Determinanter for malariabeskyttende immunitet hos mus immuniseret med levende sporozoitter under trimethoprim-sulfamethoxazolprofylakse

Abstrakt.

Hiv og malaria overlapper hinanden geografisk. Trimethoprim-sulfamethoxazol (TMP-SMX) er et lægemiddel, der i vid udstrækning anvendes til HIV-eksponerede uinficerede og inficerede børn i malaria-endemiske områder og er kendt for at have antimalariavirkninger. Yderligere undersøgelse med hensyn til antimalariapåvirkning og effekt på udviklingen af ​​malariaspecifik immunitet er derfor afgørende. Ved hjælp af gnavermalariamodeller har vi tidligere vist, at gentagen Plasmodium-eksponering under TMP-SMX-administration eller kemoprofylaksevaccination (CVac), inducerer CD8 T-celleafhængig præ-erythrocytisk immunitet.

Imidlertid er humorale immunresponser vigtige i modeller for præ-erythrocytisk immunitet. Heri demonstrerer vi, at antistofmedierede responser bidrager til beskyttende immunitet induceret af CVac-immunsera ved anvendelse af TMPSMX i modeller af homologe, men ikke heterologe, parasitarter. Kliniske undersøgelser skal tage højde for potentielle anti-Plasmodium-antistoffer induceret under TMP-SMX-profylakse.

Det humorale immunrespons er tæt forbundet med menneskelig immunitet. Den humorale immunmekanisme bruger hovedsageligt antistoffer i kropsvæsker til at forsvare sig mod infektioner, herunder ekstracellulære patogener såsom bakterier, vira og svampe. Det menneskelige immunsystem omfatter to mekanismer af humoral immunitet og cellulær immunitet, som kan genkende og eliminere fremmede invaderende patogener. Selvom humoral immunitet og cellulær immunitet er forskellige, udgør de tilsammen det komplette menneskelige immunsystem. Kun under påvirkning af et komplet menneskeligt immunsystem kan vores krop bedre reagere på invasionen af ​​forskellige patogener. Fra dette synspunkt skal vi være opmærksomme på vores immunitet. I vores forskning fandt vi ud af, at der er en plante Cistanche deserticola, der kan forbedre immuniteten. Stressevne, forstærker den bakteriedræbende virkning af immunceller.

Klik cistanche deserticola supplement

INTRODUKTION

HIV og malaria er meget udbredt sammen i mange regioner verden over, og mange HIV-eksponerede eller inficerede børn lever i malaria-endemiske områder. Trimethoprim-sulfamethoxazol (TMPSMX) er et lægemiddel, der i vid udstrækning anvendes til at reducere forekomsten af ​​opportunistiske infektioner hos HIV-eksponerede og inficerede børn, og sideløbende hermed har dette lægemiddel en antimalariavirkning som et antifolat.1

På trods af dens udbredte anvendelse og antimalariavirkninger kræver dens indvirkning på malariainfektion og udviklingen af ​​malariaspecifik immunitet i sammenhæng med udbredt antifolatresistens og hos HIV-eksponerede uinficerede og inficerede børn yderligere undersøgelser. Faktisk er kliniske undersøgelser først for nylig begyndt at se på virkningen af ​​TMP-SMX profylakse varighed på malaria som en afspejling af immunitet.2,3.

Malariainfektion med Plasmodium hos pattedyrsværten begynder med, at hunanophelin-myg inokulerer sporozoitter (SPZ'er) under et blodmåltid. Sporozoitter rejser derefter til leveren og inficerer hepatocytter, hvor de udvikler sig til leverstadie eller exoerythrocytiske former (EEF'er). Eksoerythrocytiske former producerer titusindvis af merozoitter, der derefter invaderer erytrocytter for at starte blodstadiet.

Naturlig erhvervet immunitet mod malaria udvikles kun efter gentagne malariaepisoder og forhindrer ikke geninfektion. Imidlertid kan steriliserende anti-infektionsimmunitet induceres med svækkede SPZ'er, der standser under udviklingen i leverstadiet.4 Anti-infektionsimmunitet observeres også hos mus og mennesker, der er blevet inficeret med SPZ'er og samtidig givet lægemidler, der dræber lever- eller blod- stadieparasitter,5,6, og denne proces kaldes kemoprofylaksevaccination (CVac). Tilsammen indikerer disse data, at eksponering for præ-erythrocytiske parasitter kan inducere yderst effektiv beskyttende immunitet.

Faktisk har vi hos mus vist, at TMP-SMX ved profylaktiske doser kan standse udviklingen af ​​Plasmodium i leverstadiet, og at disse regimer under gentagen malariaeksponering, kaldet CVac/TMP-SMX, inducerer beskyttende immunitet rettet mod parasitter i præ-erythrocytisk stadium. 7 Sådan immunitet kræver CD8 T-celler, hvorimod bidraget fra antistoffer forbliver ufuldstændigt undersøgt.7 Heri satte vi os for at bestemme bidraget fra antistoffer til CVac/TMP-SMX-induceret beskyttende immunitet ved hjælp af serum fra mus i vores etablerede model af CVac med Plasmodium yoelii-inficerede mus, der modtager TMP-SMX på niveauer, der tilnærmer sig, hvad der opnås hos børn på standard TMP-SMX profylakse dosering.7,8.

METODER

Mus.

BALB/c-hunmus, i alderen 4-6 uger og vejede 20-25 g (Taconic eller NIH), blev brugt i forsøg med godkendelse fra NIAID/NIH Institutional Animal Care and Use Committee. Mus var alders- og kønsmatchede for alle eksperimenter.

Parasitter og myg.

Anopheles stephensi myg blev fodret med mus inficeret med P. yoelii (17XNL) eller Plasmodium berghei (ANKA), og SPZ'er blev høstet fra spytkirtler på dag 14-18 (P. yoelii) eller dag 21-26 (P. berghei) efter myggedissektion. Alle eksperimenter blev udført med P. yoelii 17XNL og P. berghei ANKA, undtagen immunfluorescensassays (IFA), hvor transgene parasitlinjer udtrykker grønt fluorescerende protein (GFP) (P. yoelii GFP [17XNL] og P. berghei GFP [ANKA]) blev brugt.9,10 Alle myg var blevet fodret med inficerede mus, og parasitter havde ikke gennemgået serielle blodpassager, da dette har vist sig at modulere infektionsvirulens.11.

Trimethoprim-sulfamethoxazol-regimen, SPZ-podning og vurdering af effektivitet.

Trimethoprim-sulfamethoxazol blev brugt i sin kommercielt tilgængelige generiske suspensionsform og i et regime, der hæmmer udviklingen af ​​parasitter i leverstadiet in vitro og forhindrer åbenbar parasitæmi hos mus under CVac/TMP-SMX-immunisering. 7 Vores model af CVac, beskrevet i den følgende tekst, er blevet grundigt undersøgt immunologisk og farmakokinetisk med P. yoelii og det anvendte immuniseringsregime. nogle stammer af P. berghei besidder antifolatresistens.1.

Kort fortalt blev mus injiceret tre gange med 10,000 P. yoelii 17XNL SPZ'er med 14- til 21-dages intervaller. Startende samme dag som SPZ-podning fik immuniserede dyr og kontroldyr 60 μL TMP-SMX ved oral gavage 18, 24 og 36 timer efter SPZ-podning. Under immuniseringsregimet blev fraværet af parasitæmi hos immuniserede mus bekræftet ved undersøgelse af Giemsa-farvede tynde blodudstrygninger fra haleblodet hver anden dag (op til dag 15). Mus, der modtog CVac/TMP-SMX, blev hvilet i minimum 4-6 uger efter den sidste SPZ og lægemiddeladministration før serumindsamling.7 Immunsera opnået fra P. yoelii CVac/TMP-SMX-immuniserede mus vil heri blive henvist til som CVac-sera. Kontrolsera blev indsamlet fra malaria-naive mus, som ikke modtog anden intervention ("naive") eller kun modtog lægemiddel, men ingen SPZ-podninger ("lægemiddelkontrol [DC]"). Separat modtog malaria-naive infektivitetskontrolmus SPZ'er (kun i fosfatbufret saltvand [PBS]) under hver undersøgelse for at bekræfte parasitternes infektivitet.

In vitro og in vivo SPZ-neutraliseringsassays med CVac-sera.

In vitro blev sporozoit-neutralisationsassays (SNA'er), som anvender et serum til at vurdere effekten af ​​serumantistofferne på parasitternes infektivitet, udført som tidligere beskrevet.12 Kort sagt, 20, 000 P. berghei eller P. yoelii SPZ'er blev præinkuberet på is (P. berghei) eller ved stuetemperatur (P. yoelii) i 40-45 minutter i sera poolet fra grupper på 5-10 CVac/TMP-SMX-immuniserede mus7 eller fra DC eller naive mus. Sporozoitter blev derefter tilsat til konfluente HepG2:CD81-celler (en gave fra Dr. Eric Rubinstein, Inserm U935, Villejuif, Frankrig). Sporozoitter fremstillet i 10-15 μL dissektionsmedium med 6 μL sera blev derefter inkuberet i et samlet volumen på 30 μL (1:5 fortynding) i hver brønd i et 8-brøndkammerglas (Lab-Tek, Thermofisher Scientific, Waltham, MA)) med dyrkede celler og blev derefter inkuberet ved 37°C i 60-72 timer med skift af dyrkningsmedier (Dulbecco's Modified Eagle Medium [DMEM] plus 10 procent føtalt bovint serum [FBS] plus 100 U/mL penicillin -streptomycin) hver 24 timer. Assays blev kørt i firdobbelte brønde pr. betingelse.

Efter 60-72 timer blev celler trypsiniseret (trypsin-ethylendiamintetraeddikesyre [EDTA]) og vasket to gange med RNAse-fri PBS, og total RNA blev ekstraheret, og parasitbyrden blev estimeret ved qPCR. Det totale RNA blev isoleret under anvendelse af TRI-reagens (Molecular Research Center, Cincinnati, OH) i henhold til producentens instruktioner. Omvendt transkription blev udført under anvendelse af 1 ug total RNA og tilfældige hexamerer. Real-time PCR blev udført ved hjælp af primere, der genkender P. yoelii- eller P. berghei-specifikke sekvenser i 18S rRNA'et, og det amplificerede produkt blev kvantificeret ved hjælp af QuantiTect SYBR Green PCR Kit (Qiagen, Hilden, Tyskland).13 Fortyndinger af { {7}} fold af en plasmidkonstruktion indeholdende P. yoelii og P. berghei 18S rRNA-genet blev brugt til at skabe en standardkurve. Til PCR blev eksperimenter kørt i tre eksemplarer, og tre til fire uafhængige eksperimenter blev kørt.

Til in vivo eksperimenter blev SNA'er udført med inkubationstrinene som tidligere, bortset fra at 40,000 SPZ'er i et 100-μL volumen PBS blev præinkuberet i testsera ved en endelig fortynding på 1:5 i 45 minutter ved stuetemperatur.14 Dette blev derefter fortyndet yderligere i PBS for at opnå en slutkoncentration på 40,000 SPZs/ml. Naive mus blev udfordret med 100 μL af denne opløsning, svarende til 4,000 SPZ'er.14 Blodstadiets åbenhed blev overvåget i op til 15 dage efter udfordring. To eksperimenter med 5-10 mus pr. tilstand blev kørt for hver parasitart.

Immunfluorescens af SPZ'er og EEF'er.

Immunfluorescensassays blev udført på spytkirtel-SPZ'er som beskrevet andetsteds.15 Transgene parasitlinjer, der udtrykker GFP (P. yoelii GFP [17XNL] og P. berghei GFP [ANKA]) blev brugt til IFA-eksperimenter. Kort fortalt blev 5 × 104 SPZ'er i 200 μL opnået fra myggespytkirtler i dissektionsmedier præinkuberet i 45 minutter i et polylysin-coatet otte-brønds kammerglas (Lab-Tek) coatet med konfluent HepG2:CD81 celler. Sporozoitter blev derefter fikseret med PBS-4 procent PFA i 10 minutter ved stuetemperatur. Disse SPZ'er blev derefter brugt til immunfarvning med eller uden permeabilisering med 0,1 procent Triton X100 i PBS i 5 minutter ved stuetemperatur for SPZ'er, vasket to gange med PBS og derefter blokeret med PBS 3 procent bovint serumalbumin (BSA) i 30 minutter i værelset temperatur.

Disse SPZ'er blev derefter inkuberet med sera (1:400 i PBS-3 procent BSA) natten over ved 8 C. Efter vask fire gange med PBS blev SPZ'er derefter inkuberet i RT med AlexaFluor 594-konjugeret anti-mus IgG (Thermofisher Scientific) i 2 timer ved en fortynding på 1:1,000 i PBS3 procent BSA. Objektglassene blev derefter vasket tre gange med PBS for at fjerne ubundne antistoffer og til sidst med PBS med DAPI (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) 300 nM. Fluorescerende billeder blev optaget med et konfokalt mikroskop (Leica SP5, Buffalo Grove, IL).

Immunfluorescensbillederne af EEF'er blev erhvervet, som tidligere rapporteret.14 Kort sagt, 50,000 P. yoelii/P. berghei GFP SPZ'er/brønd blev tilsat til konfluente HepG2:CD81/HepG2-celler i kammerglas med otte brønde (Lab-Tek). Efter centrifugering i 5 minutter ved 310 g ved 20°C blev objektglassene inkuberet ved 37°C med dyrkningsmedium som beskrevet tidligere og udskiftet to gange dagligt efter infektion. EEF'er under udvikling blev fikseret til 48 timer, blokeret med 3 procent BSA i PBS (med eller uden permeabilisering med 0,1 procent Triton X-100 i PBS i 10 minutter) og farvet med musesera som beskrevet tidligere for SPZ IFA. Exoerythrocytiske former blev mærket med kyllinge-anti-EXP1-antistoffer for at identificere inficerede hepatocytter. Billeder blev erhvervet ved hjælp af et konfokalt mikroskop (Leica SP5).

Statistisk analyse.

Mann-Whitney-tests blev udført på kombinerede eksperimenter til in vitro-assays. Overlevelseskurver blev genereret, og log-rank (Mantel-Cox) testen blev brugt til at sammenligne grupper. Data blev normaliseret til naive kontroller på tværs af eksperimenter og sammenlignet med DC for alle statistiske analyser. Statistiske analyser blev udført ved hjælp af GraphPad Prism-software (version 7, San Diego, CA).

RESULTATER

Kemoprofylaksevaccination/Trimethoprim-sulfamethoxazol sera præinkubation med P. yoelii SPZ'er, men ikke P. berghei SPZ'er, reducerer parasitbyrden i leverstadiet in vitro.

I SNA'er inkuberede og overlejrede P. yoeliiSPZ'er på HepG2: CD81-celler med CVac-sera gav signifikant reduceret parasitbyrde i leverstadiet in vitro (figur 1A, P < 0.03). En lignende inkubation af P. berghei SPZ'er med CVac-sera formåede imidlertid ikke at reducere parasitbyrden i leverstadiet (data ikke vist).

Kemoprofylakse vaccinationssera præinkubation med P. yoelii men ikke P. berghei SPZ'er øger tiden til åbenhed in vivo.

Præinkubation af P. yoelii SPZ'er med CVac sera resulterede i en signifikant forsinkelse i P. yoelii åbenhed (dag for påvisning af parasitter i blod) sammenlignet med DC sera præinkubation (figur 1B, P=0.03). Derimod var åbenheden af ​​heterologe P. berghei-parasitter ikke signifikant forsinket (data ikke vist). Præinkubation med sera fra naive eller DC-mus med nogen af ​​parasitarterne påvirkede ikke gennemsnitlige dage til patency sammenlignet med infektivitetskontroller (figur 1B for P. yoelii, data ikke vist for P. berghei).

Kemoprofylakse vaccinationssera reagerede med. yoelii SPZ'er og EEF'er, men kun EEF'er for P. berghei af IFA.

For at undersøge, om CVac-sera genkendte antigener fra homologe og heterologe arter, udførte vi derefter IFA-eksperimenter. Immunfluorescensassay antydede, at CVac-immunsera genkendte antigener fra både P. yoelii SPZ'er og EEF'er (figur 2A og B). Antistoffarvning af P. yoelii EEF'er (2B) så ud til at være skarpt begrænset inde i hepatocytten, hvorimod den for kontroller (naive eller DC) ikke gjorde det. Kemoprofylakse-vaccination/TMP-SMX-immunsera genkendte ikke P. berghei SPZ'er, men der var igen tegn på en vis genkendelse af EEF'er, dog med mere diffus farvning på tværs af EEF (figur 2C og D).

KONKLUSIONER/DISKUSSION

Lægemiddelbaseret svækkelse af malariaparasitter og deraf følgende beskyttende immunitet er blevet påvist hos dyr og mennesker, men mekanismerne forbliver uklare. Ved at bruge P. yoelii CVac/TMP-SMX-modellen viser vi, at museimmunsera har delvis SPZ-neutraliseringsaktivitet.

Selvom CVac-sera ikke gav steriliserende immunitet, reducerede det delvist udviklingen af ​​homologe EEF'er in vitro og in vivo. CVac-sera kunne imidlertid ikke bibringe beskyttende aktivitet mod heterologe arter infektion in vitro eller in vivo. Disse data kunne tyde på, at utilstrækkeligt antistof var til stede til at forhindre åbenhed.

Manglen på heterolog beskyttelse kan også skyldes signifikant interarts-heterogenitet mellem de antigener, som antistofreaktionerne var rettet mod.

I den bestrålede SPZ-immuniseringsmodel genkendte museimmunsera kun homologe SPZ'er og medierede ikke beskyttelse mod heterologe udfordringer.16 Vores IFA'er indikerer faktisk, at reaktogenicitet adskiller sig mellem arter med brug af CVac-serum, hvilket indikerer, at der var tilstrækkelig forskel mellem arter- specifikke proteiner i EEF'er og SPZ'er. Hvordan det udmønter sig i funktionelle immunresponser, kan imidlertid ikke direkte ekstrapoleres, især fordi IFA'erne blev fikset.

Tidligere arbejde, herunder vores eget, foreslår imidlertid også beskyttende heterologe responser i humane Plasmodium falciparum CVac-forsøg og hovedsageligt på grund af celle-ikke humorale medierede immunresponser.17 I tråd med dette, i både denne CVac/TMP-SMX-model og bestrålet SPZ-model, CD8 T-celler yder et vigtigt bidrag til steril immunitet.7 Interessant nok indikerer vores tidligere publikationer, der anvender denne CVac-model, at cellemedierede responser er på spil i beskyttelsen mod heterologe og homologe udfordringer, og at et antistofrespons ikke var tilstrækkeligt til at fremkalde en beskyttende reaktion.7

Det er bemærkelsesværdigt, at både vores CVac-model og bestrålede SPZ-model står i kontrast til andre modeller af CVac-systemer, hvor antimalaria-klorokin i blodstadiet anvendes. I så fald medierer antistoffet parasitneutralisering in vivo og beskyttelse mod heterologe udfordringer.18 Men for den sidstnævnte CVac-model spiller blodstadiemedieret beskyttelse sandsynligvis en større rolle, fordi immunitet på tværs af stadier observeres i denne model i modsætning til vores CVac/TMP-SMX-model.7,18 Samlet set er derfor det potentielle bidrag fra CD8 T- eller CD4 T-celle direkte lytisk aktivitet, eller CD4 T-celle-medieret hjælp, til antistofproduktion, som vist i gnavermodeller,19 kan ikke udelukkes og afhænger sandsynligvis af den anvendte model.

I felten giver TMP-SMX-profylakse beskyttelse mod malaria i varierende grad i områder med forskellige transmissionsintensiteter, selv hvor forekomsten af ​​antifolatresistensmutationer er høj.2,3 Bidraget fra den udviklende immunrespons til malariabeskyttelse er dog stadig uklar. . Dissekere af immunresponset hos mus, der modtager gentagen SPZ-podning, mens de er på TMP-SMX-profylakse, har sin værdi; sådanne dyremodelundersøgelser er bedre rustet til at identificere beskyttende responser.20 Imidlertid er kliniske undersøgelser afgørende for at bestemme virkningen og omfanget af TMP-SMX-effekten på udvikling af antimalariaimmunitet. Faktisk er fremtidige kliniske undersøgelser nødvendige for at forstå, hvorvidt og hvordan TMP-SMX-profylakse modificerer udviklingen af ​​et antimalaria-immunrespons i malaria-endemiske områder.

Modtaget 26. juni 2020. Accepteret til offentliggørelse 9. oktober 2020.

Udgivet online 21. december 2020.

Finansiel støtte:

Denne undersøgelse blev finansieret af Intramural Research Program fra National Institute of Allergy and Infectious Diseases, National Institutes of Health. JL er en Wellcome Trust senior investigator (104777/Z/14/Z) og er støttet af Francis Crick Institute, som modtager sin kernefinansiering fra Wellcome Trust (FC001101), UK Medical Research Council (FC001101) og Cancer Research , Storbritannien (FC001101). Dette arbejde blev finansieret af NIH, NIAID, Division of Intramural Research.

Afsløring:

Undersøgelsen modtog støtte fra dyreteamet ved Laboratory of Malaria Immunology and Vaccinology (Yvette Robbins og Lynn Lambert), Insectary Management Team ved Laboratory of Malaria and Vector Research (Kevin Spinno og Andre Laughinghouse) og Animal Husbandry Unit ( Jade Basil, Christopher Brown, April Cory, Melissa Krefski, Andrew Popadich, Megan Snyder og Lisa Torzewsku, Marsha Loll) på NIH.

REFERENCER

1. Gregson A, Plough CV, 2005. Mekanismer for resistens af malariaparasitter over for antifolater. Pharmacol Rev 57: 117-145.

2. Church JA, Fitzgerald F, Walker AS, Gibb DM, Prendergast AJ, 2015. Co-trimoxazols ekspanderende rolle i udviklingslande. Lancet Infect Dis 15: 327-339.

3. Homsy J, Dorsey G, Arinaitwe E, Wanzira H, Kakuru A, Bigira V, Muhindo M, Kamya MR, Sandison TG, Tappero JW, 2014. Beskyttende effekt af forlænget co-trimoxazol-profylakse hos HIV-eksponerede børn op til alderen 4 år til forebyggelse af malaria i Uganda: et randomiseret kontrolleret åbent forsøg. Lancet Glob Health 2: e727–e736.

4. Nussenzweig RS, Vanderberg JP, Most H, Orton C, 1969. Specificitet af beskyttende immunitet produceret af x-bestrålede Plasmodium berghei sporozoiter. Nature 222: 488–489.

5. Putrianti ED, Silvie O, Kordes M, Borrmann S, Matuschewski K, 2009. Vaccinelignende immunitet mod malaria ved gentagen kausal-profylaktisk behandling af Plasmodium-parasitter i leverstadiet. J Infect Dis 199: 899-903.

6. Roestenberg M et al., 2009. Beskyttelse mod malariaudfordring ved sporozoitpodning. N Engl J Med 361: 468–477.

7. Hobbs CV, Anderson C, Neal J, Sahu T, Conteh S, Voza T, Langhorne J, Borkowsky W, Duffy PE, 2017. Trimethoprim-sulfamethoxazolprofylakse under levende malariasporozoitimmunisering inducerer langlivede, homologe og heterologe beskyttende immunitet mod sporozoit-udfordring. J Infect Dis 215: 122-130.

8. Hobbs CV et al., 2012. HIV nonnucleosid reverserer transkriptasehæmmere og trimethoprim-sulfamethoxazol hæmmer plasmodium leverstadier. J Infect Dis 206: 1706-1714.

9. Ono T, Tadakuma T, Rodriguez A, 2007. Plasmodium yoelii yoelii 17XNL udtrykker konstitutivt GFP gennem hele livscyklussen. Exp Parasitol 115: 310-313.

10. Voza T et al., 2005. Artsspecifik hæmning af cerebral malaria hos mus co-inficeret med Plasmodium spp. Infect Immun 73: 4777-4786.

11. Spence PJ, Brugat T, Langhorne J, 2015. Myg nulstiller malariaparasitter. PLoS Pathog 11: e1004987.

12. Kumar KA, Oliveira GA, Edelman R, Nardin E, Nussenzweig V, 2004. Kvantitativ Plasmodium sporozoite neutralisation assay (TSNA). J Immunol Methods 292: 157-164.

13. Pichugin A, Krzych U, 2015. Påvisning af Plasmodium berghei og Plasmodium yoelii parasitbyrde i leverstadiet ved kvantitativ realtids-PCR. Metoder Mol Biol 1325: 81-89.

14. Belnoue E, Costa FT, Frankenberg T, Vig'ario AM, Voza T, Leroy N, Rodrigues MM, Landau I, Snounou G, R'enia L, 2004. Beskyttende T-celle-immunitet mod malaria-leverstadiet efter vaccination med levende sporozoitter under chloroquinbehandling. J Immunol 172: 2487-2495.

15. Giovannini D et al., 2011. Uafhængige roller af apikale membranantigen 1 og rhoptry-halsproteiner under værtscelleinvasion af apicomplexan. Cell Host Microbe 10: 591-602.

16. Sedegah M, Weiss WW, Hoffman SL, 2007. Krydsbeskyttelse mellem svækkede Plasmodium berghei og P. yoelii sporozoiter. Parasit Immunol 29: 559-565.

17. Lyke KE et al., 2017. Svækket PfSPZ-vaccine inducerer stammeoverskridende T-celler og varig beskyttelse mod heterolog kontrolleret human malariainfektion. Proc Natl Acad Sci U SA 114: 2711-2716.

18. Belnoue E et al., 2008. Vaccination med levende Plasmodium yoelii blodstadieparasitter under klorokindækning inducerer immunitet på tværs af stadier mod malarialeverstadiet. J Immunol 181: 8552-8558.

19. Oliveira GA, Kumar KA, Calvo-Calle JM, Othoro C, Altszuler D, Nussenzweig V, Nardin EH, 2008. Klasse II-begrænset beskyttende immunitet induceret af malariasporozoitter. Infect Immun 76: 1200-1206.

20. Wykes MN, Good MF, 2009. Hvad har vi lært af musemodeller til undersøgelse af malaria? Eur J Immunol 39: 2004-2007.

For more information:1950477648nn@gmail.com