL ultrarent vand, og 5 µL blev brugt som skabelon for real-time kvantitative PCR (qPCR) reaktionen. Transkriptionel respons blev analyseret fra fem immunrelaterede gener og -actin som referencegen (tabel 2) [34]. qPCR blev udført på et StepOne Real-Time PCR System (Thermo Fisher Scientific) ved hjælp af SensiFAST™ SYBR® Hi-ROX Kit (Bioline™, London, UK). qPCR-betingelserne var initial denaturering ved 95 ◦C i 10 minutter, efterfulgt af 40 denatureringscyklusser ved 95◦C i 15 s og annealing/forlængelse ved 60 ◦C i 1 min. En analyse af dissociationskurven (60-95 ◦C) ved en temperaturovergangshastighed på 0,5 ◦C/s blev udført for hvert par primere. Den relative kvantificeringsmetode blev brugt til genekspressionsanalyse ifølge Rodriguez-Anaya [35] og Casillas-Hernández [36].

Tabel 2. Specifikke primere anvendt til transkriptionel respons af immun-relaterede gener fra L. vannamei.

2.7. DNA-ekstraktion og sekventeringsanalyse

Det genomiske DNA fra hepatopancreas og tarme fra 12 rejer pr. behandling blev ekstraheret ved hjælp af Quick-DNA™ Fecal/Soil Microbe (Zymo Research, Irvine, CA, USA), efter producentens instruktioner. DNA-koncentrationen blev kvantificeret ved hjælp af et NanoDrop 2000 spektrofotometer (Thermo-Fisher Scientific, Waltham, MA, USA), og DNA-kvaliteten blev evalueret ved agarosegelelektroforese (1 %, w/v). Genomiske DNA-prøver blev derefter outsourcet til Microbial Genomics Laboratory (CIAD, Mexico) til DNA-biblioteksforberedelse og sekventering ved hjælp af standard Illumina-protokoller til amplifikation [37]. Kort fortalt blev den variable V4-region af 16S rRNA- og 18S-rRNA-generne amplificeret ved PCR med følgende primere ved anvendelse af Illumina-adaptere: 16S-V4_515F (50 - GTG CCA GCM GCC GCG GTA A{{ 13}} ), 16S-V4_806R (50 -TAA TCT WTG GGV HCA TCA GG-30 ), 18S-V9_Euk_1391F ( 50 -GTA CAC ACC GCC CGT C-30 ), og 18S-V9_EukBr (50 -TGA TCC TTC TGC AGG TTC ACC TAC-30 ). Til sidst blev amplikonerne kvantificeret i Qubit, blandet i en ækvimolær pool og sekventeret på Illumina Miniseq-platformen under standardbetingelser (300 cyklusser, 2 × 150).

2.8. Bioinformatisk analyse

FASTQ-filerne fra parrede ende-læsninger blev analyseret ved hjælp af DADA2-pakken v1.24.0 [38]. Sekvensanalyse-workflowet inkluderede filtrering, dereplikation, prøveslutning, kimær-identifikation og sammensmeltning af par-ende (PE)-læsninger for at gruppere dem i ASV'er (amplicon-sekvensvarianter). DADA2 inkluderer den "naive Bayesian"-metode, der bruger SILVA-databaserne for både 16S-V4-regionen (silva_nr99_v138.1_train_set.fa) og 18S-V9-regionen (silva_132.18s.99_rep_set.dada2.fa). Taksonomiske oplysninger blev analyseret med Phyloseq V1.40.0 og mikrobiompakken v1.18.0 for at opnå alfa- og beta-diversitet og ordinationsværdier [37]. Beta-diversiteten blev udført baseret på uvægtet UniFrac-afstand og visualiseret ved hjælp af en PCoA bygget med ggplot i R. Endelig blev multivariate fællesskabsniveauforskelle mellem grupper kvantificeret ved permutationel multivariant variansanalyse (PERMANOVA) [39]. Den endelige ASV-tabel fra 16S-sekvenser blev også brugt som input til funktionel metagenomisk forudsigelse ved hjælp af PICRUST [40]. KEGG pathway-indholdet opnået af PICRUST blev normaliseret og derefter brugt til at opnå de metagenomiske funktionelle forudsigelser på forskellige hierarkiske KEGG-niveauer (1, 2 og 3) [41]. Illumina-sekventering ved hjælp af primere for den hypervariable V4-region i 16S rRNA-genet gav 976.065 PE-aflæsninger på 150 bp svarende til tarmen og hepatopancreas af L. vannamei med et gennemsnit på 81.338 aflæsninger pr. prøve. Efter kvalitetsfiltreringsprocessen og eliminering af kimærer blev et gennemsnit på 58.235 sekvenser pr. prøve opretholdt, svarende til 71,6%, og blev tildelt 709 ASV'er. På den anden side, fra V9-18S rDNA-sekventeringen, blev 871.699 PE-aflæsninger på 150 bp opnået med et gennemsnit på 72.642 pr. prøve. Efter arbejdsgangen for sekvensanalyse blev aflæsningerne reduceret med ca. 12,7 %. Men når den taksonomiske identifikation og ASV-gruppering blev udført, svarede de fleste af sekvenserne til værtens (L. vannamei) DNA, hvilket eliminerede prøverne fra hepatopancreas. Derfor svarer de præsenterede data om karakterisering af eukaryot mikrobiota til de mikroorganismer, der er til stede i tarmen. Det anvendte datasæt var 12.970 sekvenser, som blev tildelt 43 ASV'er.

2.9. Statistisk analyse

Vækstresultaterne, hepatopancreas' cellehøjde, fordøjelsesenzymatisk aktivitet og transkriptionel respons af immunrelaterede gener blev evalueret ved envejs-variansanalyse (ANOVA). Hvis der blev observeret nogen signifikans, blev Tukeys test udført til sammenligning af midler. Statistisk analyse blev udført med Statgraphics Centurion XVI. Signifikansen blev sat til 95 % sandsynlighedsniveauer.

3. Resultater

3.1. Vækstydelse

Vækstpræstationsværdier er vist i tabel 3. Sammenlignet med CD blev de højeste værdier for vækstpræstation (endelig vægt, vægtøgning og endelig biomasse) observeret med rejer fodret med D3 og D5, som var signifikant højere end rejer fodret med D1 (p < 0.05), men uden statistisk forskel med rejer fodret med D2 og D4 og (p > 0.05). Den laveste værdi af foderkonverteringsraten blev observeret med rejer fodret med D3, men der blev ikke fundet nogen signifikant forskel i FCR blandt alle diætbehandlinger (p > 0.05). Mens foderoptagelsen faldt signifikant (p < 0,05) hos rejer fodret med D1 og signifikant steget (p < 0,05) hos rejer fodret med D5. Der blev ikke fundet nogen signifikant forskel i overlevelsesraten blandt alle diætbehandlinger (p > 0,05).

Tabel 3. Effekt af eksperimentelle diæter på vækstpræstation af Litopenaeus vannamei.

3.2. Hepatopancreatisk histologi

Rejehepatopancreas havde en velorganiseret struktur (figur 1A). Bortset fra rejer fodret med D1, havde alle rejer fodret med reduceret fiskemelsdiæt højere (p < 0.05) højden af ​​hepatopancreas epitelceller end rejer fodret med CD (figur 1B).

Figur 1. Hepatopancreas-histologi af rejer L. vannamei fodret med kontroldiæt og 50% fiskemelserstatningsdiæter. (A) Lysmikrofotografier af langsgående snit (4 µm) af hepatopancreas farvet med hæmatoxylin og eosin viser en velorganiseret struktur. Pile angiver normale strukturer af tubuli-epitelceller, herunder sekretoriske (B-celler) celler. Målestok: 100 µm. (B) Hepatopancreas epitelhøjde celler af rejer. Data præsenteres som middelværdi ± SE, værdier med forskellige bogstaver er signifikant forskellige (p < 0.05). Forkortelser: Tubuli (Tb), epitelceller (EC) og B-celler (HpB). CD (20{{30}} g/Kg FM), D1 (0,13 % DL-MET), D2 (0,06 % MET-MET), D3 (0,19 % MET-MET) , D4 (0,13 % DL-MET plus 0,10 % B. amyloliquefaciens CECT 5940) og D5 (0,06 % MET-MET plus 0,10 % B. amyloliquefaciens CECT 5940).

3.3. Fordøjelsesenzymaktivitet

Effekten af ​​forskellige kostholdige methioninkilder og Bacillus amyloliquefaciens på fordøjelsesenzymaktiviteterne i tarmen og hepatopancreas fra L. vannamei-fodret reduceret fiskemelsdiæt er vist i tabel 4. Amylase-, protease- og lipaseaktiviteter af hepatopancreas fra rejer fodret med D3. højere (p < 0.05) end rejer fodret med CD, hvorimod fordøjelsesenzymaktiviteterne i tarmen ikke blev påvirket (p > 0.05). I hepatopancreas fra rejer fodret med D1 blev den laveste værdi af amylase og lipase observeret, mens fordøjelsesenzymaktiviteterne i tarmen havde de laveste værdier, men ingen signifikante forskelle (p > 0,05) blev observeret sammenlignet med rejer fodret med CD.

Tabel 4. Effekt af eksperimentelle diæter på fordøjelsesenzymaktivitet af Litopenaeus vannamei.

3.4. Transkriptionel respons af immunrelaterede gener

Transkriptionsresponset af immunrelaterede gener fra hvide rejer fodret med reduceret fiskemelsdiæt med tilsætningsstoffer blev bestemt og sammenlignet med rejer fodret med CD (figur 2). Bortset fra rejer fodret med D1, havde alle immunrelaterede gener analyseret i denne undersøgelse højere ekspression end rejer fodret med CD. Hc og pPO var signifikant (p < 0.05) opreguleret i rejer fodret med D3 og D5. LGBP var signifikant (p < 0.05) opreguleret i rejer fodret med D2 og D3. MnSOD var signifikant (p < 0,05) opreguleret i rejer fodret med D2, D3 og D5. HSP60 var signifikant (p < 0,05) opreguleret i rejer fodret med D5. De laveste værdier af transkriptionel respons af immunrelaterede gener blev observeret i rejer fodret med D1 sammenlignet med alle diætbehandlinger.

Figur 2. Transkriptionel respons af immunrelaterede gener fra rejefodret kontroldiæt og 50% fiskemelserstatningsdiæter. (A) hæmocyanin (Hc), (B) prophenoloxidase (pPO), (C) lipopolysaccharid og -glucanbindende protein (LGBP), (D) cytosolisk mangansuperoxiddismutase (MnSOD) og (E) varmechokprotein 6{ {11}} (HSP60). Data præsenteres som middelværdi ± SE, værdier med forskellige bogstaver er signifikant forskellige (p < 0.05). Forkortelser: CD (20{{30}} g/Kg FM), D1 (0,13 % DL-MET), D2 (0,06 % MET-MET), D3 (0,19 % MET-MET) MET), D4 (0,13 % DL-MET plus 0,10 % B. amyloliquefaciens CECT 5940) og D5 (0,06 % MET-MET plus 0,10 % B. amyloliquefaciens CECT 5940).

3.5. Fordøjelsesmikrobiotaanalyse og funktionel forudsigelse

Selektivitetskurveanalysen viste, at den observerede art pr. prøve var tilstrækkelig til både 16S-V4 (figur 3A) og 18S-V9-sekvenser (figur 4A). Med hensyn til alfa-diversitet viste 16S-resultater, at Chao1-, Shannon- og Simpsons-indekserne for hepatopancreas var højere end tarmene (figur 3B). På den anden side viste 18S-resultater, at alle alfa-diversitetsindekser faldt i rejetarme fodret med lavt fiskemelsdiæt sammenlignet med kontrol (Figur 4B). Der var dog ingen signifikante forskelle mellem diætbehandlinger i både 16S og 18S resultater.

Figur 3. 16S rRNA-gensekventering af tarme og hepatopancreas fra rejefodret kontroldiæt og 50% fiskemelserstatningsdiæter. (A) Sjældenhedskurve, (B) alfa-diversitet og (C) mikrobiotastruktur visualiseret ved hjælp af principal koordinatanalyse (PCoA) plots. Forkortelser: Tarm (I) og hepatopancreas (H). CD (200 g/Kg FM), D1 (0.13 % DL-MET), D2 ({{20}}.{{27 }}6 % MET-MET), D3 (0,19 % MET-MET), D4 (0,13 % DL-MET plus 0,10 % B. amyloliquefaciens CECT 5940) og D5 (0,06 % MET-MET plus 0,10 % B. amyloliquefaciens CECT 5940 ).

Den eksperimentelle diæts virkninger på mikrobiotastrukturen blev bestemt ved hjælp af UniFrac-afstand og visualiseret ved hjælp af PCoA-plot. Resultaterne afslørede klar adskillelse mellem eksperimentelle diæter, men uden signifikante forskelle i prokaryote samfund fra tarm eller hepatopancreas (figur 3C) samt eukaryot mikrobiota fra tarm (figur 4C). Imidlertid viste beta-diversitetsanalyse en klar adskillelse mellem prokary øresamfund fra tarm og hepatopancreas (figur 3C).

Figur 4. 18S rRNA-gensekventering af tarme fra rejefodret kontroldiæt og 50% fiskemelserstatningsdiæter. (A) Sjældenhedskurve, (B) alfa-diversitet og (C) mikrobiotastruktur visualiseret ved hjælp af principal koordinatanalyse (PCoA) plots. Forkortelse: Tarm (I). CD (200 g/Kg FM), D1 (0.13 % DL-MET), D2 ({{20}}.{{27 }}6 % MET-MET), D3 (0,19 % MET-MET), D4 (0,13 % DL-MET plus 0,10 % B. amyloliquefaciens CECT 5940) og D5 (0,06 % MET-MET plus 0,10 % B. amyloliquefaciens CECT 5940 ).

Baseret på prokaryote mikrobiota resultater blev i alt 19 forskellige bakterielle phyla identificeret. Proteobakterier var den dominerende phylum i rejetarm, mens Proteobacteria og Actinobacteria var den dominerende phyla i rejehepatopancreas. I rejetarme, der blev fodret med D3 og D5, blev der observeret en stigning i den relative mængde Actinobacteria, mens den relative mængde Bacteroidota var en smule reduceret. I rejer hepatopancreas fodret med D1, D2 og D4 blev der observeret en lille stigning i Bacteroidota relative overflod, mens den relative overflod hos rejer hepatopancreas fodret med D3 og D5 Actinobacteria var øget (figur 5A). På slægtsniveau var Pseudoalteromonas den mest udbredte i rejetarm, mens Demequina var den mest udbredte i rejehepatopancreas. Demequina havde en lav stigning i rejetarm fodret med D3 og D5, hvorimod Lysinimicrobium og Ruegeria var øget i rejehepatopancreas fodret med D3 og D5 (figur 5B). Resultaterne af de funktionelle kategorier (KEGG niveau 2) viste, at bakteriesekvenser var forbundet med cellulære processer og metabolismeveje (figur 5C og supplerende tabel S1). Aminosyremetabolisme, kulhydratmetabolisme, cofaktorer og vitaminmetabolisme var mest udbredt i metabolismeveje, hvorimod cellemotilitet var mest udbredt i cellulære processer. Efter fjernelse af sekventeringsaflæsninger fra værtens DNA, blev tre phyla på eukaryot mikrobiota observeret. SAR (Stramenopiles, Alveolate y Rhizaria) phylum var den mest udbredte i alle rejetarme, men en stigning i Opisthokonta phylum blev observeret i rejetarm fodret med D5 (figur 6A). På slægtsniveau var Aplanochytrium det mest udbredte i rejetarm fodret med D2 til D5, men forekomsten var væsentligt højere i D5. Udyrket alveolat blev beriget i rejetarm fodret med CD. Auranti ochytrium var mest udbredt i D2 til D4 med højere forekomst i D3. Endelig var Ebria mest udbredt i rejetarme, der blev fodret med D1 (figur 6B).

Figur 5. Prokaryot mikrobiota af tarme og hepatopancreas fra rejefodret kontroldiæt og 50% fiskemelserstatningsdiæter. (A) Top ti af phylaoverflod. (B) Heatmap-analyse af top 40 slægter, og (C) Heatmap-analyse af funktionsforudsigelse baseret på KEGG pathways-analyse. Forkortelser: tarm (I) og hepatopancreas (H). CD (200 g/Kg FM), D1 ({{20}},13 % DL-MET), D2 (0,06 % MET -MET), D3 (0,19 % MET-MET), D4 (0,13 % DL-MET plus 0,10 % B. amyloliquefaciens CECT 5940) og D5 (0,06 % MET-MET plus 0,10 % B. amyloliquefaciens CECT 5940).

Figur 6. Eukaryot mikrobiota af tarme fra rejerfodret kontroldiæt og 50% fiskemelserstatningsdiæter. (A) Phyla overflod. (B) Heatmap analyse af genera overflod. Forkortelse: tarm (I). SAR (Stramenopiles, Alveolate y Rhizaria). CD (200 g/Kg FM), D1 (0.13 % DL-MET), D2 (0.06 % MET -MET), D3 (0,19 % MET-MET), D4 (0,13 % DL-MET plus 0,10 % B. amyloliquefaciens CECT 5940) og D5 (0,06 % MET-MET plus 0,10 % B. amyloliquefaciens CECT 5940).

4. Diskussion

4.1. Vækstydelse

Tidligere undersøgelser har evalueret virkningerne af reduceret fiskemelsdiæt suppleret med forskellige kostholdige methioninkilder på vækstpræstationen af ​​L. vannamei, såsom rejefoder med 5 % til 10 % fiskemel og suppleret med et niveau mellem {{15 }},15 % og 1,7 % af MET-MET (AQUAVI®) eller 3 % af DL-MET [2,3,8,20,42,43]. Ikke desto mindre foreslog en undersøgelse med lignende dyrkningsforhold, der brugte unge rejer (L. vannamei) med en startvægt på 0.98 ± 0.02 g 0 .20% MET-MET (AQUAVI®) for bedre vækstydelse, når rejer blev fodret med reduceret fiskemelsfoder [20]. DL-MET er blevet bevist på unge rejer med en startvægt på 3,0 g, hvilket tyder på niveauer mellem 0.{{50}}6–0.3 0 % for god produktiv respons, når rejer blev fodret med reduceret fiskemelsfoder [2]. På den anden side var virkningerne af B. amyloliquefaciens (104 og 1{{90}}3 UFC/mL) opløst i vand af et bioflokksystem til opdrættet L. vannamei. rapporteret [44,45], men der er ingen rapporter om virkningerne af dette probiotikum suppleret i reduceret fiskemelsfoder på L. vannamei vækstpræstation. Derfor evaluerede denne undersøgelse effekten af ​​FM-erstatning med SBM og PBM i rejediæter suppleret med 0,13% af DL-MET (D1), 0,06% af MET-MET (D2), 0,19% af MET-MET (D3) og ifølge producentens anbefalinger brugte vi kombinationer af 0,13 % DL-MET plus 0,1 % B. amyloliquefaciens CECT 5940 (svarende til 109 UFC/g) (D4) og 0,06 % MET-MET plus 0,1 % B. amyloliquefaciens CECT 5940 (D5). Alle reducerede fiskemelsdiæter suppleret med methioninkilder og probiotika viste gode vandstabilitetsværdier. Derfor er de fiskemelsreducerede diæter evalueret i denne undersøgelse i overensstemmelse med tidligere rapporter, og alle diætbehandlinger viste en god respons i rejervækst. Ikke desto mindre havde rejer fodret med D1 lavere ydeevneparametre, mens rejer fodret med D3 og D5 havde højere ydeevneparametre. Den betydelige lave vækstpræstation hos rejer fodret med D1 kan relateres til dårlig foderoptagelse på grund af methioninmangel, hvilket forårsager smagsreduktion i reduceret fiskemelsvandefoder [20]. Den høje vækstpræstation hos rejer D3 sammenlignet med rejer fodret med D1 og D2 kan skyldes methioninmangel og kilde. Ovenstående kan skyldes, at det er blevet rapporteret, at MET MET-dipeptid har lav vandopløselighed og høj biotilgængelighed, som effektivt kan udnyttes af rejer, der fremmer bedre vækstpræstationsværdier [2,10,14]. Rejer fodret med D5 havde også høj vækstpræstation selv med samme methioninniveau og kilde i D2, men med tilsætning af 0,10 % B. amyloliquefaciens CECT 5940. Den høje vækstpræstation kan skyldes probiotikaets gavnlige egenskaber, som omfatter antimikrobiel aktivitet og produktion af -amylase, cellulase og protease, der øger næringsstoffets fordøjelighed og absorption [46]. En tidligere undersøgelse rapporterede også, at B. amyloliquefaciens er en methioninproducent [47], og dette kunne bidrage til at opretholde balancen af ​​denne EAA i D5. Desuden er det blevet rapporteret, at en blanding af fodertilsætningsstoffer kunne øge effektiviteten af ​​vækstpræstationerne for vandorganismer [48-50] og slagtekyllinger [51]. Derfor kunne 50 % FM-erstatningen med SBM og PBM i diæter suppleret med 0,19 % MET-MET og 0,06 % MET-MET plus 0,10 % B. amyloliquefaciens CECT 5940 forbedre næringsstofudnyttelsen og dermed rejervækstydelsen. Det er vigtigt at bemærke, at SBM og PBM har høje niveauer af fedtsyrer, men n-3 langkædede flerumættede fedtsyrer er mangelfulde i disse proteinkilder [52]. I denne sammenhæng er yderligere forskning nødvendig for at fastslå, hvordan brugen af ​​SBM og PBM påvirker fedtsyresammensætningen af ​​reduceret fiskemelsdiæt og rejemuskelkvalitet.

cistanche fordele for mænd styrker immunsystemet

4.2. Hepatopancreatisk histologi

Rejehepatopancreas er et fordøjelsesorgan og spiller en vigtig rolle i udskillelse af fordøjelsesenzymer, transport af næringsstoffer, opbevaring og absorption, derfor er dens funktion nøglen til rejers vækstpræstation og sundhed [30,53]. Det er imidlertid blevet rapporteret, at reduceret fiskemelsdiæt kan ændre den strukturelle morfologi af fordøjelsesorganer og forringe fysiologiske forhold i vandlevende organismer, hvilket resulterer i væksthæmning [54]. Den hepatopankreatiske histologi blev analyseret som en indikator for rejers vækstpræstation, sundhed og ernæringsstatus. Skader i hepatopancreas struktur blev ikke observeret, B-cellerne var de mest udbredte hepatopancreatiske celler, og deres epitelhøjde steg signifikant i alle diætbehandlinger med undtagelse af rejer fodret med D1, som havde en lignende respons som kontroldiæten. Resultaterne tyder på, at hepatopancreas er følsom over for inklusion af forskellige diætetiske methioninkilder og B. amyloliquefaciens i reduceret fiskemelsdiæt, hvilket øger B-celler, påvirker sekretion af fordøjelsesenzymer, næringsstofabsorption og assimilering og foderudnyttelse som rapporteret i andre undersøgelser, når det anvendes. fiskemel alternative kilder og tilsætningsstoffer [53,55-58]. Desuden er det blevet rapporteret, at methionintilskud kan mindske hepatopancreas-ændringer på grund af dets mangel på lavt fiskemelsdiæt [8]. Derfor er der ifølge den histologiske analyse ingen tegn på toksicitet forårsaget af reduceret fiskemelsdiæt suppleret med forskellige diætetiske methioninkilder og B. amyloliquefaciens i L. vannamei hepatopancreas.

4.3. Analyse af fordøjelsesenzym

Enzymets fordøjelsesaktivitet er en fysiologisk proces, der forbedrer fordøjelsen og absorptionen af ​​næringsstoffer og er derfor en nøglefaktor for at fremme rejervækstydelsen [59]. Ikke desto mindre har tidligere undersøgelser rapporteret, at fordøjelsesenzymaktiviteten faldt signifikant med reduceret fiskemelsdiæt uden additivt tilskud [60,61]. Fordøjelsesenzymaktiviteterne blev brugt som en indikator for rejers fordøjelsesfunktion. I nærværende undersøgelse forbedrede rejer fodret med D3 (p < 0,05) i hepatopancreatisk fordøjelsesenzymaktivitet sammenlignet mellem alle grupper, og der blev ikke fundet signifikante forskelle i den intestinale fordøjelsesenzymaktivitet. Samlet set blev lave fordøjelsesenzymaktiviteter bemærket i begge organer af rejer fodret med D1. I overensstemmelse med disse resultater øgede methionintilskud aktiviteten af ​​fordøjelsesenzymer hos brasen (Pagrus major) [62], græskarper (Ctenopharyngodon idella) [63], hvide rejer (L. vannamei) [2,3,20] og rohu fisk (Labeo rohita) [59]. Effekterne af foder suppleret med B. amyloliquefaciens på rejers fordøjelsesenzymaktivitet er ikke blevet rapporteret i L. vannamei, men det er kendt, at probiotika øger fordøjelsesenzymers aktivitet og forbedrer foderudnyttelsen og fordøjelsen [64]. Derudover vurderede flere værker forskellige akvakulturfoder suppleret med tilsætningsstoffer kombineret med probiotika og viste en stigning i fordøjelsesprocessen. [48,50]. Ikke desto mindre blev der påvist uoverensstemmelser i fordøjelsesenzymaktiviteterne, når slagtekyllinger med organiske syrer, probiotika og kombinationer, muligvis på grund af induktionsniveauet af fodertilsætningsstoffer og kombinationer på suboptimale niveauer [51]. Denne undersøgelse rapporterede også uoverensstemmelser i hepatopancreatisk fordøjelsesenzymaktivitet hos rejer fodret med D3, D4 og D5. Resultaterne tyder dog på, at det tidligere nævnte tilskud ikke påvirker rejens fordøjelsesfunktionalitet.

4.4. Transkriptionel respons af immunrelaterede gener

Den transkriptionelle respons af immunrelaterede gener er meget vigtig for at opnå data vedrørende rejers sundhedsstatus [35]. Det er dog blevet rapporteret, at lavt fiskemelsdiæt forringer immun- og antioxidantrejeresponset på grund af ubalancerede næringsstoffer, høje anti-ernæringsfaktorer og fiberindhold, der påvirker foderindtag, smag og fordøjelighed [56,65-67]. Tidligere undersøgte vi virkningerne af proteinkilde og -niveau på immunrelaterede gener (Hc, pPO, LGBP), antioxidantkapacitet (MnSOD) og stresstolerance (HSP60) og foreslog, at forsvarsmekanismerne ikke blev påvirket når rejer blev fodret med diæter indeholdende plantebaseret protein (30-35%) på mellemniveau [35]. På den anden side er det blevet rapporteret, at lavt fiskemelsdiæt har negative effekter på rejers immunrespons, når fiskemelet reduceres fra 250 g/kg til 100 g/kg [68]. Ikke desto mindre blev antioxidantresponset moduleret uden at påvirke lever- og tarmoxidativ status, når europæisk havaborre (Dicentrarchus labrax) blev fodret med lavt fiskemel suppleret med et DL-Met niveau 12% under deres etablerede krav [69]. Desuden blev immunresponset og antioxidantkapaciteten forbedret, da hvide rejer (L. vannamei) [8] og Nile tilapia (O. niloticus) [14] blev fodret med en lav fiskemelsdiæt med 0,15 % MET-MET. Desuden viste en undersøgelse, at Nile tilapia (O. niloticus) fodret med lavt fiskemelsdiæt suppleret med Spirulina platensis og B. amyloliquefaciens havde forbedret immunrespons og antioxidantkapacitet, men reduceret stresstolerance [21]. Resultaterne af denne undersøgelse fandt, at de transskriptionelle responser af gener relateret til immunitet, antioxidantkapacitet og stresstolerance blev forbedret, når rejer blev fodret med D2, D3, D4 og D5, hvilket er interessant, fordi dette indikerer, at methionin og probiotisk tilskud kan modulere positivt. forsvarsmekanismerne, hvilket mindsker påvirkningerne forårsaget af lavt fiskemelsfoder. I modsætning hertil kunne den lave transkriptionelle respons af immunrelaterede gener observeret i rejer fodret med D1 skyldes et methionin-underskud. Men i betragtning af den produktive ydeevne kunne de bedste diætbehandlinger være D3 og D5 uden at påvirke rejers vækst og sundhed.

4.5. Fordøjelsesmikrobiotaanalyse og funktionel forudsigelse

Rejefordøjelsessystemet er vært for mikroorganismesamfund domineret af bakterier, men eukaryote mikroorganismer kan også være til stede, hvilket bygger et stort mikrobielt økosystem kaldet mikrobiotaen [70]. Rejers fordøjelsessystems mikrobiota påvirker immunitet eller resistens, gavnlig metabolitproduktion og næringsstoffordøjelse og assimilering [71,72]. Kost er en af ​​de vigtigste miljøfaktorer, der påvirker rejernes fordøjelsessystems mikrobiota [73]. Denne undersøgelse evaluerede virkningerne af lavt fiskemelsdiæt på diversiteten, strukturen og den relative overflod af prokaryote og eukaryote mikroorganismer fra tarmen og hepatopancreas af L. vannamei ved hjælp af 16S og 18S sekventering. Undersøgelsesresultaterne antydede, at mangfoldigheden og strukturen af ​​mikrobiotaen (prokaryot og eukaryot) ikke var forskellig mellem diætbehandlinger. Imidlertid bestemte beta-diversitetssammenligning, at intestinal prokaryot mikrobiota klyngede sig adskilt fra hepatopancreatisk prokaryot mikrobiota, hvilket tyder på en unik økologisk niche ifølge rejers fordøjelsesorgan [74]. Derfor hjælper specialiserede mikroorganismer i både tarmen og hepatopancreas med at forbedre den energi, værten effektivt opnår, og de metaboliske processer, der er nødvendige for vækst, immunrespons, næringsstoffordøjelse og assimilering [75]. Som det vil blive forklaret nedenfor, tyder undersøgelsesresultaterne på, at overfloden af ​​både prokaryote og eukaryote mikroorganismer kunne øges og hjælpe rejer til effektivt at bruge næringsstoffer fra lavt fiskemelsdiæt til metaboliske processer, der er nødvendige for at opnå energi, vækst, immunitet, fordøjelse og ernæring. Ifølge forekomsten af ​​prokaryoter i alle tarm- og hepatopancreas-prøver var den mest udbredte phylum Proteobacteria, mens Actinobacteria-phylum havde en højere tilstedeværelse i hepatopancreas-prøver. Disse resultater er i overensstemmelse med en tidligere undersøgelse [36], og det er også blevet beskrevet, at disse phyla var dominerende i unge og voksne rejer (Penaeus monodon) [76]. Pseudoalteromonas tilhørende Proteobacteria phylum er et fordøjelsesenzym (proteaser, amylaser, -galactosidaser og phospholipaser) producerende mikroorganisme, der bidrager til næringsstoffordøjelsen af ​​rejer [77-79]; det er også blevet rapporteret, at det bidrager til syntese af polyumættet fedtsyre (PUFA) og kortkædet fedtsyre (SCF) [80,81]. Ruegeria, der tilhører Proteobacteria phylum, producerer triesteraseaktivitet, der bidrager til værtens fordøjelsesprocesser såvel som antibakteriel aktivitet mod Vibrio anguillarum [82]. Demequina, der tilhører Actinobacteria phylum, kan producere -amylase, xylanase og cellulase, som er involveret i kulhydratabsorption og udnyttelse [83–86]. Ifølge kemotaxonomiske og genomiske profiler kan Lysinimicrobium betragtes som et subjektivt synonym for Demequina [87] og kan følgelig have de samme bidrag til fordøjelsesenzymaktivitet og kulhydratfordøjelse. Rollen af ​​prokaryote mikroorganismer i rejefordøjelsessystemet er tæt forbundet med funktionsforudsigelser i KEGG-databasen, som var aminosyrer, kulhydrater, cofaktorer og vitaminmetabolisme samt cellemotilitet. Enzymets fordøjelsesproduktion og syntesen af ​​essentielle fedtsyrer indikerer mikrobiotaens gavnlige rolle i sundheden og immunstimuleringen af ​​rejers fordøjelsessystem. Desuden kunne cellemotilitetsprocesser såsom bakteriel kemotaksi og flagellar samling understøtte de prokaryote mikroorganismer i at tilpasse sig værtens fordøjelsesmiljø [88]. Derfor ville lavt fiskemelsdiæt suppleret med 0,19 % MET-MET eller 0,06 % MET-MET plus probiotika (B. amyloliquefaciens) hjælpe prokaryote samfunds gavnlige roller i rejernes fordøjelsessystem.

Det var vanskeligt at karakterisere de eukaryote mikroorganismers overflod med 18S-gensekventering, fordi en stor mængde L. vannamei-DNA blev påvist i denne undersøgelse. Desuden er det almindeligt ved fækal DNA-metabarcoding, at mikroeukaryotes DNA i fæces nedbrydes hurtigere end værtens DNA, og yderligere trin såsom spaltning eller blokering af værts-DNA ved hjælp af restriktionsenzymer eller blokerende primere er nødvendige før eller efter amplifikation [89 ]. Ikke desto mindre giver undersøgelsesresultaterne indsigt i de mikroeukaryote samfund i rejernes fordøjelsessystem. SAR-filumet var det mest udbredte i rejetarme, der blev fodret med lavt fiskemelsdiæt. Aurantiochytrium havde højere forekomst i rejetarm fodret med D3, mens Aplanochytrium var mest udbredt i rejetarm fodret med D5. Derudover var Ebria den mest udbredte i rejetarm fodret med D1. Aurantiochytrium er en eicosapentaensyre (EPA) producent [90], mens Aplanochytrium producerer docosahexaensyre (DHA) [91]. Disse fedtsyrer spiller en væsentlig rolle i at fremme væksten eller boostningen af ​​vandorganismers immunitet; EPA og DHA hjælper også vandorganismer med at reducere inflammatoriske faktorer og reducere inflammation [90]. På den anden side har Ebria et indre fast kiselholdigt skelet, hvilket kan resultere i dårlig fordøjelse af vandorganismer [92], hvilket kan sænke vækstevnen af ​​rejer fodret med D1. De eukaryote mikroorganismer lever som kommensaler eller mutualister i fordøjelsessystemet og væv hos marine hvirvelløse dyr, men det er sandsynligt, at de stammer fra kystvand, der blev brugt til at vande rejedammen, som tidligere beskrevet [93]. Brugen af ​​diæter, der er miljøvenlige og suppleret med tilsætningsstoffer og probiotika, kunne dog kontrollere den skadelige mikroalgevækst i rejernes fordøjelsessystem og dets miljø [94]. Dette stemmer overens med undersøgelsesresultaterne, som indikerer, at en lavt fiskemelsdiæt suppleret med 0.13 % DL-MET øgede Ebria-overfloden, hvilket påvirkede rejers produktive ydeevne og sundhed, mens diæter suppleret med 0.19 % METMET eller 0,06 % MET-MET plus 0,10 % B. amyloliquefaciens ville hjælpe eukaryote samfunds gavnlige roller i rejernes fordøjelsessystem.

cistanche fordele for mænd styrker immunsystemet

5. Konklusioner

Fiskemel kunne delvist erstattes med op til 50% af SBM og PBM i rejefoder suppleret med MET-MET og/eller B. amyloliquefaciens CECT 5940 uden negative effekter på vækstpræstationen. Sammenlignet med kontroldiæten havde rejer fodret med reduceret fiskemelsdiæt med 0,19 % MTE-MET og 0,06 % MET-MET plus 0,10 % B. amyloliquefaciens CECT 5940 henholdsvis 43 % og 40 % mere endelig biomasse. Desuden havde rejer fodret med reduceret fiskemelsdiæt suppleret med MET-MET og/eller B. amyloliquefaciens CECT 5940 bedre hepatopancreas epitelcellehøjde, fordøjelsesenzymaktivitet, transkriptionel respons af immunrelaterede gener og gavnlig mikrobiota for fordøjelsessystemet. Yderligere forskning er nødvendig for at undersøge graduerede niveauer af methioninkilder og de synergistiske virkninger af aminosyrer og probiotika i reduceret fiskemelsdiæt til opdrættede rejer. Det ville også være interessant at evaluere, hvordan SBM og PBM påvirker fedtsyresammensætningen af ​​reduceret fiskemelsdiæt og rejemuskelkvalitet. Ikke desto mindre kunne denne information være interessant til at udvikle lavt fiskemelsfoder til akvakultur uden at påvirke væksten og velfærden af ​​akvatiske organismer.

Referencer

1. FAO. Verdens fiskeri og akvakultur 2022. Mod blå transformation; FAO: Rom, Italien. [CrossRef]

2. Xie, J.-J.; Lemme, A.; Han, J.-Y.; Yin, P.; Figueiredo-Silva, C.; Liu, Y.-J.; Xie, S.-W.; Niu, J.; Tian, ​​L.-X. Fiskemelsniveauer kan med held reduceres i hvide rejer (Litopenaeus vannamei), hvis de suppleres med DL-Methionin (DL-Met) eller DL-MethionylDL-Methionin (Met-Met). Aquac. Nutr. 2017, 24, 1144-1152. [CrossRef]

3. Lu, J.; Zhang, X.; Zhou, Q.; Cheng, Y.; Luo, J.; Masagunder, K.; Han er.; Zhu, T.; Yuan, Y.; Shi, B.; et al. Kosttilskud af DL-methionyl-DLmethionin kunne forbedre vækstpræstation under strategier med lavt fiskemel ved at modulere TOR-signalvejen for Litopenaeus vannamei. Aquac. Nutr. 2021, 27, 1921-1933. [CrossRef]

4. Cho, JH; Kim, IH Fiskemel-næringsværdi. J. Anim. Physiol. Anim. Nutr. 2011, 95, 685-692. [CrossRef] [PubMed]

5. Sang, X.; Ja, H.; Jin, F.; Li, H.; Kim, Y.-S.; Xiao, J.; Guo, Z. Effekter af fermenteret sojaskrå og guanosin 50 -monophosphat på vækst, tarmsundhed og anti-stress-evne hos Penaeus vannamei i kost med lavt fiskemel. Aquaculture 2022, 548, 737591. [CrossRef]

6. Yao, W.; Yang, P.; Zhang, X.; Xu, X.; Zhang, C.; Li, X.; Leng, X. Effekter af at erstatte diætfiskemel med Clostridium autoethanogenum-protein på vækst og kødkvalitet af stillehavshvide rejer (Litopenaeus vannamei). Aquaculture 2022, 549, 737770. [CrossRef]

7. Zhang, J.; Yang, H.; Yan, Y.; Zhang, C.; Ja, J.; Sun, Y. Effekter af probiotika fra fiskeoprindelse på vækstpræstation, immunrespons og tarmsundhed hos rejer (Litopenaeus vannamei) fodret med fiskemel delvist erstattet af sojaskrå. Aquac. Nutr. 2020, 26, 1255-1265. [CrossRef]

8. Ji, R.; Wang, Z.; Han, J.; Masagunder, K.; Xu, W.; Mai, K.; Ai, Q. Effekter af DL-methionyl-DL-methionin-tilskud på vækstpræstation, immun- og antioxidative reaktioner af hvide benrejer (Litopenaeus vannamei) fodret med lavt fiskemelsdiæt. Aquac. Rep. 2021, 21, 100785. [CrossRef]

9. Chaklader, R.; Siddik, MAB; Fotedar, R. Total udskiftning af fiskemel med fjerkræbiproduktmel påvirkede væksten, muskelkvaliteten, histologisk struktur, antioxidantkapacitet og immunrespons hos juvenil barramundi, Lates calcarifer. PLoS ONE 2020, 15, e0242079. [CrossRef]

10. Niu, J.; Lemme, A.; Han, J.-Y.; Li, H.-Y.; Xie, S.-W.; Liu, Y.-J.; Yang, H.-J.; Figueiredo-Silva, C.; Tian, ​​L.-X. Vurdering af biotilgængeligheden af ​​det nye Met-Met-produkt (AQUAVI®Met-Met) sammenlignet med dl-methionin (dl-Met) i hvide rejer (Litopenaeus vannamei). Akvakultur 2018, 484, 322–332. [CrossRef]

11. Skiba-Cassy, ​​S.; Geurden, I.; Panserat, S.; Seiliez, I. Kostens methionin-ubalance ændrer transkriptionsreguleringen af ​​gener involveret i glukose-, lipid- og aminosyremetabolisme i leveren af ​​regnbueørred (Oncorhynchus mykiss). Akvakultur 2016, 454, 56–65. [CrossRef]

12. Machado, M.; Serra, CR; Oliva-Teles, A.; Costas, B. Methionin og tryptofan spiller forskellige modulerende roller i den europæiske havaborre (Dicentrarchus labrax) medfødt immunrespons og apoptosesignalering - en in vitro undersøgelse. Foran. Immunol. 2021, 12, 660448. [CrossRef]

13. Zhou, Y.; Han, J.; Su, N.; Masagunder, K.; Xu, M.; Chen, L.; Liu, Q.; Ja, H.; Sun, Z.; Ye, C. Virkninger af DL-methionin og en methioninhydroxyanalog (MHA-Ca) på vækst, aminosyreprofiler og ekspression af gener relateret til taurin og proteinsyntese i almindelig karpe (Cyprinus carpio). Aquaculture 2021, 532, 735962. [CrossRef]

14. Guo, T.-Y.; Zhao, W.; Han, J.-Y.; Liao, S.-Y.; Xie, J.-J.; Xie, S.-W.; Masagunder, K.; Liu, Y.-J.; Tian, ​​L.-X.; Niu, J. Kosttilskud af dl-methionyl dl-methionin øgede vækstpræstationer, antioxidantevne, indholdet af essentielle aminosyrer og forbedrede mangfoldigheden af ​​tarmmikrobiota i Nilen tilapia (Oreochromis niloticus). Br. J. Nutr. 2020, 123, 72-83. [CrossRef]

15. Lin, J.; Zeng, Q.; Zhang, C.; Sang, K.; Lu, K.; Wang, L.; Rahimnejad, S. Effekter af Bacillus subtilis-tilskud i sojamel-baserede diæter på vækstpræstation, diætfordøjelighed og tarmsundhed hos tyrefrø Lithobates catesbeianus. Aquac. Rep. 2020, 16, 100273. [CrossRef]

16. Tao, X.; Han, J.; Lu, J.; Chen, Z.; Jin, M.; Jiao, L.; Masagunder, K.; Liu, W.; Zhou, Q. Effekter af Bacillus subtilis DSM 32315 (Gutcare®) på vækstpræstation, antioxidantstatus, immunevne og tarmfunktion for unge Litopenaeus vannamei fodret med diæter med højt/lavt fiskemel. Aquac. Rep. 2022, 26, 101282. [CrossRef]

17. De Oliveira, MJK; Sakomura, NK; Dorigam, JCDP; Doranalli, K.; Soares, L.; Viana, G. Bacillus amyloliquefaciens CECT 5940 alene eller i kombination med antibiotiske vækstfremmere forbedrer ydeevnen hos slagtekyllinger under enterisk patogenbelastning. Poult. Sci. 2019, 98, 4391-4400. [CrossRef]

18. Silva, TFA; Petrillo, TR; Yunis-Aguinaga, J.; Marcusso, P.; Claudiano, GDS; de Moraes, FR; de Moraes, JRE Effekter af det probiotiske Bacillus amyloliquefaciens på vækstpræstation, hæmatologi og intestinal morfometri i bur-opdrættet Nile tilapia. Lat. Er. J. Aquat. Res. 2015, 43, 963-971. [CrossRef]

19. Bai, S.; Katya, K.; Yun, H. Tilsætningsstoffer i vandfoder. I foder- og fodringspraksis i akvakultur; Woodhead Publishing: Sawston, Storbritannien, 2015; s. 171–202. [CrossRef]

20. Wang, L.; Ja, L.; Hua, Y.; Zhang, G.; Li, Y.; Zhang, J.; Han, J.; Liu, M.; Shao, Q. Effekter af dietarydl-methionyl-dl-methionin (Met-Met) på vækstpræstation, kropssammensætning og hæmatologiske parametre for hvide rejer (Litopenaeus vannamei) fodret med planteproteinbaseret kost. Aquac. Res. 2019, 50, 1718-1730. [CrossRef]

21. Al-Deriny, SH; Dawood, MA; Zaid, AAA; El-Tras, WF; Paray, BA; Van Doan, H.; Mohamed, RA De synergistiske virkninger af Spirulina platensis og Bacillus amyloliquefaciens på vækstydeevnen, intestinal histomorfologi og immunrespons af Nile tilapia (Oreochromis niloticus). Aquac. Rep. 2020, 17, 100390. [CrossRef]

22. Sun, Y.; Zhang, Y.; Liu, M.; Li, J.; Lai, W.; Geng, S.; Yuan, T.; Liu, Y.; Gør det selv.; Zhang, W.; et al. Effekter af kosttilskud af Bacillus amyloliquefaciens CECT 5940 på vækstpræstation, antioxidantstatus, immunitet og fordøjelsesenzymaktivitet hos slagtekyllinger fodret med majs-hvede-sojabønnefoder. Poult. Sci. 2022, 101, 101585. [CrossRef]

23. NRC (Det Nationale Forskningsråd). Næringsstofbehov for fisk og rejer; National Academic Press: Washington, DC, USA, 2011. [CrossRef]

24. Guo, J.; Davis, R.; Starkey, C.; Davis, DA Effektiviteten af ​​forskellige belagte materialer til at forhindre udvaskning af næringsstoffer for stillehavsrejer Litopenaeus vannamei kommercielle diæter. J. World Aquac. Soc. 2020, 52, 195-203. [CrossRef]

25. Det internationale kontor for epizootier; Aquatic Animal Health Standards Commission. Manual for diagnostiske tests for vanddyr. Office international des épizooties. 2022. Tilgængelig online: https://www.woah.org/en/what-we-do/standards/codes-andmanuals/aquatic-manual-online-access/ (tilgået den 1. september 2022).

26. Martinez-Porchas, M.; Ezquerra-Brauer, M.; Mendoza-Cano, F.; Higuera, JEC; Vargas-Albores, F.; Martinez-Cordova. Aquac. Rep. 2020, 16, 100257. [CrossRef]

27. Peña-Rodríguez, A.; Elizondo-González, R.; Nieto-López, MG; Ricque-Marie, D.; Cruz-Suárez, LE Praktiske diæter til bæredygtig produktion af brune rejer, Farfantepenaeus californiensis, unge i nærværelse af den grønne makroalge Ulva clathrata som naturlig føde. J. Appl. Phycol. 2017, 29, 413-421. [CrossRef]

28. Piérri, V.; Valter-Severino, D.; Goulart-De-Oliveira, K.; Manoel-Do-Espirito-Santo, C.; Nascimento-Vieira, F.; Quadros-Seiffert, W. Dyrkning af marine rejer i bioflokteknologi (BFT) system under forskellige vandalkaliniteter. Braz. J. Biol. 2015, 75, 558-564. [CrossRef] [PubMed]

29. Gonzalez-Galaviz, JR; Casillas-Hernández, R.; Flores-Perez, MB; Lares-Villa, F.; Bórquez-López, RA; Gil-Núñez, JC Effekt af genotype og proteinkilde på ydeevnen af ​​stillehavshvide rejer (Litopenaeus vannamei). Ital. J. Anim. Sci. 2020, 19, 289-294. [CrossRef]

30. Bell, TA; Lightner, DV A Handbook of Normal Penaeid Shrimp Histology; De Forenede Nationers Fødevare- og Landbrugsorganisation: Rom, Italien, 1988.

31. Casillas-Hernández, R.; Arévalo-Sainz, KJ; Gonzalez-Galaviz, JR; Rodríguez-Jaramillo, MDC; Bórquez-López, RA; Gil Núñez, JC; Flores-Pérez, MB; Lares-Villa, F.; Ibarra-Gámez, JC; Barrios, RMM Virkningerne af høj koncentration af kuldioxid på ydeevne og vævshistologi af rejer Litopenaeus vannamei. Aquac. Res. 2021, 52, 3991-3996. [CrossRef]

32. Xiao, Z.; Storms, R.; Tsang, A. En kvantitativ stivelse-jod metode til måling af alfa-amylase og glucoamylase aktiviteter. Anal. Biochem. 2006, 351, 146-148. [CrossRef]

33. Bradford, MM En hurtig og følsom metode til kvantificering af mikrogram mængder af protein under anvendelse af princippet om protein-farvestofbinding. Anal. Biochem. 1976, 72, 248-254. [CrossRef]

34. Zhang, S.-P.; Li, J.-F.; Wu, X.-C.; Zhong, W.-J.; Xian, J.-A.; Liao, S.-A.; Miao, Y.-T.; Wang, A.-L. Effekter af forskellige diætiske lipidniveauer på vækst, overlevelse og immunrelateret genekspression i stillehavsrejer, Litopenaeus vannamei. Fisk Skaldyr. Immunol. 2013, 34, 1131-1138. [CrossRef]

35. Anaya, LR; Casillas-Hernández, R.; Flores-Pérez, MB; Lares-Villa, F.; Lares-Jiménez, LF; Luna-Nevarez, P.; Gonzalez-Galaviz, JR Effekt af genetisk linje, proteinkilde og proteinniveau på vækst, overlevelse og immunrelateret genekspression af Litopenaeus vannamei. J. World Aquac. Soc. 2020, 51, 1161-1174. [CrossRef]

36. Casillas-Hernández, R.; Arévalo-Sainz, KJ; Flores-Pérez, MB; Garcia-Clark, JG; Rodriguez-Anaya, LZ; Lares-Villa, F.; BórquezLópez, RA; Gil-Núñez, JC; Gonzalez-Galaviz, JR Transkriptionel respons af immunrelaterede gener i Litopenaeus vannamei dyrket i recirkulerende akvakultursystemer med forhøjet CO2. Rev. Bras. de Zootec. 2021, 50, 20200197. [CrossRef]

37. Guzmán-Villanueva, LT; Escobedo-Fregoso, C.; Barajas-Sandoval, DR; Gomez-Gil, B.; Peña-Rodríguez, A.; Martínez-Diaz, SF; Balcazar, JL; Quiroz-Guzmán, E. Vurdering af mikrobiel dynamik og antioxidantenzymgenekspression efter probiotisk administration i opdrættede stillehavsrejer (Litopenaeus vannamei). Aquaculture 2020, 519, 734907. [CrossRef]

38. Callahan, BJ; Mcmurdie, PJ; Rosen, MJ; Han, AW; Johnson, AJA; Holmes, SP DADA2: Højopløselig prøveslutning fra Illumina amplikondata. Nat. Metoder 2016, 13, 581-583. [CrossRef]

39. Lahti, L.; Shetty, S. Microbiome R-pakke; Frigivelse (3.16); Bioleder: Boston, MA, USA, 2017. [CrossRef]

40. Langille, MGI; Zaneveld, J.; Caporaso, JG; McDonald, D.; Knights, D.; Reyes, JA; Clemente, JC; Burkepile, DE; Vega Thurber, RL; Ridder, R.; et al. Prædiktiv funktionel profilering af mikrobielle samfund ved hjælp af 16S rRNA markør gensekvenser. Nat. Biotechnol. 2013, 31, 814-821. [CrossRef]

41. Cornejo-Granados, F.; Lopez-Zavala, AA; Gallardo-Becerra, L.; Mendoza-Vargas, A.; Sánchez, F.; Vichido, R.; Brieba, LG; Viana, MT; Sotelo-Mundo, RR; Ochoa-Leyva, A. Mikrobiom af stillehavsrejer afslører forskelle i bakteriesamfundets sammensætning mellem vilde, akvakulturerede og AHPND/EMS-udbrudstilstande. Sci. Rep. 2017, 7, 1-15. [CrossRef]

42. Façanha, FN; Oliveira-Neto, AR; Figueiredo-Silva, C.; Nunes, AJ Effekt af rejers belægningstæthed og graderede niveauer af diætmethionin over vækstpræstationen af ​​Litopenaeus vannamei opdrættet i et grønt vandsystem. Akvakultur 2016, 463, 16-21. [CrossRef]

43. Nunes, AJP; Sabry-Neto, H.; Masagounder, K. Råprotein i kost med lavt fiskemel til unge Litopenaeus vannamei kan reduceres gennem et velafbalanceret tilskud af essentielle aminosyrer. J. World Aquac. Soc. 2019, 50, 1093-1107. [CrossRef]

44. Llario, F.; Falco, S.; Sebastiá-Frasquet, M.-T.; Escrivá, J.; Rodilla, M.; Poersch, LH Rollen af ​​Bacillus amyloliquefaciens på Litopenaeus vannamei under modningen af ​​et bioflokksystem. J. Mar. Sci. Eng. 2019, 7, 228. [CrossRef]

45. Llario, F.; Romano, LA; Rodilla, M.; Sebastiá-Frasquet, MT; Poersch, LH Anvendelse af Bacillus amyloliquefaciens som probiotisk for Litopenaeus vannamei (Boone, 1931) dyrket i et bioflokksystem. Iran. J. Fisk. Sci. 2020, 19, 904-920.

46. ​​Gharib-Naseri, K.; Dorigam, JCDP; Doranalli, K.; Kheravii, S.; Swick, RA; Choct, M.; Wu, S.-B. Modulationer af gener relateret til tarmintegritet, apoptose og immunitet ligger til grund for de gavnlige virkninger af Bacillus amyloliquefaciens CECT 5940 i slagtekyllinger fodret med diæter med forskellige proteinniveauer i en nekrotisk enteritis-udfordringsmodel. J. Anim. Sci. Biotechnol. 2020, 11, 104. [CrossRef]

47. Ajogwu, TMC; Ekwealor, CC; Mbah, AN; Madukwe, EJ; Ekwealor, IA Screening af methionin-producerende bacillearter fra nigerianske fermenterede fødevarekrydderier og virkninger af nogle kulturelle parametre på methioninakkumulation. Er. J. Food Nutr. 2020, 9, 16-22. [CrossRef]

48. Yu, M.-C.; Li, Z.-J.; Lin, H.-Z.; Wen, G.-L.; Ma, S. Effekter af kostbaciller og medicinske urter på væksten, fordøjelsesenzymaktiviteten og serumbiokemiske parametre for rejen Litopenaeus vannamei. Aquac. Int. 2008, 16, 471-480. [CrossRef]

49. Yılmaz, S.; Ergun, S.; Yigit, M.; Çelik, E. Effekt af kombination af diæt Bacillus subtilis og trans-kanelsyre på medfødte immunresponser og modstand af regnbueørred, Oncorhynchus mykiss til Yersinia ruckeri. Aquac. Res. 2020, 51, 441-454. [CrossRef]

50. Zare, R.; Kenari, AA; Sadati, MY Indflydelse af diæteddikesyre, protein (probiotisk) og deres kombination på vækstpræstation, tarmmikrobiota, fordøjelsesenzymer, immunologiske parametre og fedtsyresammensætning hos sibirisk stør (Acipenser baerii, Brandt, 1869). Aquac. Int. 2021, 29, 891-910. [CrossRef]

51. Rodjan, P.; Soisuwan, K.; Thongprajukaew, K.; Apparatet, Y.; Khongthong, S.; Jeenkeawpieam, J.; Salaeharae, T. Effekt af organiske syrer eller probiotika alene eller i kombination på vækstpræstation, næringsstoffordøjelighed, enzymaktiviteter, tarmmorfologi og tarmmikroflora hos slagtekyllinger. J. Anim. Physiol. Anim. Nutr. 2018, 102, e931–e940. [CrossRef] [PubMed]

52. Hong, Y.; Chu, J.; Kirby, R.; Sheen, S.; Chien, A. Virkningerne af at erstatte fiskemelsprotein med en blanding af fjerkræbiproduktmel og fermenteret sojaskrå på vækstpræstationen og vævets ernæringsmæssige sammensætning af asiatisk havaborre (Lates calcarifer). Aquac. Res. 2021, 52, 4105-4115. [CrossRef]

53. Burri, L.; Berge, K.; Chumkam, S.; Jintasataporn, O. Effekter af forskellige foderinklusionsniveauer af krillmel på vækst og hepatopancreas morfologi af Litopenaeus vannamei. Aquac. Res. 2020, 51, 4819-4823. [CrossRef]

54. Murashita, K.; Matsunari, H.; Fukada, H.; Suzuki, N.; Furuita, H.; Oku, H.; Rønnestad, I.; Yoshinaga, H.; Yamamoto, T. Effekt af en plantebaseret kost med lavt fiskemel på fordøjelsesfysiologi i gulhale Seriola quinqueradiata. Akvakultur 2019, 506, 168–180. [CrossRef]

55. Rahimnejad, S.; Yuan, X.; Wang, L.; Lu, K.; Sang, K.; Zhang, C. Chitooligosaccharidtilskud i kost med lavt fiskemel til stillehavsrejer (Litopenaeus vannamei): Effekter på vækst, medfødt immunitet, tarmhistologi og immunrelateret genekspression. Fisk Skaldyr. Immunol. 2018, 80, 405-415. [CrossRef]

56. Peña-Rodríguez, A.; Pelletier-Morreeuw, Z.; García-Luján, J.; Rodríguez-Jaramillo, MDC; Guzmán-Villanueva, L.; Escobedo regoso, C.; Tovar-Ramírez, D.; Reyes, AG Evaluering af råekstrakt af Agave lechuguilla-biprodukt som fodertilsætningsstof til juvenile rejerLitopenaeus vannamei. Aquac. Res. 2019, 51, 1336-1345. [CrossRef]

57. Ray, GW; Liang, D.; Yang, Q.; Tan, B.; Dong, X.; Chi, S.; Liu, H.; Zhang, S.; Rimei, L. Effekter af at erstatte fiskemel med diætetisk sojaproteinkoncentrat (SPC) på vækst, serum biokemiske indekser og antioxidative funktioner for unge rejer Litopenaeus vannamei. Aquaculture 2020, 516, 734630. [CrossRef]

58. Ambasankar, K.; Dayal, JS; Vasagam, KK; Sivaramakrishnan, T.; Sandeep, KP; Panigrahi, A.; Ananda Raja, R.; Burri, L.; Vijayan, KK Vækst, fedtsyresammensætning, immunrelateret genekspression, histologi og hæmatologiindekser for Penaeus vannamei fodret med graderede niveauer af antarktisk krillmel ved to forskellige fiskemelskoncentrationer. Aquaculture 2022, 553, 738069. [CrossRef]

59. Noor, Z.; Noor, M.; Khan, SA; Younas, W.; Ualiyeva, D.; Hassan, Z.; Yousafzai, AM Kosttilskud af methionin forbedrer vækstpræstationer, medfødt immunitet, fordøjelsesenzymer og antioxidantaktiviteter af rohu (Labeo rohita). Fish Physiol. Biochem. 2021, 47, 451-464. [CrossRef]

60. Yun, H.; Shahkar, E.; Hamidoghli, A.; Lee, S.; Vandt, S.; Bai, SC Evaluering af diætetisk sojaskrå som fiskemelserstatning for juvenile hvidbensrejer, Litopenaeus vannamei opdrættet i biofloksystem. Int. Aquat. Res. 2017, 9, 11-24. [CrossRef]

61. Hu, X.; Yang, H.-L.; Yan, Y.-Y.; Zhang, C.-X.; Ja, J.-D.; Lu, K.-L.; Hu, L.-H.; Zhang, J.-J.; Ruan, L.; Sun, Y.-Z. Virkninger af fructooligosaccharid på vækst, immunitet og tarmmikrobiota af rejer (Litopenaeus vannamei) fodret med fiskemel delvist erstattet af sojaskrå. Aquac. Nutr. 2019, 25, 194-204. [CrossRef]

62. Mamauag, REP; Gao, J.; Nguyen, BT; Ragaza, JA; Koshio, S.; Ishikawa, M.; Yokoyama, S. Tilskud af dl-methionin og methionin-dipeptid i diæter er effektive til udvikling og vækst af larver og unge røde havbrasen, Pagrus major. J. World Aquac. Soc. 2012, 43, 362-374. [CrossRef]

63. Wu, P.; Tang, L.; Jiang, W.; Hu, K.; Liu, Y.; Jiang, J.; Kuang, S.; Tang, W.; Zhang, Y.; Zhou, X.; et al. Forholdet mellem kostmethionin og vækst, fordøjelse, absorption og antioxidantstatus i tarm- og hepatopancreatisk væv fra sub-voksne græskarper (Ctenopharyngodon idella). J. Anim. Sci. Biotechnol. 2017, 8, 1-14. [CrossRef]

64. Encarnação, P. Funktionelle fodertilsætningsstoffer i akvakulturfoder. I vandfoderformulering; Academic Press: Cambridge, MA, USA, 2016; s. 217–237. [CrossRef]

65. Xie, S.; Wei, D.; Yin, P.; Zheng, L.; Guo, T.; Liu, Y.; Tian, ​​L.; Niu, J. Kosterstatning af fiskemelssænket proteinsyntese og immunrespons af unge stillehavsrejer, Litopenaeus vannamei ved lavt saltindhold. Comp. Biochem. Physiol. Del B Biochem. Mol. Biol. 2018, 228, 26-33. [CrossRef]

66. Ayiku, S.; Shen, J.; Tan, B.-P.; Dong, X.-H.; Liu, H.-Y. Effekter af at reducere diætfiskemel med gærtilskud på Litopenaeus vannamei vækst, immunrespons og sygdomsresistens mod Vibrio harveyi. Microbiol. Res. 2020, 239, 126554. [CrossRef]