Cistanche-polysaccharider hæmmer prostatacancercelleproliferation og inducerer apoptose via ROS-generering og antioxidantgenundertrykkelse

Abstrakt:
Objektiv:At undersøge virkningerne og underliggende mekanismer vedCistanche polysacchariderom spredning og apoptose afprostatacancerceller.

Metoder:
Humane prostatacancer DU145-celler blev behandlet med lave, mellemstore og høje koncentrationer afCistanche polysaccharider(henholdsvis 20, 40 og 80 mg/ml). Celleproliferation blev evalueret under anvendelse afMTT assay, og apoptose blev vurderet afflowcytometri. Intracellulærtreaktive oxygenarter (ROS)niveauer blev målt via flowcytometri, mensglutathion (GSH)niveauer blev bestemt vhaELISA. mRNA- og proteinekspressionsniveauerne afglutamat-cystein ligase katalytisk underenhed (GCLC), glutamat-cystein ligase modificerende underenhed (GCLM), ogthioredoxin reduktase 1 (TXNRD1)blev analyseret afRT-PCRogWestern blothhv.

Resultater:
Den halvmaksimale inhiberende koncentration (IC50) afCistanche polysacchariderpå DU145-celler var 40,35 mg/ml, således blev 40 mg/ml valgt som mediumdosis for efterfølgende eksperimenter. De lave, mellemstore og høje doser blev defineret som henholdsvis 50 %, 100 % og 200 % af IC50.

Alle behandlingsgrupper viste signifikant øgede apoptoserater sammenlignet med kontrolgruppen. Dehøjdosis Cistanche gruppeudviste den største hæmning af celleproliferation og den højeste apoptoserate, efterfulgt af mellem- og lavdosisgrupperne (P< 0,01). ROS-niveauer var signifikant forhøjede, og GSH-niveauer var signifikant reduceret i alleCistanche-behandlede grupperkontra kontrol. Især denhøjdosis gruppehavde markant højere ROS og lavere GSH-niveauer end mellem- og lavdosisgrupperne (P< 0,05); mellemdosisgruppen viste lignende forskelle sammenlignet med lavdosisgruppen (P< 0,05).

Udtryksniveauer afGCLC, GCLM, ogTXNRD1(både mRNA og protein) var signifikant nedreguleret i alle Cistanche-behandlede grupper sammenlignet med kontrol (P< 0,05). Dehøjdosis gruppeviste den mest signifikante undertrykkelse af disse antioxidant-relaterede gener og proteiner, efterfulgt af mellem- og lavdosisgrupperne (P< 0,05).

Konklusion:
Cistanche polysacchariderhæmmer ekspressionen af antioxidantfaktorerGCLC, GCLM, ogTXNRD1, og derved reducereGSH syntese, fremmeROS-akkumuleringog i sidste ende fremkaldendeapoptose i prostatacancerceller. Disse resultater tyder på detCistanchekan tjene som ennaturligt terapeutisk middelfor prostatakræft viaoxidativ stress-medierede mekanismer.

Cistanche tubulosa-

Cistancheekstrakt med højt indhold af polysaccharider

Køb nu

Understøttende service af Wecistanche-The Kontakt os for at få en engrospris
E-mail:wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/tlf.:+86 15292862950

Baggrund og metoder

Prostatakræftstår for ca7,1% af alle mandlige maligniteter, med den højeste forekomst efter 60 års alderen. Efterhånden som Kinas befolkning fortsætter med at ældes, forventes forekomsten af denne sygdom at stige yderligere [1]. Undersøgelser tyder på, at den høje forekomst af prostatacancer hos ældre mænd kan være relateret tildegenerative forandringer i prostata, genetisk disposition, kostvaner, oglivsstilsfaktorer [2].

Kirurgisk resektionforbliver en grundpille i behandling af prostatacancer med det formål at fjerne det meste af tumormassen. Det er dog forbundet med betydelige komplikationer, som f.eksurininkontinens, seksuel dysfunktionog mest kritisk,tumortilbagefald og metastasering, som er væsentlige årsager til dårlig prognose [3].

I de senere år harTraditionel kinesisk medicin (TCM)har fået stigende opmærksomhed for sin rolle i kræftbehandling. TCM kan hjælpeøge immuniteten, modvirke kemoterapi/strålebehandlingsbivirkninger, ogøge afgiftningen. Nogle lægeurter udstiller ogsådirekte antitumoregenskaber, herunder hæmning af tumorvækst oginduktion af apoptose i cancerceller [4].

Blandt disseCistanche (Cistanche deserticola)er en traditionel tonic urt kendt for sinimmunmodulerende, antioxidativ, ogantitumor virkninger. Dets vigtigste bioaktive komponenter erpolysacchariderogphenylethanoid glycosider. Denne undersøgelse undersøger virkningerne og den underliggende mekanisme afCistanche polysacchariderpåspredning og apoptose af prostatacancer DU145-celler.

Buy Cistanche With 25 Echinacoside and 9 Acteoside

1. Materialer og metoder

1.1 Vigtigste materialer og reagenser

DU145 humane prostatacancercellerblev opnået fra Tongpai Biotech (Shanghai, Kina).

Cistanche polysaccharider(Batchnr.: 0287181) blev købt fra Weikeqi Bio Co., Ltd. (Sichuan, Kina).

Føtalt bovint serum, penicillin/streptomycin, ogDMEMblev leveret af Zeta Life (USA).

MTT assay, Annexin V/PI apoptosesæt, RIPA lyseringsbuffer, BCA protein kvantificeringssætblev opnået fra Elabscience (Shanghai, Kina).

Reactive oxygen species (ROS) detektionskitogGSH ELISA-sætblev købt fra BioLab (Shanghai, Kina).

Trizol reagens, reverse transkriptionssæt, ogPCR-sætblev hentet fra NeuroSym (Hangzhou, Kina).

Antistoffer modGCLC, GCLM, TXNRD1, -aktinog tilsvarende sekundære antistoffer blev købt fra UnivBio (Shanghai, Kina).

cistanche deserticola

1.2 Cellekultur- og proliferationsassay

DU145-celler blev dyrket iDMEM suppleret med 10 % FBS og 1 % penicillin/streptomycini en CO₂-inkubator. ForMTT assayDU145-celler i logaritmisk fase blev podet i plader med 96 brønde og behandlet medCistanche polysaccharidopløsningerved koncentrationer af10, 20, 40 og 80 mg/ml. Kontrolgruppen modtog kun DMEM-medium.

Efter 24 timers behandling,20 µL 5 mg/ml MTTblev tilsat til hver brønd og inkuberet i 4 timer. Supernatanten blev fjernet, og150 µL DMSOblev tilføjet. Efter omrystning i 10 minutter blev absorbansen målt ved490 nmved hjælp af en mikropladelæser. DeIC₅₀blev beregnet, og20, 40 og 80 mg/mlblev valgt somlave, mellemstore og høje dosertil efterfølgende forsøg. Decelleproliferationsinhiberingshastighedblev beregnet som:
Hæmningshastighed (%)=(OD_kontrol - OD_behandlet) / OD_kontrol × 100

cistanche coffee

1.3 Apoptoseassay

Log-fase DU145 celler blev behandlet med forskellige koncentrationer afCistanche polysacchariderefter grupperinger. Efter fiksering og farvning,Annexin V-FITCogPIblev brugt til at mærke apoptotiske celler.Flowcytometriblev udført for at detektere fluorescenssignaler, og procentdelen af apoptotiske celler blev registreret.

1.4 Påvisning af intracellulære ROS- og GSH-niveauer

ROS-niveauer blev målt ved hjælp af enROS fluorescensprobeog flowcytometri. GSH-niveauer blev kvantificeret vhaELISA. En standardkurve blev fremstillet under anvendelse af kendte koncentrationer af GSH-standarder, og absorbans blev målt for at beregne GSH-koncentrationer i prøver.

1,5 RT-PCR for mRNA-ekspression af GCLC, GCLM, TXNRD1

Total RNA blev ekstraheret under anvendelse afTrizolog cDNA blev syntetiseret. PCR blev udført ved hjælp af specifikke primere:

GCLC:

Frem: 5'-GTCGGTGTCAAAATACGGAGTTCCA-3'

Bagside: 5'-CGTGACGAGGACTGCGTGCATGGAT-3'

GCLM:

Frem: 5'-CCGATGACGCCATAAACGTCCGTAGC-3'

Bagside: 5'-GGCTAAGCGTACGTAGTACGCAACGTA-3'

TXNRD1:

Forlæns: 5'-TGACAGTCCTACCGTACGTAGAATGCC-3'

Bagside: 5'-ATAATGCGTAGGGATGCGCTAGCAATGG-3'

-aktin (intern kontrol):

Frem: 5'-TTAGGCGCGATGCAGTCAGATAAGC-3'

Bagside: 5'-ATCGACGTACGTACGGACGCGATAG-3'

Forstærkningsbetingelser: 95 grader i 60 s, efterfulgt af 30 cyklusser af 95 grader i 30 s, 60 grader i 30 s og 72 grader i 60 s. PCR-produkter blev analyseret vedgelelektroforese, og relativ genekspression blev normaliseret til-aktin.

1.6 Western blotting for proteinekspression

Totalt protein blev ekstraheret vhaRIPA buffer, og proteinkoncentrationen blev bestemt vedBCA assay. Proteiner blev adskilt afSDS-SIDE, overført tilPVDF membraner, blokeret og inkuberet natten over ved 4 grader med primære antistoffer imodGCLC, GCLM, TXNRD1, og-aktin. Efter inkubation medHRP-konjugerede sekundære antistoffer, blev bånd visualiseret vhakemiluminescensog kvantificeret afImageJ software.