Metoder til kvalitetskontrol af Cistanche deserticola

for flere oplysninger:ali.ma@wecistanche.com

Shi Ziyi, Wu Yun, Zhu Yuemei & et al.

Den traditionelle kinesiske medicinCistancheer den saftige stilk afCistanche deserticolaYC Ma eller Cisanche tubulosa (Schenk) Wight med tørre skællende blade. Det har funktionerne at tonificere nyre-yang, nærende essens og blod, fugte tarme og afføringsmidler osv. Det bruges mest til mangel på nyre-yang, mangel på essens og blod, impotens og infertilitet, ømhed og svaghed i talje og knæ, svaghed af muskler og knogler, tarmtørhed og forstoppelse. Det viser moderne farmakologisk forskningCistanchehar mange funktioner såsom forbedring af seksuel funktion, modstand mod Alzheimers sygdom og Parkinsons sygdom, forbedring af indlærings- og hukommelsesevne, anti-aldring, anti-træthed, beskyttelse af leveren og afføringsmiddel [4]. En lang række undersøgelser har bekræftet, at phenylethanoid-glykosiderne iCistanche deserticolahar åbenlyse effekter på at forbedre indlærings- og hukommelsesevnen, modstå Alzheimers sygdom og Parkinsons sygdom (4, oligosaccharider og polyoler har virkningen af ​​afføringsmiddel og afføringsmiddel 64 ). "Folkerepublikken Kinas farmakopé" måler kun indholdet af phenylethanoid glycosider echinacoside og verbascoside iCistanchedeserticola, men måler ikke de aktive komponenter af dets afførende virkning, så det er vanskeligt at opnå en omfattende analyse af de medicinske materialer afCistanchedeserticola. Kvalitetskontrol. For at overvinde denne begrænsning og etablere et multi-indeks kvalitetsevalueringssystem relateret til de vigtigste funktioner og indikationer afCistanchedeserticola, denne undersøgelse brugte HPLCELSDP4 til at etablere en kvantitativ analysemetode for betain, mannitol, fructose, glucose og saccharose i medicinske materialer afCistanchedeserticola. Hertil kommer 58 partier afCistanchedeserticolamedicinske materialer fra forskellig oprindelse og 10 batches af medicinske materialer afCistanchei Hotan-området i Xinjiang blev testet, hvilket kan give en reference til den omfattende kvalitetskontrol og evaluering af medicinske materialer afCistanchedeserticolai fremtiden.

Klik for at cistanche ekstrakt fordele produkter

1 Instrument og reagenser

1.1 Instrumenter

Sartorius elektronisk vægt BT25 S, BS 124 S (Beijing Sartorius Balance Co., Ltd.); Agilent 1100 højtydende væskekromatografi; ALLTECH 2000ES Evaporative Light Scattering Detector (EISD); Ultrasonic Cleaner KQ 250 (Kunshan Ultrasonic Instrument Ltd). 1.2 Reagenser

Kontrolstof: betain (batch: {{0}}, renhed: 99,2 procent), mannitol (batch: 10053-201304, renhed: 99,0 procent), D-fructose (batch: 111504-201703 , renhed: 99,8 procent ), D - vandfri glucose (batchnummer: 110833-201506, renhed: 99,9 procent ), saccharose (batchnummer: 111507-201303, renhed: 99,8 procent ), alt købt fra China National Institute til fødevare- og lægemiddelkontrol.

De medicinske materialer afCistanchedeserticolablev indsamlet i Indre Mongoliet, Xinjiang, Gansu og andre steder, med i alt 58 partier. De blev identificeret af professor Tu Pengfei fra Peking University School of Pharmacy som de tørrede kødfulde stængler afCistanchedeserticolaYCMa af Lidangaceae-planten, som vist i tabel 3.

De medicinske materialer afCistanchedeserticolablev indsamlet i Hotan-området, Xinjiang, i i alt 10 partier. De blev identificeret af professor Tu Pengfei fra School of Pharmacy ved Peking University som de tørrede kødfulde stængler med skællende blade af Cistanche tubulosa (Schenk) Wight fra Liedangaceae-planten, som vist i tabel 4.

1.3 Reagenser

Acetonitril er kromatografisk ren (Tianjin Boshiqi Technology Development Co., Ltd.), methanol er kromatografisk (Tianjin Saifu Century Technology Development Co., Ltd.), og vand er ultrarent vand.

2 Metoder og resultater

2.1 Kromatografiske forhold

Den kromatografiske søjle var en ShodexAshaipak NH2P-50 4E polymergelkolonne (250 mm × 4,6 mm, 5 μm); den mobile fase var acetonitril-vand (77∶23); flowhastigheden var 0,7 mL·min-1; kolonnetemperaturen var 25 grader; Lysspredningsdetektor (ELSD): Driftsrørets temperatur var 100 grader, og bæregasstrømningshastigheden var 3 L·min-1.

2.2 Fremstilling af referenceopløsning

Tag en passende mængde betain, mannitol, fructose, glucose og saccharose referencestof, vej det nøjagtigt, tilsæt vand for at lave en blandet opløsning indeholdende 0.25 mg betain, mannitol, fructose, glucose og saccharose pr. 1 ml, ryst godt og tag.

2.3 Forberedelse af testopløsningen

Tag omkring 1,0 g afCistanchemedicinsk pulver (passet gennem en nr. 4-sigte), vej det nøjagtigt, kom det i en 100 ml brun målekolbe, tilsæt 50 ml 50 procent methanol præcist, tilslut det tæt, ryst det op, vej det, læg det i blød i 30 minutter og derefter ultralyd (effekt 250 W, frekvens 35 kHz) i 40 minutter, tag det ud, lad det køle af, vej det igen, tilsæt 50 procent methanol for at reducere massen, ryst godt og lad den står. Aspirer 5 mL supernatant præcist, kom den i en 25 mL målekolbe, fortynd til mærket med 50 procent methanol, ryst godt og filtrer gennem en 0,2 μm mikroporøs membran.

2.4 Bestemmelsesmetode

Træk nøjagtigt henholdsvis 5 og 10 μL af referenceopløsningen og 5 μL af testopløsningen, injicer dem i væskekromatografen, noter toparealet og beregn i overensstemmelse med den logaritmiske ligning for den eksterne standard topunktsmetode.

2.5 Systemets egnethedstest

I henhold til de kromatografiske forhold under punkt 2.1 trækkes nøjagtigt 5 μ af referenceopløsningen og testopløsningen, og injicer dem i højtydende væskekromatografi, mål og optag kromatogrammet som vist i figur 1. De kromatografiske toppe af testprøven viste samme retentionstid som referencestoffets kromatografiske toppe, opløsningen var god, og de kromatografiske betingelser var gennemførlige.

Note: A. Kontrolstof; B.Cistanchenr. 49 prøve; 1. betaime ; 2. fnuckese ; 3. mannibol ; 4. glukose; 5. sucreve

Fig. 1 HPLC-profiler af referencestoffet og prøven af ​​Cistanche nr. 49

2.6 Undersøgelse af lineære sammenhænge

Tag passende mængder betain, mannitol, fructose, glucose og saccharose som referencestoffer, afvej dem nøjagtigt, og tilsæt vand for at få hver 1 mL indeholdende betain 0.496 0 mg, mannitol {{3} }.994 0 mg, frugt 1.0126 mg, glucose 1.0882 mg og saccharose 0.9922 mg. 0.0992, 0.2480, 0.4960, 0,9920, 1,9840, 2,9760 μ, mannitol 0,1988, 0,4970 , 0,9940, 1,9880, 3,9760, 5,9640 μ, fructose 0,5063, 1.012 6. 2.025 2. 4.050 4. 5.063 0. Kromatografiske betingelser blev injiceret og detekteret, og toparealet blev registreret; derefter blev logaritmeværdien X (ug) af hver referencestofinjektionsmængde anvendt som abscissen, og logaritmeværdien Y for toparealet var ordinaten, og standardkurven blev tegnet. Resultaterne er vist i tabel 1.

Tabel 1 Resultaterne af den lineære sammenhængsundersøgelse

2.7 Præcisionstest

Tegn testopløsningen (prøve nr. 49) nøjagtigt under ovenstående kromatografiske betingelser, injicer kontinuerligt 6 gange, mål toparealet af hver kromatografisk top, og beregn dens RSD-værdi. Resultater RSD'erne for topområderne for betain, mannitol, fructose, glucose og saccharose var henholdsvis 0,84 procent, 2,56 procent, 1,27 procent, 2,62 procent og 1,52 procent, hvilket indikerer, at præcisionen af ​​det instrument, der blev brugt i denne undersøgelse var god. 2.8 Repeterbarhedstest

Tag 6 prøver afCistanchedeserticola(prøve nr. 49), tilbered testopløsningen efter metoden under punkt 2.3, mål toparealet af hver kromatografisk top, og beregn det tilsvarende indhold. Resultater Det gennemsnitlige indhold af betain, mannitol, fructose, glucose og saccharose (n=6) var 7,93 procent , 7,27 procent , 8,74 procent , 2,75 procent og 4,81 procent , og RSD'erne var 2,83 procent , 1,94 procent . 18}},97 procent og 2,60 hhv. procent , 1,40 procent , hvilket indikerer, at metoden har god repeterbarhed. 2.9 Stabilitetstest

Tag testopløsningen (prøve nr. 49), injicer den ved 0, 4, 8, 12, 16 og 24 timer efter klargøring til måling, og beregn RSD-værdien for hver kromatografisk top. Resultater RSD'erne for betain, mannitol, fructose, glucose og saccharose var henholdsvis 0,61 procent, 1,92 procent, 1,34 procent, 2,83 procent og 0,69 procent, hvilket indikerer, at testopløsningen havde god stabilitet inden for 24 timer. 2.10 Restitutionstest

Tag 6 prøver afCistanchedeserticolamed kendt indhold (prøve nr. 49), vej nøjagtigt 0.25g, kom dem i en 50mL brun målekolbe, og træk nøjagtigt 25mL af den blandede referenceopløsning i en koncentration på 1: 1 (som indeholder {{10}}.7900 mg betain). mL-, fructose 0,7236 mg"mL-1, mannitol 0,8812 mg·mL-1, glucose 0,2708 mg·mL-1, saccharose 0,4883 mg'mL-') blev tilsat til prøven, og testopløsningen blev fremstillet i overensstemmelse med metoden under 2.3. Detekteret ifølge de ovennævnte kromatografiske betingelser, beregnet dens genvinding, resultaterne er vist i tabel 2, hvilket indikerer, at metoden har god nøjagtighed.

Tabel 2: Måleresultater af prøvegenvindingshastigheden for 5 komponenter, der skal testes (n=6)

3 Diskussion

3.1 Valg af indekskomponenter

Det samlede antal oligosaccharider afCistancheer de effektive dele afCistanchetil afføringsmidler. Forfatteren analyserede den kemiske sammensætning af denne del ved LC-MS og referencestoffet og fastslog, at denne del hovedsageligt er sammensat af betain, mannitol, fructose, glucose og saccharose. Derfor blev Disse 5 komponenter udvalgt som indekskomponenter forCistanchedeserticola, og indholdsbestemmelsesmetoden blev etableret.

3.2 Valg af kromatografiske søjler

De fem komponenter, der skal testes, betain, mannitol, fructose, glucose og saccharose, er relativt polære og kan ikke tilbageholdes i den omvendte fase Cn-søjle. Generelt vises toppe inden for 1-2 minutter, og komponenterne kan ikke adskilles. Aminosøjler Waters Bonoapar NH, (300 mm × 4,6 mm, 10 μm) og Phenomenex Bondclone 10 NH, (300 mm × 3,9 mm, 10 μm) til adskillelse af sukker og polyol, og polymerbaserede aminosøjler Prevail Carbohydrat ES (250 mm) ×4,6 mm, 5 μm), ShodexAshaipak NH2P-50 4E (250 mm×4,6 mm, 5 μm). Resultaterne viser, at polymermatrix-aminosøjlen effektivt kan adskille disse fem komponenter.

3.3 Detektorvalg

De fem komponenter, der skal testes, har ingen tydelig UV-absorption, og indholdet af UV-detektoren kan ikke direkte bestemmes. Derfor etablerede dette papir en kvantitativ analysemetode for sukkeralkoholkomponenterne iCistanchedeserticolaved hjælp af HPLC-EISD. Resultaterne viser, at metoden har høj følsomhed, god repeterbarhed og høj nøjagtighed og kan bruges til kvalitetskontrol afCistanchedeserticolaog andre medicinske materialer, der indeholder betain og sukkeralkoholer.

3.4 Undersøgelse af præparationsmetoden for testopløsningen

Forskellige ekstraktionsopløsningsmidler inklusive vand, 30 procent methanol, 50 procent methanol, 70 procent methanol, methanol osv. blev sammenlignet hhv. Resultaterne viste, at bortset fra den lidt lavere ekstraktionshastighed på 70 procent methanol og methanolopløsningsmiddel, var der ingen signifikant forskel på andre opløsningsmidler, så det direkte udvalg blev foretaget. 50 procent methanol blev anvendt som opløsningsmiddel under punktet "Bestemmelse af indhold" afCistanchei Folkerepublikken Kinas farmakopé, og det blev fremstillet i overensstemmelse med fremstillingsmetoden for den relevante testopløsning og derefter fortyndet 5 gange for at bestemme sukkeralkoholkomponenterne.

3.5 Påvisning og analyse af prøver med forskellige baser

I denne undersøgelse er indholdet af 5 komponenter i 58 batches afCistanchedeserticolaog 10 partier afCistanchedeserticolamedicinske materialer blev bestemt. Massefraktionerne af betain, mannitol, fructose, glucose og saccharose i 58 batches afCistanchedeserticolaprøverne var 2,73 procent -17.65 procent , 2.46 procent -16.34 procent , 2.52 procent {{10}}.74 procent , 0.97 procent -14.06 procent , 3,15 procent -27,16 procent ; Mannitol, fructose og glucose var 1.00 procent -13.04 procent , 2.98 procent -8.85 procent , 1.09 procent -5.33 procent i de 10 batches afCistancheprøver, henholdsvis betain og saccharose blev ikke påvist. Indholdet af medicinske materialer er meget forskelligt mellem batch, og der er ingen regel at følge, hvilket tyder på, at det er nødvendigt at etablere standarden for indholdsbestemmelse for at kontrollere kvaliteten af ​​medicinske materialer. Derudover kan denne metode effektivt skelne mellem to slagsCistanchebasisplanter, nemligCistancheindeholder ikke betain og saccharose, mens indholdet af disse to komponenter er højere iCistanche deserticola. Dette giver også grundlag for at analysere forskellene i tekstur og levested for de to medicinske materialer afCistanche deserticola. Sammenlignet med det medicinske materiale afCistanche deserticola, teksturen er blødere, og den er lokalt kendt som "Soft Dayun", mensCistanchekaldes "Chai Dayun", fordi den indeholder saccharose (3,15 procent ~27,16 procent). ).Cistanche deserticolaer hovedsageligt distribueret i Alxa i Indre Mongoliet, mensCistancheer hovedsageligt distribueret i Hotan-området i Xinjiang, hvor temperaturen er højere end i Alxa-området, og drypvanding bruges ofte i lokalområdet, men når temperaturen falder,Cistanchevil lide alvorlig skade. Fryseskader har på den ene side et vist forhold til sit høje vandindhold, og på den anden side har det noget at gøre med de ingredienser, den indeholder. Betain 243 er et vigtigt osmotisk justeringsstof, som spiller en vigtig rolle i at øge planters stressresistens, såsom modstandsdygtighed over for saltholdighed, tørke, lav temperatur og stærkt lys. Det er netop på grund af det høje indhold af betain indeholdt iCistanche deserticolaat den har bedre modstandsdygtighed over for salt-alkali, tørke og frostskader endCistanche, og har en forholdsvis bred udbredelse.

3.6 Analyse afCistanchedeserticolaprøver fra forskellig oprindelse

Blandt de 58 partier af ørkencistanchelægemiddelprøver, 45 batcher blev produceret fra Alxa League, Indre Mongoliet, 3 batcher var fra Wangyedi (Dengkou County), Indre Mongoliet, og 1 batch var ukendt. Alle 49 batcher af medicinske materialer havde forskelligt indhold af 5 komponenter. Der er dog ingen væsentlig forskel. Årsagen til analysen kan være, at de medicinske materialer alle er produceret i det samme ørkenområde, økologien og det geografiske miljø er ens, og produktkvaliteten er forholdsvis ensartet og stabil. Der er 3 batcher produceret i Minqin County, Gansu, og 6 batches fra Xinjiang. Ifølge analysen i figur 2, sammenlignet med de medicinske materialer produceret i Indre Mongoliet, afspejles hovedforskellen i indholdet af fructose og saccharose. Saccharoseindholdet i de medicinske materialer var relativt højest, men i betragtning af den lave mængde prøver fra de to oprindelser, skal denne konklusion verificeres ved at indsamle flere prøver. 3.7 Sammenfatning

I denne undersøgelse blev HPLC Wang ISD etableret til samtidig bestemmelse af 5 aktive ingredienser af afføringsmidler, hvilket gav en mere bekvem, effektiv og nøjagtig metode til kvalitetskontrol afCistanche deserticola, og gav grundlag for at forbedre kvalitetsstandarden og videreudvikleCistanchedeserticola. meningsfuld reference.

Referencer

【1】 State Pharmacopoeia Commission. Farmakopé for Folkerepublikken Kina: A 【M】. Beijing: China Pharmaceutical Science and Technology Press, 2015;135.

【2】 Song Zhihong, Lei Li, Tu Pengfei. Forskningsfremskridt om den farmakologiske aktivitet afCistancheUdstilling. Chinese Herbal Medicine, 2003, 34(9); 113415.

【3】 Xue Haiyan. Jiao Danyuan, Yao Jun. Forskningsstatus for de farmakologiske virkninger af totale glucosider i Cilantro [J]. Chinese Journal of Clinical Pharmacology, 2018, 34(4): 486-488.

【4】 An Chunna, Zhang Hongning, Pu Xiaoping. Forskningsfremskridt inden for neurofarmakologi afCistanche deserticolaUdstilling [J]. Chinese Journal of Pharmacy, 2011, 46(12): 887-890.

【5】 Gao Yuhong, Ke Zunji. Forskningsfremskridt om de farmakologiske virkninger afCistanche deserticolai behandlingen af ​​Alzheimers sygdom []. Shanghai Journal of Traditional Chinese Medicine, 2018, 52(1): 109-112.

【6】 Zhang Baishun, Zhao Xuewen, Chen Shuanghou, et al. Afførende virkning af isolerede dele afCistanche deserticolaEksperimentel forskning □. China Journal of Traditional Chinese Medicine, 2003, 10(1I1): 31-32.

【7】 Zhang Baishun, Chen Shuanghou, Zhao Xuewen, et al.Cistanche deserticolaekstrakt galactitol En dosis-respons undersøgelse af virkningen af ​​afføring [J]. China Journal of Traditional Chinese Medicine, 2003, 10 (12): 28-29.

【8】 Gao Yunjia, Jiang Yong, Dai Fang, et al. Forskning i de medicinske stoffer afCistanche deserticolafor afføringsmidler Forskning [J]. Modern Chinese Medicine in China, 2015, 17(4): 307-311.

【9】 Bao Zhong, Cai Hong, Jiang Yong, et al. Tre aktiviteter afCistanche deserticolaunder forskellige påvirkningsfaktorer Kvantitativ analyse af komponenter J. Chinese Herbal Medicine, 2013, 44 (22): 32233230.

【10】 Bao Zhong, Cai Hong, Jiang Yong, et al. Bestemmelse afCistanche deserticolaaf HPLCEISD Content of Galactitol.Journal of Pharmaceutical Analysis, 2007, 27(7): 1004-1006.

【11】 Zhao Kuijun, Liang Lijuan, Bi Dan, et al. HPLCELSD bestemmelse afCistancheog rør Indhold af galactitol iCistanche[J]. China Journal of Traditional Chinese Medicine, 2012, 19(8): 52-54.

【12】 Wang Guiping, Xue Xiaomin, Lu Chao, et al. Effekten af ​​betain på at forbedre plantestressresistens og dets virkningsmekanisme.Jiangxi Agricultural Journal, 2014, 26(8): 2226.

【13】 Wang Qingjie, Wang Li. En gennemgang af forskning i planters kulderesistensgener. Landdistrikternes økonomi og teknologi, 2018, 29(8): 23-25.