Antioxidant Graphene Oxide Nanoribbon som et nyt blegemiddel hæmmer mikroftalmi-associeret transkriptionsfaktor-relateret melanogenese-mekanisme

Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

ABSTRAKT:I denmelaninsynteseprocessen spiller oxidative reaktioner en væsentlig rolle, og det er en god strategi at hæmme melaninproduktionen ved at reducere oxidativt stress. Fulleren og dets derivater, eller komplekserne, blev betragtet som stærke frie radikaler, og vi anvendte yderligere flerlags sp2nanocarbon for at opdagemelaninsyntesehæmmende mekanismer.I denne undersøgelse brugte vi nye nanomaterialer, såsom multiwalled carbon nanorør (MWCNT'er), korttype MWCNT'er, grafenoxid nanobånd (GONR'er) og korttype GONR'er, som antioxidative midler til at reguleremelaninproduktion. Resultaterne viste, at GONR'er havde bedre antioxidative evner i intracellulære og ekstracellulære oxidative stressanalyseplatforme end andre. Vi foreslog, at GONR'er har iltholdige funktionelle grupper. I 2',7'-dichlordihydrofluoresceindiacetat-assayet fandt vi ud af, at GONR kunne chelatere metalioner til opfangende iltarter. I det molekylære indsigtssyn observerede vi, at disse nanomaterialer nedregulerede melaninsyntesen ved at reducere mikrophthalmi-associerede transkriptionsfaktor-relaterede genudtryk, og der var lignende konsekvenser i proteinudtryk. For at opsummere er GONRs en potentiel agent som romanantioxidantog hudblegende kosmetologisk materiale.

cistanchehæmmer dannelsen af ​​melanin

1. INTRODUKTION

Hud er det organ, der dækker den ydre overflade af menneskekroppen. Da grænsefladen er i kontakt med miljøet, spiller hudlaget en vigtig rolle i at beskytte kroppen mod patogener, undgå for stort vandtab, regulere kropstemperaturen og så videre. Melanocytter vokser i basalmembranen af ​​hudens epidermis og tegner sig for 5 procent til 10 procent af celleindholdet. De er blevet karakteriseret som encellede "kirtler" med tynde, lange, streamer-lignende dendritter og forgrening. Melanocytter bevæger sig gennem de epidermale celler i deres umiddelbare nærhed og skaber en konstellation af epidermale celler omkring hver melanocyt. Der er mange interne og eksterne årsager til hudens aldring, og en sådan faktor er ultraviolet (UV) stråling fra sollys.1 Under UV-eksponering stiger niveauet af reaktive oxygenarter (ROS) i huden dramatisk, hvilket er kendt som oxidativt stress. Adskillige miljømæssige toksicitetsfaktorer øger også oxidativ stress på huden, såsom pesticider, kultetrachlorid, tungmetaller, aromatiske aminer og partikler 2.5(PM2.5).2 I den biokemiske mekanisme genereres de intracellulære oxidanter fra det ikke-enzymatiske system, der omdanner dem til ROS for at udløse melanogenesispathway.

Ud over ROS er der mange faktorer, der påvirker melaninproduktionen, herunder genekspression, inflammation, endokrine ændringer og pigmentoptagelse.1 I de første trin af melaninproduktionen spiller tyrosinase en rolle i at katalysere tyrosin til pheomelanin og eumelanin. Begge pigmenters fremstillingsmekanismer er ens, som omfatter L-tyrosin-hydroxylering til 3,4-dihydroxy-L-phenylalanin (L-DOPA) og L-DOPA-oxidation til dopaquinon. I næste trin oxideres dopamin af tyrosinase-relateret protein 1(TRP-1) og tyrosinase-relateret protein 2 (TRP-2)-inmelanosom, som reguleres af den mikrophthalmia-associerede transkriptionsfaktor (MITF) at dannemelanin.Til sidst modnes og udfældes melanin i stratumcorneum.4,5 Disse trænger ind i de tilstødende keratinocytter i basallaget og beskytter deres DNA mod eventuelle UV-inducerede mutationer eller modifikationer. Den modnedemelanininden for melanosomer overføres til keratinocytter6−9 og fører til sidst til en langvarig pigmentering. Lentiginer, fregner og brune/sorte pletter forårsager nogle gange sociale problemer hos mænd og kvinder. Blokering af oxidativ stress eller undertrykkelse af thetyrosinaseaktivitet er en strategi til at nedregulere syndromet med hyperpigmentering og dermatologiske lidelser.Antioxidanterhelbrede ROS-forårsagede hyperpigmenteringer og cellulær skade.10,11 Derfor har syntetiserede antioxidative forbindelser mange biofunktionelle anvendelser i hudplejeapplikationer.

Fulleren (C60), carbon nanorør (CNT), grafen og andgraphene nanoribbon (GNR) er fire slags sp2 nanocarbon, der forskes i vidt omfang rundt om i verden.12 Fulleren og dets derivater eller komplekser er i lang tid blevet betragtet som stærke frie radikaler. Yodoh et al. brugt vandopløseligt C60 som et beskyttende middel mod katabolisk stress-induceret degeneration. Injac et al. konkluderede, at C60(OH)24 er stærktantioxidantforbindelse, når det oxidative stress er for højt. Okuda et al. foreslog, at C60-komplekser kan forhindre NO-medieret celleskade.13,14 Tong et al. viste, at C60-komplekser kan være lovende kandidater til behandling af hjernerelaterede sygdomme forårsaget af øgede niveauer af superoxid. Faktisk identificerede et japansk firma fullerener med en stærk antioxidantaktivitet til kosmetisk brug i 2006. Lucente Schultz et al. demonstreret, at iltradikalopfangningsevnen af ​​funktionaliserede enkeltvæggede CNT'er (SWCNT'er) er næsten 40 gange større end dendritiske C60.15−19Fenoglio et al. observerede, at flervæggede CNT'er (MWCNT'er) besidder en bemærkelsesværdig radikalopfangende kapacitet i kontakt med en ekstern kilde til hydroxyl- eller superoxidradikaler.20 Beregninger af densitetsfunktionsteori afslørede også en model af SWCNT'er som frie radikaler. I 2004 demonstrerede Novoselov et al. først, at grafen udviste en stærk ambipolarelektrisk effekt og kunne være lovende til elektroniske applikationer.21 Herefter fortsatte de med at vise, at grafen har elektroniske egenskaber, der er karakteristiske for en 2D-gas af partikler beskrevet af Dirac-ligningen. 22,23 Siden disse to banebrydende artikler er der blevet givet mere og mere opmærksomhed til grafenbaseret forskning.24−30 Eksempelvis, Qiu et al. i 2014 viste, at grafenoxid og fålagsgrafen udviser betydeligeantioxidantaktivitet og kan beskytte forskellige biomolekylære molekyler mod oxidation.31Han et al. eksperimentelt demonstreret i 2007, at energigabet i GNR'er kan kontrolleres under litografiprocessen ved at ændre båndbredden.32 Blandt de fire nanocarboner har GNR'er fået mindst opmærksomhed. Så vidt vi ved, er der kun lidt forskning i antioxidantegenskaberne af grafenoxid-nanobånd (GONR'er).31,33 Derfor forberedte vi i denne undersøgelse omhyggeligt MWCNT'er, korte MWCNT'er, GONR'er og korte GONR'er og havde til formål at sammenligne deres antioxidantegenskaber og relaterede resultater systematisk. .

2. RESULTATER OG DISKUSSION

2.1. Morfologi af MWCNT'er og GONR'er.

Figure 1a shows the low- and high-magnification transmission electron microscopy (TEM) images of MWCNTs and short MWCNTs. Following acidic cutting under ultrasonication, the length of MWCNTs could be shortened from >10 μm til 2−3 μm. Samtidig blev det observeret, at salpetersyrebehandlingen gør de glatte røroverflader ru. Nogle hak og uregelmæssige former vises på billedet med høj forstørrelse. Yderligere opnår anvendelse af MWCNT'er og korte MWCNT-gennem mikrobølgereaktioner henholdsvis GONR og shortGONR. Vi illustrerede også TEM-billederne med lav og høj forstørrelse af GONR og korte GONR. På grund af den store langsgående udskæring og mindre horisontale skæring ser det ud til, at GONR'er var kortere end MWCNT'er. På den anden side viste billeder med høj forstørrelse større diametre, det vil sige 0.11−0,18 μm, af GONR end dem af MWCNT'er, hvilket indikerer, at udpakningsprocessen var vellykket. Tilsvarende udviste korte GONR'er en kortere længde og større diameter end korte MWCNT'er. I luftkompressoren i vores nye unzipping-proces var de tynde lagstrukturer af GONR'erne mindre end det, vi opnåede i den tidlige rapport for den samme mikrobølgeeffekt på 250 W, mens vi bibeholdt de tykkere centrale MWCNT'er.12 Dette betød, at en kerne-skal MWCNT/GONR-heterostruktur sandsynligvis ville vises i stedet for den fuldt udpakkede nanobåndstruktur gennem alle mikrobølgekræfter i den nye proces. For at sammenligne med den korte GONR i vores tidligere undersøgelser34 genererede den højere mikrobølgeeffekt flere hak på siden af ​​båndene og dannede ikke pæne glatte båndkanter. Bemærk, at vi brugte to forskellige slags Cu-gitre i figur 1a. For MWCNT'er og GONR'er med tilstrækkelig længde, blev Gu-gitteret med en lacey formvar stabiliseret med carbon (produktnr. 01881-F, Ted Pella, Inc., USA) brugt. De åbne huller i en blonde carbonfilm forhindrede et overlappende transmissionsbillede mellem nanocarboner og carbonfilmen. De mørkegrå netværk tilhører den blonde carbonfilm. Gu-gitteret med formvar stabiliseret med carbon (produktnr. 01800-F, Ted Pella, Inc., USA) var imidlertid nødvendigt for kort MWCNT og kort GONR. Dette skyldtes, at de store huller i den blonde carbonfilm forårsagede problemer med at holde den korte MWCNT og den korte GONR effektivt. Som illustreret i figur 1 er den lysegrå kontrast under de korte MWCNTs og korte GONR'er et let lag af kulstof. Dette kulstoflag stabiliserede formvar-filmen udsat for elektronstrålen via dens varme- og elektrisk ledende egenskaber.

2.2. Bindingskonfigurationer af MWCNT'er og GONR'er.

Raman-spektrene for de fire nanocarboner er vist i figur 1b; D-båndet af GONR'er var højere end det for MWCNT'er efter udpakningsprocessen. Dette blev tilskrevet det højere oxidationsniveau og et større antal kantstrukturer af GONR sammenlignet med MWCNT'er. Dette fænomen ligner også det, vi observerede i 2011.12 På grund af det høje grafitiseringsniveau havde G-båndet af MWCNT'er det laveste fuld-bredde-ved-halv-maksimumtal. ID/IG-forholdet mellem de fire nanocarboner var henholdsvis 0.076, 0,502, 0,483 og 0,700. Kort fortalt øgede den reducerede længde og overfladeoxidation defektniveauet og gjorde dermed ID/IG-forholdet højere. D′-toppen er til stede i alle defekte grafener og ses som et mål for kvalitet.35 Som illustreret i figur 1b bliver D′-toppen i de fire spektre mere fremtrædende enten efter skæring eller udpakning, hvilket tyder på, at de er destruktive processer, der introducerer mange skavanker. Figur 1c,d viser røntgenfotoelektronspektroskopispektrene for de fire nanocarboner. Tilsyneladende er D′-toppen den klareste for korte GONR'er. Som vist i figur 1c steg O-niveauet markant fra 7,6 procent (MWCNT'er) til 19,9 procent (GONR'er) på grund af KMnO4's stærke oxidationsevne i et surt miljø. På den anden side steg O-niveauet lidt med 0,8 procent fra MWCNT til de korte MWCNT'er. Det er vigtigt, at det højeste O-niveau er 38,3 procent for den korte GONR, hvilket antyder, at enderne af nanobåndene ville være nemmere at vedhæfte oxygenfunktionelle grupper end de plane sp2-overflader. Det større antal i fuld bredde-ved-halv-maksimum og skiftet til den høje bindingsenergi af C 1s-toppe efter udpakningsprocessen af ​​både MWCNT'er og korte MWCNT'er er illustreret i figur 1d. For grafenoxider er de dekonvoluterede toppe i den høje bindingsenergi side kunne tildeles C−C(CC), C−O,CO og COOH-bindinger.36 Vi karakteriserede GONR (200W) i 2013,37, og resultaterne lignede denne undersøgelsesresultater. Denne undersøgelse konkluderede fænomenerne fra Raman-spektrene, hvilket betyder, at flere iltholdige funktionelle grupper blev genereret under rør-til-bånd-transformationen (figur 2).

2.3. Antioxidative egenskaber af MWCNT'er og GONR'er.

2.3.1. Bestemmelse af 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl frie radikaler-fjernende aktivitetsassays.

1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) fri-radikal-opfangende aktivitet er enantioxidantplatform anvendt til at detektere den antioxidative kapacitet; resultaterne for de fire nanocarboner er beskrevet i tabel 2. I DPPH-analysen blev C-vitamin i en koncentration på 100 μM brugt som en positiv kontrol. For at teste de antioxidative aktiviteter af MWCNT'er, korte MWCNT'er, GONR'er og korte GONR'er blev doser på 1, 5 og 1 0 mg/L inkuberet i reaktionsopløsningen for at måle egenskaberne. MWCNT'er, korte MWCNT'er, GONR'er og korte GONR'er havde moderate hæmmende evner ved 1{{20}} mg/L (19,2 ±0,3, 12,1 ± 0,3, 26,8 ± 0,3 og 300. ± 0,4 procent), mens Chad-vitamin en lignende tilstand ved 100 μM (93,4 ± 0,1 procent) for undertrykkelsen.

2.3.2. Ion-chelaterende aktivitetsanalyse.

Inden for den oxidative stress-situation kan ferrozinen udvikle et kompleks med Fe2 plus, der skal måles kvantitativt. I nærvær af chelateringsmediatorer brydes komplekset, hvilket får ferro-ionerne til at reducere fra en mørkerød farve af Fe2 plus-komplekset. Vi brugte EDTA som den positive kontrol. Tabel 2 viser, at MWCNT'er, korte MWCNT'er, GONR'er og korte GONR'er havde chelateringsaktivitet ved 10 mg/L (29,2 ± {{10}},8, 28,7 ± 0. 7, 69,7 ± 0,6 og 68,9 ± 0,3 procent), mens den positive kontrol havde en lignende tilstand ved 100 μM (93,4 ± 0,1 procent).

2.3.3. Ferri-reducerende antioxidant effektmåling.

Den ferri-reducerende potentialeanalyse er en enkel og pålidelig test, der bruges til at kvantificere Fe(III)-ferricyanidkomplekssyntesen. I dette assay blev den reducerende kraft af de fire nano-carbonatomer, der producerer ferro-Fe(III)-TPTZ-komplekset, påvist ved ændringer i opløsningens farve fra gul til grøn og blå. Tabel 2 viser, at de reducerende kræfter af MWCNT, kort MWCNT, GONR og kort GONR var optisk densitet (OD) 1,11, 1,13, 1,15 og 1,11 ved 10 mg/L.

2.3.4. MWCNT'er og GONR'er hæmmer intracellulær ROSAakkumulation.

Mange rapporter har vist, at ROS ødelægger den strukturelle integritet af cellemembraner, herunder cellemembraner og kernemembraner for at føre til celleskade og tab af normal funktion.38−40 Derudover er ROS også en af ​​de vigtige faktorer til at katalysere tyrosinasedannende melanin, og hæmning af ROS-produktion er en god strategi til at nedreguleremelanin synthesis. In this study, we used the 2′,7′-dichlorodihydrofluorescein diacetate (DCFDA) staining assay to analyze the intracellular oxidative stress level in MWCNT and GONR treatment cells. Phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) induced oxidative stimulations in MWCNT and GONR groups and was used as a negative control.41 When the concentration of PMA was 20 ng/mL, it induced oxidative stress, increasing the value to 38%; after treating GONRs and MWCNTs, the levels of ROS were downregulated to the normal level. The data showed that both materials inhibited oxidative stress levels, and the anti-oxidative effect of GONRs was higher than that of MWCNTs (Figure 3). Table 1 shows a similar consequence list. We contended that there are three reasons for our new findings: first, the order of solubility of these materials was as follows: short GONRs > GONRs >korte MWCNT'er > MWCNT'er, hvilket betyder, at kontaktområdet for korte GONR'er var det største, så det var overlegent til ROSscavenging. For det andet var GONR'er og MWCNT'er sp2-kulstofstrukturer, der kunne ødelægge ROS-elektricitet gennem adduktdannelse eller elektronoverførsel.42 Vi fandt ud af, atantioxidant virkningeraf nanobåndstrukturerne var bedre end nanorørstrukturerne, så nanobånd gør det lettere at overføre elektroner end nanorør. Endelig, i figur 1b, observerer vi, at GONR sp2-carbonstedet indeholdt flere iltfunktionelle grupper end MWCNT'er, carboxylsyregrupperne kunne chelatere metalioner, og hydroxylgrupperne kunne være en H-donor til at opfange ROS og hæmme melaninproduktion.

2.4. Cytotoksicitet af MWCNT'er og GONR'er behandlet i humane dermale fibroblastceller.

{{0}}(4,5-dimethylth-triazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazoliumbromid (MTT)-metoden blev anvendt til at evaluere den cytotoksiske egenskaber af GONR'er på Hs68-celler (figur 3), og celler blev dyrket i forskellige doser på 1, 5 og 10 ug/ml. Vi undersøgte, at MWCNT's cellelevedygtighed var 100,7 ± 3,7, 99,8 ± 4,9 og 94,1 ± 4,7 procent ved koncentrationer på henholdsvis 1, 5 og 10 mg/L; levedygtighed for den korte MWCNT blev beregnet i samme rækkefølge og blev fundet at være 93,9 ± 2,2, 86,4 ± 3,0 og 98,9 ± 2,1 procent. Vi observerede, at B16-F10-cellerne blev inkuberet i høje koncentrationer, og celleoverlevelsen af ​​Hs68-celler var mere end 80 procent, hvilket tyder på, at MWCNT og korte MWCNTh ikke havde nogen toksisk effekt på humane dermale fibroblastceller. Celleviabiliteten af ​​GONR og kort GONR var 86,24 ± 2,1, 90,87± 3,5, 88,58 ± 2,5, 89,03 ± 3,6, 90,71 ± 2,8 og 90,64 ±2,5 procent. Det er også påpeget i figur 4a, at GONR og shortGONR ikke havde en mærkbar cytotoksisk virkning på HS68-celler. I tidligere rapporter kunne brugen af ​​utestede nanomaterialer til kosmetiske formål betragtes som tvivlsom,43,44, og det skyldtes normalt angrebet af DNA, efter at nanopartiklerne centrerede cellerne. Efter cytotoksicitetstesten fandt vi ud af, at vores materialer ikke forårsagede toksicitet for normale hudceller. Vi konkluderede, at efter at nanomaterialer trængte ind i cellerne, hæmmer nanomaterialerne bare melaninproduktionen ved at mindske det oxidative stress og chelaterende metalioner og ikke beskadiger mitokondrierne eller DNA'et, hvilket betyder, at MWCNT'er og GONR'er var sikre at blive brugt.

2.5. To typer MWCNT'er og GONR'er i B16−F10-cellulær tyrosinaseaktivitet og melaninindhold.

I denmelaninsyntesevejen, spiller tyrosinase en afgørende rolle.Tyrosinase oxiderer og danner eumelanin og pheomelaningennem en række biokemiske reaktioner. For at bestemme, om GONR'er og MWCNT'er hæmmer aktiviteten af ​​tyrosinase og forårsager et fald i melaninproduktionen, analyserede vi tyrosinaseaktiviteten i B16-F10-celler. Vi fandt, at MWCNT'er og korte MWCNT'er hæmmede tyrosinaseaktivitet med cirka 17,1 procent og 23 procent ved 10 mg/L. GONR'er og korte GONR'er havde en bedre effekt ved at undertrykke tyrosinaseaktiviteten ved de samme koncentrationer sammenlignet med en anden GONR. De var også på en dosisafhængig måde og hæmmede 49,8 procent og 44,7 procent af thetyrosinaseaktiviteten, som vist i figur 4b.

Melaniner et uundværligt pigment i den menneskelige krop, men overekspression af melanin udløser ofte en række sygdomme. I tidligere undersøgelser har Xiao et al. brugte et lignende materiale, Radical Sponge, en fullerennanopartikel, som et anti-melaninmiddel.45 Der var nogle gode resultater; omkring 20 procent afmelaninproduktionen kunne hæmmes. For at forbedre dets effektivitet forbedrede vi yderligere testmaterialet til at måle inhiberingshastigheden af ​​melanin og dets molekylære mekanisme, som vist i figur 4c og 5. MWCNT'er og korte MWCNT'er reducerede melaninindholdet med 17,6 ± 5,5 og 13,2 ± 0. 2 procent ved 10 mg/L og på en dosisafhængig måde. GONR'er og korte GONR'er nedregulerede kraftigt værdierne til 32,0 ± 2,3 og 35,3 ± 3,4 procent ved 10 mg/L. De eksperimentelle resultater tydede på, at alle fire typer kunne hæmme syntesen af ​​melanin, og GONR'er havde en stærkere effekt. På den anden side har vi også observeret, at den korte GONR har en bedre effekt til at hæmme melaninproduktionen. Vi konkluderer, at de korte GONR'er har mere funktionelle grupper og effektivt kan forhindre metalion-katalyseret tyrosinase, hvilket yderligere hæmmer produktionen af ​​melanin (figur 2). I tabel 1 observerer vi, at indsatsen af ​​metalion-chelaterende kort type er højere end den normale type; dette betyder, at disse korte GONR'er potentielt kan anvendes i det kosmetiske område som hudplejemidler.

2.6. Mekanisme af MWCNT'er og GONR'er hæmmede B16-F10 cellulært melaninindhold.

Celler reagerer på eksternt oxidativt stress ved at regulere proteinekspression. B16−F10-celler øger c-myc-genekspressionen og opregulerer AMPK for at reducere oxidative niveauer,46 og i dette arbejde er MITF en specifik transkriptionsfaktor af tyrosinase til at regulere den molekylære melaninsyntese signalvej.47−49 I figur 5a, MWCNT'er og GONR'er nedregulere den mikroftalmi-associerede transkriptionsfaktor ved at reducere det oxidative stress, og derefter blev downstream-genet TRP-1 og TRP-2 også nedreguleret. For proteinniveauet blev der fundet et lignende fænomen, hvor MWCNT'er og GONR'er nedregulerede den MITF-relaterede melanogenese-vej og derefter til sidst reduceredemelaninindhold (figur 5b).

cistanche bodybuilding

3. EKSPERIMENTELLE MATERIALER OG METODER

3.1. Udarbejdelse af MWCNT'er og GONR'er.

Den relevante proces til fremstilling af GONR'er blev rapporteret i et tidligere papir.12MWCNT (0.05 g) blev suspenderet i 9:1 H2SO4/H3PO4 og behandlet med en mikrobølgereaktor (CEM-Discover) med strømindstillingen ved 250 W i 2 min. Efter tilsætning af KMnO4 (0,25 g) til opløsningerne blev opløsningerne behandlet med den samme mikrobølgeeffekt ved 65 grader i 4 min. Her bruges luftkompressoren til at styre temperaturen på mikrobølgereaktoren under processen. Mikrobølgeeffekten blev sat til 250 W i de indledende tests.

3.2. Udarbejdelse af korte MWCNT'er og korte GONR'er.

Den relevante proces til fremstilling af korte GONR'er blev rapporteret i vores tidligere papir.34 Den sure behandlingstid blev valgt til 8 timer. Mikrobølgeeffekten blev indstillet til 250 W, hvilket er det samme som for at få GONR'er.

3.3. DPPH Radical Scavenging Activity.

DPPH blev ofte brugt til at bestemme prøvernes opfangningskapacitet og antioxidationsegenskaberne.50 DPPH er et lilla reagens, der ændrer farven fra lilla til gult, hvis de frie radikaler overføres til analytten. Positive antioxidative prøver med passende koncentrationer blev tilsat til opløsningen, og prøverne blev analyseret ved 517 nm i 30 min. Vi brugte procenterne af den resterende DPPH udover testprøverne til at måle antallet afantioxidanterkræves for at reducere de tidligere DPPH-radikaler. Vitamin C ved 100 μM blev brugt som den positive kontrol. Opfangningsaktiviteten (procent) blev målt som

3.4. Metal-chelaterende aktivitet.

Metalionen er den faktor, der forårsager lipidoverdreven oxidation, og Fe2 plus er en af ​​de mest indflydelsesrige ioner.50 Forskellige koncentrationer af nanobiomaterialer (1 μL) blev fyldt i en 96-brøndplade, som indeholdt 2mM FeCl2·4H2O ( 10 μL), og derefter fyldt i ferrozin (5 mM, 20 μL). Blandingen blev fuldstændig blandet med 69 μLmenthol og holdt ved stuetemperatur i 10 min. Derefter blev prøvereaktionsopløsningen observeret ved 562 nm. EDTA blev brugt som en positiv kontrol ved 100 μM, og beregningsformlen for metalchelateringsaktivitet var baseret på ligning 1.

3.5. Reducerende kraft.

Beregningen af ​​at reducere kraften er baseret på en tidligere undersøgelse.50 Først blev 2,5 μL grafenmaterialer blandet med PBS-buffer (67 mM, pH 6,8) og K3Fe(CN)6(2,5 μL, 20 procent) og derefter inkuberet ved 50 grader i 20 grader. min. Derefter blev 10 procent trichloreddikesyre (160 μL) blandet med disse midler ved 300 g centrifugeret i 20 minutter. Absorptionslængden blev bestemt ved 700 nm efter at være blevet blandet med 25 μL FeCl3 (2 procent). Butyleret hydroxyanisol (BHA) blev anvendt ved 100 μM.

3.6. Celleproliferationsundersøgelser.

Den humane dermalfibroblastcellelinje HS68 blev anvendt til at analysere forholdet mellem celleproliferation. HS68 blev inkuberet i Dulbeccos modificerede Eagle-medium (DMEM) indeholdende 10 procent føtalt bovint serum og 1 procent penicillin og streptomycin blandet.50,51 Efter at være blevet behandlet med forskellige koncentrationer af prøver påførte vi MTT for at påvise celleproliferationsforholdet. 8000 celler blev udsået i 96-brøndsplader og behandlet med prøver i 24 timer. Supernatantopløsningen blev fjernet, og vi brugte MTT-opløsningen til dyrkning i 2 timer ved 37 grader. Efter inkubation blev de MTT-holdige medier fjernet og opløst med dimethylsulfoxid (DMSO). Opløsningen blev aflæst ved OD 590nm, og hastigheden blev beregnet ved eq 1.

3.7. Vurdering af cellulært melaninindhold.

Vi brugte en metode med mindre modifikationer baseret på det foregående assay.52,53 Cellepelleter af B16−F10 fra Bioresource Collection and Research Center (BCRC, CRL 6323, Hsinchu, Taiwan) blev opløst i en blanding af 2,0 N NaOH og 10 procent DMSO. Prøven blev efterfølgende opvarmet i 1 time ved 90 grader og centrifugeret ved 10,000g i yderligere 10 minutter for at opnå den klarede supernatant. Detmelanintælling blev bestemt ved at overvåge OD af supernatanten ved 475 nm.

3.8. B16−F10 Cellulær tyrosinaseaktivitet.

For den cellulære B16−F10-tyrosinaseaktivitet henviste vi til det tidligere arbejde med nogle modifikationer.50 Celler blev dyrket i 12-brøndsplader med 105 celler i hver brønd. Efter behandlinger med prøver blev celler lyseret i 1 procent Triton X-100/PBS og 2 mML-tyrosin (50 μL) i 3 timer. Efter inkubationen fjernede vi mediet og aflæste absorbansen ved OD 590 nm. Formlen for thetyrosinaseaktivitet blev beregnet ved ligning 1.

3.9. Påvisning af ROS ved DCFDA-farvning.

Med henvisning til den tidligere undersøgelse,54 1.2 1.105 B16−F10-celler blev udsået i6-brøndplader og behandlet med forskellige koncentrationer af prøver. Celler blev suspenderet i PBS og derefter fyldt med DCFDA (5 μM) i ikke-phenolrødt DMEM i 30 minutter ved 37 grader. Flowcytometeret (Guava, Merck, Tyskland) blev brugt til at detektere det fluorescerende signal fra DCFDA. Excitations- og emissionsbølgelængder af DCFDA var henholdsvis 488 og 535 nm.

3.10. Kvantitativ realtids polymerasekædereaktion.

Vi fulgte metoderne ifølge Lin et al. (2018).1 Kvantitativ revers transkription-polymerase-kædereaktion i realtid (qRT-PCR) bestod af en eksklusiv primer-probe til at generere fluorescens. Den brugte en fluorescensdetektionsteknik, der registrerer hver cyklus ved hjælp af et 7500 qRT-PCRSystem (Applied Biosystems, USA). Den detekterede cyklussen baseret på mængden af ​​frigivet fluorescens, og derefter blev produktet af hver cyklus beregnet for det genererede indhold, hvilket resulterede i opnåelse af kvantitative realtidsformål. Trizol (Invitrogen, USA) blev brugt til at ekstrahere et komplet RNA fra lungevævet i henhold til anvisningen givet af producenten. Efterfølgende blev et revers transkriptionskit (Takara, Japan) brugt til at generere DNA. I qRT-PCR'en under anvendelse af primere, anført i tabel 1, blev prøven først opvarmet til dannelse af en enkelt DNA-streng; derefter fandt en primerbinding sted til dannelse af et dobbeltstrenget DNA (dsDNA), hvorefter SYBR Green dsDNA blev kombineret, hvortil SYBR green plus reagenskit (Roche,Basel, Swiss) blev brugt, hvilket resulterede i frigivelse af fluorescens. Det resulterende produkt blev ført gennem et fluorescensdetektionssystem. Detektionen af ​​fluorescerende signaler fandt sted under forlængelses- eller annealingsfasen af ​​hver cyklus; efter detektionen blev prøveindholdet skubbet tilbage af de detekterede fluorescensintensiteter.55 Ekspressionsniveauerne for målgener blev normaliseret til -tubulinniveauer ved hjælp af 2−ΔΔCt-metoden .

cistanche blegende effekt på huden til anti-oxidation

3.11. Western Blot Test.

B16-F10-celler blev lyseret ved 4 grader natten over med en radioimmunpræcipitationsassaybuffer (Thermo Scientific Co., USA), som indeholder proteaseinhibitorer. Bicinchoninsyreproteinassay-kittet (BCA,Sigma-Aldrich Corp., USA) blev brugt til at kvantificere proteinmængden. Prøveproteiner blev separeret på 10 procent natriumdodecylsulfat-polyacrylamidgel og overført til en polyvinylidendifluorid (PVDF) membran (Pall LifeScience, Ann Arbor, MI, USA). PVDF-membranen blev blokeret med en blokerende buffer (Thermo Scientific) i 1 time og inkuberet med det specifikke primære antistof natten over ved 4 grader. Dernæst blev membranen vasket med Tris-pufret saltvand Tween 20-buffer to gange og inkuberet med sekundære antistoffer i 1,5 time. Derefter blev membranen dyppet i kemiluminescensdetektionsreagenser (Thermo Scientific) og analyseret af en MiniChemi Chemiluminescenceimager (Beijing Sage Creation Science, Kina). Kilder til antistoffer omfattede kanin anti-MITF, kanin anti-TRP-1, kanin anti-TRP-2 og -actin (Thermo Scientific).

3.12. Materialeanalyse.

TEM (JEOL JEM-1230, 100 kV) blev brugt til at observere morfologien af ​​nanocarbonet. Amicro Raman-spektrometer (PTT, RAMaker) blev anvendt for at kontrollere resonanstilstandene for nanocarbonet. Røntgenfotoelektronspektroskopi (XPS, Kratos Axis Ultra DLD) målinger blev også udført for at bestemme sammensætningsanalysen.

3.13. Statistisk analyse.

Alle prøverne og standardeksperimenterne blev gentaget mindst tre gange. Vi anvendte Elevens t-test til at sammenligne og udtrykke gennemsnittet af temaværdier ± standardafvigelse statistiskY.

4 KONKLUSIONER

For at opsummere observerede vi, at den korte GONR var potentielt materiale til hudplejeproduktion på grund af dets multiple biofunktionelle egenskaber (figur 6). Resultaterne viste, at nanocarbonet spillede en rolle som en ekstracellulær og intracellulær antioxidant. I mellemtiden hæmmede nanocarbonet tyrosinaseaktiviteten ogmelaninindhold og forårsagede ikke nogen alvorlig skade på pigmentceller. Dette arbejde etablerede anti-melanogenese funktionerne af fire typer af nanocarbon; fremtidige undersøgelser vil blive undersøgt mekanismen af ​​disse forbindelser på specifikke gen- og proteinudtryk relateret til melaninmodning, transport og akkumulering.

cistanche bienfaits

REFERENCER

(1) Lin, L.-C.; Chen, C.-Y.; Kuo, C.-H.; Lin, Y.-S.; Hwang, BH; Wang, TK; Kuo, Y.-H.; Wang, H.-MD 36H: A Novel Potent Inhibitor for Antimelanogenesis. Oxid. Med. Celle. Levetid 2018,2018, 6354972.

(2) Li, R.; Qiu, X.; Xu, F.; Lin, Y.; Fang, Y.; Zhu, T. Makrofagemedierede virkninger af luftbårne fine partikler (PM2.5) på hepatocytinsulinresistens in vitro. ACS Omega 2016, 1, 736−743.

(3) Dig, Y.-J.; Wu, P.-Y.; Liu, Y.-J.; Hou, C.-W.; Wu, C.-S.; Wen, K.-C.; Lin, C.-Y.; Chiang, H.-M. Sesamol hæmmet ultraviolet stråling-induceret hyperpigmentering og skade i C57BL/6 musehud.Antioxidanter 2019, 8, 207.

(4) Hseu, Y.-C.; Cheng, K.-C.; Lin, Y.-C.; Chen, C.-Y.; Chou, H.-Y.; Ma, D.-L.; Leung, C.-H.; Wen, Z.-H.; Wang, H.-M. Synergistiske effekter af Linderanolide B kombineret med Arbutin, PTU eller Kojic Acid på tyrosinasehæmning. Curr. Pharm. Biotechnol. 2015, 16, 1120−1126.

(5) Bae-Harboe, Y.-SC; Park, H.-Y. Tyrosinase: et centralt regulerende protein til hudpigmentering. J. Invest. Dermatol. 2012, 132,2678−2680.

(6) Rezapour-Lactose, A.; Yeganeh, H.; Ostad, SN; Gharibi, R.; Mazaheri, Z.; Ai, J. Termoresponsiv polyurethan/siloxanmembran til sårforbinding og cellepladetransplantation: In vitro og in vivo undersøgelser. Mater. Sci. Eng., C 2016, 69, 804-814.

(7) Boo, YC p-Coumaric Acid as An Active Ingredient inCosmetics: A Review Focusing on its antimelanogenic effects.Antioxidants 2019, 8, 275.

(8) Awan, F.; Islam, MS; Kan.; Yang, C.; Shi, Z.; Berry, RM;Tam, KC Cellulose Nanocrystal-ZnO nanohybrider til kontrol af fotokatalytisk aktivitet og UV-beskyttelse i kosmetisk formulering.ACS Omega 2018, 3, 12403−12411.

(9) Cristina Nekritto, M.; Valdez, C.; Sharma, J.; Rosenberg, C.; Selassie, CR Vækstinhibering og DNA-skader induceret af X-phenoler i gær: En kvantitativ struktur-aktivitetsrelationstudie. ACS Omega 2017, 2, 8568−8579.

(10) Hamelin, M.; Hemmati, S.; Varma, K.; Veisi, H. Greensynthesis, den antibakterielle, antioxidante og cytotoksiske virkning af goldnanopartikler ved hjælp af Pistacia Atlantica-ekstrakt. J. Taiwan Inst. Chem. Eng. 2018, 93, 21-30.

(11) Meneses-Gutierrez, CL; Herna ́ ndez-Damia ́ n, J.; Pedraza- ́Chaverri, J.; Guerrero-Legarreta, I.; Tellez, DI; Jaramillo-Flores, M. ́E. Antioxidantkapacitet og cytotoksiske virkninger af katekiner og resveratrololigomerer produceret ved enzymatisk oxidation mod T24Humane urinblærekræftceller. Antioxidanter 2019, 8, 214.

(12) Sun, C.-L.; Chang, C.-T.; Lee, H.-H.; Zhou, J.; Wang, J.; Sham,T.-K.; Pong, W.-F. Mikrobølge-assisteret syntese af en kerne-skal MWCNT/GONR heterostruktur til elektrokemisk påvisning af ascorbinsyre, dopamin og urinsyre. ACS Nano 2011, 5, 7788−7795.

(13) Lin, T.-E.; Lu, Y.-J.; Sun, C.-L.; Pick, H.; Chen, J.-P.; Lesch, A.; Girault, HH Bløde elektrokemiske sonder til kortlægning af fordelingen af ​​biomarkører og injicerede nanomaterialer i Animalland Human Tissues. Angew. Chem., Int. Ed. Engl. 2017, 56, 16498−16502.

(14) Okuda, K.; Hirota, T.; Hirobe, M.; Nagano, T.; Mochizuki, M.; Nishino, T. Syntese af forskellige vandopløselige G60-derivater og deres superoxid-dæmpende aktivitet. Fulleren Sci. Teknol. 2000, 8.127−142.

(15) Lucente-Schultz, RM; Moore, VC; Leonard, AD; Pris, BK; Kosynkin, DV; Lu, M.; Partha, R.; Conyers, JL; Tour, JMANtioxidant enkeltvæggede kulstof nanorør. J. Am. Chem. Soc. 2009,131, 3934−3941.

(16) Injac, R.; Perse, M.; Obermajer, N.; Djordjevic-Milic, V.;Prijatelj, M.; Djordjevic, A.; Cerar, A.; Strukelj, B. Potentielle hepatobeskyttende virkninger af fulleren C60(OH)24 i doxorubicin-induceret hepatotoksicitet hos rotter med brystkarcinomer. Biomaterialer 2008, 29, 3451−3460.

(17) Tong, J.; Zimmerman, MC; Li, S.; Yi, X.; Luxenhofer, R.; Jordan, R.; Kabanov, AV Neuronal optagelse og intracellulær superoxidopfangning af fulleren (C60)-poly(2-oxazolin)snanoformulering. Biomaterialer 2011, 32, 3654−3665.

(18) Yugioh, K.; Shishido, K.; Murayama, H.; Yano, M.; Matsubayashi, K.; Takada, H.; Nakamura, H.; Masuko, K.; Kato, T.;Nishioka, K. Vandopløselig C60 fulleren forhindrer degeneration af ledbrusk ved slidgigt via nedregulering af chondrocytkatabolisk aktivitet og hæmning af bruskdegeneration under sygdomsudvikling. Gigt Rheum. 2007, 56, 3307-3318.

(19) Takada, H.; Mimura, H.; Xiao, L.; Islam, RM; Matsubayashi,K.; Ito, S.; Miwa, N. Innovativ antioxidant: Fulleren (INCI #:7587) er som "radikal svamp" på huden. Dens høje niveau af sikkerhed, stabilitet og potentiale som førsteklasses anti-aldrings- og blegningskosmetisk ingrediens. Fullerenes, Nanorør, Carbon Nanostruct.2006, 14, 335−341.

(20) Fenoglio, I.; Greco, G.; Tomatis, M.; Muller, J.; Raymundo Piñero, E.; Beguin, F.; Fonseca, A.; Nagy, JB; Lison, D.; Fubini, B. ́Strukturelle defekter spiller en stor rolle i den akutte lungetoksicitet af flervæggede kulstofnanorør: fysisk-kemiske aspekter. Chem. Res.Toxicol. 2008, 21, 1690−1697.

(21) Novoselov, KS; Geim, AK; Morozov, SV; Jiang, D.; Zhang, Y.; Dubonos, SV; Grigorieva, IV; Firsov, AA Elektrisk felteffekt i atomisk tynde kulstoffilm. Science 2004, 306, 666−669.

(22) Novoselov, KS; Geim, AK; Morozov, SV; Jiang, D.; Katsnelson, MI; Grigorieva, IV; Dubonos, SV; Firsov, AA Todimensionel gas af masseløse Dirac-fermioner i grafen. Natur 2005,438, 197−200.

(23) Zhou, X.; Wei, Y.; Han, Q.; Boey, F.; Zhang, Q.; Zhang, H. Reducerede grafenoxidfilm brugt som matrix af MALDI-TOF-MS til påvisning af octachlordibenzo-p-dioxin. Chem. Commun. 2010, 46,6974−6976.

(24) Zhao, W.; Fan, S.; Xiao, N.; Liu, D.; Tay, YY; Yu, C.; Sim, D.; Huang, HH; Zhang, Q.; Boey, F.; Ma, X.; Zhang, H.; Yan, Q. Fleksibelt nanorørpapir med forbedrede termoelektriske egenskaber.Energy Environ. Sci. 2012, 5, 5364-5369.

(25) Wang, Z.; Wu, S.; Zhang, J.; Chen, P.; Yang, G.; Zhou, X.; Zhang, Q.; Yan, Q.; Zhang, H. Sammenlignende undersøgelser af enkeltlagsreducerede grafenoxidfilm opnået ved elektrokemisk reduktion og hydrazindampreduktion. Nanoskala Res. Lett. 2012, 7, 161.

(26) Liang, X.; Fu, Z.; Chou, SY Grafentransistorer fremstillet via overførselsudskrivning i enhedens aktive områder på den store wafer. Nano Lett.2007, 7, 3840−3844.

(27) Sun, X.; Liu, Z.; Welsher, K.; Robinson, JT; Goodwin, A.; Zaric, S.; Dai, H. Nano-grafenoxid til cellulær billeddannelse og lægemiddellevering. Nano Res. 2008, 1, 203-212.

(28) Chen, W.; Xiao, P.; Chen, H.; Zhang, H.; Zhang, Q.; Chen, Y. Polymeric Graphene Bulk Materials with a 3D Cross-Linked Monolithic Graphene Network. Adv. Mater. 2019, 31, 1802403.

(29) Chen, D.; Feng, H.; Li, J. Grafenoxid: forberedelse, funktionalisering og elektrokemiske anvendelser. Chem. Rev. 2012,112, 6027−6053.

(30) Ranjan, P.; Agrawal, S.; Sinha, A.; Rao, TR; Balakrishnan, J.; Thakur, AD En lavpris ikke-eksplosiv syntese af grafenoxid til skalerbare applikationer. Sci. Rep. 2018, 8, 12007.

(31) Qiu, Y.; Wang, Z.; Owens, ACE; Kulaots, I.; Chen, Y.; Kane, AB; Hurt, RH Antioxidantkemi af grafenbaserede materialer og dens rolle i oxidationsbeskyttelsesteknologi. Nanoskala 2014, 6,11744−11755.

(32) Han, MY; Ozyilmaz, B.; Zhang, Y.; Kim, P. Energibånd-gapengineering af grafen nanobånd. Phys. Rev. Lett. 2007, 98,206805.

(33) Souza, JP; Mansano, AS; Venturini, FP; Santos, F.; Zucolotto, V. Antioxidantmetabolisme af zebrafisk efter sub-lethal eksponering for grafenoxid og genopretning. Fish Physiol. Biochem. 2019,45, 1289−1297.

(34) Sun, C.-L.; Su, C.-H.; Wu, J.-J. Syntese af korte grafenoxid-nanobånd til forbedret biomarkørdetektion af Parkinsons sygdom. Biosens. Bioelektron. 2015, 67, 327-333.

(35) King, AAK; Davies, BR; Noorbehesht, N.; Newman, P.; Church, TL; Harris, AT; Razal, JM; Minett, AI En ny RamanMetric til karakterisering af grafenoxid og dets derivater.Sci. Rep. 2016, 6, 19491.

(36) Hsu, H.-C.; vist, I.; Wei, H.-Y.; Chang, Y.-C.; Du, H.-Y.; Lin, Y.-G.; Tseng, C.-A.; Wang, C.-H.; Chen, L.-C.; Lin, Y.-C.; Chen, K.-H. Grafenoxid som en lovende fotokatalysator for omdannelse af CO2 til methanol. Nanoskala 2013, 5, 262−268.

(37) Lin, L.-Y.; Yeh, M.-H.; Tsai, J.-T.; Huang, Y.-H.; Sun, C.-L.; Ho, K.-C. En ny kerne-skal multi-vægget carbon nanorør @ grapheneoxide nanoribbon heterostruktur som et potentielt superkondensatormateriale. J. Mater. Chem. 2013, 1, 11237−11245.

(38) Yin, H.; Xu, L.; Porter, NA Frie radikaler lipidperoxidation: mekanismer og analyse. Chem. rev. 2011, 111, 5944−5972.

(39) Tung, C.-H.; Chang, J.-H.; Hsieh, Y.-H.; Hsu, J.-C.; Ellis, AV; Liu, W.-C.; Yan, R.-H. Sammenligning af hydroxylradikaludbytter mellem foto- og elektrokatalyserede vandbehandlinger. J. Taiwan Inst. Chem. Eng. 2014, 45, 1649−1654.

(40) Ohshima, H.; Yoshie, Y.; Auriol, S.; Gilbert, I. Flavonoiders antioxidante og pro-oxidante virkninger: virkninger på DNA-skader induceret af nitrogenoxid, peroxynitrit og nitroxylanion. Fri radikal Biol. Med.1998, 25, 1057−1065.

(41) Chou, H.-Y.; Lee, C.; Pan, J.-L.; Wen, Z.-H.; Huang, S.-H.; Lan, C.-W.; Liu, W.-T.; Time, T.-C.; Hseu, Y.-C.; Hwang, B.; Cheng, K.-C.; Wang, H.-M. Beriget astaxanthinekstrakt fra HaematococcusPluvialis øger vækstfaktorsekretioner for at øge celleproliferation og inducerer MMP1-nedbrydning for at forbedre kollagenproduktionen i humane dermale fibroblaster. Int. J. Mol. Sci. 2016, 17.955.

(42) Bitner, BR; Marcano, DC; Berlin, JM; Fabian, RH; Cherian, L.; Culver, JC; Dickinson, ME; Robertson, CS; Pauller,RG; Kent, TA; Tour, JM Antioxidant kulstofpartikler forbedrer cerebrovaskulær dysfunktion efter traumatisk hjerneskade. ACSNano 2012, 6, 8007−8014.

(43) Liao, C.; Li, Y.; Tjong, S. Graphene nanomaterialer: syntese, biokompatibilitet og cytotoksicitet. Int. J. Mol. Sci. 2018, 19, 3564.

(44) Kong, H.; Wang, L.; Zhu, Y.; Huang, Q.; Fan, C. Kulturmedium-associeret fysisk-kemiske indsigter om cytotoksiciteten af ​​kulstof nanomaterialer. Chem. Res. Toxicol. 2015, 28, 290-295.

(45) Xiao, L.; Matsubayashi, K.; Miwa, N. Inhiberende virkning af det vandopløselige polymerindpakkede derivat af fulleren på UVA-induceret melanogenese via nedregulering af tyrosinaseekspression umenneskelige melanocytter og hudvæv. Arch. Dermatol. Res. 2007, 299.245-257.

(46) Kfoury, A.; Amaro, M.; Collet, C.; Sordet-Dessimoz, J.; Giner, MP; Christen, S.; Moco, S.; Leleu, M.; Leval, L.; Koch, U.; Trump, K.; Sakamoto, K.; Beermann, F.; Radtke, F. AMPK fremmer overlevelse af c-Myc-positive melanomceller ved at undertrykke oxidativt stress. EMBO J. 2018, 37, nr. e97673.

(47) Hseu, Y.-C.; Cheng, K.-C.; Lin, Y.-C.; Chen, C.-Y.; Chou, H.-Y.; Ma, D.-L.; Leung, C.-H.; Wen, Z.-H.; Wang, H.-M. Synergistiske virkninger af Linderanolide B kombineret med Arbutin, PTU eller KojicAcid på tyrosinasehæmning. Curr. Pharm. Biotechnol. 2015, 16,1120−1126.

(48) Lee, S.; Kim, J.; Sang, H.; Seok, J.; Hong, S.; Boo, Y. Luteolin7-sulfat dæmper melaninsyntese gennem hæmning af CREB og MITF-medieret tyrosinaseekspression. Antioxidanter 2019, 8, 87.

(49) Duval, C.; Cohen, C.; Chagnoleau, C.; Flouret, V.; Bourreau, E.; Bernard, F. Nøgle regulatoriske rolle af dermale fibroblaster inpigmentering som demonstreret ved hjælp af en rekonstrueret hudmodel: virkningen af ​​foto-ældning. PLoS One 2014, 9, nr. e114182.

(50) Li, P.-H.; Chiu, Y.-P.; Shih, C.-C.; Wen, Z.-H.; Ibeto, LK; Huang, S.-H.; Chiu, CC; Ma, D.-L.; Leung, C.-H.; Chang, Y.-N.; Wang, H.-MD Biofunktionelle aktiviteter af Equisetum ramosissimum-ekstrakt: Beskyttende virkninger mod oxidation, melanom og melanogenese. Oxid. Med. Celle. Levetid 2016, 2016, 2853543.

(51) Liang, C.-H.; Chan, L.-P.; Ding, H.-Y.; Så EC; Lin, R.-J.; Wang, H.-M.; Chen, Y.-G.; Chou, T.-H. Free Radical ScavengingActivity af 4-(3,4-Dihydroxybenzoyloxymethyl)phenyl-O- -d-glucopyranosid fra Origanum vulgare og dets beskyttelse mod oxidativ skade. J. Agric. Food Chem. 2012, 60, 7690-7696.

(52) Wang, H.-M.; Chen, C.-Y.; Wen, Z.-H. Identifikation af melanogenesehæmmere fra Cinnamomum SubGenius med in vitro og in vivo screeningssystemer ved at målrette den humane tyrosinase. Exp.Dermatol. 2011, 20, 242-248.

(53) Wang, Y.-C.; Huang, X.-Y.; Chiu, C.-C.; Lin, M.-Y.; Lin, W.-H.; Chang, W.-T.; Tseng, C.-C.; Wang, H.-MD Hæmninger af melanogenese via Phyllanthus Emblica frugtekstraktpulver i B16F10-celler. Food Biosci. 2019, 28, 177−182.

(54) Panchuk, RR; Skorokhyd, NR; Kozak, YS; Lehka, LV; Moiseenok, AG; Stoica, RS Vævsbeskyttende aktivitet af selenomethionin og D-pantherin i B16 melanom-bærende mus under doxorubicinbehandling er ikke forbundet med deres ROS-opfangende potentiale. kroat. Med. J. 2017, 58, 171.

(55) Wang, H.-MD; Chen, C.-C.; Huynh, P.; Chang, J.-S. Udforskning af potentialet ved at bruge alger i kosmetik. Bioressource. Technol.2015, 184, 355−362