Abnormiteter i B-celler og T-celler hos patienter med selektiv IgA-mangel

Abstrakt

Baggrund

Selektiv IgA-mangel (SIgAD) er den mest udbredte medfødte immunitetsfejl med næsten ukendt ætiologi. Denne undersøgelse havde til formål at undersøge de kliniske diagnostiske og prognostiske værdier af lymfocytundergrupper og funktion hos symptomatiske SIgAD-patienter.

Metoder

I alt 30 tilgængelige SIgAD-patienter fra det iranske register og 30 alders-kønsmatchede raske kontroller blev inkluderet i denne undersøgelse. Vi analyserede B- og T-cellers perifere undergrupper og T-celleproliferationsassay ved flowcytometri hos SIgAD-patienter med milde og svære kliniske fænotyper.

Resultater

Vores resultater indikerede en signifikant stigning i naive og overgangsbestemte B-celler og et stærkt fald i marginalzonelignende og skiftede hukommelses-B-celler hos SIgAD-patienter. Vi fandt ud af, at naive og centrale hukommelses-CD4+ T-celleundersæt samt Th1-, Th2- og regulatoriske T-celler er faldet signifikant. På den anden side var der en signifikant reduktion i central- og effektorhukommelses-CD8+ T-celleundersæt, hvorimod proportioner af begge (CD4+ og CD8+) terminalt differentierede effektorhukommelses-T-celler (TEMRA) var signifikant forhøjet hos vores patienter. Selvom nogle undergrupper af T-celler i svær SIgAD var ens, var et fald i marginal-zone og skiftede hukommelse B-celler og en stigning i CD21low B-celler hos patienter med svær SIgAD let fremtrædende. Desuden var spredningsaktiviteten af ​​CD4+ T-celler stærkt svækket hos SIgAD-patienter med en alvorlig fænotype.

Konklusion

SIgAD-patienter har forskellige cellulære og humorale mangler. Derfor kan vurdering af T-celler og B-celler hjælpe med bedre at forstå den heterogene patogenese og prognoseestimering af sygdommen.

Nøgleord

Medfødte immunitetsfejl, Primær immundefekt, Selektiv IgA-mangel, B-celleundergrupper, T-celleundergrupper, Flowcytometri, Proliferationassay

cistanche tubulosa-forbedrer immunsystemet

cistanche ekstrakt

Introduktion

Selektiv IgA-mangel (SIgAD) er den mest udbredte primære immundefektlidelse (PID) eller medfødte immunitetsfejl (IEI), identificeret ved serumkoncentration af IgA under 7 mg/dL og normale koncentrationer af IgG og IgM hos patienter over fire år . Størstedelen af ​​SIgAD-patienter er asymptomatiske, selvom nogle af dem viser forskellige kliniske manifestationer, herunder mave-tarm- og luftvejsinfektioner, allergiske sygdomme og autoimmune lidelser. Sygdommens progression til almindelig variabel immundefekt (CVID) i en udvalgt gruppe af SIgAD-patienter med IgG-underklassemangel eller autoimmune lidelser er blevet rapporteret [1]. Ingen specifikke årsager til patogenesen af ​​SIgAD er endnu ikke blevet rapporteret. Imidlertid er defekter i processen med IgA-klasse switch-rekombination (CSR), IgA-produktion og -sekretion samt langtidsoverlevelse af IgA, switched memory B-celler og plasmaceller fra SIgAD-patienter blevet identificeret i uløste tilfælde [2 ]. Defekter i disse immunologiske processer er forbundet med abnormiteter i lymfocytterne hos SIgAD-patienter. Derfor kunne vurderingen af ​​lymfocytterne, især B-celle- og T-celle-undergrupper, være værdifuld og nyttig. Adskillige undersøgelser har påvist B-celle- og T-celleabnormiteter i nogle grupper af SIgAD-patienter [3, 4]. Med hensyn til B-celle-undergrupper er et fald i antallet af switched memory B-celler, IgA-plasmaceller og overgangs-IL-10+ regulatoriske B-celler fra SIgAD-patienter blevet rapporteret [5-8]. På den anden side er der rapporteret defekter i nogle T-celle-undersæt af SIgAD-tilfælde, der er forbundet med utilstrækkelige IgA-producerende B-celler [5, 8, 9]. Flowcytometrisk immunfænotypning kan spille en vigtig rolle i diagnosticering, prognose, klassificering og håndtering af patienter med SIgAD. Derfor sigtede vi for første gang på at undersøge de vigtigste subpopulationer af B- og T-lymfocytter sammen med en evaluering af T-cellefunktion for at klarlægge sammenhængen mellem immunologiske karakteristika og kliniske manifestationer hos symptomatiske patienter med SIgAD.

materialer og metoder

Patienter

I alt 30 tilgængelige symptomatiske SIgAD-patienter (fra det iranske IEI-register [10, 11]) og 30 alders-kønsmatchede raske kontroller (HC'er) blev inkluderet i denne undersøgelse. Det blev bekræftet, at HC'erne efter kliniske og laboratorieundersøgelser ikke havde nogen immundefekt eller nogen underliggende sygdom. Patienterne var blevet henvist til Children's Medical Center (Pediatrics Center of Excellence tilknyttet Tehran University of Medical Sciences, Teheran, Iran). Alle patienter blev diagnosticeret med SIgAD ifølge European Society for Immunodeficiencies [12]. Undersøgelsen blev godkendt af den etiske komité ved Teheran University of Medical, og der blev indhentet skriftligt informeret samtykke fra alle personer (IR.TUMS.VCR.REC.1396.2018). Demografiske, kliniske manifestationer og immunologiske data for patienterne blev dokumenteret i en spørgeskemaform.

Klassificering af patienter

For at sammenligne demografiske, kliniske og immunologiske data blev patienterne kategoriseret i to grupper, alvorlige og milde (baseret på kliniske manifestationer) samt consanguine og ikke-consanguine grupper (baseret på forældres consanguinitet). Minimumsinklusionskriterierne for, at en patient kunne betragtes som symptomatisk, var ti advarselstegn fra Jeffrey Modell Foundation. Patienterne blev opdelt i to grupper milde og svære, da patienter med alvorlige infektioner (f.eks. blodbanen, centralnervesystemet og dybtliggende infektioner som osteomyelitis og arthritis), autoimmunitet eller malignitet blev kategoriseret i den alvorlige gruppe og andre komplikationer blev betragtet som en mild gruppe. Da lungebetændelse og andre luftvejsinfektioner er almindelige hos SIgAD-patienter, og vi ønskede at tjekke det som en parameter mellem svære og milde grupper, så vi ikke kategoriserede det i den svære gruppe.

cistanche supplement fordele - hvordan man styrker immunsystemet

Klik her for at se produkter fra Cistanche Enhance Immunity

【Spørg om mere】 E-mail:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

Lymfocytundersæt-assay

Perifere mononukleære blodceller (PBMC'er) blev separeret fra 8 ml blodprøver opsamlet i natriumheparinrør ved anvendelse af en Ficoll-Hypaque-densitetsgradientcentrifugering ved 600 g i 25 minutter ved 22 grader. Til ekstracellulær farvning blev PBMC'er opdelt i 5-panelfraktioner og farvet i 20 minutter ved 2-8 grader på et mørkt sted, hvor hver cocktail indeholdt de monoklonale antistoffer i optimale koncentrationer. B1-panelet blev brugt til at bestemme naiv (CD19+CD27−IgM+IgD+), IgM-kun hukommelse (CD19+CD27+ IgM++IgD−), skiftet hukommelse (CD19+CD27+IgM−IgD−) og marginalzonelignende B-celler (CD19+CD27+IgM++IgD+). B2-panelet blev brugt til at identificere CD21low B-celler (CD19+CD21−/lowCD38−/lowIgM+++), plasmablast (CD19+CD21−/lowCD38++/{ {34}}IgM−) og overgangsmæssige B-celler (CD19+CD21+CD38++IgM+). T1-panelet blev brugt til at klassificere naiv (CD4+ eller CD8+ og CD45RA+CCR7+), effektorhukommelse (CD4+ eller CD8+ og CD45RA−CCR7−), central hukommelse (CD4+ eller CD8+og CD45RA−CCR7+) og TEMRA (terminalt differentieret effektorhukommelse) T-celler (CD4+ eller CD8+ og CD45RA+CCR7−). T2-panelet blev brugt til at klassificere regulatoriske T-celler (TregsCD4+CD25+FOXP3+CD127-/low). Til intracellulær farvning blev de efter overflademolekylefarvningen fikseret og permeabiliseret i hele FOXP3/Permeabiliseringsbuffer (eBioscience, USA) i henhold til producentens instruktioner for følgende: Anti-Human FOXP3 (PE), Anti-Human IL{{67} } (PE), Anti-Human IL-4 (APC) og Anti-Human IFN- (FITC). Alle antistoffer og isotypekontroller blev købt fra eBioscience, et amerikansk selskab. For at vurdere T-hjælperceller (inklusive T1, T2 og T17) blev 1 × 106 (celle/ml) PBMC'er dyrket i Roswell Park Memorial Institute (RPMI 1640) cellekulturmedium, efterfulgt af stimulering med phorbolmyristatacetat (PMA) , 50 ng/ml, Sigma-Aldrich, USA)/ionomycin (1 ug/ml, Sigma-Aldrich), og i nærvær af brefeldin (5 ug/ml, eBioscience). Derefter blev cellerne inkuberet ved 37 grader i en inkubator med 5 % CO2 og 95 % fugtighed i 5 timer. De stimulerede celler blev vasket med phosphatpufret saltvand (PBS), og overfladefarvning med anti-humant CD4 (PerCp)-Cy5.5 blev udført. Intracellulære cytokinfarvningsantistoffer (anti-IFN-FITC, anti-IL-17 PE og anti-IL-4 APC til evaluering af T-undersæt og anti-FoxP3 PE til evaluering af Treg) blev tilføjet og inkuberet ved stuetemperatur i 30 min. Celler blev vasket med permeabiliseringsbuffer og resuspenderet i kold farvningsbuffer, og tællinger blev bestemt ved hjælp af et BD FACSCalibur Flow Cytometer (BD Biosciences) (Yderligere fil 1: Tabel S1). Gatestrategien ligner vores tidligere undersøgelse [13, 14].

T-celle proliferation assay

For at vurdere T-celleproliferation blev PBMC'er dyrket med fluorescerende 5,6-carboxyfluoresceinsuccinimidylester (CFSE, Biolegend, USA). En CFSE-stamopløsning blev fremstillet ved at opløse CFSE i dimethylsulfoxid (DMSO) i en koncentration på 5 mM/L baseret på producentens instruktioner. Denne bestanddel blev frosset i små portioner for at forhindre overdreven fryse- og optøningscyklusser. CFSE blev tilsat til et tværgående falkerør indeholdende 500 μL PBMC-suspension (5 × 106 celler/ml) i RPMI 1640 cellekulturmedium indeholdende 10% FBS (føtalt bovint serum, Biosera, Frankrig) med en slutkoncentration på 5 μM og 2 mM L-glutamin, 100 U/ml penicillin og 100 ug/ml streptomycin (Lymphosep; Biosera, Frankrig). Røret drejede hurtigt og vortexede for at sikre homogen spredning. Efter mærkning blev cellesuspensionen inkuberet i 5 minutter ved 37 grader. Derefter blev 9 ml RPMI1640 indeholdende 10% FBS tilsat til cellesuspensionen, og den blev centrifugeret ved 500 g i 5 minutter. Celler blev vasket tre gange, og 1 ml RPMI1640 med 10 % FBS blev tilsat. Med hensyn til specifik T-cellestimulering og proliferation blev et anti-CD3-antistof (1 µg/ml) tilsat til 500 μL sterilt PBS, og pladen blev inkuberet ved 37˚C i 2 timer. Den overtrukne plade blev vasket to gange med sterilt PBS, og de mærkede celler blev direkte tilsat, og til sidst blev et anti-CD28-antistof (2 µg/ml) tilsat som et stimulerende middel til T-celler. Pladen blev inkuberet ved 37 ºC i en inkubator med 5 % CO2 og 95 % fugtighed i 96 timer [15-17]. En ustimuleret brønd blev betragtet som en kontrol for ikke-proliferative celler. Efter 96 timer blev cellerne høstet og vasket. Efter farvning med Anti Human CD4 (PerCPCy5.5) blev cellerne til sidst analyseret med BD FACSCalibur™ Flowcytometer og CellQuest Pro-software (BD, Biosciences, San Jose, CA, USA). Proliferationsanalyse blev udført ved at sammenligne tre kriterier, herunder procentdelen af ​​celler delt (%delt), det gennemsnitlige antal celledelinger, som en celle gennemgår (Divisionsindeks), og det gennemsnitlige antal celledelinger, der forekommer i hele den primære cellepopulation (Proliferation Index) af FlowJo 7.6-software.

Statistisk analyse

SPSS-software (Windows version 16.0; SPSS Inc., Chicago, IL, USA) blev brugt til statistisk analyse. Vi brugte Kolmogorov-Smirnov-testen til at vurdere, om data var normalfordelt. Resultaterne blev præsenteret som median (interkvartilområde [IQR], præsenteret som et område med 25.-75. percentiler) værdier. En chi-kvadrattest eller Fishers eksakte test blev brugt til sammenligninger. Til sammenligning af mere end to grupper, hvis datafordelingen var normal, blev ANOVA brugt, og hvis datafordelingen var ikke-normal, blev Kruskal Wallis's test brugt. Forskellene blev betragtet som statistisk signifikante for P-værdier, der var<0.05.

cistanche fordele for mænd styrker immunsystemet

Resultater

Demografiske, immunologiske og kliniske fund

Blandt alle registrerede iranske SIgAD-patienter blev 30 tilgængelige patienter (23 mænd og syv kvinder) rekrutteret i denne undersøgelse. Medianalderen (IQR) for patienterne var 11 (7,3-16) år på tidspunktet for undersøgelsen. Forældres slægtskab var til stede hos 16 (53,3 %) patienter. Pneumoni (42,3%) var den hyppigste kliniske manifestation hos de undersøgte patienter, og malignitet blev ikke diagnosticeret i denne kohorte. De demografiske, kliniske og immunologiske karakteristika for patienter er opsummeret i tabel 1. Efter kategorisering af patienter baseret på alvorlige og milde fænotyper blev demografiske, kliniske og immunologiske data sammenlignet (tabel 1, fig. 1). Patienter med alvorlige fænotyper viste flere respiratoriske komplikationer end den milde gruppe. Andre parametre har ikke vist en signifikant forskel. De samme sammenligninger blev udført hos patienter med og uden slægtskab, og ingen af ​​dem havde en signifikant forskel. I modsætning hertil udviste patienter med milde fænotyper en lidt højere frekvens af allergi og gastrointestinale manifestationer med et øget serum-IgE-niveau, hvilket tyder på en øget skift mod IgE-produktion.

Tabel 1 Sammenligning af demografiske, kliniske og immunologiske data for SIgAD-patienter med svære og milde fænotyper

Fig. 1 Sammenligning af kliniske manifestationer blandt svær og mild SIgAD

B-celle undersæt

SIgAD-patienter viste signifikant en øget frekvens af CD{{0}} B-celler [11,2% (9,4-13.07%) vs. 7,2% (6-8,6%), p < 0.001], med øgede naive B-celler [71 % (63.7-80 %) mod 66.5 % (56.2-71.1 %), p=0.036] og overgangsmæssige B-celler [ 8 % (3,6-13,5 %) mod 4,8 % (2,6-9,5 %), p=0.032] sammenlignet med HC'er. I modsætning hertil er procentdelen af ​​marginalzonelignende [2,3% (2-3,5%) vs. 3,4% (2,3-4,8%), p=0.022) og skiftede hukommelses-B-celler [3,5% (1,9) –5,5 %) vs. 6 % (3,5-8,4 %), p=0.006] var signifikant lavere end HC'er. Imidlertid var nedsat IgM-kun hukommelse og plasmablaster og øgede CD21low B-celler hos patienter end dem i HC'er ikke signifikante (fig. 2). Interessant nok var nogle sammenligninger signifikante mellem patienternes kliniske grupper. Procentdelen af ​​CD19+ B-celler i både milde og svære fænotyper var signifikant højere end HC'er [11,6% (8,7-13) vs. 7,2% (6-8,6), p < 0,0001, 10,8% (9,6-13,2) ) mod henholdsvis 7,2 % (6-8,6), p < 0,0001. Patienter med svær SIgAD viste en signifikant stigning i procentdelen af ​​CD21low B-celler [1,5 % (1–2,2) vs. 2,7 % (1,6–5,6), p=0.025], og et signifikant fald i procentdelen af både marginalzone og switched memory B-celleundersæt [3,4 % (2,3–4,8) vs. 2,2 % [2, 3], p=0.040, 6 % (3,5–8,4) vs. 2,7 % ( 1.7–4.7), henholdsvis p=0}.003]. Procentdelen af ​​overgangs-B-celler i milde SIgAD-patienter var højere end HC'er [10,7 % (3,9-13,8) vs. 4,8% (2,6-9,5), p=0.047] (fig. 3). Procentdelen af ​​IgM-kun hukommelse var signifikant højere hos patienter med slægtskab end hos dem uden slægtskab. Vi kategoriserede også hyppigheden af ​​B-celle-undergrupper af SIgAD-patienter i tre kategorier: normal, nedsat og øget baseret på det normale område af HC'er (tabel 2). Baseret på denne analyse er det største fald i B-celleundersæt relateret til switched memory B-celler (23%), mens den største stigning er relateret til naive B-celler (27%) hos SIgAD-patienter. Bortset fra øgede CD21low B-celler hos svære SIgAD-patienter sammenlignet med milde SIgAD-patienter.

Fig. 2 Kvantitativ analyse af B-celle- og T-celledelmængdeprocenter hos SIgAD-patienter og sunde kontroller. Medianen er repræsenteret af en vandret linje. Data blev analyseret ved hjælp af Mann-Whitney U-testen. *s<0.05, statistical significance between patients and HCs. HC Healthy control

T-celle undersæt

Undersætseparationen af ​​CD4+ T-celler afslørede en signifikant reduktion i det samlede antal CD4+ T-celler [36,5 % (30,8-41,2 %) vs. 40,1 % (37,3-47,2 %), p{{14 }}.038)], centrale hukommelsesceller [11 % (7,3-13,1 %) mod 24,5 % (16-29 %), p.<0.0001), T1 [7.7% (5.2–9.9%) vs. 12% (7.8–16%), p=0.002], T2 [0.3% (0.2–0.4%) vs. 0.6% (0.4–1.3%), p<0.0001] and Tregs [0.3% (0.03–0.7%) vs. 1.4% (1.1– 1.6%), p<0.0001] in patients compared with HCs. Oppositely, the percentage of TEMRA [9.5% (5.7–16.4%) vs. 2% (1.3–6.2%), p<0.0001] was meaningfully higher than HCs. Moreover, decreased effector memory and T17, and increased naïve helper T cells in patients in comparison with HCs were not significant (Fig.  2). Regarding the percentage of CD8+ T cell subsets, central memory [0.6% (0.3–0.8%) vs. 3% (2–6%), p<0.0001] and effector memory [12.3% (7.6–22.1%) vs. 23.9% (19.5– 27.2%), p<0.0001] were markedly diminished in patients compared with HCs. On the other hand, the percentage of cytotoxic TEMRA [44.1% (28.4–55.7%) vs. 24.4% (20– 31%), p<0.0001] was significantly higher than HCs. However, increased total CD8+ T cells and decreased naïve CD8+ T cells were not significant in patients compared to those in HCs (Fig. 2). Regarding the comparison of the percentage of CD8+ T cells subsets between severe SIgAD patients with HCs, naïve T cells, effector, and central memory cells demonstrated a significant reduction. Also, there was a significant decrease in the percentage of total CD4+ T-cells, central memory, T1, T2, and regulatory T cells, whereas TEMRA in both CD4+ and CD8+ T cells demonstrated an increase. On the other hand, the percentage of effector and central memory cells within CD8+ T cells, as well as central memory, TEMRA, T1, and regulatory T cells within CD4+ T cell subsets demonstrated a significant decrease in mild forms of SIgAD compared to HCs. In contrast, we found an increase in TEMRA CD8+ T cells and T2 CD4+ T cells in mild patients compared to controls (Fig.  3). Comparisons of the percentages of all T cell subsets between SIgAD patients with and without consanguinity have not indicated any significant difference. We also categorized the frequency of T cell subsets of SIgAD patients into three categories: normal, decreased, and increased based on a normal range of HCs (Table  2). Based on this analysis, the most decrease in T cell subsets is related to Tregs (67%), while the most increase is related to CD8+ TEMRA (37%) in SIgAD patients. Flow cytometry results of B cell and T cell subsets in 30 SIgAD patients have shown separately in Additional file 1: Tables S2 and S3. To evaluate the impact of the T cell subset on the switching process of B cells and the production of different Ig subtypes we performed a correlation analysis. Surprisingly only IgG but not IgM and IgE were significantly associated with specific T cell subsets (negative association with naïve CD4 and naïve CD8 T cells and positive association with CD4+ TEM and T17 cells, Additional file 1: Table S4) indicating the independent association of IgM to IgE from co-stimulation of T cell subsets in our patient cohorts. Moreover, correlation analysis of absolute counts and percentage of subsets should significant direct correlation in all measured parameters (Additional file 1: Table S5).

Fig. 3 Kvantitativ analyse af B-celle- og T-celledelmængdeprocenter hos svære og milde SIgAD-patienter. Medianen er repræsenteret af en vandret linje. Data blev analyseret ved hjælp af Mann-Whitney U-testen. *s<0.05, statistical signifcance between severe and mild patien

Tabel 2 Fordeling af normale, øgede og reducerede andele af T-celle- og B-celle-undergrupper i alle SIgAD-patienter. N=30

T-celleproliferation

Dataene genereret af CFSE-mærkede kulturer blev analyseret for at kvantificere CD4+ T-celleproliferation. Der var ingen signifikant forskel i divisionsindeks (DI), proliferationsindeks (PI) og procentdelt (PD) mellem SIgAD-patienter og HC'er (fig. 4). Interessant nok, da vi sammenlignede disse indekser mellem SIgAD-patienter med svære og milde fænotyper, fandt vi, at median DI og PD hos patienter med svær SIgAD sammenlignet med milde tilfælde blev signifikant ophævet [0.1 (0 .08–0.4) vs. 0.5 (0.3–0.8), p=0.019 og 12.2 (8.4– 26.4) vs. 42.5 (26.8-52.6), henholdsvis p=0.009]. Der var dog ingen signifikant forskel i PI mellem svære og milde grupper (fig. 4). På den anden side var sammenligninger af DI, PI og PD mellem SIgAD-patienter med og uden konsanguinitet ikke signifikante.

Fig. 4 Sammenligning af T-lymfocytproliferationsindekser hos svære og milde SIgAD-patienter. Medianen er repræsenteret af en vandret linje. *s<0.05, statistical significance between severe and mild patients

Diskussion

SIgAD er den mest udbredte IEI med forskellige kliniske manifestationer. Disse patienter har et andet spektrum af kliniske manifestationer. Derfor er immunologiske undersøgelser hos patienter med et andet spektrum af kliniske manifestationer nyttige. Den mest udbredte kliniske manifestation i IEI'er, især i SIgAD, er tilbagevendende luftvejsinfektioner [18-20]. Vi fandt lungebetændelse som den hyppigste komplikation hos vores registrerede symptomatiske patienter. Tilbagevendende luftvejsinfektioner manifesterer sig almindeligvis i form af øvre luftvejsinfektioner og kan forblive udiagnosticeret i flere år; dog viser nogle SIgAD-patienter mere alvorlige fænotyper såsom bronkiektasi eller udslettet bronchiolitis, hvilket tvinger immunologisk undersøgelse hos disse patienter [21]. I betragtning af at tilbagevendende luftvejsinfektioner er blevet rapporteret som den vigtigste årsag til morbiditet og død hos børn med IEI'er, især primære antistofmangler [22, 23], er tidlig diagnose og behandling af luftvejslidelser forbundet med SIgAD meget vigtig [24, 25] . Det er blevet indikeret, at abnormiteter i B-celle-undergrupper observeres hos nogle SIgAD-patienter [3, 4]. Vores resultater indikerede en signifikant stigning i naive og overgangsbestemte B-celler og et stærkt fald i marginal zone-lignende og switched memory B-celler. Dette unormale B-cellemønster tyder på defekter i de terminale stadier af B-celledifferentiering, svarende til CVID-patienter [26]. I betragtning af at CVID og SIgAD deler næsten lignende genetiske baggrunde og kan akkumulere som flere tilfælde inden for en familie, er denne lighed forudsigelig. Generelt har mere end halvdelen af ​​IEI-patienter, der er registreret i det iranske register, forældres slægtskab, men denne frekvens er stadig mindre almindelig hos SIgAD-patienter. Hos SIgAD iranske patienter sammenlignet med vestlige patienter er slægtskab mere udbredt. Selvom monogenetiske årsager kan eksistere, er det endnu ikke blevet identificeret på trods af næste generations sekventering hos flere patienter [27]. Vi opdagede en reduktion i marginal zone-lignende og switched memory B-celler, især hos svære SIgAD-patienter, som det tidligere er blevet rapporteret [28]. For nylig rapporterede vi en lignende reduktion i marginal zone-lignende og switched memory B-celler hos CVID patienter [14].

cistanche supplement fordele-øge immunitet

På den anden side, selvom vi observerede et signifikant fald i skiftet hukommelse hos patienter med Ataxia Telangiectasia (AT), men en skarp stigning i de marginale zone-lignende B-celler blev observeret [29]. SIgAD-patienter, især en gruppe patienter med alvorlige kliniske manifestationer (tilbagevendende og intensiv infektion og autoimmunitet), har lavere switched memory B-celler [28, 30, 31]. Det er blevet foreslået, at faldet i skiftet hukommelse B-celle subpopulation skyldes defekter i niveauet af antistof klasse-skiftende rekombination (CSR) proces, forårsaget af enzymatisk mangel, eller abnormiteter i cytokin netværk og deres receptorer [28]. Nogle SIgAD-patienter med alvorlig fænotype udvikler sig til CVID, hvilket afspejler denne undergruppe af SIgAD, kan dele fælles immunpatogenese med CVID, især i udviklingen af ​​CSR-trinnet. Derfor betragtes switched memory B-celler som en diagnostisk biomarkør hos patienter [28]. Hyppigheden af ​​skiftet hukommelse B-celler er imidlertid normal blandt børn i vores undersøgelsespopulation, og reduktionen blev observeret mere hos voksne patienter; tyder på, at aldring sandsynligvis fører til progression af SIgAD til CVID, især hos patienter med alvorlige kliniske manifestationer (data ikke vist). På den anden side er marginal zone B-celler en specialiseret population af B-celler, der producerer IgM til beskyttelse mod infektioner, især indkapslede bakterier [32]. Selvom tidligere undersøgelser har vist, at antallet af marginal zone-lignende B-celler i SIgAD-patienter ikke var anderledes sammenlignet med normale kontroller [33], opnåede vi ikke desto mindre en signifikant reduktion i marginal zone-lignende B-celler i vores tilfælde, svarende til en tidligere rapport hos CVID-patienter [34]. Reduktion af marginale B-celle-undergrupper hos andre patienter med antistofproduktionsdefekter kan være forbundet med en øget risiko for infektion såsom lungebetændelse og et fald i serum-IgM-niveauer, svarende til CVID-patienter [35]. Vi fandt øgede CD21low B-celler sammenlignet med kontrol, hovedsageligt hos patienter med svær SIgAD. Tidligere undersøgelser har rapporteret en stigning i CD21low B-celler i både SIgAD [3] og CVID patienter [36] og andre autoimmune sygdomme [37]. For nylig er der også rapporteret en stigning i CD21-low hos AT-patienter [29]. En stigning i antallet af CD21low-celler er direkte relateret ikke kun til autoimmunitet, men også til infektion [36]. På den anden side kan kronisk eksponering for viral infektion føre til omdannelse af antigen-reaktive B-celler til manglende respons CD21low B-celler [38]. For at afklare årsagen til udvidede CD21low B-celler; det er nødvendigt at foretage yderligere undersøgelser for denne B-celle subpopulation. I betragtning af den høje subpopulation af CD21low B-celler i CVID-patienter og progressionen af ​​nogle patienter med SIgAD til CVID, vil den alvorlige gruppe af SIgAD-patienter med øget CD21low B-celler mere sandsynligt udvikle CVID. Derfor har de brug for en mere regelmæssig opfølgning for at vurdere sygdomsforløbet. Overgangs B-celler er på et mellemstadie i udviklingen mellem umodne knoglemarvsceller og modne B-celler i milten [39]. I denne undersøgelse observerede vi signifikant øgede overgangs-B-celler hos vores SIgAD-patienter, især hos svære SIgAD-patienter, selvom antallet af overgangs-B-celler hos børn med SIgAD var normalt (data ikke vist). Vi har for nylig observeret et signifikant fald i overgangs B-celler AT [29]. I modsætning til tidligere undersøgelser, der viste nedsatte overgangs-B-celler [8, 28, 40], indikerede voksne patienter let øgede overgangs-B-celler. Desuden har Lemarquis et al. viste et fald i den funktionelle aktivitet af overgangs-B-celler baseret på IL-10-produktion og CpG-stimulering [40]. I betragtning af defekten i de terminale stadier af B-celler i SIgAD ser det ud til, at en stigning i overgangs-B-celler og naive B-celler hos vores patienter skyldes en kompenserende mekanisme, der øger tidlig B-celleudvikling. Med hensyn til forskellige resultater mellem vores undersøgelse og andre, ser det ud til, at denne forskel skyldes forskellige selektionsprocesser, da alle vores patienter var symptomatiske, mens andre undersøgte heterogent asymptomatiske og symptomatiske SIgAD-patienter. Med hensyn til undergrupper af T-celler observerede vi et fald i det samlede antal CD4+ T-celler, T1-, T2- og Treg-celler og øget TEMRA i både CD4+- og CD8+-celler. I overensstemmelse med vores resultater har tidligere undersøgelser vist en stigning og reduktion i henholdsvis CD8+ og CD4+ T-lymfocytpopulation [4]. Vi fandt også, at central hukommelse i både CD4+ og CD8+ T-celler og effektorhukommelse i CD8+ T-lymfocytter var nedsat hos SIgAD-patienter sammenlignet med HC'er. Vi observerede en signifikant stigning i TEMRA-celleundergruppen i både CD4+- og CD8+-lymfocytpopulationen, især hos patienter med svær SIgAD. TEMRA er en tredje undergruppe af T-cellehukommelse i perifere inflammatoriske væv, der udtrykker CD45RA, men mangler ekspression af CCR7 eller CD27. Hos mennesker påvirkes TEMRA-celleakkumulering af kroniske infektioner, såsom CMV [41, 42]. En stigning i disse terminerede T-celle-undergrupper kan skyldes kronisk cellulær respons på infektioner hos disse patienter; der skal dog udføres yderligere undersøgelser vedrørende dette fænomen. I overensstemmelse med vores resultater, Nechvatalova et al. demonstrerede udvidede CD4+ og CD8+ TEMRA-celler i SIgAD-patienter, der var relateret til CMV-infektion [43]. Vi undersøgte ikke CMV-infektion hos SIgAD-patienter, men en stigning i antallet af TEMRA-celler undergruppe hos vores patienter kunne relateres til kroniske infektioner. Vi har for nylig evalueret specifikke antistofresponser på PPSV-23 hos patienter med SIgAD og AT og afslørede, at 18,6 % af SIgAD-patienterne og 81,3 % af AT-patienterne havde et utilstrækkeligt respons. Antallet af plasmablaster, marginale zone B-celler, overgangs-B-celler, naive CD8+ T-celler og procentdelen af ​​CD8+ T-celler, IgM-hukommelse B-celler og switched memory B-celler i SIgAD-patienter var signifikant lavere i en ikke-respondergruppe end i respondergruppe. Selvom specifik antistofmangel er hyppigere hos AT-patienter end SIgAD-patienter [44]. Regulatoriske T-celler spiller en vigtig rolle i produktionen af ​​IgA-antistoffer ved at transformere vækstfaktor-beta (TGF-) sekretion [45-47]. Vi fandt signifikant nedsatte Tregs hos vores patienter i overensstemmelse med tidligere offentliggjorte studier [48], selvom en undersøgelse rapporterede øgede Tregs hos SIgAD-patienter [43]. Det er også blevet rapporteret en sammenhæng mellem reducerede Treg-celler og sværhedsgraden af ​​SIgAD-sygdom, især hos personer med autoimmunitet, og IgA CSR-mangel hos patienter med alvorlige kliniske manifestationer [30, 48]. Den lave frekvens af Treg-celler og andre T-celle-undergrupper, herunder T1 og T2 hos vores patienter, kan skyldes lave thymusemigranter forårsaget af defekt thymopoiesis og eller øget apoptose af disse celler [49]. T-celle funktionel assay ved mitogen eller antigen stimulering er et vigtigt træk ved diagnosticering af forskellige immunsygdomme og immundefekter [50]. Traditionelt er der én protokol til evaluering af T-cellers funktion baseret på optagelse af [3H]-thymidin efter PHA-stimulering ved hjælp af radioaktive komponenter, der har brug for specifikke laboratoriebetingelser, og den er heller ikke T-cellespecifik, da den kan stimulere flere andre immunceller som f.eks. godt. På den anden side er den vigtigste svaghed, at der ikke kunne opnås information om specifikke celleundersæt. CFSE-proliferationsassay er et praktisk valg til evaluering af T-celle-responser på et antigen eller mitogen hos IEI-patienter, især SIgAD til målretning af yderligere potentielle T-celle-defektanalyser hos disse patienter [51]. Indtil videre er der få rapporter om T-celle-responsdefekter hos SIgAD-patienter. Som forventet afslører vores undersøgelse ikke nogen signifikant forskel i T-cellerespons mellem patienter og kontroller. Men når vi kategoriserede patienter i to grupper baseret på svære og milde fænotyper, indikerede svære patienter nedsat T-celleproliferation sammenlignet med milde patienter. Dette resultat kunne være et vigtigt fund for at kategorisere SIgAD-patienter for at kende patientens prognose. Vi rapporterede for nylig, at T-celleproliferation var markant svækket sammenlignet med de raske kontroller hos CVID-patienter og AT-patienter [29, 52]. Desuden indikerer dette, at SIgAD-patienter med defekt T-celleproliferation bør følges yderligere for præcis medicinsk behandling. Vi anbefaler yderligere undersøgelser til evaluering af virkningen af ​​T-cellefunktion for SIgAD-patienter baseret på alvorlige og milde fænotyper i andre undersøgelser. Begrænsninger af eksperimentet omfattede det lille antal symptomatiske patienter, utilgængeligheden af ​​mange af dem og e, og endda forbedringen af ​​nogle patienter.

Konklusioner

Vores resultater indikerede signifikante skader i B-cellemønstre svarende til CVID-patienter. I betragtning af at CVID og alvorlige former for SIgAD deler næsten lignende kliniske og immunologiske fænotyper og højst sandsynligt genetisk baggrund, er denne opfattelse forudsigelig. Baseret på fænotypeanalyser observerede vi nogle flere abnormiteter hos SIgAD-patienter med alvorlige fænotyper, såsom en høj subpopulation af CD21low B-celler og T-celleproliferationsdefekt. Derfor viser svære patienter et højere antal luftvejsinfektioner sammenlignet med mild SIgAD, med talrige antal af dem, der lider af bihulebetændelse, otitis, lungebetændelse og b, bronkiektasi, hvilket tyder på yderligere opfølgning og mere præcis behandling hos disse patienter. Fædrene til denne undersøgelse tyder på, at undersøgelsen af ​​B- og T-celle-undergrupper kunne være nyttig for en bedre forståelse af sygdommens patogenese og prognose.

Referencer

1. Aghamohammadi A, Mohammadi J, Parvaneh N, Rezaei N, Moin M, Espanol T, et al. Progression af selektiv IgA-mangel til almindelig variabel immundefekt. Int Arch Allergy Immunol. 2008;147(2):87–92.

2. Bagheri Y, Sanaei R, Yazdani R, Shekarabi M, Falak R, Mohammadi J, et al. Den heterogene patogenese af selektiv immunoglobulinmangel. Int Arch Allergy Immunol. 2019;179(3):232–46.

3. Nechvatalova J, Pikulova Z, Stikarovska D, Pesak S, Vlkova M, Litzman J. B-lymfocytsubpopulationer hos patienter med selektiv IgA-mangel. J Clin Immunol. 2012;32(3):441–8.

4. Litzman J, Vlková M, Pikulová Z, Štikarovská D, Lokaj J. T- og B-lymfocytsubpopulationer og aktiverings-/differentieringsmarkører hos patienter med selektiv IgA-mangel. Clin Exp Immunol. 2007;147(2):249-54.

5. Lemarquis AL, Einarsdottir HK, Kristjansdottir RN, Jonsdottir I, Ludviksson BR. Overgangs B-celler og TLR9-responser er defekte i selektiv IgA-mangel. Front Immunol. 2018;9:909.

6. Celiksoy M, Yildiran A. En sammenligning af B-celleundergrupper i primære immundefekter skrider frem med antistofmangel-matchede raske børn. Allergol Immunopathol. 2016;44(4):331–40.

7. Marasco E, Farroni C, Cascioli S, Marcellini V, Scarsella M, Giorda E, et al. B-celleaktivering med CD40L eller CpG måler funktionen af ​​B-celle undergrupper og identificerer specifikke defekter hos immundefekte patienter. Eur J Immunol. 2017;47(1):131–43.

8. Lemarquis AL, Theodors F, Einarsdottir HK, Ludviksson BR. Kortlægning af signalveje knyttet til sIgAD afslører svækket IL-21-drevet STAT3 B-celleaktivering. Front Immunol. 2019;10:403.

9. Borte S, Pan-Hammarstrom Q, Liu C, Sack U, Borte M, Wagner U, et al. Interleukin-21 genopretter immunglobulinproduktion ex vivo hos patienter med almindelig variabel immundefekt og selektiv IgA-mangel. Blod. 2009;114(19):4089–98.

10. Abolhassani H, Kiaee F, Tavakol M, Chavoshzadeh Z, Mahdaviani SA, Momen T, et al. Fjerde opdatering om det iranske nationale register over primære immundefekter: integration af molekylær diagnose. J Clin Immunol. 2018;38(7):816–32.

11. Aghamohammadi A, Rezaei N, Yazdani R, Delavari S, Kutukculer N, Topyildiz E, et al. Konsensus Mellemøsten og Nordafrikas register om medfødte fejl i immunitet. J Clin Immunol. 2021;41(6):1339-51.

12. Seidel MG, Kindle G, Gathmann B, Quinti I, Buckland M, van Montfrans J, et al. Det europæiske samfund for immundefekter (ESID) registrerer arbejdsdefinitioner for den kliniske diagnose af medfødte immunitetsfejl. J Allergy Clin Immunol Pract. 2019;7(6):1763-70.

13. Shad TM, Yousef B, Amirifar P, Delavari S, Rae W, Kokhaei P, et al. Variable abnormiteter i T- og B-celle-undergrupper i ataksi telangiectasia. J Clin Immunol. 2020:1–13.

14. TofghiZavareh F, Mirshafey A, Yazdani R, Keshtkar AA, Abolhassani H, Bagheri Y, et al. Lymfocytundergrupper i korrelation med en klinisk profil hos CVID-patienter uden monogene defekter. Ekspert Rev Clin Immunol. 2021;17(9):1041-51.

15. Moeini Shad T, Yousef B, Amirifar P, Delavari S, Rae W, Kokhaei P, et al. Variable abnormiteter i T- og B-celle-undergrupper i ataksi telangiectasia. J Clin Immunol. 2021;41(1):76-88.

16. Azizi G, Mirshafey A, Abolhassani H, Yazdani R, Ghanavatinejad A, Noorbakhsh F, et al. Ubalancen mellem cirkulerende T-hjælperundergrupper og regulatoriske T-celler hos patienter med LRBA-mangel: Korrelation med sygdommens sværhedsgrad. J Cell Physiol. 2018;233(11):8767–77.

17. Azizi G, Mirshafey A, Abolhassani H, Yazdani R, Jafarnezhad-Ansariha F, Shaghaghi M, et al. Cirkulerende hjælper T-celle undergrupper og regulatoriske T-celler hos patienter med almindelig variabel immundefekt uden den kendte monogene sygdom. J Investig Allergol Clin Immunol. 2018;28(3):172–81.

18. Reisi M, Azizi G, Kiaee F, Masiha F, Shirzadi R, Momen T, et al. Evaluering af lungekomplikationer hos patienter med primære immundefekter. Eur Ann Allergy Clin Immunol. 2017;49(3):122.

19. Cerutti A, Chen K, Chorny A. Immunoglobulinresponser ved slimhindegrænsefladen. Annu Rev Immunol. 2011;29:273-93.

20. Bagheri Y, Babaha F, Falak R, Yazdani R, Azizi G, Sadri M, et al. IL-10 inducerer TGF-sekretion, TGF-receptor II-opregulering og IgA-sekretion i B-celler. Eur Cytokine Netw. 2019;30(3):107–13.

21. Ozkan H, Atlihan F, Genel F, Targan S, Gunvar T. IgA- og/eller IgG-underklassemangel hos børn med tilbagevendende luftvejsinfektioner og dets sammenhæng med kronisk lungeskade. J Investig Allergol Clin Immunol. 2005;15(1):69-74.

22. Tavakol M, Jamee M, Azizi G, Sadri H, Bagheri Y, Zaki-Dizaji M, et al. Diagnostisk tilgang til patienter med mistanke om primær immundefekt. Endocr Metab Immune Disord Drug Targets. 2020;20(2):157–71.

23. Resnick ES, Moshier EL, Godbold JH, Cunningham-Rundles C. Morbiditet og dødelighed i almindelig variabel immundefekt over 4 årtier. Blod. 2012;119(7):1650–7.

24. Yazdani R, Abolhassani H, Asgardoon M, Shaghaghi M, Modaresi M, Azizi G, et al. Infektiøse og ikke-infektiøse lungekomplikationer hos patienter med primære immundefekter. J Investig Allergol Clin Immunol. 2017;27(4):213–24.

25. Ahmadi M, Nouri M, Babaloo Z, Farzadi L, Ghasemzadeh A, Hamdi K, et al. Intravenøs immunglobulin (IVIG) behandling modulerer perifert blod Th17 og regulatoriske T-celler hos patienter med tilbagevendende abort: et ikke-randomiseret, åbent klinisk forsøg. Immunol Lett. 2017;192:12-9.

26. Yazdani R, Seify R, Ganjalikhani-Hakemi M, Abolhassani H, Eskandari N, Golsaz-Shirazi F, et al. Sammenligning af forskellige klassifikationer for patienter med almindelig variabel immundefekt (CVID) ved hjælp af måling af B-celle undergrupper. Allergol Immunopathol (Madr). 2017;45(2):183–92.

27. Aghamohammadi A, Abolhassani H, Rezaei N. Primære immundefektsygdomme i Iran: fortid, nutid og fremtid. Arch Iran Med. 2021. https://doi. org/10.34172/aim.2021.18.

28. Aghamohammadi A, Abolhassani H, Biglari M, Abolmaali S, Moazzami K, Tabatabaeiyan M, et al. Analyse af switched memory B-celler hos patienter med IgA-mangel. Int Arch Allergy Immunol. 2011;156(4):462–8.

29. Yousef B, Amirifar P, Delavari S, Rae W, Kokhaei P, Abolhassani H, et al. Variable abnormiteter i T- og B-celle-undergrupper i ataksi telangiectasia. J Clin Immunol. 2020. https://doi.org/10.1007/s10875-020-00881-9.

30. Abolhassani H, Gharib B, Shahinpour S, Masoom SN, Havaei A, Mirminachi B, et al. Autoimmunitet hos patienter med selektiv IgA-mangel. J Investig Allergol Clin Immunol. 2015;25(2):112–9.

31. Arkwright PD, Abinun M, Cant AJ. Autoimmunitet i humane primære immundefektsygdomme. Blod. 2002;99(8):2694-702.

32. Cerutti A, Cols M, Puga I. Marginal zone B-celler: fordele ved medfødte antistof-producerende lymfocytter. Nat Rev Immunol. 2013;13(2):118–32.

33. Bukowska-Straková K, Kowalczyk D, Baran J, Siedlar M, Kobylarz K, Zembala M. B-cellerummet i det perifere blod hos børn med forskellige typer af primær humoral immundefekt. Pediatr Res. 2009;66(1):28–34.

34. Karaman SBES, Gülez N, Genel F. Betydningen af ​​B-celle undergrupper hos patienter med uklassificeret hypogammaglobulinemi og associering med intravenøs immunoglobulinerstatningskrav. Iran J Immunol. 2018;15(1):1–13.

35. Patuzzo G, Mazzi F, Vella A, Ortolani R, Barbieri A, Tinazzi E, et al. Immunfænotypisk analyse af B-lymfocytter hos patienter med almindelig variabel immundefekt: identifikation af CD23 som en nyttig markør i definitionen af ​​sygdommen. ISRN Immunol. 2013. https://doi.org/10. 1155/2013/512527.

36. Patuzzo G, Barbieri A, Tinazzi E, Veneri D, Argentino G, Moretta F, et al. Autoimmunitet og infektion i almindelig variabel immundefekt (CVID). Autoimmun Rev. 2016;15(9):877–82.

37. Rakhmanov M, Keller B, Gutenberger S, Foerster C, Hoenig M, Driessen G, et al. Cirkulerende CD21low B-celler i almindelig variabel immundefekt ligner vævssøgende, medfødte B-celler. Proc Natl Acad Sci. 2009;106(32):13451–6.

38. Isnardi I, Ng YS, Menard L, Meyers G, Saadoun D, ​​Srdanovic I, et al. Komplementreceptor 2/CD21-humane naive B-celler indeholder for det meste autoreaktive ikke-responsive kloner. Blod. 2010;115(24):5026–36.

39. Sims GP, Ettinger R, Shirota Y, Yarboro CH, Illei GG, Lipsky PE. Identifikation og karakterisering af cirkulerende humane overgangs-B-celler. Blod. 2005;105(11):4390–8.

40. Lemarquis AL, Einarsdottir HK, Kristjansdottir RN, Jonsdottir I, Ludviksson BR. Overgangs B-celler og TLR9-responser er defekte i selektiv IgA-mangel. Front Immunol. 2018. https://doi.org/10.3389/fmmu.2018. 00909.

41. Willinger T, Freeman T, Hasegawa H, McMichael AJ, Callan MF. Molekylære signaturer adskiller human central hukommelse fra effektorhukommelse CD8 T-celleundergrupper. J Immunol. 2005;175(9):5895-903.

42. Martin MD, Badovinac VP. Definere hukommelse CD8 T-celle. Front Immunol. 2018;9:2692.

43. Nechvatalova J, Pavlik T, Litzman J, Vlkova M. Terminalt differentierede hukommelses-T-celler øges hos patienter med almindelig variabel immundefekt og selektiv IgA-mangel. Cent Eur J Immunol. 2017;42(3):244–51.

44. Khanmohammadi S, Shad TM, Delavari S, Shirmast P, Bagheri Y, Azizi G, et al. Evaluering af specifikke antistofresponser hos patienter med selektiv IgA-mangel og ataxia telangiectasia. Endocr Metab Immune Disord Drug Targets. 2022;22(6):640–9.

45. Cazac BB, Roes J. TGF-receptor kontrollerer B-cellerespons og induktion af IgA in vivo. Immunitet. 2000;13(4):443-51.

46. ​​Van Vlasselaer P, Punnonen J, De Vries J. Transformering af vækstfaktor-beta styrer IgA-skift i humane B-celler. J Immunol. 1992;148(7):2062-7.

47. Cerutti A, Rescigno M. Biologien af ​​intestinale immunoglobulin A-responser. Immunitet. 2008;28(6):740–50.

48. Soheili H, Abolhassani H, Arandi N, Khazaei HA, Shahinpour S, Hirbod Mobarakeh A, et al. Evaluering af naturlige regulatoriske T-celler i forsøgspersoner med selektiv IgA-mangel: fra senioridé til nye muligheder. Int Arch Allergy Immunol. 2013;160(2):208–14.

49. Yazdani R, Fatholahi M, Ganjalikhani-Hakemi M, Abolhassani H, Azizi G, Hamid KM, et al. Apoptoses rolle i almindelig variabel immundefekt og selektiv immunglobulin A-mangel. Mol Immunol. 2016;71:1-9.

50. McCusker C, Warrington R. Primær immundefekt. Alle Asth Clin Immun. 2011;7(Suppl 1):S11.

51. Marits P, Wikström AC, Popadic D, Winqvist O, Thunberg S. Evaluering af T- og B-lymfocytfunktion i klinisk praksis ved hjælp af et flowcytometri-baseret proliferationsassay. Clin Immunol. 2014;153(2):332–42.

52. TofghiZavareh F, Mirshafey A, Yazdani R, Keshtkar AA, Abolhassani H, Mahdaviani SA, et al. Immunfænotypisk og funktionel analyse af lymfocytundergrupper hos almindelige patienter med variabel immundefekt uden monogene defekter. Scand J Immunol. 2022;96(1):e13164.