Anti-aldring - Klotho genaktiveret stillads fremmer foryngende sårhelingsrespons i humane fedtafledte stamceller

3. Diskussion

Denne undersøgelse havde til formål at undersøge den funktionelle virkning af en anti-aging -Klotho genaktiveret stillads på humane ADSC'er til forbedret sårheling. Samlet set fandt vi, at det genaktiverede stillads tilbyder kontrolleret aktivering af ADSCs regenerative evner som afbildet i figur5. Specifikt forstærkede det genaktiverede stillads midlertidigt ADSC'ers stammeevne gennem aktiveringen af ​​transkriptionsfaktor okt-4. Det genaktiverede stillads fremmede også tidlig aktivering af det anti-fibrotiske gen TGF- 3, en afgørende faktor for kontrolleret heling med reduceret ardannelse. Desuden styrede de aktiverede ADSC'er endotelial angiogenese tidsmæssigt og understøttede dermal fibroblastheling gennem parakrin signalering. Mod modning kontrollerede ADSC'erne også aktiveringen af ​​pro-fibrotisk respons i de dermale fibroblaster. I mellemtiden regenererede ADSC'erne på det genaktiverede stillads effektivt den dermale basalmembran ved at forbedre laminin og kollagen IV-aflejring. Denne reaktion var yderligere forbundet med reduceret ar-associeret -SMA-proteinekspression og forbedret kvalitativ elastinmatrixaflejring. Vores undersøgelse har samlet fastslået, at -Klotho-gen-aktiveretCistanchebesidder et enormt potentiale forsårhelingog kunneavanceret stamcellebaseret terapi til foryngende helbredende applikationer.

Figur 5. Et skematisk billede af den funktionelle indvirkning af B-Klotho-genaktiveret stillads på humane ADSC'er til sårhelingsapplikationer. Nøgleresultaterne af denne undersøgelse er (1) forbigående forbedring af stamcellepluripotens og anti-fibrotisk respons, (2) forbedret parakrin kontrol over for angiogenese og pro-fibrotisk kollagenomdannelse i dermale fibroblaster og i sidste ende (3) øget modning af basalmembranen med kontrol over ar-associeret proteinsekspression Stiplede linjer for elastinmatrix indebærer forbedret kvalitativ aflejring.

Klik her for at vide, hvordan CistancheSårhelende effekter

I sårhelingsstrategier anvendes plasmidbaseret genterapi for forbigående at forbedre cellulære responser, indtil sårreparation er fuldstændig [37]. Vores genaktiverede stillads viser også, at det terapeutiske -Klotho-genet er forbigående reguleret over 14 dage. Det væsentligt forbedrede (170-fold) udtryk for -Klotho mRNA på dag 3 kunne tilskrives den umiddelbare tidlige CMV-promotor, der er kendt for at øge transkriptionel aktivering af det kodede transgen [38]. I MSC'erne kunne CMV imidlertid gennemgå DNA-methylering eller histon-deacetylering, der kan reducere transgenekspressionen [39]. Desuden er plasmiderne generelt ikke-replikerende episomer, hvilket begrænser overførslen af ​​transgen til delende celler og forårsager et fald i transgenekspressionen over tid [40]. Tilstedeværelsen af ​​heterokromatiske markører, der stammer fra bakteriesekvenserne afplasmid kunne yderligere undertrykke transgenekspression [41], hvilket generelt bidrager til en forbigående genekspression.

En af de veje, der forfølges i behandlingen af ​​sår, der er svære at hele, er anvendelsen af ​​cellefrøede bioaktive stilladser. En grund er deres evne til at fremme hurtig sårreparation. Metabolisk aktive celler i transplantatet udskiller parakrine faktorer og gennemgår differentiering, orkestrerer de komplekse signalbegivenheder i sårmiljøet [42]. Især stamceller har en unik evne til at mærke ydre stimuli og modulere deres respons for at genoprette homeostase [43]. Men stamceller mister deres stamness, når de udvides in vitro for at generere store celleantal til transplantatet. Vores undersøgelse viser, at stammen kan forstærkes forbigående ved at bruge et genaktiveret stillads, der bærer et anti-aldringsgen - Klotho. Specifikt bemærkede vi, at det anti-aging gen-aktiverede stillads forbedrede ekspressionen af ​​stamness-genet Oct-4 i ADSC'erne. oktober-4 er en af ​​de centrale transkriptionsfaktorer i embryonale stamceller og er afgørende for kontrolleret embryonal udvikling [44]. I ADSC'erne kan aktiveringen af ​​Oct-4-genet fremme deres sprednings- og differentieringspotentiale [45]. Den øgede ekspression af Oct-4 kan således lette hurtig differentiering af ADSC'erne på det genaktiverede stillads til værtsceller og hjælpe med helingsprocessen.

Efter at have observeret aktiveringen af ​​Oct-4-genet i ADSC'erne, vurderede vi derefter ADSC'ernes angiogene styrke. Angiogenese er afgørende for den effektive integration af transplantatet med værtsvævet [46]. Celler i transplantatet udløser angiogenese gennem sekretion af parakrine faktorer. Angiogenese er også en afgørende begivenhed for udvikling af granulationsvæv, og dens aktivitet aftager, efterhånden som granulationsvævet modnes [47]. Denne programmerede begrænsning af den angiogene aktivitet i helingens senere stadier er essentiel for at kontrollere ardannelse og hypergranulering, der kan hæmme re-epitelialisering [48]. Vores fund viser også, at ADSC'erne på det genaktiverede stillads kan forbedre endothelial spiring og kontrollere deres vækst gennem parakrin signalering. Derudover viser de signifikante stigninger i endotelcellernes metaboliske aktivitet og spiring som svar på dag 3 CM potentialet for det ADSCs-ladede genaktiverede stillads til hurtigt at integrere med værtsvævet. Desuden er brugen af ​​stamceller CM en almindeligt anvendt cellefri tilgang til at forbedre kvaliteten af ​​sårheling [49]. Som en begrænsning anerkender vi, at voksne dermale endotelceller ville tjene en bedre cellemodel til at studere angiogenese; dog for at opretholde overensstemmelse med vores tidligere undersøgelser og HUVEC'erne, der er bredt accepteret som "guldstandard" cellekandidat [50], adopterede vi HUVECs angiogenese-assay.

En stigning i fibroblastremodelleringsaktivitet er et generelt træk ved modning af granulationsvæv [51]. I denne fase erstattes kollagen III-matricerne gradvist af stærkere kollagen I-fibre [51]. Kollagenfibre fremmer derefter sårsammentrækning [52], og sårsammentrækning er uundværlig for fuldstændig sårlukning [53]. Imidlertid kan en aggressiv vedvarende stigning i kollagen I-aflejring øge ardannelsen [54]. Kontrol af ardannelse er afgørende, da det kan hæmme udviklingen af ​​andre hudvedhæng, såsom hårsække, talgkirtler og svedkirtler, for eksempel i forbrændingssår [54]. Vores fund viser, at den gamle (dag 14) CM fra den genaktiverede stilladsgruppe kunne kontrollere ekspressionen af ​​pro-fibrotisk kollagen I i voksne dermale fibroblaster. Denne kontrollerede effekt på fibroblasterne forekom uden yderligere indflydelse på fifibroblastens migration eller deres anti-fibrotiske kollagen III-ekspression i forhold til den genfrie scaffoldgruppe. Derfor foreslår vi, at det ADSCs-ladede genaktiverede stillads kan tilbyde bedre kontrol med at begrænse ardannelse in vivo gennem kontrolleret kollagen I-ekspression. Li et al., har også vist, at ADSCs CM signifikant kan reducere kollagen I-ekspression i fibroblaster afledt af hypertrofiske ar [55]. En anden undersøgelse af Wang et al., viste en lignende reduktion i kollagen I-ekspression i keloid-afledte fibroblaster [56], der samlet demonstrerer det anti-fibrotiske potentiale af ADSC'ernes CM.

Et af de væsentlige fund, som vi bemærkede med anvendelsen af -Klotho gen-aktiveret stillads er den forbedrede regenerering af basalmembranen i ADSC'erne. Regenereringen af ​​basalmembranen er afgørende for blodkarmodning og fuldstændig re-epitelisering [57,58]. Vigtigere er tendensen, hvor proteinerne laminerer(2.1-fold) og kollagen IV (8.8-fold) er opreguleret, hvilket yderligere indikerer øget modning af basalmembranen i den genaktiverede stilladsgruppe [59]. Udover at fungere som en anti-aldringsfaktor [60], fungerer beta-klotho til at øge følsomheden over for fibroblast-vækstfaktor (FGF) af FGF-receptorer [61]. Derudover har en stigning i FGF-signalering vist sig at fremme basalmembranmodning gennem aflejring af laminin og kollagen IV [62]. I betragtning af beta klothos rolle som en co-receptor af FGF, er den øgede kældermodning i den genaktiverede stilladsgruppe potentielt medieret af en stigning i ADSCs FGF-signalering.

Basalmembrankomponenten bemærkelsesværdigt opreguleret i den genaktiverede stilladsgruppe er kollagen IV-proteinet. Kollagen IV-proteinet repræsenterer 50 procent af alle basalmembraner [63] og giver strukturel stabilitet til basalmembranen [59]. Aldring reducerer imidlertid markant kollagen IV-ekspression i den dermal-epidermale forbindelse [58,64] og manglen på kollagen IV kan fremme arpatogenese [65]. Vores resultater tyder således på, at den øgede basalmembran-regenerative styrke af det ADSCs-ladede genaktiverede stillads betydeligt kan hjælpe med forbedret heling hos ældre patienter. Andre undersøgelser har også vist, at fedtvævs-afledt ECM besidder det enorme terapeutiske potentiale for hudreparation [66]. Ydermere er vævsmanipulerede transplantater rige på laminin og kollagen IV også af interesse til reparation af respiratorisk epitel [67]. 

Ud over den pro-fibrotiske kontrol mod fibroblasterne viser vores undersøgelse yderligere, at ADSC'erne i det genaktiverede stillads også udtrykker en 2- gange lavere ekspression af det ar-associerede protein -SMA [68]. Selvom vi ikke evaluerede dens indvirkning in vivo, reduktionen i lokale -SMA-ekspression er afgørende for forbedret kvalitativ heling [69]. Brug af fibrotiske midler såsom bleomycin [70] kunne være en måde til bedre at evaluere de anti-fibrotiske egenskaber af ADSC'er/genaktiveret stilladskonstruktion in vitro; vores fokus var imidlertid at etablere konstruktionens foreløbige terapeutiske potentiale.

En anden indikator for, at det ADSCs-ladede genaktiverede stillads kan forbedre kvalitativ heling, er aflejringen af ​​fibrøs elastinmatrix i stedet for pletvis ekstracellulære sekretioner i den genfrie stilladsgruppe. Elastinaflejring er en af ​​de vigtigste aktiviteter, der driver føtal arfri sårheling [71]. Men voksne hud mangler aflejring af elastin [71]. Som sådan er tropoelastin, en forløber for elastin, ofte inkorporeret i biomateriale stilladser for at kontrollere ardannelse i sårheling [72]. Samlet set antyder vores resultater, at ADSC'erne/ -Klotho genaktiveret stilladskonstruktion kan give et stærkt anti-fibrotisk respons in vivo.

4. Materialer og metoder

4.1. Forberedelse af genaktiveret stillads

Det genaktiverede stillads blev udviklet ved hjælp af en 2-trinsproces. For det første blev faste porøse kollagen-chondroitinsulfat stilladser fremstillet af en frysetørrende opslæmning af bovin sene type 1 kollagen og chondroitin-6-sulfat afledt af hajbrusk (Sigma, UK). En optimeret frysetørringsproces designet til at skabe ensartede porer blev brugt til at fremstille stilladserne [73]. Baseret på vores offentliggjorte protokol [74], blev de frysetørrede stilladser derefter dehydrotermisk (DHT) behandlet ved 105°C◦C under vakuum til sterilisering og mekanisk forbedring. De steriliserede stilladser blev derefter kemisk tværbundet med 14 mM N-(3-Dimethylaminopropyl)-N'-ethylcarbodiimidhydrochlorid og 5,5 mM N-Hydroxysuccinimid (2,5 molære forhold af EDC/NHS) (Sigma, UK) opløsning til yderligere forbedre den mekaniske stabilitet [75]. De tværbundne stilladser blev derefter vasket med PBS (Gibco, Paisley, UK) for at fjerne resterende kemikalier. Når stilladserne var klar, blev polyplekser i et N/P10-forhold (nitrogen til phosphat-forhold) fremstillet ved at blande et forudbestemt volumen af ​​forgrenet polyethylenimin (PEI) opløsning med plasmid-DNA (pDNA), der koder for det humane beta-Klotho-gen ( -Klotho), opnået fra SinoBiological, Beijing, Kina. N/P10-forholdet blev valgt baseret på vores tidligere undersøgelser, der viste, at polyplekser formuleret i et N/P10-forhold effektivt kunne danne små, stabile kationiske nanopartikler med plasmider så store som GLuc (5,76 kb) [21,23]. Før anvendelse blev plasmiderne fortyndet i endotoksinfrit vand for at opnå en arbejdskoncentrationaf 0.5µg/µL. Plasmidet indeholder humant forstærket umiddelbar-tidlig cytomegalovirus(CMV3) promotor for at fremme høj-niveau stabil og forbigående ekspression af det kodedegen i pattedyrsceller.

Plasmid/PEI-blandingen fik lov til at sætte sig i 30 minutter for selv at samle sig til polyplexnanopartikler. Nanopartiklerne blev derefter sat i blød på stilladserne ved pipetteringlige store volumener af polyplexopløsningen pr. side af stilladset. I alt 2µg pDNA varbruges pr. stillads til at udvikle det genaktiverede stillads.

4.2. Cellesåning på -Klotho genaktiveret stillads

Humane ADSC'er (iXCells Biotechnologies, San Diego, CA, USA) blev udvidet til passage 4 i ADSC's vækstmedium (Kat. nr. MD0003) leveret af virksomheden. I alt 5× 105 ADSC'er (2.5× 105 per side) blev derefter podet pr. genfrit stillads (kontrol,n = 3) eller genaktiveret stillads (test,n = 3). Efter at have ladet cellerne bundfælde sig i ca. 20 minutter blev 2 ml transfektionsmedie OptiMEM (Gibco, UK) tilsat, og de cellulariserede stilladser blev inkuberet ved 37°C.◦C i 24 timer. Efter 24 timers inkubation blev de cellulariserede genfrie eller genaktiverede stilladser overført til nye 12-brøndsplader og fodret med 2 mL ADSCs vækstmedium. Medieskift blev derefter udført hver 3.-4. dag indtil dag 14 ved at opsamle 1 ml af det konditionerede medium (CM) og erstatte det med samme volumen friske medier. Alle CM blev opbevaret kl−80 ◦C indtil analyse.

4.3. qRT-PCR analyser for at bestemme -Klotho-genoverekspression og aktivering af funktionelle gener

For at bestemme den forbigående regulering af målgenerne blev celler høstet på dag 3 (tidlig) og 14 (sen) efter podning på de genfrie eller genaktiverede stilladser. Cellerne blev først lyseret under anvendelse af Qiazol-lysereagenset (Qiagen, Germantown, MD, USA). Chloroform blev derefter tilsat for at adskille cellelysatet i protein-, DNA- og RNA-faser. Under anvendelse af RNeasy Kit (Qiagen, Manchester, UK) blev RNA'et ekstraheret, og deres kvalitet og mængde blev bestemt ved anvendelse af en Multiskan Go pladelæser (Thermo Scientific, UK) med absorbansen indstillet til 260 nm. Genomisk DNA blev derefter fjernet ved at blande RNA'et med en genomisk DNA wipeout-buffer (Qiagen, Manchester, UK) og opvarme til 42◦C i 2 min. Efterfølgende blev revers transkription udført for at fremstille cDNA'et. Dubletter af cDNA pr. replikat (n = 3) blev indlæst i qRT-PCR-pladerne, og derefter blev assayet kørt ved hjælp af primerne anført i tabel1. Foldeændring i mRNA-ekspression i forhold til cellerne på det genfrie stillads blev beregnet ved hjælp af 2−∆∆CTmetode fra gennemsnit af tre replikater pr. gruppe. Human GAPDH (Hs_GAPDH_1_SG, kat.nr. QT00079247) blev brugt som husholdningsgenet.

4.4. Bioaktivitetsanalyser af udskilte faktorer fra ADSC'erne på -Klotho genaktiveret stillads

4.4.1. Pro-angiogene bioaktivitetsanalyser

4.4.2. Dermale fibroblaster Helings- og modningsanalyser

Efter angiogenese-assayet undersøgte vi CM's styrke for dermal heling ved at anvende et scratch-assay af humane voksne dermale fibroblaster (iXcells, Kat. nr. 10 HU-014). Til denne undersøgelse valgte vi specifikt den gamle CM fra dag 14 for at studere dens indflydelse på fibroblastsårlukning under modning. I alt 1× 104 celler/brønd i en 96-brøndsplade blev podet og inkuberet natten over i fibroblastvækstmediet. Den næste dag blev der skabt et sår på monolaget ved vandret at ridse en 200 uL pipettespids hen over brønden. Monolaget blev derefter skyllet med PBS for at fjerne eventuelle rester og tilført CM. Sårlukning blev registreret mellem 12-16 timer efter ridsen. Immunfarvning blev brugt til at studere ekspressionen af ​​pro-fibrotisk kollagen I (1:100, Novusbio, UK) og anti-fibrotisk kollagen III (1:100, Novusbio, UK) i fibroblasterne. Fibroblasterne blev modfarvet med rhodamin (1:800, Abcam, UK) til F-actin-billeddannelse. Immunfarvning blev udført som beskrevet i afsnit4.5, med undtagelse af vævsbehandling og afparaffinering. Både HUVEC'er og fibroblasterne blev brugt ved passage 4.

4.5. Immunofluorescensbilleddannelse af ekstracellulære matrixproteiner

Efter 14 dages dyrkning blev de cellulariserede genfrie eller genaktiverede stilladser høstet til påvisning af matrixaflejring ved anvendelse af immunfluorescens. Behandlingen af ​​prøverne blev udført som beskrevet tidligere. Kort fortalt blev stilladserne først vasket med PBS og fikseret i 10 procent neutral bufret formalin i 20 min. De fikserede prøver blev derefter behandlet under anvendelse af standardprotokollen for afparaffinisering. Blokkene blev derefter skåret i 7-µm tykke skiver og opsamlet på ladede objektglas. Sektionerne blev derefter afparaffiniseret under anvendelse af xylen efterfulgt af rehydrering af sektionen med faldende gradienter af ethanol. Efterfølgende blev cellerne permeabiliseret med 0,2 procent Tween®20 (Sigma-Aldrich, Frankrig) opløsning i PBS i 30 min (10 min vask× 3) og blokeret under anvendelse af 10 procent NGS (Normal Goat Serum, Invitrogen, Rockford, IL, USA)/5 procent BSA/0,3 M Glycin (fremstillet i permeabiliserende opløsning) i 1 time. Efter blokering blev objektglassene skyllet i PBS og derefter inkuberet ved 4◦C natten over med antistofferne mod målrettede matrixproteiner anført i tabel2. Den næste dag blev objektglassene skyllet i PBS tre gange i 2-3 minutter hver for at fjerne eventuelle ubundne primære antistoffer. Efterfølgende blev objektglassene inkuberet i enten Alexa 488-konjugeret ged anti-mus IgG (A32723, Invitrogen, UK) eller Alexa 594- konjugeret ged anti-kanin IgG (A11012, Invitrogen, UK) ved 1: 800 fortynding ved stuetemperatur i 1 time i mørke. Skylletrinnet blev udført som før og modfarvet for kerner under anvendelse af monteringsmediet med DAPI (ab104139, Abcam, UK). Objektglassene blev derefter afbildet ved hjælp af et fluorescensmikroskop (Olympus BX43, Japan) ved 20× objektiv. Prøver inkuberet med kun sekundære antistoffer blev anvendt som kontroller.

Billedkvantificering

Image] software (Image, NIH, MD, USA) blev brugt til semi-kvantitativt at bestemme mængden af ​​udtrykte proteiner. For hver markør blev en konstant tærskelværdi først bestemt gennem foreløbig billeddannelse af forskellige snit. Ved anvendelse af den indstillede tærskelværdi blev integreret tæthed (farvet område x gennemsnitlig gråværdi) af billederne bestemt og derefter normaliseret til antallet af celler (DAPI-tælling) for at give en endelig gennemsnitlig fluorescensdensitet pr. celle. Et gennemsnit blev kvantificeret fra 8-10 tilfældige billeder pr. replikat med minimum tre replikater pr. gruppe. De opnåede gennemsnit fra de tre replikater/gruppe blev derefter brugt til at måle relativ ekspression mellem grupperne.

4.6. Statistisk analyse

Alle resultater er udtrykt som gennemsnit plus standardafvigelse. Uparret, to-halet t-test blev generelt brugt til at beregne den statistiske signifikans mellem grupper, hvor p < 0.05 blev anset for at være signifikant

Denne undersøgelse viste, atanti aldring -Klotho gen-aktiveret cistanchetilbud kontrolleret aktivering af den regenerative kapacitet af ADSC'er. De vigtigste resultater af denne undersøgelse er (1)forbigående forbedring af stamcellepluripotens og anti-fibrotisk respons, (2)forbedret parakrin kontrol over for angiogeneseog pro-fibrotisk kollagen-ombygningi dermale fibroblaster og i sidste ende (3)øget modning af basalmembranenmed kontrol over ar-associerede proteiners udtryk. Disse resultater tyder endeligt påat ADSCs-ladede -Klotho genaktiveret stillads kan have et stort potentialebehandling af en lang række hudsår.

ressourcer, ALLE, FJO og MBK; datakuration, ALL og MBK; skrivning—oprindeligt udkast præparation, ALLE; skrivning - gennemgang og redigering, ALL, FJO og MBK; visualisering, ALLE; overvågning,FJO og MBK; projektadministration, MBK; funding acquisition, FJO og MBK Alle forfatterehar læst og accepteret den offentliggjorte version af manuskriptet.

Interessekonflikt:Forfatterne erklærer, at der ikke eksisterer nogen interessekonflikt.

Referencer

1. Laiva, AL; O'Brien, FJ; Keogh, MB Innovationer i gen- og vækstfaktorleveringssystemer til diabetisk sårheling.J. Tissue Eng. Regen. Med.2018, 12, e296–e312. [CrossRef] [PubMed] 

2. Makrantonaki, E.; Wlaschek, M.; Scharfetter-Kochanek, K. Patogenese af sårhelingsforstyrrelser hos ældre.JDDG J. Dtsch. Dermatol. Ges.2017, 15, 255–275. [CrossRef] [PubMed]

3. Ganguly, P.; El-Jawhari, JJ; Burska, AN; Ponchel, F.; Giannoudis, PV; Jones, EA Analysen af ​​in vivo aldring i humane knoglemarvs mesenchymale stromale celler ved anvendelse af kolonidannende enhed-fibroblast-assay og CD45lowCD271 plus-fænotypen.Stamceller Int.2019, 2019, 5197983. [CrossRef] 

4. Westerweel, PE; Teraa, M.; Rafifii, S.; Jaspers, JE; White, IA; Hooper, AT; Verhaar, MC Nedsat endotelstamcellemobilisering og dysfunktionel knoglemarvsstroma i diabetes mellitus.PLoS ONE2013, 8, e60357. [CrossRef] 

5. Murray, RZ; West, ZE; Cowin, AJ; Farrugia, BL Udvikling og brug af biomaterialer som sårhelende terapier.Brænde. Trauma2019, 

6. [CrossRef] [PubMed] 6. Ebrahimian, TG; Pouzoulet, F.; Squiban, C.; Burd, V.; André, M.; Fætter, B.; Tamarat, R. Celleterapi baseret på fedtvævs-afledte stromaceller fremmer fysiologisk og patologisk sårheling.Arterioskler. Thromb. Vasc. Biol.2009, 29, 503–510. [CrossRef] 

7. Wu, Y.; Chen, L.; Scott, PG; Tredget, EE mesenkymale stamceller forbedrer sårheling gennem differentiering og angiogenese.Stamceller2007, 25, 2648–2659. [CrossRef] [PubMed] 

8. Foubert, P.; Gonzalez, AD; Teodosescu, S.; Berard, F.; Doyle-Eisele, M.; Yekkala, K.; Fraser, JK Fedtafledt regenerativ celleterapi til heling af brandsår: En sammenligning af to leveringsmetoder.Adv. Sårpleje2016, 5, 288–298. [CrossRef] [PubMed]

9. Assi, R.; Foster, TR; Han, H.; Stamati, K.; Bai, H.; Huang, Y.; Dardik, A. Levering af mesenkymale stamceller i biomimetisk konstruerede stilladser fremmer heling af diabetiske sår.Regen. Med.2016, 11, 245–260. [CrossRef] [PubMed] 

10. Jiang, Y.; Chen, B.; Liu, Y.; Zhufu, Z.; Yan, X.; Hou, X.; Tan, Q. Effekt af kollagen stillads med fedtafledte stromale vaskulære fraktionsceller på diabetisk sårheling: En undersøgelse i en diabetisk svinemodel.Tissue Eng. Regen. Med.2013, 10, 192–199. [CrossRef] 

11. Falanga, V.; Sabolinski, M. En tolags levende hudkonstruktion (APLIGRAF®) fremskynder fuldstændig lukning af svære at hele venøse sår.Sårreparation Regen.1999, 7, 201–207. [CrossRef] 12. Hart, CE; Loewen-Rodriguez, A.; Lessem, J. Dermagraft: Anvendelse til behandling af kroniske sår.Adv. Sårpleje.2012, 1, 138–141. [CrossRef] [PubMed] 13. Dinh, TL; Veves, A. Effekten af ​​Apligraf til behandling af diabetiske fodsår.Plast. Reconstr. Surg.2006, 117, 152S–157S. [CrossRef] [PubMed]

14. Eaglestein, WH; Falanga, V. Vævsteknik og udviklingen af ​​Apligraf®, en human hudækvivalent.Clin. Ther.1997, 19, 894–905. [CrossRef] 

15. Jiang, T.; Xu, G.; Wang, Q.; Yang, L.; Zheng, L.; Zhao, J.; Zhang, X. In vitro svækkede ekspansion stammen af ​​mesenkymale stamceller ved tidlig passage til behandling af bruskdefekter.Celledød Dis2017, 8, e2851. [CrossRef] [PubMed]

16. Liu, J.; Ding, Y.; Liu, Z.; Liang, X. Ældring i mesenkymale stamceller: funktionelle ændringer, molekylære mekanismer og foryngelsesstrategier.Foran. Cell Dev. Biol.2020, 8, 258. [CrossRef] [PubMed] 

17. Wang, W.; Xu, X.; Li, Z.; Lendlein, A.; Ma, N. Genteknologi af mesenkymale stamceller ved ikke-viral genlevering.Clin. Hæmorheol. Microcirc.2014, 58, 19–48. [CrossRef] 

18. Deveza, L.; Choi, J.; Lee, J.; Huang, N.; Cooke, J.; Yang, F. Polymer-DNA nanopartikel-induceret CXCR4-overekspression forbedrer stamcelle-engraftment og vævsregenerering i en musehinde-iskæmimodel.Teranostik2016, 6, 1176–1189. [CrossRef] [PubMed] 

19. O'Brien, FJ Biomaterialer og stilladser til vævsteknologi.Mater. I dag2011, 14, 88-95. 20. Yannas, I.; Tzeranis, D.; Harley, B.; Så, P. Biologisk aktive kollagen-baserede stilladser: Fremskridt inden for behandling og karakterisering.Philos. Trans. R. Soc. En matematik. Phys. Eng. Sci.2010, 368, 2123–2139. [CrossRef] 

21. Laiva, AL; Raftery, RM; Keogh, MB; O'Brien, FJ Pro-angiogen virkning af SDF-1 genaktiverede kollagen-baserede stilladser i stamcelle-drevet angiogenese.Int. J. Pharm.2018, 544, 372–379. [CrossRef] [PubMed] 

22. Lackington, WA; Raftery, RM; O'Brien, FJ In vitro-effektivitet af en genaktiveret nervestyringskanal, der inkorporerer ikke-virale PEI-pDNA-nanopartikler, der bærer gener, der koder for NGF, GDNF og c-Jun.Acta Biomater.2018, 75, 115–128. [CrossRef] 

23. Tierney, EG; Duffy, GP; Hibbitts, AJ; Cryan, SA; O'Brien, FJ Udviklingen af ​​ikke-virale genaktiverede matricer til knogleregenerering ved hjælp af polyethylenimin (PEI) og kollagenbaserede stilladser.J. Kontrol. Frigøre2012, 158, 304–311. [CrossRef] [PubMed] 24. Laiva, AL; O'Brien, FJ; Keogh, MB SDF-1 genaktiveret kollagen stillads driver funktionel differentiering af humane Schwann-celler til sårheling.Biotechnol. Bioeng.2021, 118, 725–736. [CrossRef] [PubMed]