Abstrakt

ObjektivFor at undersøge den urinsyresænkende effekt og sikkerhedsevaluering af echinacosid (Ech) udvundet fraCistanche tubulosa. MetoderI den akutte toksicitetstest blev KM-mus administreret oralt Ech ved den maksimale koncentration to gange dagligt til observation af akut toksicitet. En hyperurikæmi (HUA) rottemodel blev etableret under anvendelse af 1,5 g·kg⁻1 kaliumoxonat + 0.1 g·kg⁻1 adenin. HUA-modelrotter blev tilfældigt opdelt i en modelgruppe, en allopurinolgruppe (30 mg·kg⁻¹) og lav-, medium- og højdosis Ech-grupper (50, 75, 100 mg·kg⁻¹), med en normal kontrolgruppe (n=10 pr. gruppe). Lægemidler blev indgivet intragastrisk én gang dagligt i 28 på hinanden følgende dage. Efter administration blev rotter aflivet, og serum blev opsamlet for at påvise relevante biokemiske indikatorer og xanthinoxidase (XOD) niveauer; renale histopatologiske ændringer blev observeret. Organer blev vejet for at beregne organkoefficienter; ekspressionsniveauerne af relaterede gener og proteiner i nyrevæv blev påvist.ResultaterIngen tydelige toksiske reaktioner blev observeret i den akutte toksicitetstesten. Ech reducerede signifikant serumurinsyreniveauer, markant forbedret nyrefunktion og renale tubulære/interstitielle læsioner hos HUA-modelrotter og regulerede signifikant transkriptions- og proteinekspressionsniveauerne af urattransportør-relaterede gener i nyrevæv.KonklusionDen urinsyresænkende effekt af Ech i HUA-modelrotter kan være relateret til reduktion af in vivo urinsyreproduktion, regulering af nyrefunktionen og modulering af ekspressionen af ​​urattransportører med gunstig sikkerhed.Nøgleord: Cistanche tubulosa; Echinacoside; hyperurikæmi; Urinsyre; Gentransskription; Proteinekspression; Virkningsmekanisme; Sikkerhedsvurdering

 

 

 

Cistanche tubulosa(Schenk) R. Wight er en almindeligt anvendt nyre-tonificerende urt i traditionel kinesisk medicin (TCM). Som optaget iKinesisk farmakopé, det genopbygger nyre-yang, genopbygger essens og blod og bruges klinisk til impotens og infertilitet, mangel på essens og blod og ømhed i talje og knæ. Phenylethanoid glycosider er de mest udbredte og biologisk aktive komponenter iCistanche tubulosa, der viser et stort potentiale for udvikling og anvendelse. Vores forskerhold fandt tidligere via netværksfarmakologi og foreløbige museforsøg, at echinacoside (Ech) fraCistanche tubulosaekstrakt kan have en urinsyresænkende virkning, mens dets mekanisme og sikkerhed sjældent rapporteres. Denne undersøgelse tager patogenesen af ​​hyperurikæmi som indgangspunktet for at undersøge den farmakologiske urinsyresænkende effekt af Ech, med det formål at klarlægge dens mekanisme og evaluere dens sikkerhed.

1 Materialer og metoder

1.1 Instrumenter, reagenser og dyr

7100 Automatic Biochemical Analyzer (Hitachi, Japan); Multiskan GO 1510 mikropladelæser (Thermo, USA); BG-Power600i elektroforesesystem (Beijing Baijing Biotechnology Co., Ltd.); 7500 Fast Real-Time Fluorescent Quantitative PCR System (Applied Biosystems, USA).

Cistanche tubulosa extract (Ech, self-prepared, chromatographic purity >98%); kaliumoxonat, adenin (Shanghai Aladdin Biochemical Technology Co., Ltd.); kreatinin (CREA), urinsyre (UA), urinstof (UREA), adenosindeaminase (ADA), alanintransaminase (ALT), aspartattransaminase (AST), alkalisk fosfatase (ALP) assaysæt (Shenzhen Mindray Bio-Medical Electronics Co., Ltd.); XOD aktivitet assay kit (Shanghai Macklin Biochemical Technology Co., Ltd.); antistoffer URAT1, GLUT9, OAT1, OAT3 (Jiangsu Qinke Biotechnology); gede-anti-kanin IgG/HRP-konjugat (Beijing Zhongshan Jinqiao Biotechnology Co., Ltd., parti: 245440113); DEPC (Amresco, USA); M5 HiClear DL2000 DNA-markør (Beijing Juhemai Biotechnology Co., Ltd.); TRIzol™-reagens (Thermo Fisher Scientific, USA); 5× All-In-One RT MasterMix, EvaGreen Express 2× qPCR MasterMix-Low ROX (Aibimeng Biotechnology Co., Ltd.).

Fyrre SPF-grade KM-mus (han og hun, 18-22 g) og 90 SPF-grad han SD-rotter (150-180 g) blev leveret af Experimental Animal Center ved Xinjiang Medical University (produktionslicens nr. SCXK Xin 2023-0001).

1.2 Metoder og resultater

1.2.1 Akut toksicitetstest

Dyreforsøg blev godkendt af den etiske komité for Xinjiang Institute of Drug Research (godkendelsesnr. IACUC-(Zhun)-2024-008, IACUC-(Zhun)-2024-009). Fyrre SPF-grade KM-mus blev tilfældigt opdelt i en kontrolgruppe og en behandlingsgruppe (n=20, han- og hunkøn) efter karantæne og akklimatisering. Mus blev fastet natten over med fri adgang til vand før administration. IfølgeRetningslinjer for enkeltdosis toksicitetstest af traditionelle kinesiske lægemidler og naturprodukterDen maksimale koncentrationsopløsning (250 mg·ml-1), der kunne passeres gennem en 12-gauge sondeernæringsnål, blev fremstillet. KM-mus fik oralt administreret 40 ml·kg⁻1 to gange dagligt med et 4-timers interval med en kumulativ dosis på 20 g·kg⁻1. Generelle tilstande, pelsfarve, aktivitet, gang, mental tilstand, afføring og urin blev nøje observeret for toksiske symptomer, begyndelsestid, varighed og restitution. Ingen skadelige toksiske reaktioner (f.eks. begrænset aktivitet, udmattelse, sløvhed, død) blev observeret i behandlingsgruppen. Pelsfarve, aktivitet, gang, mental tilstand, afføring og urin forblev normale i observationsperioden. Kropsvægt og fødeindtagelse viste ingen signifikante forskelle mellem behandlings- og kontrolgruppen. Grov obduktion ved slutningen af ​​observationen afslørede ingen abnormiteter i organvolumen, farve eller tekstur.

 

Figur 1 Effekter af ekko kropsvægt(AB) og fødeindtag(C,D) hos mus

 

1.2.2 Modeletablering, gruppering og administration

Tres SD-hanrotter (150-180 g) blev akklimatiseret og opdelt i en normal kontrolgruppe (n=10) og en modelleringsgruppe (n=50). Modelleringsgruppen fik intragastrisk administreret 100 mg·kg⁻1 adenin + 1.5 g·kg⁻1 kaliumoxonat (suspenderet i 0,5 % CMC-Na) ved 10 ml·kg⁻1 en gang dagligt i 14 dage; kontrolgruppen modtog 0,5 % CMC-Na. Efter modellering blev orbitalblod opsamlet for at påvise UREA, CREA og serumurinsyre (SUA). Modellen blev betragtet som vellykket, når UREA, CREA og SUA var signifikant forhøjet. Succesfulde HUA-modelrotter blev opdelt i en modelgruppe, allopurinolgruppe (30 mg·kg⁻¹) og lav-, medium- og højdosis Ech-grupper (50, 75, 100 mg·kg⁻¹) (n=10 pr. gruppe). For at opretholde stabil hyperurikæmi fik alle grupper undtagen kontrolgruppen intragastrisk administreret 100 mg·kg⁻1 adenin + 500 mg·kg⁻1 kaliumoxonat (0,5 % CMC-Na suspension) hver morgen og tilsvarende lægemidler hver eftermiddag i 14 dage. Modelleringsmidler blev derefter stoppet, mens lægemiddeladministration fortsatte i yderligere 14 dage.

1.2.3 Bestemmelse af SUA og urinsyre (UUA) hos rotter

Efter den sidste administration blev rotterne fastet natten over med fri adgang til vand. Urin blev opsamlet, centrifugeret (3x10³ r·min-1, 10 min), fortyndet 1:9 med saltvand og testet for UUA ved anvendelse af en biokemisk analysator. Blod blev opsamlet under bedøvelse, og serum blev separeret (3 x 10³ r·min⁻1, 10 min) til SUA-detektion. Sammenlignet med kontrolgruppen viste modelgruppen signifikant øget SUA (P<0.05) and decreased UUA (P<0.01). The allopurinol group and low-, medium-, and high-dose Ech groups had significantly reduced SUA (P<0.05); the allopurinol group and medium-/high-dose Ech groups had significantly increased UUA (P<0.05 or P<0.01).

 

Figur 2 Effekt af Ech på SUA(A) og UUA(B) i hyperurikæmi-modelrotter

 

1.2.4 Bestemmelse af serum ADA og XOD niveauer hos rotter

Serum ADA blev målt ved anvendelse af en biokemisk analysator; XOD-aktivitet blev detekteret ved enzym-linked immunosorbent assay (absorbans ved 290 nm). Sammenlignet med den normale gruppe havde modelgruppen signifikant forhøjet ADA og XOD (P<0.01). Compared with the model group, the allopurinol group and all Ech dose groups had significantly reduced ADA (P<0.01); the allopurinol group and high-dose Ech group had significantly reduced XOD (P<0.01).

1.2.5 Bestemmelse af serum UREA, CREA, ALT, AST, ALP niveauer

Sammenlignet med den normale gruppe havde modelgruppen signifikant forhøjet UREA og CREA (P<0.05 or P<0.01). Compared with the model group, the allopurinol group had significantly reduced UREA (P<0.01); all Ech dose groups had significantly reduced UREA and CREA (P<0.05 or P<0.01); medium-/high-dose Ech groups had significantly reduced ALT (P<0.01); low-dose Ech group had significantly increased ALP (P<0.01).

1.2.6 Bestemmelse af nyreorgankoefficient hos rotter

Organkoefficient=organmasse (mg)/kropsvægt (g). Sammenlignet med den normale gruppe havde modelgruppen signifikant nedsat fastende kropsvægt (P<0.01) and increased kidney and adrenal gland coefficients (P<0.05 or P<0.01). Compared with the model group, all Ech dose groups had significantly increased body weight (P<0.05); the allopurinol group and all Ech dose groups had significantly reduced kidney coefficients (P<0.01).

 

Tabel 1 Effekter af Ech på UREA-, CREA-, ALT-, AST- og ALP-niveauer hos hyperurikæmimodelrotter (xˉ±s, n=10)

 

Gruppe	Dosis / mg·kg⁻¹	UREA/mmol·L⁻¹	CREA / μmol·L⁻¹	ALT / U·L⁻¹	AST / U·L⁻¹	ALP / U·L⁻¹
Kontrollere	–	8.00 ± 0.71	34.11 ± 3.33	51.22 ± 3.80	109.11 ± 11.62	206.00 ± 42.20
Model	–	23.20 ± 6.05**	100.10 ± 43.59*	62.00 ± 9.64	109.10 ± 7.92	173.10 ± 27.30
Allopurinol	30	10.70 ± 1.95##	55.20 ± 13.27	52.70 ± 12.79	117.50 ± 21.71	198.40 ± 52.66
Ech	50	11.20 ± 3.33##	44.80 ± 21.01#	55.70 ± 12.59	106.10 ± 13.80	242.11 ± 55.04##
	75	9.90 ± 1.45##	41.20 ± 4.54#	46.50 ± 5.72##	102.10 ± 16.11	183.70 ± 22.31
	100	8.90 ± 1.10##	35.20 ± 2.74#	46.50 ± 5.72##	106.00 ± 15.19	195.20 ± 33.96

Note:Sammenlignet med kontrolgruppe: *P<0.05, **P<0.01; compared with model group: #P<0.05, ##P<0.01

 

Tabel 2 Effekter af Ech på organkoefficienter hos hyperurikæmimodelrotter (xˉ±s, n=10)

 

Gruppe	Dosis / mg·kg⁻¹	Fastende kropsvægt / g	Leverkoefficient	Nyrekoefficient	Binyrekoefficient	Miltkoefficient	Thymus koefficient
Kontrollere	–	403.6 ± 28.0	26.92 ± 3.15	6.57 ± 0.55	0.14 ± 0.04	1.88 ± 0.26	1.07 ± 0.15
Model	–	352.5 ± 38.5**	26.60 ± 1.78	11.52 ± 1.67**	0.18 ± 0.03*	2.12 ± 0.23	1.03 ± 0.17
Allopurinol	30	367.5 ± 26.3	25.76 ± 1.14	7.93 ± 0.51##	0.16 ± 0.03	1.93 ± 0.35	1.08 ± 0.27
Ech	50	392.3 ± 28.3#	27.04 ± 2.14	8.06 ± 0.54##	0.16 ± 0.04	2.09 ± 0.24	1.09 ± 0.19
	75	388.4 ± 34.8#	26.78 ± 2.37	7.80 ± 0.78##	0.16 ± 0.02	2.00 ± 0.20	0.99 ± 0.25
	100	386.3 ± 41.4#	25.91 ± 1.46	7.58 ± 0.33##	0.18 ± 0.03	2.09 ± 0.28	1.17 ± 0.31

Note:Sammenlignet med kontrolgruppe: *P<0.05, **P<0.01; compared with model group: #P<0.05, ##P<0.01

 

 

 

1.2.7 Histopatologisk observation af rottenyre (HE-farvning)

Nyrevæv blev fikseret, dehydreret, indlejret, sektioneret (4 μm), farvet med HE og forseglet. Modelgruppen viste renal tubulær epitelcelleudskillelse, nekrotisk og inflammatorisk celleinfiltration og fokal inflammatorisk infiltration i det renale interstitium. Allopurinolgruppen viste milde læsioner; Ech-behandlingsgrupper viste lindret epitelcelleudskillelse, nekrose og inflammatorisk infiltration.

 

 

Figur 4 HE-farvningsbillede af rottenyrevæv i kontrolgruppe(A),modelgruppe(B),allopurinolgruppe(C,D),lav(E)oghøj
(F)dosisgrupper af Ech(×400)

 

1.2.8 Proteinekspression af URAT1, GLUT9, OAT1, OAT3 i rottenyre

Immunhistokemi blev udført for at påvise proteinekspression (integreret optisk tæthed, IOD). Sammenlignet med den normale gruppe havde modelgruppen signifikant opreguleret URAT1 og GLUT9 (P<0.01) and downregulated OAT1 and OAT3 (P<0.05). Compared with the model group, the allopurinol group and all Ech dose groups had significantly downregulated URAT1 and GLUT9 (P<0.05, P<0.01) and upregulated OAT1 (P<0.05, P<0.01); the allopurinol group and medium-/high-dose Ech groups had significantly upregulated OAT3 (P<0.05, P<0.01).

 

Figur 5 Effekter af EchonURAT1/IOD-værdier(A),GLUT9/IOD-værdier(B),OAT1/IOD-værdier(C),ogOAT3/IOD-værdier(D)i
nyrespørgsmål af hyperurikæmi-modelrotter

 

Figur 6 Effekter af Ech på renal URAT1-ekspression i hyperurikæmi-modelrotter

(Kontrolgruppe (A), modelgruppe (B), allopurinolgruppe (C) og 50, 75, 100 mg·kg⁻¹ Ech-grupper (D–F); IHC ×400)

 

Figur 7 Effekter af Ech på renal GLUT9-ekspression i hyperurikæmi-modelrotter

(Kontrolgruppe (A), modelgruppe (B), allopurinolgruppe (C) og 50, 75, 100 mg·kg⁻¹ Ech-grupper (D–F); IHC ×400)

Figur 8 Effekter af Ech på renal OAT3-ekspression i hyperurikæmi-modelrotter

(Kontrolgruppe (A), modelgruppe (B), allopurinolgruppe (C) og 50, 75, 100 mg·kg⁻¹ Ech-grupper (D–F); IHC ×400)

Figur 9 Effekter af Ech på renal OAT1-ekspression i hyperurikæmi-modelrotter

(Kontrolgruppe (A), modelgruppe (B), allopurinolgruppe (C) og 50, 75, 100 mg·kg⁻¹ Ech-grupper (D–F); IHC ×400)

 

 

1.2.9 mRNA-ekspression af URAT1, GLUT9, OAT1, OAT3 i rottenyre

Total RNA blev ekstraheret og revers-transkriberet; qPCR blev udført under anvendelse af 2⁻ΔΔCt-metoden. Sammenlignet med den normale gruppe havde modelgruppen signifikant opreguleret URAT1 og GLUT9 mRNA (P<0.05) and downregulated OAT1 and OAT3 mRNA (P<0.05). Compared with the model group, the allopurinol group and all Ech dose groups had significantly downregulated URAT1 mRNA (P<0.05); the allopurinol group and low-/medium-dose Ech groups had significantly downregulated GLUT9 mRNA (P<0.05); the allopurinol group and all Ech dose groups had significantly upregulated OAT1 and OAT3 mRNA (P<0.05).

 

Tabel 3 Primersekvenser

 

Primer navn	Sekvens (5′ til 3′)	Produktstørrelse
URAT1-	F: GTTCCCATGGCCTCCAGATTR: CATATGCATGCCACACAGCC	121 bp
GLUT9	F: TCTGCCTTGGCTGAGTATTGAR: ATGTGTCCCCCACATCATTGT	2147 bp
OAT1	F: TGTGAAGCCCTTCCGTTCTCR: TGTGAAGCCCTTCCGTTCTC	218 bp
OAT3	F: TACCTGCATGTGACCTTGCTGR: GAGACACTTCTCAGGCTTCCC	171 bp
- Actin	F: CCCATCTATGAGGGTTACGCR: TTTAATGTCACGCACGATTTC	150 bp

 

1.2.10 Statistisk analyse

Data blev analyseret under anvendelse af SPSS 20.0, udtrykt som middel ± standardafvigelse (x̄±s). Envejs ANOVA blev brugt til gruppesammenligninger og LSD eller Tamhanes T2 til post-hoc test. P<0.05 was considered statistically significant.

Figur 5 Effekter af EchonURAT1/IOD-værdier(A),GLUT9/IOD-værdier(B),OAT1/IOD-værdier(C)ogOAT3/IOD-værdier(D) hos nyresygdomme af hyperuricæmi-modelrotter

 

2 Diskussion

Vedvarende hyperurikæmi forårsager urinsyre-induceret nyreskade og ændrer nyrefunktionsbiomarkører. Denne undersøgelse etablerede en HUA-rottemodel ved hjælp af adenin kombineret med kaliumoxonat, med UREA, CREA og SUA som nøgleindikatorer. Resultater viste, at Ech fraCistanche tubulosaforbedret nyrefunktion og reduceret SUA i HUA-modelrotter, der udøver terapeutiske virkninger. Hyperurikæmi opstår som følge af overdreven urinsyreproduktion og nedsat udskillelse. Hepatisk XOD og ADA er nøgleenzymer i urinsyresyntese; overproduktion er en væsentlig årsag til HUA. Omtrent to tredjedele af den daglige urinsyre udskilles via nyrerne, hvilket gør renal udskillelsesdysfunktion til en primær drivkraft. URAT1 og GLUT9 medierer urinsyrereabsorption, mens OAT1 og OAT3 letter urinsyreudskillelsen - alle er nøglemål for urinsyresænkende lægemiddeludvikling. Ech reducerede signifikant hepatisk ADA og XOD, nedregulerede renal URAT1/GLUT9 (protein og mRNA) og opregulerede OAT1/OAT3 (protein og mRNA), hvilket indikerer, at dets urinsyresænkende effekt virker ved at reducere syntese og regulere transportører. Ved akut toksicitetstest blev der ikke observeret nogen dødelighed eller tydelig akut toksicitet hos mus. Jeg forbedrede nyrefunktionen og sænkede lever-ALAT hos HUA-rotter uden at påvirke AST- eller organkoefficienter, hvilket bekræfter gunstig sikkerhed. Som konklusion udøver Ech betydelige urinsyresænkende virkninger i adenin-kaliumoxonat-inducerede HUA-rotter ved at undertrykke ADA/XOD-medieret urinsyresyntese, beskytte nyrefunktionen og afbalancere urattransportørekspression med pålidelig sikkerhed til potentiel klinisk anvendelse.

Referencer

Zhang MH, Du JW, Zhang T, et al. Mekanisme af Bixie Fenqing Wan i intervention af hyperurikæmi-rotter ved at regulere urattransportørekspression[J]. Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae, 2023, 29(3): 1–8.

Niu YF, Zhou YF, Lin H, et al. Hæmning af 3,5,2',4'-tetrahydroxychalcon ved produktion af urinsyre i hypoxanthin-inducerede hyperuricemiske mus[J]. Biological & Pharmaceutical Bulletin, 2018, 41(1): 99-105.

Frédéric L. Gigt: en opdatering[J]. Journal of Bone and Joint Surgery, 2019, 86(1): 103-115.

Takeo N, Kouhei O, Sho S, et al. Funktionelt samarbejde mellem URAT1 (SLC22A12) og URATv1 (SLC2A9) ved nyreabsorption af urat[J]. Nephrology Dialyse Transplantation, 2013, 28(3): 603-611.

Lee SY, Cho SS, Han KM, et al. Koreansk rød ginseng forbedrer serumurinsyreniveauet ved at nedregulere URAT1 og opregulere OAT1 og OAT3[J]. Biologisk & Farmaceutisk Bulletin, 2024, 47(11): 1876–1882.

Falah K, Zhang P, Nigam AK, et al. In vivo regulering af små molekyle naturlige produkter, antioxidanter og næringsstoffer ved OAT1 og OAT3[J]. Næringsstoffer, 2024, 16(14): 2242.

 

Højt indholdCistancheForsyningskilde til urinsyresænkende urter

For institutioner, praktiserende læger og enkeltpersoner med fokus påurteterapier til reduktion af urinsyreog behandling af hyperurikæmi,høj renhedCistanche tubulosaekstrakter et pålideligt naturligt råmateriale med verificeret effektivitet.

Kernefordele ved forsyningskilden

Højstandardiserede aktive komponenter

Echinacoside (Ech): Større end eller lig med 10%-40%

Acteosid: Større end eller lig med 4%-16%

Samlet antal phenylethanoidglycosider: Større end eller lig med 40%-85% (opfylder fødevare- og ekstraktkvalitetsspecifikationer for F&U og produktudvikling)

 

Cistanche base og fabrik

Kontakt nu

 

Supportive Service Of Wecistanche-For flere detaljer om samarbejde
E-mail:wallence.suen@wecistanche.com

 

Verificeret urinsyresænkende mekanisme

Hæmmer XOD/ADA for at reducere urinsyresyntese

Regulerer URAT1/GLUT9/OAT1/OAT3 for at fremme urinsyreudskillelsen

Beskytter nyrefunktionen og lindrer hyperurikæmi-relateret nyreskade

Sikker og veltolereret

Akut toksicitetstest: Ingen tydelige bivirkninger ved høje doser

Ingen væsentlig skade på lever, nyre eller større organer

Overholder kravene til mad og kosttilskud

Autoritativt forsyningslink

https://www.xjcistanche.com/cistanche-extract-product/herbal-cistanche-dietary-supplement-capsules.html

 

Denne kilde giver standardiseretCistanche tubulosaekstrakt, kapsler, tabletter, orale væsker og tilpassede behandlingstjenester, der understøtter urteurinsyresænkende produktudvikling, klinisk forskning og kosttilskudsformulering.