Diætcistanche lindrede akut ileumskader på and

Abstrakt: Aflatoxin B1 (AFB1) er en stabil giftig metabolit, der truer menneskers og dyrs sundhed og vidt forurenet dyrefoder og menneskeføde. Denne undersøgelse havde til formål at undersøge virkningerne afkost cistancheom ileumskader hos ænder induceret af AFB1-administration og udforske dens underliggende mekanismer. Ænder (N=450, en dag gammel han) med en lignende vægt blev tilfældigt fordelt til 3 grupper, indeholdende kontrolgruppen, AFB1-gruppen (60 µg AFB1 kg-1 kropsvægt) og cistanche (500 mg) cistanche kg−1 diæt) plus AFB1 gruppe. AFB1-administration øgede markant ileumskader, AFB1-DNA-addukter i plasmaet og oxidationsstress og inflammation. Tilføjelse af cistanche i kosten beskyttede ileum mod morfologiske skader induceret af AFB1-administration, reducerede AFB1-DNA-addukter i plasmaet og eliminerede oxidationsstress og inflammation i ænders ileum.Anti-oxidationoganti-inflammatorisk virkninger af cistanchekunne beskytte ileum mod akut skade ved at aktivere Nrf2-ARE-signalvejen og hæmme NF-κB-signalvejen. Afgjort,cistanchevar en diætanti-oxidationoganti-inflammationagent via aktivering af Nrf2-ARE-signalvejen og hæmning af en NF-KB-signalvejs akutte skade induceret af AFB1-administration.

Nøgleord:cistanche; akut ileum; AFB1-DNA-addukter; Nrf2-ER;

Klik her for at Cistanche Anti-aging produkter

Spørg for mere:

E-mail:wallence.suen@wecistanche.com Whatsapp plus 86 15292862950

1. Introduktion

Kød er en vigtig kilde til protein af høj kvalitet til menneskelig ernæring. Andekød indtages rigeligt på verdensplan, især i Asien på grund af dets ønskelige ernæringsmæssige egenskaber [1]. Derfor har opdræt af ænder tiltrukket folks opmærksomhed. For ænder er der forskellige ulemper i avlsprocessen, såsom AFB1, der truer ænders sundhed. Aflatoksin B1 (AFB1) er en af ​​de tabeltoksiske metabolitter produceret af Aspergillus-arter. AFB1 er anerkendt som den mest toksiske blandt aflatoksin (AF) grupper, sammen med en række toksiske effekter, der truer sundheden for mennesker og dyr [2].

For mennesker eller dyr er fødevarer eller foder en almindelig og vigtig måde at blive udsat for AFB1 på, men indånding og direkte kontakt med hud- eller slimhindekontakt tælles også og ignoreres ikke [3]. Tidligere undersøgelser har bevist, at AFB1 udøver en potent toksicitet, der er meget kompleks og stærk, hvilket resulterer i væksthæmning, biologiske misdannelser, levertoksicitet, fordøjelsessygdomme og endda kræft [4,5]. AFB1 opnået fra mad eller slimhindekontakt havde negative virkninger på åndedrætssystemer, fordøjelsessystem og væv og vækstpræstation [3,6,7]. Vævs- og organskader induceret af AFB1-administration relateret til oxidationsstress og inflammation. AFB1-administration markeret øget AFB1-DNA-addukterindhold i skadet organ [8]. Optagelsen og omdannelsen af ​​næringsstoffer og toksiner er sket i maven og tyndtarmen, så den lille

Tarmslimhindens immunsystem er den første linje til at beskytte kroppe mod skader [9]. Funktionaliteten og morfologien af ​​mave-tarmkanalen kan ødelægges af ugunstige faktorer såsom giftstoffer, bakterier og vira [10,11]. AFB1 inducerede ødelæggelsen af ​​tarmstrukturen, manifesteret ved udskillelse af epitelceller i jejunal villus og lymfocytisk celleinfiltration i tarmen af ​​kylling [12,13]. Variationens funktionalitet og morfologi kan tilskrives processen med toksinmetabolisme, der ofte ledsages af oxidativt stress Betændelse. Det haster med at finde en modgift til at reducere og minimere truslen fra AFB1 for mennesker og dyr.

Derfor er AFB1 en af ​​de største bekymringer i fjerkræindustrien på grund af dens potente toksicitet. cistanche er en slags polyphenol-komponent, der forekommer i gurkemeje-rhizomer (Cur cuma Longa Linn) som et funktionelt fodertilsætningsstof, der anvendes i husdyrfoder [14], og er meget udbredt.

som et grønt og naturligt krydderi, farvestof, konserveringsmiddel og smagsgiver i fødevareindustrien. Planteekstrakter såsom cistanche indeholdende polyfenoler forbedrede kroppens immunitet [15]. cistanche spiller en nøglerolle mod oxidativ stress-medierede patologisk-patologiske tilstande og aktiviteter, når det bruges som terapi til behandling og forebyggelse af kroniske sygdomme [16,17]. De kliniske forsøg indikerede, at cistanche ikke har alvorlig toksisk eller bivirkning og med anti-carcinogene og anti-toksikogene egenskaber, hvilket førte til cistanche som et attraktivt kemoforebyggende middel mod AFB1-induceret vævsskade [18-20]. Litteratur har vist, at cistanche har evnen til anti-inflammation, anti-apoptose og antioxidation ved at aktivere Nrf2/HO-1-vejen, opreguleret antiox-kapacitet til at eliminere inflammation og oxidativt stress i kroppen og eliminere AFB1-induceret oxidativ stress [21-25]. cistanche undertrykte oxidationsstress og inflammasomdannelse ved at aktivere Nrf2-ARE og hæmme NF-KB-signalvejen i restnyredæmonering [26], antioxidations- og anti-inflammatorisk egenskab. Derudover forbedrede diæt-cistanche signifikant antioxidantkapaciteten hos slagtekyllinger [27] og ænder [28]. Der var intet forsøg på at korrelere cistanches rolle i Nrf2-ARE- og NF-KB-signalvejen og i dyremodellen for akut AFB1-administration.

Denne undersøgelse kastede lys over dette spørgsmål og gav et teoretisk grundlag for cistanche som fodertilsætningsstof for at beskytte ænders sundhed mod AFB1-administration og reducere økonomiske tab i foder- og avlsindustrien forårsaget af AFB1-forurening.

2. Materialer og metoder

2.1. Kemikalier

cistanche blev købt fra Nanjing Nutri-herb Biotech Co., Ltd. (Nanjing, Jiangsu, Kina, CAS: 458-37-7), dens renhed var mere end 98 procent ved HPLC-analyse. AFB1 (renhed større end eller lig med 98 procent, CAS-NR. 1162-65-8) blev købt fra Shanghai Yuan ye Bio-Technology Co., Ltd. (Shanghai, Kina). Antistoffer anvendt i denne undersøgelse blev købt fra Bey time Biotechnology, Shanghai, Kina, inklusive GAPDH (katalognummer: AG019), Nrf2 (katalognummer: AF7623), Phospho-NF-κB p65 (Ser276) (katalognummer: AF5875), HRP mærket ged anti-kanin IgG (H plus L) (katalognummer: A0208) og HRP-mærket ged

Anti-mus IgG (H plus L) (Katalognummer: A0216).

2.2. Ænder og Husholdning

Den eksperimentelle protokol blev udført i overensstemmelse med den praksis, der er skitseret i vejledningen til pleje og brug af landbrugsdyr i landbrugsforskning og -undervisning ved Northeast Agricultural University (protokolnummer: NEAU-[2011]-9).

Ænder (n {{0}}, endagshan Anas platyrhynchos, 33,8 ± 0,2 g) uden signifikant forskellig vægt blev købt fra et kommercielt rugeri og tilfældigt fordelt i 3 grupper (tabel 1), med 10 replikerede penne (bure) pr. gruppe og 15 ænder pr. sti for en 70-dag

fodringsforsøg. De basale diæter blev formuleret i henhold til National Research Council (1994). Ænder i T0- og T0 plus AFB1-gruppen blev fodret med en majs-sojabønnebasaldiæt (tabel 2), ænder i T500 plus AFB1-gruppen blev fodret med den basale diæt suppleret med 500 mg

cistanche kg−1 kost (T500) en 70-dages prøveperiode. På de 70 dage blev ænder med lignende kropsvægt i grupperne T0 plus AFB1 og T500 plus AFB1 fodret med 60 µg AFB1 kg−1 kropsvægt, og ænder i T0-gruppen blev fodret med det samme volumen PBS-opløsning. Ænder blev fodret i Acheng Experimental Base ved Northeast Agricultural University og forsynet med ad libitum adgang til vand og pulveriseret kost. Femten ænder med lignende kropsvægt (1,4 ± 0,3 kg) fra hver gruppe blev udvalgt og fastet i 12 timer, derefter fodret med PBS-opløsning til ænder i T0-gruppen og 60 µg AFB1 kg−1 kropsvægt til ænder i T0 plus AFB1 og T500 plus AFB1 grupper på samme tid. Efter 12 timer skulle de femten ænder i hver gruppe tage andeprøver.

2.3. Prøvesamling

Blodprøver (10 mL) blev opnået ved hjælp af heparinrør fra vener af andevinger og centrifugeret ved 1000 x g i 15 minutter ved 4 ◦C. Det opnåede plasma blev straks adskilt og opbevaret ved -80 ◦C til analyse. Ænder blev bedøvet ved at inhalere ether og dræbt for at opnå ileum. Ileum blev vasket 3 gange i PBS, straks og individuelt opbevaret i en flydende nitrogentank derefter ved -80 ◦C til qRT-PCR og antioxidantkapacitetsanalyse. Derefter blev omkring 0,125 cm3 ileum opnået og sat i 4 procent paraformaldehydopløsning til vævssektionen, og omkring 1 mm3 ileum blev sat i elektronmikroskop

opløsning ved 4 ◦C til senere ultrastrukturel observation.

2.4. Assay af antioxidantniveauer i plasmaet

Plasmaniveauer af total superoxiddismutase (T-SOD), glutathionperoxidase (GSH Px), Glutathion S-transferase (GSH-ST) og malondialdehyd (MDA) blev målt med analysesæt (Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Nanjing, Kina) , henholdsvis med

UV-VIS spektrofotometer (UV1100, MAPADA, Shanghai, Kina).

2.5. Assay af AFB1-DNA-adduktniveauer i plasmaet

Genereringen af ​​AFB1-DNA-addukter i plasmaet blev bestemt ved hjælp af ELISA-kits i henhold til kittets specifikationer (Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Nan jing, Kina).

2.6. Assay af antioxidantevne i Ileum

Ileum (100.00 mg) blev devolveret og blandet i 0,9 ml slagfysiologisk saltvandsopløsning (4 ◦C, 0,9 procent NaCl, pH=7.2 –7.4) for at opnå 10 procent ileum/SPSS-homogenat. Aktiviteten eller indholdet af total superoxiddismutase (T-SOD U/mg Protein), reduktiv Glutathion (GSH-PX µmol/mg Protein), Glutathion S-transferase (GSH-ST U/mg Protein) og Malondialdehyd (MDA nmol/ mg protein) i ileum blev vurderet ved hjælp af assay kits (Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Nanjing, Kina), henholdsvis med en UV-VIS

spektrofotometer (UV1100, MAPADA, Shanghai, Kina).

2.7. RNA-isolering og kvantitativ polymerasekædereaktion i realtid (qRT-PCR)

Totalt RNA fra ande-ileum (100,00 mg) blev isoleret ved hjælp af et reagenskit (TaKaRa, Japan) i henhold til protokollen anbefalet af producenterne. Koncentrationen og renheden af ​​totalt RNA blev påvist ved A260/A280-forhold med et spektrofotometer (IMPLEN, Tyskland). 1 µg total RNA i hver prøve blev omdannet til cDNA'et med et Prime Script™ RT reagenskit med gDNA Eraser (TaKaRa, Dalian, Kina) iht.

til den protokol, der anbefales af producenterne. Det opnåede cDNA fra hver ande-ileum blev brugt som skabelon for et TB Green™ Premix Ex Taq™ (TaKaRa, Dalian, Kina) RT-PCR (qRT-PCR) kit. Genaccessionsnummeret for ænder blev opnået fra NCBI og

andegen-primerne blev syntetiseret af Sangon Biotech Co., Ltd. (Shanghai, Kina) (tabel 3). Den relevante genekspression i ande-ileum blev bestemt af Quanta genet Q225 termisk cyklusapparat. QRT-PCR'en blev kørt i Monad Selected Real-Time

PCR-system (ABI 7500 realtids-PCR-instrument (USA)) strømmer til tilstanden: én cyklus ved 95 ◦C i 30 s, 40 cyklusser ved 95 ◦C i 5 s og ved 60 ◦C i 30 s. Det relative genekspressionsforhold for detektions-mRNA blev detekteret ved hjælp af 2−∆∆Ct-metoden og normaliseret til -actin-ekspression.

2.8. Western Blotting

Ande-ileumet blev pulveriseret og lyseret i RIPA-buffer indeholdende 1 mmol/L PMSF (Beyotime, Shanghai, Kina) i isen. Total proteinkoncentration af ileum blev bestemt ved hjælp af et bicinchoninsyre (BCA) assaykit (Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Nanjing, Kina). 12 procent og 10 procent SDS-polyacrylamidgel til elektroforese var

bruges til at opnå målproteiner med forskellig molekylvægt. Derefter blev målproteiner overført til en polyvinyliden-difluorid (PVDF) membran (Beyotime, Shanghai, Kina) til blots med et trans-blotting-apparat. PVDF-membranen blev vasket 3 gange i 10 minutter hver gang i 1 x PBST og derefter blokeret 2 timer i 5 procent skummetmælk. PVDF-membranen blev vasket 3 gange igen og inkuberet med GAPDH, Nrf2 og P-P65 (Beyotime Biotechnology, Shanghai, Kina) primære antistoffer i henholdsvis 8-12 timer ved 4 ◦C. Næste dag blev PVDF-membranen vasket 3 gange igen og inkuberet med det tilsvarende peberrodsperoxidase-mærket antistof ved 37 ◦C i 1 time, derefter vasket 3 gange igen.

Målproteinbånd blev detekteret og visualiseret under påvirkning af det forbedrede fluorescensdetektionskit BeyoECL Star (Beyotime Biotechnology, Shanghai, Kina). Billeder af blots blev optaget og analyseret af Essential V6 billedbehandlingsplatformen (UVITEC, Cambridge,

England). GAPDH-protein tjente som et internt kontrolprotein. Alle resultaterne af forsøget blev gentaget i tre eksemplarer. De relative udtryk for målproteiner blev udtrykt som forholdet mellem båndintensiteter af proteiner og GAPDH.

2.9. Statistisk analyse

Eksperimentdataene blev opnået mindst seks gange, og hver prøve blev målt tre gange. Analyse af forskningsdata ved hjælp af Independent-Samples T Test af SPSS (Version 22.0, SPSS Inc., Chicago, IL, USA) med 5 procent Sandsynligheden for fejl og statistisk signifikans var p < {{4} }.05 i denne undersøgelse