Karakterisering af T-celleimmunitet hos kronisk hepatitis B-virus-inficerede mødre med postpartum alanintransaminase-takst

Abstrakt

Baggrund:

Postpartum alanintransaminase (ALT)-priser forekommer hyppigt hos kronisk hepatitis B-virus (HBV)-inficerede mødre med antiviral behandling før fødslen (AVT). Vi havde til formål at karakterisere T-celleimmuniteten hos HBV-inficerede mødre, der oplever postpartum ALT-priser.

Metoder:

Tyve HBV-inficerede gravide kvinder, der modtog AVT ved 26-28 ugers graviditet, blev tilmeldt og fulgt op indtil 15-18 uger efter fødslen. Blandt de 20 HBV-inficerede gravide kvinder oplevede 6 postpartum ALT-takst (AF-mødre), mens 14 ikke gjorde det (NAF-mødre). T-lymfocyt-fænotyper og -funktioner blev analyseret ved hjælp af flowcytometri.

Der er en vis sammenhæng mellem postpartum alanin aminotransferase (ALT) og immunitet. Alaninaminotransferase er et enzym i levercellernes indre membran, som er involveret i aminosyremetabolismen og har en høj følsomhed over for levercelleskade. I postpartum-perioden kan alaninaminotransferase være forhøjet på grund af kropsjusteringer under graviditet og fødsel. Høj ALT kan afspejle nedsat leverfunktion, hvilket kan føre til nedsat immunitet. Leveren er et vigtigt immunorgan i menneskekroppen. Nedsat leverfunktion kan påvirke kroppens immunitet, påvirke kroppens evne til at modstå patogener og forårsage forskellige sygdomme.

Derfor kan højt ALT efter fødslen indikere, at kroppens immunitet er svækket, og det er nødvendigt at styrke reguleringen af ​​levevaner og ernæringsindtag for at forbedre immuniteten og opretholde leversundheden. Samtidig, når en mor har høj ALAT, bør hun søge læge i tide for at finde ud af årsagen og udføre den tilsvarende behandling. Fra dette synspunkt er vigtigheden af ​​immunitet vigtig. Ud over gravide kvinder bør vi også være opmærksomme på immunitet, især forbedring af immunitet. Cistanche kan forbedre immuniteten betydeligt. Cistanche er rig på forskellige antioxidantstoffer, såsom C-vitamin, carotenoider osv. Disse ingredienser kan opfange frie radikaler, reducere oxidativt stress og forbedre immunsystemets modstandsdygtighed.

Klik cistanche tubulosa fordele

Resultater:

Sammenlignet med NAF-mødre faldt de kvantitative HBsAg-niveauer hos AF-mødre signifikant 6-8 eller 15-18 uger efter fødslen. Signifikante forskelle i HBeAg-niveauer mellem disse grupper blev kun fundet ved levering. Regulatory T-celle (Treg)-tal i AF-mødre var lavere end NAF-mødre før AVT; der var dog ingen signifikante forskelle i Treg-tal på andre opfølgningspunkter. Ekspression af andre T-cellefænotyper var ens mellem de to grupper. T-celler i AF-mødre producerede flere pro-inflammatoriske cytokiner (IFN-, IL-21, TNF-, IL-2) eller mindre anti-inflammatorisk cytokin (IL-10) end dem i NAF mødre før, under eller efter antiviral behandling. Forholdet mellem IFN- og IL-10 produceret af CD4 plus T-celler eller CD8 plus T-celler var højere hos AF-mødre end hos NAF-mødre under graviditeten eller efter fødslen.

Konklusioner:

Karakteristikaene for T-celleimmunitet var forskellige mellem mødre med postpartum ALT-pris og dem uden ALT-takst fra graviditet til postpartum, hvilket indikerede, at T-celleimmunitet kunne blive involveret i postpartum ALT-takst.

Nøgleord:

Hepatitis B-virus, postpartum, alanintransaminase-pris, T-celleimmunitet.

Baggrund

Globalt er hepatitis B-virus (HBV)-infektion fortsat et stort folkesundhedsproblem. Verdenssundhedsorganisationen (WHO) anslåede, at 257 millioner mennesker i 2015 levede med kronisk HBV-infektion, og at HBV-relaterede sygdomme resulterede i 887,000 dødsfald årligt på verdensplan [1]. I meget endemiske lande er mor-til-barn-overførsel (MTCT) hovedvejen for HBV-overførsel; cirka 40-50 procent af HBsAg plus patienter får infektioner via MTCT [2]. Ifølge de seneste WHO-estimater er andelen af ​​børn under 5 år, der er kronisk inficeret med hepatitis B-virus, faldet fra 5 procent i præ-vaccinationsperioden fra 1980'erne til begyndelsen af ​​2000'erne til mindre end 1 procent i 2019 [1] .

At reducere forekomsten af ​​MTCT er stadig en stor udfordring. Undersøgelser har vist, at niveauerne af HBV-DNA hos HBV-inficerede mødre er en uafhængig risikofaktor for MTCT [3-5]. Det blev rapporteret, at MTCT ikke forekom hos mødre med en virusmængde < 6 log10 kopier/ml [6]. Undersøgelser har vist, at sammen med administrationen af ​​HBV-vaccinen og immunoglobulin kan antiviral antepartum-terapi (AVT) yderligere reducere forekomsten af ​​MTCT hos gravide kvinder med høj viral belastning [7-9]. Tidligere undersøgelser fokuserede hovedsageligt på effektiviteten og sikkerheden af ​​AVT, samt sandsynligheden for og sværhedsgraden for maternal alanintransaminase (ALT) opblussen efter fødslen [10]. Karakteristikaene ved postpartum ALT-opblussen er hovedsageligt milde til moderate abnormiteter, som kan forsvinde spontant hos de fleste mødre [11]. I øjeblikket er det kontroversielt om antiviral intervention under graviditet øger forekomsten af ​​postpartum ALT-opblussen [7, 12, 13].

En vellykket graviditet afhænger af en gravid kvindes immunsystem, som ikke kun skal tolerere faderlige antigener, men også skal beskytte kvinden og det voksende foster mod indtrængende patogener [14]. Under de forskellige stadier af graviditeten ændres immunsystemet hos gravide kvinder dynamisk. Pro-inflammatorisk immunitet er dominerende i graviditetens første trimester, mens anden fase af graviditeten overvejende er antiinflammatorisk. Pro-inflammatorisk immunitet bliver dominerende igen i den sidste fase af graviditeten [15]. Undersøgelser har vist, at hyppigheden af ​​regulatoriske T-celler (Treg) i det perifere blod hos gravide er nedsat under graviditeten, hvilket kan være forårsaget af ændringer i østrogen- og progesteronniveauer [16]. Dette fald kan også forekomme på grund af maternal Tregs, der migrerer til moder-føtale overflade for at forhindre moder-føtal afvisning, hvilket resulterer i nedsat perifert blod Treg-frekvens [17].

Derfor er immunstatus for kronisk HBV-inficerede gravide kvinder forskellig fra den for kroniske HBV-inficerede kvinder, der ikke er gravide. Disse ændringer vender hurtigt efter levering. Aktuelle hypoteser tyder på, at ændringer i immunsystemet under graviditet kan være ansvarlige for en høj rate af postpartum ALT-priser hos HBV-inficerede kvinder [18]. Imidlertid er immunologiske karakteristika for HBV-inficerede mødre, der oplever postpartum ALT-takst, ikke blevet undersøgt.

Denne undersøgelse havde til formål at karakterisere T-celleimmuniteten hos HBV-inficerede mødre og udforske de immunologiske mekanismer for postpartum ALT-takst ved at sammenligne T-celleimmuniteten hos HBV-inficerede mødre, som oplevede postpartum ALT-fare med HBV-inficerede mødre uden ALT-takst.

Patienter og metoder

Patienter

Fra september 2017 til april 2020 blev 20 gravide kvinder med kroniske HBV-infektioner, som modtog den profylaktiske antivirale intervention (telbivudin eller tenofovir) til forebyggelse af MTCT, indskrevet og fulgt op på Nanfang Hospital i Guangzhou, Kina. Disse gravide kvinder var i fasen med immuntolerance over for kronisk HBV-infektion ved indskrivning, og viste HBeAg-positivitet, normalt niveau af ALT og højt niveau af HBV-DNA (Større end eller lig med 6 log10 IE/ml) før antiviral intervention. Alle forsøgspersoner rekrutteret til denne undersøgelse var negative for hepatitis C-virus og human immundefektvirus. Derudover blev dem, der fik samtidig behandling, der involverede cytotoksiske lægemidler, immunmodulatorer og glukokortikoider, såvel som dem med større systemiske sygdomsmaligniteter, levercirrhose, hjertesygdomme eller nyreinsufficiens udelukket.

Kortvarig AVT blev administreret til forsøgspersonerne begyndende i uge 26-28 af graviditeten indtil fødslen. De blev besøgt i graviditetsuge 26-28 (før antiviral intervention), 1 måned efter antiviral intervention, ved fødslen, 6-8 uger efter fødslen og 15-18 uger efter fødslen. ALT-takst blev defineret som større end eller lig med 2 × øvre normalgrænse (ULN). ALT-fare-mødre (AF-mødre) var HBV-inficerede mødre, der oplevede en postpartum ALT-takst (n=6), mens ikke-ALT-fare-mødre (NAF-mødre) var HBV-inficerede mødre med postpartum ALT<2×ULN (n=14).

Virologiske og serologiske vurderinger

Niveauerne af serum HBsAg og HBeAg blev målt ved anvendelse af et Roche Elecsys assay (Roche, Basel, Schweiz). Serum-HBV-DNA-niveauer blev kvantitativt bestemt ved realtidspolymerasekædereaktion (PCR) under anvendelse af et kommercielt nukleinsyrediagnostiksæt (Sansure Biotech, Changsha, Kina) med en nedre detektionsgrænse (LOD) på 100 IE/ml. Serologiske markører og HBV DNA-assays blev udført på Laboratory of Viral Hepatitis Research, Nanfang Hospital (Guangzhou, Kina). Niveauerne af serum-ALAT og aspartattransaminase (AST) blev testet på afdelingen for klinisk laboratorium på Nanfang Hospital (Guangzhou, Kina).

Flowcytometrisk analyse af perifere blodmononukleære celler (PBMC'er)'

Perifere blodveneprøver blev opnået fra individuelle kvinder før, under og efter standsning af den antivirale intervention. PBMC'er blev isoleret ved Ficoll-Hypaque-densitetsgradientcentrifugering og kryokonserveret i flydende nitrogen til udskudt analyse [19]. Til flowcytometrianalyse blev optøede PBMC'er farvet med levende/døde fikserbare døde celler (eBioscience, San Diego, CA, USA) i 10 minutter ved stuetemperatur. Cellerne blev derefter farvet i 30 minutter ved 4 grader i mørke under anvendelse af følgende antistoffer (Abs): peridinin chlorophyll protein kompleks (PerCP)-Cy5.5- eller fluorescein isothiocyanat (FITC)-antiCD4 (kloner SK3 og RAP -T4, henholdsvis; BD Biosciences, San Jose, CA, USA), FITC- eller allophycocyanin (APC)-anti-CD8 (klon RPA-T8; BD Biosciences, San Jose, CA, USA), phycoerythrin (PE)-anti -CD45RA (HI100; BD Biosciences, San Jose, CA, USA), PE–CY7-anti-CD62L (klon DREG-56; BD Biosciences, San Jose, CA, USA), PE–CY 7-anti-CD25 (klon M-A251; BD Biosciences, San Jose, CA, USA), APC-anti-CD69 (klon FN50; Biolegend, San Diego, CA, USA), PE–CY{{34 }}anti-CD38 (klon HIT2; BioLegend, San Diego, CA, USA) og PE-anti-PD-1 (klon MIH4; BD Biosciences, San Jose, CA, USA). Intranukleær APC-anti-gaffelboks P3 (FOXP3; klon PCH101; eBioscience, San Diego, CA, USA) farvning blev udført i henhold til producentens instruktioner. De farvede celler blev evalueret ved flowcytometri ved hjælp af BD FACSDiva-systemet (BD Biosciences, San Jose, CA, USA), og dataene blev analyseret ved hjælp af FlowJo-software (TreeStar Inc., Ashland, OR, USA) [20].

Flowcytometrisk analyse af intracellulær cytokinfarvning (ICS)

Til analyse af intracellulær cytokinproduktion blev 5 x 105 celler/brønd stimuleret med 5 ug/mL anti-CD3 monoklonalt antistof (mAb; klon 145-2C11; BD Biosciences) og 5 ug/mL opløseligt anti-CD28 mAb (klon 37.51; BD Biosciences, San Jose, CA, USA) i en 96-brøndfedtbundet plade ved 37 grader i 24 timer. Brefeldin A (10 ug/ml; BD Biosciences, San Jose, CA, USA) blev tilsat i løbet af de sidste 6 timers inkubation. Cellerne blev farvet med Live/Dead Fixable Dead Cell-farvning (eBioscience, San Diego, CA, USA) ved stuetemperatur. Efter at være blevet vasket, blev cellerne farvet med PerCP-Cy5.5-antiCD4 og FITC-anti-CD8 ved 4 grader i 30 min. De overfladefarvede celler blev fikseret og permeabiliseret ved hjælp af et fikserende/permeabiliserende reagens (BD Biosciences, San Jose, CA, USA) i 20 minutter, efterfulgt af farvning med PE-Cy7-anti-interferon (IFN)-y (klon) B27; BD Biosciences, San Jose, CA, USA), PE-anti-interleukin (IL)-10 (klon JES3-9D7; Biolegend, San Diego, CA, USA), PE-anti- IL-21 (klon 3A3-N2.1; BD Biosciences, San Jose, CA, USA), APCanti-tumor necrosis factor (TNF)- (klon 6401.1111; BD Biosciences, San Jose, CA, USA), PE-anti-IL-2 (klon MQ1-17H12; BD Biosciences, San Jose, CA, USA) og PE-Cy7-anti-IL{{55} } (klon 8D4-8; BD Biosciences San Jose, CA, USA) i 30 min. Analyser blev udført ved hjælp af BD FACSDiva-systemet (BD Biosciences, San Jose, CA, USA) og FlowJo-programmet (TreeStar Inc., Ashland, OR, USA) [21].

Statistisk analyse

Data blev udtrykt som enten medianen med et 95 procent konfidensinterval (CI) eller et interkvartilinterval. Den ikke-parametriske Mann–Whitney U-test blev brugt til statistisk analyse baseret på to-halede hypotesetest ved hjælp af GraphPad Prism-software (v.8.0; GraphPad Software, San Diego, CA, USA). P-værdier<0.05 were considered significant.

Resultater

Kliniske karakteristika for mødre med kronisk HBV-infektion

The clinical characteristics are comparable between the AF mothers and the NAF mothers. No statistically significant differences were found between the two groups in terms of age, number of births, weeks of gestation, AVT duration, or delivery methods. The levels of ALT or AST in HBV-infected mothers from the AF group or NAF group were all within the normal range before the antiviral intervention, and the median levels of ALT (interquartile range) were 22.00 (15.50, 23.50) and 21.00 (15.75, 24.25) U/L, respectively, while the median levels of AST (interquartile range) were 21.00 (16.50, 29.00) and 19.00 (16.75, 21.25) U/L, respectively, and no statistically significant differences were found. ALT and AST were within 1×ULN during antiviral treatment in the NAF mothers (including one month after antiviral intervention and at delivery), while one mother from the AF mothers had ALT over 2×ULN and her ALT levels returned to normal at delivery. Other AF mothers maintained ALT and AST levels in the normal range (1×ULN) during the antiviral intervention. At 6–8  weeks postpartum, 2 mothers (33.33%) from the AF group developed transient ALT>2×ULN. Another 4 mothers had ALT>2×ULN 15-18 uger efter fødslen. To mødre fra AF-gruppen fortsatte med at have ALT-abnormiteter, og antiviral behandling blev genoptaget efter fødslen (tabel 1).

Virologiske og serologiske karakteristika for HBV-inficerede mødre under graviditet og postpartum

Medianniveauerne af HBsAg hos AF-mødrene var lavere end hos NAF-mødrene før den antivirale intervention, under AVT eller efter seponering af antiviral behandling efter fødslen. Signifikante forskelle blev kun fundet 6-8 uger og 15-18 uger efter fødslen (p=0.459, p=0.294, p=0.415, p=0 .027, s=0.021). Alle mødre oplevede et lille fald i niveauerne af HBsAg under AVT og øgede niveauer efter fødslen (fig. 1A). Derudover var niveauerne af HBeAg i AF-gruppen lavere end i NAF-gruppen ved 5 opfølgningspunkter fra 26 til 28 ugers graviditet til 15-18 uger efter fødslen, med en statistisk signifikant forskel kun mellem de to grupper forekommer ved levering (p=0.035) (fig. 1B). Med hensyn til HBV-DNA-niveauer blev der ikke fundet nogen signifikant forskel mellem AF- og NAF-mødrene på nogen af ​​opfølgningspunkterne (fig. 1C).

Sammenligning af CD4 plus T-celle fænotyper af AF og NAF mødre før, under og efter AVT

For at analysere karakteristikaene for CD4 plus T-cellefænotyper hos AF-mødre sammenlignede vi forskellene i fænotypeekspression af CD4 plus T-celler baseret på tilstedeværelsen af ​​CD45RA, CD62L, CD38, CD69 og PD-1 mellem AF og NAF-grupper før, under og efter antiviral intervention (fig. 2A-E). Der blev ikke observeret nogen signifikante forskelle i ekspressionen af ​​CD45RA, CD62L, CD38 eller PD-1 af CD4 plus T-celler på nogen af ​​opfølgningspunkterne. Vi fandt imidlertid, at aktiveringsmarkøren CD69 blev udtrykt af CD4 plus T-celler hos AF-mødre med en signifikant højere hastighed end hos NAF-mødre ved 26-28 ugers graviditet (før antiviral intervention) og 15-18 uger efter fødslen (p.=0.04, s.=0.04) (fig. 2D). Vi undersøgte yderligere mængden af ​​Tregs (CD4 plus CD25 plus Foxp3 plus ) mellem de to grupper før, under og efter antiviral intervention og fandt ud af, at antallet af Tregs hos AF-mødre var signifikant højere end hos NAF-mødre før antiviral intervention (dvs. ved 26-28 graviditetsuge) (s.=0.02). Der var ingen signifikante forskelle i mængderne af Tregs mellem de to grupper under og efter standsning af antiviral intervention (fig. 2F).

Sammenligning af CD8 plus T celle fænotyper af AF og NAF mødrene før, under og efter AVT

Repræsentative FACS-plot, der viser fænotyperne af CD8 plus T-celler baseret på tilstedeværelsen af ​​CD45RA, CD62L, CD38, CD69 og PD-1 er vist i fig. 3A. Fra 26 til 28 ugers graviditet til 15-18 uger efter fødslen, antallet af CD8 plus CD45RA plus celler, CD8 plus CD62L plus celler, CD8 plus CD38 plus celler, CD8 plus CD69 plus celler og CD8 plus PD-1 plus-celler var ens mellem AF- og NAF-mødrene (fig. 3B-F).

CD4 plus T-celler i AF-mødre producerede flere pro-inflammatoriske cytokiner

Efter anti-CD3/anti-CD28-stimulering analyserede vi niveauerne af cytokiner udskilt af CD4 plus T-celler i 6 AF- og 14 NAF-mødre ved hjælp af flowcytometri. Repræsentative FACS-punktplot af cytokinproduktion fra CD4 plus T-celler er vist i fig. 4A. Før antiviral behandling (ved 26-28 ugers graviditet, fig. 4B) udskilte CD4 plus T-celler i AF-mødre mere IFN-, IL-21 og IL-2 end CD4 plus T-celler i NAF mødre (s=0.007, s=0.035, s=0.021). Derudover ser det ud til, at sekretionen af ​​TNF- fra CD4 plus T-celler var højere hos AF-mødre end hos NAF-mødre (p=0.087). Sammenlignet med CD4 plus T-cellerne fra NAF-mødre udviste cellerne fra AF-mødre imidlertid en reduceret evne til at udskille antiinflammatorisk cytokin IL-10 (p=0.024). Sekretionen af ​​IL-4 af CD4 plus T-celler var ikke signifikant forskellig mellem de to grupper (p > 0,999) (fig. 4B). Under AVT (herunder en måned efter antiviral terapi og ved fødslen) var der ingen statistisk signifikant forskel i udskillelsen af ​​forskellige cytokiner fra CD4 plus T-celler mellem AF- og NAF-mødrene (fig. 4C, D). Efter standsning af antiviral intervention (inklusive 6-8 uger postpartum og 15-18 uger postpartum), var CD4 plus T-cellers evne til at udskille IFN- større hos AF-mødre end hos NAF-mødre (p=0.049 , s=0.035). Desuden udviste AF-mødre svækket IL-10-sekretion 15-18 uger efter fødslen (p=0.004) (fig. 4E, F). Endelig, når vi sammenlignede frekvensforholdet mellem IFN-udskillende CD4 plus T-celler og IL-10-udskillende CD4 plus T-celler hos AF-mødre med det for NAF-mødre på alle opfølgningspunkter, fandt vi, at forholdet hos AF-mødre var signifikant højere end hos NAF-mødre (p=0.002, p=0.046, p=0.001, p=0.005) før den antivirale intervention, en måned efter antiviral intervention, ved fødslen og 15-18 uger efter fødslen. 6-8 uger efter fødslen var der ingen signifikant forskel i forholdet mellem pro-inflammatoriske/anti-inflammatoriske cytokiner produceret af CD4 plus T-celler, men en lignende tendens blev observeret (p=0.072) (fig. 4G).

CD8 plus T-celler fra AF-mødre producerer flere pro-inflammatoriske cytokiner

Repræsentative FACS-punktplot af pro-inflammatoriske cytokiner (IFN-, IL-21, TNF- og IL-2) og antiinflammatoriske cytokiner (IL-4 og IL-10 5A. Når vi sammenlignede den pro-inflammatoriske og anti-inflammatoriske cytokinsekretion fra CD8 plus T-celler hos AF-mødrene med NAF-mødrenes før, under og efter AVT, fandt vi, at mængden af ​​IFN- -udskiller CD8 plus T-celler hos AF-mødre var signifikant højere end hos NAF-mødre ved 26-28 ugers svangerskab og 6-8 uger efter fødslen (p=0.046, p=0.035). Mængden af ​​IL-10-udskillende CD8 plus T-celler i NAF-gruppen var signifikant højere end i AF-gruppen på alle opfølgningspunkter (p=0.005, p=0. 044, p=0.039, p=0.025, p=0.002) (fig. 5B–F). Efter at have analyseret forholdet mellem IFN- -udskillende CD8 plus T-celler og IL-10-udskillende CD8 plus T-celler ved hvert opfølgningspunkt, blev AF-mødrene desuden fundet at have et signifikant højere forhold på disse celler end hos NAF-mødrene før og efter standsning af AVT (6-8 uger postpartum og 15-18 uger postpartum) (p=0.007, p=0.046, p{{50} }.027). Medianforholdet for AF-mødrene var højere end NAF-mødrene ved 30-32 ugers graviditet eller fødsel, men der blev ikke observeret nogen signifikant forskel (p=0.127, p=0.058) (Fig. 5G). Kort fortalt var CD8 plus T-cellers evne til at udskille pro-inflammatoriske faktorer i AF-gruppen højere end i NAF-gruppen, mens evnen til at udskille den antiinflammatoriske faktor IL-10 var signifikant svagere end i NAF-gruppen. NAF-gruppen.

Diskussion

I de seneste år har hepatitis B-retningslinjer anbefalet, at antiviral intervention bør administreres til gravide kvinder med høje HBV-DNA-niveauer for at blokere MTCT og trækkes tilbage efter fødslen [22-24]. Det blev rapporteret, at nogle af de HBV-inficerede mødre, som gennemgik antivirale indgreb i slutningen af ​​graviditeten, oplevede postpartum ALT-priser efter medicinabstinenser [25-28]. Den store prøvestørrelse og den retrospektive undersøgelse viste, at forhøjede ALAT-niveauer og påviselige niveauer af HBV-DNA ved fødslen var uafhængige risikofaktorer for postpartum sygdomspriser [27]. Der er dog begrænsede data om T-celleimmunitet hos HBV-inficerede patienter med postpartum ALT-abnormiteter. I denne undersøgelse søgte vi således at undersøge T-celleimmunitet hos HBV-inficerede mødre, som oplevede postpartum ALT-takst, for at udforske immunmekanismer, som kunne ligge til grund for postpartum-ALAT-priserne.

Vores undersøgelse viste, at 95 procent (19/20) af HBV-inficerede gravide kvinder opretholdt ALT-normalisering i den antivirale periode. Postpartum ALT-priser forekom hos 30 procent (6/20) af HBsAg plus /HBeAg plus mødre efter standsning af antiviral intervention, blandt hvilke 4 tilfælde spontant vendte tilbage til det normale, og de andre 2 tilfælde krævede genstart af antiviral behandling. Vi fandt, at HBsAg-niveauer hos AF-mødrene var signifikant lavere end hos NAF-mødrene 6-8 uger og 15-18 uger efter fødslen. Dette resultat viste, at kroniske HBV-inficerede mødre med lavere HBsAg-niveauer er tilbøjelige til at få ALT-takst efter fødslen.

Det er blevet rapporteret, at postpartum leverskade kan forekomme på grund af ændringer i moderens immunstatus [11, 18]. I denne undersøgelse fandt vi, at før antiviral behandling (ved 26-28 ugers graviditet), sammenlignet med Treg-mængderne hos NAF-mødre, faldt mængderne hos AF-mødre, og T-celler hos AF-mødre udskilte signifikant højere mængder af pro-inflammatoriske cytokiner (IFN-, IL-21, IL-2) og færre mængder antiinflammatoriske cytokiner (IL-10). Forholdet mellem pro-inflammatorisk cytokin (IFN- ) og anti-inflammatorisk cytokin (IL-10) i CD4 plus eller CD8 plus T-celler var højere hos AF-mødre end hos NAF-mødre før, under eller efter AVT. Tregs er i øjeblikket anerkendt som CD4 plus T-celler, der udviser betydelige immunsuppressive virkninger. Vedligeholdelsen af ​​immuntolerance kommer hovedsageligt til udtryk ved, at Tregs har en immunsuppressiv effekt på HBV-specifikke T-celleresponser, hvilket fører til kronisk infektion [29, 30]. Derudover forhindrer pro-inflammatoriske cytokiner (såsom IFN- og IL-12) immuntolerance og udrydder vira, mens antiinflammatoriske cytokiner (IL-10) opretholder immuntolerance [31, 32].

Sammenlignet med NAF-mødre havde AF-mødre lavere Treg-frekvens ved 26-28 ugers svangerskab, stærkere pro-inflammatorisk immunitet og svagere anti-inflammatorisk immunitet fra 26 til 28 ugers graviditet til 15-18 uger efter fødslen. Disse resultater indikerede, at HBV-inficerede mødre havde distinkte karakteristika for T-celleimmunitet, som spillede en vigtig rolle i postpartum ALT-priser. De mødre med lavere Treg-frekvens og et højere forhold mellem det pro-inflammatoriske cytokin og antiinflammatorisk cytokin i CD4 plus eller CD8 plus T-celler vil være mere tilbøjelige til at opleve ALT-takst postpartum. Ovenfra udleder vi, at når pro-inflammatorisk immunitet er dominerende (dvs. T-celler udskiller flere pro-inflammatoriske cytokiner og færre anti-inflammatoriske cytokiner; Treg-mængderne falder) hos HBV-inficerede gravide kvinder, har patienternes immuntolerance en tendens til at dæmpes, så der er større sandsynlighed for, at ALT-takster efter fødslen opstår.

Fordi forskellene i profilen af ​​pro-inflammatoriske/anti-inflammatoriske cytokiner eksisterede så tidligt som 26-28 uger af graviditeten (før AVT) og forblev at være signifikante indtil postpartum 15-18 uger, overvejede vi, at de forskellige karakteristika for T-celleimmunitet var forårsaget af hverken AVT eller graviditetsstatus. Ved baseline udviste de HBV-inficerede mødre distinkte karakteristika for T-celle-immunitet, selvom deres biokemiske parametre var normale. Derfor er det nødvendigt at overvåge ALAT-niveauer efter fødslen hos kroniske HBV-inficerede gravide kvinder, og mere opmærksomhed bør rettes mod dem med ALT-pris, fordi de sandsynligvis vil opleve overgangen fra immuntolerancefasen til immunclearancefasen.

Denne undersøgelse var begrænset af manglen på en langsigtet opfølgningsanalyse af HBsAg plus/HBeAg plus mødre med høj viral belastning, som ikke gennemgik AVT; vi kunne derfor ikke analysere, om AVT påvirkede forekomsten og sværhedsgraden af ​​postpartum ALT-priser. Derudover var stikprøvestørrelsen af ​​denne undersøgelse lille, især i AF-gruppen. Flere undersøgelser med større stikprøvestørrelser er nødvendige for yderligere at validere resultaterne af denne undersøgelse.

Konklusion

I denne undersøgelse fandt vi, at egenskaberne ved T-celle-immunitet var forskellige mellem AF- og NAF-mødre fra graviditet til postpartum. T-celleimmunitet hos AF-mødre var karakteriseret ved lavere Treg-frekvens og et højere forhold mellem det pro-inflammatoriske cytokin og anti-inflammatorisk cytokin i CD4 plus eller CD8 plus T-celler. Resultaterne indikerede, at moderens immunstatus kan spille en vigtig rolle i postpartum ALT hos HBV-inficerede mødre. Derfor bør de HBV-inficerede mødre med ALT-takst postpartum overvåges nøje, fordi de kan opleve overgangen fra immuntolerancefasen til den immunaktive fase.

Forkortelser

ALT: Alanin transaminase; HBV: Hepatitis B-virus; AVT: Antiviral terapi før fødsel; AF: ALT billetpris; NAF: Ikke-ALT billetpris; Treg: Regulatorisk T-celle; WHO: Verdenssundhedsorganisationen; MTCT: Mor-til-barn transmission; ULN: Den øvre grænse for normal; AST: Aspartattransaminase; PBMC'er: Mononukleære celler fra perifert blod; PerCP: Peridinin klorofylprotein; FITC: Fluorescein-isothiocyanat; APC: Allophycocyanin; PE: Phycoerythrin; FOXP3: Gaffelkasse P3; ICS: Intracellulær cytokinfarvning; mAb: Monoklonalt antistof; IFN: Interferon; IL: Interleukin; TNF: Tumornekrosefaktor; CI: Konfidensinterval.

Anerkendelser

Vi er taknemmelige over for de mødre, der er tilmeldt denne undersøgelse, og vi takker vores kolleger i afdelingen for infektionssygdomme, Nanfang Hospital, for deres hjælp til at indsamle prøver og kliniske data.

Forfatteres bidrag

ZHL, YFG, JH og MTH har designet undersøgelsen. MTH indsamlede prøver, udførte eksperimenterne, udførte de statistiske analyser og udarbejdede manuskriptet. XRY, XLZ og YHH indsamlede kliniske data og fulgte op med patienterne. ZHL, YFG, JH og MTH reviderede manuskriptet. Alle forfattere læste og godkendte det endelige manuskript.

Finansiering

Dette arbejde blev støttet af National Natural Science Foundation of China (Grant No.81673243), det kinesiske nationale forskningslegat af den trettende femårsplan for nøgleprojekter inden for infektionssygdomme (2017ZX10201201) og Sanming Project of Medicine i Shenzhen ( SZSM201911001).

Tilgængelighed af data og materialer

De datasæt, der er brugt under den aktuelle undersøgelse, er tilgængelige fra den tilsvarende forfatter efter rimelig anmodning.

Erklæringer

Etisk godkendelse og samtykke til deltagelse

Denne undersøgelse blev udført af Good Clinical Practice i overensstemmelse med lokale regler og etiske principper beskrevet i Helsinki-erklæringen. Studieprotokollen blev godkendt af Institutional Review Board på Nanfang Hospital, Southern Medical University (IRB-nr. NFEC-2019-197), og der blev indhentet skriftligt informeret samtykke fra alle forsøgspersoner.

Samtykke til offentliggørelse

Ikke anvendelig.

Konkurrerende interesser

Forfatterne erklærer, at de ikke har nogen konkurrerende interesser.

Forfatterdetaljer

Afdeling for infektionssygdomme, Nanfang Hospital, Southern Medical University, Guangzhou 510515, Kina. 2 Nuværende adresse: Department of Infectious Diseases, Huizhou Third People's Hospital, Guangzhou Medical University, Huizhou 516002, Kina. 3 Nuværende adresse: Afdelingen for Obstetrik og Gynækologi, Zengcheng-afdelingen af ​​Nanfang Hospital, Southern Medical University, Guangzhou 511340, Kina. 4 Department of Nosocomial Infection Administration, Zhujiang Hospital, Southern Medical University, Guangzhou 510280, Kina. 5 Liver Diseases Center, Shenzhen Hospital of Southern Medical University, Shenzhen 518000, Kina.

Referencer

1. Verdenssundhedsorganisationen. Faktaark om hepatitis B. https://www.who.int/ news-room/fact-sheets/detail/hepatitis-b. Tilgået 27. juli 2020.

2. Su W, Chen S, Yang C, Chuang P, Chang H, Chang M. Virkningen af ​​universel spædbarnshepatitis B-immunisering på reduktion af hepatitis B-bærefrekvensen hos gravide kvinder. J Infect Dis. 2019;220(7):1118–26.

3. Peng T, Cai Q, Yang M, Chen S, Chen F, Wang M, Peng L, Wong G, Shen C, Cheng W, et al. Epidemiologiske tendenser og virologiske træk ved hepatitis B-virusinfektion hos gravide kvinder og nyfødte. Arch Virol. 2019;164(5):1335–41.

4. Terrault NA, Levy MT, Cheung KW, Jourdain G. Viral hepatitis og graviditet. Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 2021;18(2):117–30.

5. Yi W, Pan CQ, Hao J, Hu Y, Liu M, Li L, Liang D. Risiko for vertikal overførsel af hepatitis B efter fostervandsprøve i HBs antigen-positive mødre. J Hepatol. 2013;60(3):523–9.

6. Zou H, Chen Y, Duan Z, Zhang H, Pan C. Virologiske faktorer forbundet med manglende passiv-aktiv immunprofylakse hos spædbørn født af HBsAg-positive mødre. J Viral Hepat. 2012;19(2):e18–25.

7. Pan CQ, Duan Z, Dai E, Zhang S, Han G, Wang Y, Zhang H, Zou H, Zhu B, Zhao W, et al. Tenofovir for at forhindre hepatitis B-overførsel hos mødre med høj viral belastning. N Engl J Med. 2016;374(24):2324–34.

8. Brown RJ, McMahon BJ, Lok AS, Wong JB, Ahmed AT, Mouchli MA, Wang Z, Prokop LJ, Murad MH, Mohammed K. Antiviral terapi ved kronisk hepatitis B virusinfektion under graviditet: en systematisk gennemgang og meta-analyse . Hepatologi. 2016;63(1):319–33.

9. Funk AL, Lu Y, Yoshida K, Zhao T, Boucheron P, van Holten J, Chou R, Bulterys M, Shimakawa Y. Effekt og sikkerhed af antiviral profylakse under graviditet for at forhindre mor-til-barn-overførsel af hepatitis B-virus : en systematisk gennemgang og meta-analyse. Lancet Infect Dis. 2021;21(1):70–84.

10. Li Z, Duan X, Hu Y, Zhou M, Liu M, Kang K, Cai H, Yi W, Fu D, Gao X. Effekt og sikkerhed af lamivudin eller telbivudin til at forhindre mor-til-barn overførsel af hepatitis B virus: en undersøgelse fra den virkelige verden. Biomed Res Int. 2020;2020:1374276.

11. Bzowej NH, Tran TT, Li R, Belle SH, Smith CI, Khalili M, Chung R, Tsai N, Terrault N. Totalpris for alaninaminotransferase (ALT) hos gravide nordamerikanske kvinder med kronisk hepatitis B-infektion: resultater fra en prospektiv observationsundersøgelse. Am J Gastroenterol. 2019;114(8):1283-91.

12. Zhang H, Pan CQ, Pang Q, Tian R, Yan M, Liu X. Brug af telbivudin eller lamivudin sent i graviditeten reducerer sikkert perinatal overførsel af hepatitis B-virus i praksis i det virkelige liv. Hepatologi. 2014;60(2):468–76.

13. Jourdain G, Ngo-Giang-Huong N, Harrison L, Decker L, Khamduang W, Tierney C, Salvadori N, Cressey TR, Sirirungsi W, Achalapong J, et al. Tenofovir versus placebo for at forhindre perinatal overførsel af hepatitis B. N Engl J Med. 2018;378(10):911–23.

14. Zhang YH, Sun HX. Immune checkpoint-molekyler under graviditet: fokus på regulatoriske T-celler. Eur J Immunol. 2020;50(2):160–9.

15. Chatterjee P, Chiasson VL, Bounds KR, Mitchell BM. Regulering af de antiinflammatoriske cytokiner interleukin-4 og interleukin-10 under graviditet. Front Immunol. 2014;5:253.

16. Mjosberg J, Svensson J, Johansson E, Hellstrom L, Casas R, Jenmalm MC, Boij R, Matthiesen L, Jonsson JI, Berg G, et al. Systemisk reduktion af funktionelt undertrykkende CD4dimCD25highFoxp3 plus Tregs i graviditet i andet trimester hos mennesker induceres af progesteron og 17 beta-estradiol. J Immunol. 2009;183(1):759-69.

17. Tilburgs T, Roelen DL, van der Mast BJ, de Groot-Swings GM, Kleijburg C, Scherjon SA, Claas FH. Evidens for selektiv migration af fosterspecifikke CD4 plus CD25 lyse regulatoriske T-celler fra det perifere blod til decidua under human graviditet. J Immunol. 2008;180(8):5737-45.

18. Joshi SS, Cofn CS. Hepatitis B og graviditet: virologiske og immunologiske egenskaber. Hepatol Commun. 2019;4(2):157–71.

19. Bøyum A. Isolering af lymfocytter, granulocytter og makrofager. Scand J Immunol. 1976;5(s5):9-15.

20. Barathan M, Mohamed R, Vadivelu J, Chang LY, Vignesh R, Krishnan J, Sigamani P, Saeidi A, Ram MR, Velu V, et al. CD8 plus T-celler fra kroniske HCV-inficerede patienter udtrykker flere negative immunkontrolpunkter efter stimulering med HCV-peptider. Cell Immunol. 2017;313:1-9.

21. Huang M, Gao Y, Liao D, Li J, Tang B, Ma Y, Yin X, Li Y, Liu Z. Effekter af intrauterin eksponering for moder-afledt HBeAg på T-celleimmunitet i navlestrengsblod. Scand J Immunol. 2020;92(2):e12914.

22. European Association for the Study of the Lever. EASL 2017 kliniske retningslinjer for håndtering af hepatitis B-virusinfektion. J Hepatol. 2017;67(2):370–98. 23. Chinese Society of Hepatology, Chinese Medical Association; Chinese Society of Infectious Diseases, Chinese Medical Association. Retningslinjerne for forebyggelse og behandling af kronisk hepatitis B (2019 version). Zhonghua Gan Zang Bing Za Zhi. 2019;27(12):938–61.

24. Hou J, Cui F, Ding Y, Dou X, Duan Z, Han G, Jia J, Mao Q, Li J, Li Z, et al. Håndteringsalgoritme til at afbryde mor-til-barn-overførsel af hepatitis B-virus. Clin Gastroenterol Hepatol. 2019;17(10):1929–36.

25. Giles M, Visvanathan K, Lewin S, Bowden S, Locarnini S, Spelman T, Sasadeusz J. Kliniske og virologiske prædiktorer for leverpriser hos gravide kvinder med kronisk hepatitis B. Gut. 2015;64(11):1810–5.

For more information:1950477648nn@gmail.com